樊和斌；郭亚兵；杨洁；侯金林；王战会；朱幼芙；秦劲峰
目的建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制.方法实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304.将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48 h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化:采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体αvβ3表达的变化.结果ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P＜0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体αvβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P＜0.01).结论ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体αvβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成.
作者：刘亮；刘旭盛；张晓启；明佳；徐辉；程天民 刊期： 2005年第02期
目的克隆、构建绿色荧光蛋白(GFP)-AWP1(associated with protein kinase C related kinase 1,AWP1)表达载体,观察AWP1在293细胞中表达和定位.方法采用逆转录PCR(RT-PCR)法从人ECV304内皮细胞中扩增AWP1 cDNA编码区,并将其重组于GFP表达载体pEGFP-C2中.经酶切、序列鉴定分析后,将该重组质粒通过DOTAP脂质体介导,转染293细胞.荧光显微镜观察AWP1在细胞内的表达和分布.结果GFP-AWP1融合基因表达载体经酶切鉴定和测序分析确认构建成功,并在293细胞中获得了高效表达.荧光显微镜下,在不携带外源基因的空载体pEGFP-C2转染的对照组293细胞,绿色荧光均匀分布于整个细胞中;在重组质粒pEGFP-C2/AWP1转染的293细胞,绿色荧光弥散分布于细胞质内.结论成功构建GFP-AWP1融合基因表达载体并表达于293细胞胞质中.
作者：曹永宽；莫永炎；田伏洲；刘亚伟；邓鹏；秦清和；姜勇 刊期： 2005年第02期
目的了解烧伤血清对内皮细胞抑制性κB(IκBα)降解、核因子-κB(NF-κB)活化的影响,进一步探讨烧伤血清诱导内皮细胞活化分泌细胞因子的机制.方法采用体外培养的内皮细胞,分别用正常人血清(对照组)、烧伤患者血清、烧伤患者血清+吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)刺激内皮细胞.采用Western印迹法检测血清刺激30、60、90、120min后内皮细胞IκBα蛋白降解情况,电泳迁移率分析检测血清刺激30、60、120、240 min后NF-κB活性的变化.结果烧伤血清刺激内皮细胞后30min,IκBα发生明显降解,刺激后60min达高峰,2 h后表达逐渐升高;烧伤血清刺激内皮细胞后30 min,NF-κB活性迅速升高,30～60 min达高峰,2 h后逐渐回复基础状态.PDTC能有效抑制烧伤血清作用条件下内皮细胞IκBα降解、NF-κB活化.结论烧伤血清可诱导内皮细胞IκBα降解,活化NF-κB,从而在烧伤后内皮细胞分泌细胞因子过程中起重要作用.
作者：李志清；黄跃生；杨宗城；王甲汉 刊期： 2005年第02期
目的总结腹部多器官联合移植的围手术期处理经验.方法我院自2001年10月至2005年1月共施行19例腹部多器官联合移植术,其中胰肾联合移植6例、肝肾联合移植12例、肝胰联合移植1例;分析手术方法、免疫抑制剂的使用和术后并发症处理的方法.结果19例患者手术均获成功,术后发生FK506中毒1例(5.3%),发生急性排斥反应3例(15.8%),消化道出血发生2例(10.5%),腹腔出血1例(5.3%),肺部感染1例(5.3%),经相应治疗后好转.结论腹部多器官联合移植成功的关键是作好供体选择、保证供器官质量、选择适当手术方式、术后合理应用免疫抑制剂以及有效防治术后并发症.
作者：于立新；叶俊生；邓文锋；徐健；付绍杰；叶桂荣；杜传福；王亦斌；刘小友；苗芸 刊期： 2005年第02期
目的探讨人脐血单个核细胞体外向神经元样细胞定向诱导分化的条件.方法无菌条件下采集正常人脐血,分离单个核细胞.用DMEM/F12培养基进行纯化和扩增培养.取扩增5代的间充质干细胞(MSC),分别用β-巯基乙醇(β-ME)、二甲基亚砜(DMSO)、神经条件培养液诱导脐血MSC向神经元样细胞分化.免疫组化法检测脐血MSC的Nestin表达和神经元样细胞特异性标志.结果脐血原代和2、5代MSC的Nestin表达阳性率分别为6.7%、12.4%和20.8%.神经条件培养液诱导神经元样细胞阳性率高达36%,β-ME、DMSO分别为33%和25%.结论脐血MSC具有神经干/祖细胞的特性,在一定条件下能向神经元样细胞分化.
作者：柳太云；张成；肖露露；姚晓黎；冯善伟；曾缨 刊期： 2005年第02期
目的探讨葡萄胎差异表达新基因F10在不同类型滋养细胞肿瘤中的表达及其与恶性滋养细胞肿瘤侵袭的关系.方法采用原位杂交方法检测12例葡萄胎、6例侵袭性葡萄胎、8例绒癌中F10表达情况.结果F10在全部葡萄胎、侵袭性葡萄胎、绒癌中均呈阳性表达,其在葡萄胎、侵袭性葡萄胎、绒癌中的表达强度递增,有显著性差异(P＜0.001).结论F10可能与滋养细胞肿瘤的发生及其侵袭行为相关,在侵袭或滋养细胞恶变中起一定作用.
作者：周瑾；陈士岭；邢福祺；庞战军；李冰；周问渠；付欣；丁彦青 刊期： 2005年第02期
原子力显微镜(AFM)是目前新的生物成像操纵技术之一,制样简单,可以在多种环境条件下原子分辨率三维成像以及进行生物分子之间力的测定及操纵调控.目前国际上AFM主要应用于组织、细胞微生物、生物大分子纳米水平形态结构功能研究及生物单分子相互作用、生物过程操纵调控等研究领域.虽然存在着针尖碳纳米管衍化、柔软生物样品硬化、结果解释待改进等局限性,但AFM必将成为生命科学研究的重要手段.
作者：郁毅刚；徐如祥；蔡颖谦；姜晓丹；柯以铨 刊期： 2005年第02期
目的探讨多层螺旋CT冠脉造影(multislice spiral CT coronary angiography,MSCTCA)的成像技术及其临床应用价值.方法对79例对象行MSCTCA检查,利用多种重建方法进行重建,分析影响冠脉成像质量的重要因素,MSCT对冠脉的显示能力,冠脉斑块性质及钙化程度,评价管腔狭窄及其程度,并对桥血管和支架的显示及通畅性进行评价.结果左冠脉主干及前降支重建的佳时相为75%R-R时相,左回旋支及右冠脉为62.5%R-R时相.以75%的相位窗重建得到容积再现的图像为佳.MSCTCA对冠脉l～3级分支、甚至部分4级分支显示清晰,对冠脉斑块显示良好,对冠脉狭窄显示较佳,对搭桥血管及内支架显示良好.结论16层MSCTCA可作为冠心病的筛选手段及在血运重建术后复查中有很高的临床应用价值.
作者：许尚文；张雪林；曾建华；王江云；李天然；钱根年；高荣光 刊期： 2005年第02期
目的探讨病毒性脑炎患者脑血流动力学变化及其意义.方法对38例病毒性脑炎患者和30例对照组进行经颅多普勒超声(TCD)检查.结果TCD检测显示:正常11例,异常27例,阳性率71%,病毒性脑炎患者急性期大脑中动脉、大脑前动脉、大脑后动脉、椎动脉和基底动脉平均血流速度均明显增快,与恢复期和对照组比较有显著性差异(P＜0.001～0.05).大脑中动脉、大脑后动脉和基底动脉脉动指数均显著升高,与恢复期和对照组比较有显著性差异(P＜0.001).结论TCD研究结果表明病毒性脑炎,尤其是中、重度患者存在不同程度的脑血管痉挛,部分患者主要表现为脑小动脉痉挛.
作者：王群；夏欣；袁惠娟 刊期： 2005年第02期
目的了解广州地区医院感染常见革兰阴性细菌分布特征和耐药特点.方法2001年7月～2003年8月,用Kirby-Bauer法检测了从广州地区13家医院分离获得的3 500株革兰阴性细菌对临床常用15～21种抗生素的药敏结果,并按美国临床实验标准委员会2000年判断标准进行判断,用WHONET-5软件分析数据.结果分离出的3 500株革兰阴性菌中前3位细菌依次是大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)1 244株(占35.5%)、肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae,Kpn)900株(占25.7%)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pae)547株(占15.6%).广州地区临床分离革兰阴性菌中产超广谱β内酰胺酶(extended-spectrumbeta-lactamases,ESBLs)菌株的总检出率为31.0%(1 084/3 500),在各种常见菌属中的检出率分别为:大肠埃希菌为38.7%(482/1 244)、肺炎克雷伯菌为37.9%(341/900)、铜绿假单胞菌为5.3%(29/547)、阴沟肠杆菌为55.2%(117/212)、不动杆菌属为8.2%(17/208)、其他肠杆菌属为27.7%(53/191)、嗜麦芽窄食单胞菌为33.3%(37/117)、变形杆菌属为9 2%(8/87).从呼吸道标本中分离获得革兰阴性细菌多,为1 463株(占41.8%);其次为泌尿道标本,为943株(占26.9%).耐药性分析显示:革兰阴性杆菌对临床常用抗生素的总体耐药率低为亚胺培南(8.7%),其次为头孢哌酮/舒巴坦(13.3%),而高为氨苄西林(90.5%),其次为奈啶酸(69 3%).亚胺培南对广州地区临床分离的大肠埃希氏菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌、不动杆菌属、其他肠杆菌属和变形杆菌属的耐药率低,分别为1.1%、0.5%、0.6%、3.2%、0.8%和0%,而头孢哌酮/舒巴坦对广州地区临床分离的铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌的耐药率低,分别为10.8%和15.9%,大部分细菌呈多重耐药.产ESBLs菌株对15～21种临床常用抗菌药物的耐药率均显著高于不产ESBLs菌株(P＜0.05).结论细菌耐药性仍是目前广州地区临床用药为严重的问题,尤其是产ESBLs菌株有上升趋势.亚胺培南和头孢哌酮/舒巴坦分别对临床分离革兰阴性菌株有较好的抗菌活性,可以作为广州地区临床经验用药的候选药物.
作者：肖庆忠；苏丹虹；江洁华；钟南山 刊期： 2005年第02期
目的探讨老年人体重指数与糖尿病的关系.方法按统一方法对佛山市60岁以上常住居民3 382人进行现场问卷调查,同时测量血压、身高、体重(体质量)等,并计算体重指数(BMI).结果肥胖、超重、体重正常、体重过低者糖尿病患病率分别为31.58%、22.84%、15.65%和9.40%;高血糖患病率分别为67.94%、56.14%、46.58%和38.35%;随BMI增高,糖尿病、高血糖患病率明显增高.糖尿病组BMI均值为23.9 kg/m2,≥24者占48.7%;高血糖组BMI均值为23.4kg/m2,≥24者占42.9%;血糖正常组BMI均值为22.6 kg/m2,≥24者占32.3%,两两比较有显著性差异(P＜0.01).结论BMI水平与糖尿病密切相关.
作者：陈雪梅；邵虹；邱晓敏；李蜀光；张耿新；潘鉴枝 刊期： 2005年第02期
目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果.方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体;将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后,通过RT-PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用.结果成功克隆hTERT上游-280 bp～+40 bp的核心启动子.RT-PCR和β-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达;hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应.结论hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略.
作者：李帆；谭晓华；彭晓君；蔡红兵；胡大荣 刊期： 2005年第02期
目的了解广东地区慢性乙型肝炎患者HBV基因型特点及其临床意义.方法用特异性引物扩增乙型肝炎病毒S基因区,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型方法,对该地区55例慢性活动性乙型肝炎(CAH)患者感染的HBV进行基因分型,并与其临床生化结果、病毒定量和肝组织病理进行相关性分析.结果B基因型28例(51.0%),C基因型18例(32.7%),D基因型4例(7.3%),B+C型4例(7.3%),未分型1例(1.8%).其中年龄大于30岁的26例患者B和C基因型的丙氨酸转氨酶水平分别为(190.9±270.3)IU和(141.0±83.0)IU(t=0.532,P＞0.05),肝脏病理炎症分级的平均秩次为10.4和11.8(Z=0.561,P＞0.05),肝脏病理纤维化分期的平均秩次为10.5和11.7(Z=0.483,P＞0.05),HBV DNA含量分别为106.8±1.4和108.5±1.1(t=2.989,P＜0.05),HBeAg阳性数分别为2/12和8/9(Fisher's精确概率P=0.002).结论广东地区HBV基因型主要为B型和C型;两种基因型感染者丙氨酸转氨酶水平、病毒复制水平、HBeAg表达水平以及肝脏病理炎症和纤维化程度无显著性差异;然而在年龄大于30岁的CAH患者中,感染C基因型的HBV病毒复制水平和HBeAg表达水平比感染B基因型者显著增高.
作者：樊和斌；郭亚兵；杨洁；侯金林；王战会；朱幼芙；秦劲峰 刊期： 2005年第02期
目的原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ42)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术.方法化学合成Aβ42基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ42基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ42融合蛋白.Western blotting检测其抗原特异性.以GST-Aβ42和Aβ42肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42免疫的大鼠血清中Aβ抗体.结果原核表达的可溶性GST-Aβ42融合蛋白相对分子质量为31 000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800 mg/L菌液,纯度大于95%;Westem blotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ42为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2 ng/ml;以GST-Aβ42和化学合成的Aβ42分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ42肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P＞0.05).结论原核表达的GST-Aβ42融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ42肽抗原,用于检测Aβ抗体.
作者：张革；王烈峰；汪华侨；姚志彬 刊期： 2005年第02期
目的观察广东产的鸸鹋蛋壳粉对小鼠性功能的影响.方法给成年雄性小鼠连续服药21 d后采用小鼠交配试验测其交配的潜伏期及交配次数.给幼龄雄性小鼠连续服药30 d后检测其附性器官的脏器指数.以重复悬吊应激复制小鼠性行为障碍模型,观察雄性小鼠的交配能力.结果鸸鹋蛋壳粉能增加成年雄性小鼠的交配次数,促进未成年雄性小鼠生殖器官的生长发育,对重复悬吊应激引起的雄性小鼠性功能障碍具有一定的促进功能恢复的作用.结论广东产鸸鹋蛋壳粉具有一定的增强小鼠性功能,提高小鼠性器官生长发育的作用.
作者：莫志贤；彭林光；彭旺 刊期： 2005年第02期
目的研究不同电融合条件对来源于小鼠卵丘细胞核移植重组胚的融合和早期发育的影响,寻找佳电融合参数.方法将直径10～12mm的C57BL/6j小鼠卵丘细胞核注射到去核卵母细胞透明带下,构建供体核-卵母细胞复合体.在不同电融合条件下诱导两者间的融合,并对重组胚激活以及随后发育的早期阶段包括2细胞、4～8细胞和桑椹胚进行观察和计数.结果电融合时电场强度或脉冲时间在一定范围内允许波动,变动范围分别是电场强度1 000～2000kV/cm和脉冲时程40～160 ms.低于容许范围的电融合参数会降低供体核-卵母细胞复合体的融合率,而高于容许范围的参数会导致供体核-卵母细胞复合体溶解乃至死亡.如果电融合参数在容许范围内,供体核-卵母细胞复合体的融合率无统计学差异,并且融合后重组胚的激活,以及发育至2细胞、4～8细胞和桑椹胚阶段的比率也无统计学差异.此外,脉冲重复次数以1～2次为佳.结论优化的电融合参数是决定供体核-卵母细胞复合体融合与重组胚激活的关键因素.
作者：江培洲；沈新明；乔贵林；黄华；姚开泰 刊期： 2005年第02期
近年来子宫内膜癌在国内外均呈上升趋势,在我国妇科恶性肿瘤中仅次于宫颈癌居第2位,占女性恶性肿瘤的3%.子宫内膜癌的发病病因至今不清,可能与雌激素对子宫内膜的持续作用有关.子宫内膜癌是否有家族史或遗传史专家尚有不同意见.本文报道两对姐妹患子宫内膜癌的诊治情况.
作者：刘国炳；庞占军 刊期： 2005年第02期
目的探讨磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信号通路被阻断对大肠癌细胞凋亡状态的影响.方法利用U73122(1、5、10μmol/L)处理细胞以阻断PLC-γ1信号通路,光镜、电镜观察细胞形态改变,MTT法评估细胞杀伤效应,流式细胞仪分析凋亡细胞比例.结果PLC-γ1信号通路阻断后,大肠癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变,存活细胞明显减少,流式细胞仪检测出现典型的凋亡亚二倍体峰,凋亡细胞所占比例达到半数以上.结论阻断PLC-γ1信号通路能够启动大肠癌细胞凋亡.
作者：刘俊；李明；曾位森；白晓春；罗深秋 刊期： 2005年第02期
目的建立大鼠β-淀粉样肽[Aβ(25-35)]诱导的痴呆模型,探讨知母总皂苷在阿耳茨海默病(AD)发病机制中的作用.方法SD大鼠60只,采用脑立体定位技术在大鼠单侧侧脑室一次性注射老化的Aβ(25-35)建立实验性AD模型.手术24 h后,大鼠经灌胃分别给予3种剂量的知母总皂苷和EGB761,模型组和空白组给予等剂量的蒸馏水,1次/1 d,连续14 d.在给予Aβ(25-35)后的第8天,应用Morris水迷宫法测定大鼠的学习记忆功能,造模后第14天断头取脑,测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力.结果与空白对照组相比,模型组大鼠空间学习记忆能力明显减弱,寻找平台潜伏期明显延长(P＜0.01);脑组织SOD、总抗氧化能力明显降低(P＜0.01),而MDA明显升高(P＜0.05).与模型组比较,给予知母总皂苷治疗后的大鼠学习记忆功能障碍得到明显改善,潜伏期显著缩短(P＜0.05),SOD活力显著提高(P＜0.05),总抗氧化能力也显著增强(P＜0.05),MDA水平明显降低(P＜0.05).结论知母总皂苷可明显改善AD模型大鼠的学习记忆功能,同时可提高模型大鼠的抗过氧化能力,这有可能是其改善学习记忆的原因之一.
作者：欧阳石；孙莉莎；郭胜蓝；刘旭；徐江平 刊期： 2005年第02期
目的探讨低G预适应对高G致大鼠学习记忆功能受损的影响.方法24只雄性SD大鼠随机分为对照组、+10Gz/3 min组和低G预适应组,每组8只.低G预适应组在+10 Gz/3 min暴露前进行3 d的+4Gz/3 min锻炼(1次/d).观察单次+10 Gz/3 min暴露后0、2、4和6 d大鼠学习记忆功能的变化.结果旷场反应中,+10 Gz/3 min组中央格停留时间在0 d,2 d较对照组显著延长(P＜0.05),总得分在0 d显著降低(P＜0.01);低G预适应组0 d的中央格停留时间显著延长(P＜0.01),总得分显著降低(P＜0.01).与+10 Gz/3 min组比较,低G预适应组中央格停留时间从2 d开始有缩短趋势,6 d时达到显著水平(P＜0.05),各时间点总得分均无显著差异.辨别性学习能力测试中,+10 Gz/3 min组正确反应次数在各时间点均较对照组显著下降,反应时在各时间点均较对照组显著延长(P＜0.01);低G预适应组正确反应次数和反应时在各时间点均与对照组无明显差别;与+10 Gz/3 min组比较,低G预适应组在各时间点的正确反应次数均显著增加(P＜0.01),反应时均显著缩短(P＜0.01).被动回避反应中,与对照组比较,+10 Gz/3 min组的0 d潜伏期显著延长(P＜0.05),6 d潜伏期显著缩短(P＜0.01),学习所用总时间与错误数无显著性变化;低G预适应组各项检测项目均无明显改变;与+10Gz/3min组比较,低G预适应组大鼠的6 d潜伏期显著延长(P＜0.01).结论采用低G预适应措施后,能够显著改善高G导致的大鼠学习和记忆能力受损程度.
作者：曹新生；吴兴裕；孙喜庆；刘挺松 刊期： 2005年第02期
南方医科大学学报杂志
主管:广东省教育厅
主办：南方医科大学
