学术投稿

血管内皮生长因子受体启动子驱动重组腺病毒双自杀基因系统选择性杀伤大肠癌细胞

林荣凯;黄宗海;苏国强;柯志勇;陈建雄;周俊杰

关键词:结直肠肿瘤, 血管内皮, KDR启动子, 自杀基因治疗
摘要:目的探讨血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动重组腺病毒CDglyTK融合基因体系对结直肠癌细胞株LOVO及人脐血管内皮细胞株ECV304的选择性杀伤作用.方法将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增后,体外感染表达KDR的LoVo、ECV304细胞和对照组不表达KDR的LS174T细胞,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对细胞株的杀伤效应.结果制备的病毒滴度为2.0×1012pfu/ml.3种细胞的感染率相似,且感染率随腺病毒滴度的递增而增加,当MOI为200时,所有细胞株均接近100%感染.以MOI为100的重组体分别感染各细胞株,发现其对前药的敏感性不同:表达KDR的LoVo和ECV304细胞对前药具有较高的敏感性,且二者敏感性无显著差异(P>0.1);与前二者相比,LS174T细胞对前药不敏感(P<0.001).同时,CDglyTK双自杀基因的疗效优于任一单自杀基因(P<0.001).流式细胞术检测表明该体系抑制LoVo细胞DNA的合成,表现为S期细胞比率增多及G1期细胞减少(P<0.001).结论 KDR基因启动子调控的CDglyTK融合基因体系可选择性杀伤结直肠癌LoVo细胞和血管内皮细胞.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 晚期氧化蛋白产物通过活性氧诱导单核细胞分泌肿瘤坏死因子

    目的探讨晚期氧化蛋白产物(AOPP)对单核细胞分泌肿瘤坏死因子(TNFα)的影响及可能机制.方法以THP-1和人外周血单核细胞为单核细胞模型,与用次氯酸氧化牛血清白蛋白(BSA)制备的AOPP-BSA共同培养,用ELISA法检测培养上清TNFα的释放量,用VICTOR Wallac1420多标记分析系统检测细胞氧化2,7-二氢二氯荧光素产生的荧光量反映活性氧的产生量:用抗氧化剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC),NADPH氧化酶抑制剂apocynin和P38磷酸化抑制剂SB203580预处理细胞,探讨AOPP诱导单核细胞分泌TNFα的可能机制.结果AOPP-BSA能诱导单核细胞TNFα的分泌和细胞内活性氧(ROS)的产生.用PDTC预处理细胞,可以清除AOPP-BSA诱导产生的ROS,同时抑制TNFα的分泌.用apocynin抑制NADPH氧化酶及用SB203580抑制P38磷酸化均能有效地抑制AOPP-BSA诱导的TNFα分泌.结论 AOPP可能通过激活单核细胞NADPH氧化酶,释放ROS,使P38磷酸化,导致TNFα的分泌.

    作者:张志辉;刘尚喜;侯凡凡;田建伟;王力;刘志强;陈瑗 刊期: 2005年第05期

  • 血管紧张素-(1-7)对腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚和纤维化的影响

    目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对腹主动脉缩窄所诱导的大鼠心肌肥厚和纤维化的影响.方法对8周龄雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术并随机分为假手术组、模型对照组和Ang-(1-7)治疗组,对1d后仍存活者皮下植入微量泵持续静脉输注Ang-(1-7)或生理盐水,Ang-(1-7)组(n=14)输注Ang-(1-7)(25μg·kg-1·h-1),假手术组(n=15)及模型对照组(n=12)则输注等量的生理盐水,4周后检测血流动力学参数、血浆和心肌AngⅡ浓度、左心室重量指数、心肌细胞横径和心肌胶原容积分数.结果(1)模型对照组动脉收缩压、舒张压、心率、左室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压、左室内压大上升速率(+dp/dtmax)均明显高于假手术组(P均<0.01),左室内压大下降速率(-dp/dtmax)低于假手术组(P<0.01).与模型对照组比较,Ang-(1-7)治疗组LVDEP显著减低(P<0.05),-dp/dtmax升高(P<0.05),而收缩压、舒张压、心率、LVSP及+dp/dtmax在两组间无明显差异.(2)在腹主动脉缩窄术后4周,模型对照组左心室质量、左心室质量指数及心肌细胞横径明显高于假手术组(P<0.01),Ang-(1-7)治疗组上述指标虽高于假手术组,但均明显低于模型对照组(P<0.05).(3)Ang-(1-7)治疗组心肌中小血管周围及心肌间质中胶原沉积虽多于假手术组,但明显少于模型对照组(P<0.05).(4)与假手术组比较,模型对照组和Ang-(1-7)治疗组心肌中AngⅡ浓度均明显增高(P<0.01),但模型对照组和Ang-(1-7)治疗组之间无显著差异(P>0.05);3组间血浆AngⅡ水平无明显差异(P>0.05).结论长期静脉输注Ang(1-7)对腹主动脉缩窄引起的动脉压和心肌血管紧张素Ⅱ水平的升高无影响,但使心肌肥厚和纤维化程度显著减轻,并保护受损的心功能.

    作者:王立军;何建桂;马虹;蔡乙明;廖新学;曾武涛;柳俊;王礼春 刊期: 2005年第05期

  • 定量测定血清心肌肌钙蛋白Ⅰ、肌红蛋白在急性心肌梗死诊治中的应用

    目的探讨心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)、肌红蛋白(Mb)两种生化指标在急性心肌梗死诊治中的应用价值.方法对胸痛发作后2~4 h的50例急性心肌梗死患者,定量检测血清cTnI、Mb、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同功酶(CK-MB)浓度,并对结果进行统计分析.结果急性心肌梗死患者Mbc、TnI、CK、CK-MB明显升高;峰值时间:Mb,(8±2.2)h;CK-MB,(18.1±3.2)h;CK,(19.4±4.1)h;cTnI,(18.6±2.9)h.病情恶化时各项指标持续上升,病情好转时降至正常范围.对照组的cTnI、Mb、CK和CK-MB4项指标均正常.结论 cTnI是诊断急性心肌梗死较理想的指标,同时Mb可对急性心肌梗死的早期诊断提供一种快速、可靠的生化指标,具有临床应用价值.

    作者:肖洪广;黄泽红;刘汉欣;林勇平 刊期: 2005年第05期

  • 超声诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的临床研究

    目的从临床上评价超声检查对诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的准确性.方法 67名近端指间关节受伤的病人接受了超声检查.超声采用5~10MHz实时线性变曲探头.并采用了3种临床体格联合检查方法,对伤情进行了判断.以手术探查结果为标准,对超声检查结果和临床体格检查结果进行了比较.结果手术探查结果证实39名病人有伸指肌中央腱断裂.超声检查结果与手术探查结果有非常好的一致性.超声检查和临床体格检查的敏感性分别为100%和89.74%,特异性为96.4%和82.14%.两种检查方法经统计学处理有显著差异(P<0.01).结论超声检查是一种非侵入性早期准确诊断近端指间关节伸指肌中央腱断裂的方法.

    作者:杨华;周初松 刊期: 2005年第05期

  • CT的空间分辨力测量技术及测试体模研究

    目的采用主观法和客观法测试CT机的空间分辨力,探讨与空间分辨力相关的各项参数.方法采用Catphan500和自制体模对2台CT在不同条件下进行了测试.结果分别得出了线对法和MTF方法下的结果.结论每种测试方法各有优缺点,有多种因素影响CT空间分辨力.

    作者:李萍;余晓锷;杨克柽;占杰 刊期: 2005年第05期

  • 南方战区783名空军官兵生存质量的调查与分析

    目的调查、分析和评价南方战区部分空军官兵的生存质量.方法采用自行设计的部队官兵生存质量量表--自测健康评定量表,在南方战区调查了783名空军官兵,从生理、心理、社会3方面考察了其生存质量状况.结果空军官兵的生存质量情况为中等水平.生理得分为66.33±9.38,心理得分为58.99±10.09,社会得分为53.69±12.40,总得分为:178.44±22.60.不同文化程度(P<0.01)、不同入伍地(P<0.01)、不同兵种(P<0.05)、不同身份(P<0.01)、入伍前不同职业(P<0.01)的空军官兵的生存质量有显著差别.结论不同文化程度、不同入伍地、不同兵种、不同身份、入伍前不同职业对军人的生存质量有一定影响,但不同民族、是否为独生子女对军人的生存质量影响并不大.

    作者:王斌会;俞守义 刊期: 2005年第05期

  • 3H-TdR标记人骨髓间充质干细胞移植治疗mdx鼠的实验研究

    目的探讨人骨髓间充质干细胞移植mdx鼠能否修复骨骼肌肌膜病变及干细胞在其体内的分布特点.方法用氚-脱氧胸腺嘧啶(3H-TdR)标记人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs),以每只鼠干细胞1×107/0.3 ml经尾静脉注入18只免疫抑制的mdx鼠(8~10周龄).于移植后24 h、48 h、2周、1月、2月、4月处死鼠,分别测定各组织器官的放射活性;用免疫荧光法检测骨骼肌肌膜营养障碍基因(dystrophin,Dys)表达情况.结果移植后1月,多数组织、器官放射活性显著高于对照组,其中以骨髓、肝、脾放射活性增高更为明显.大多数组织器官放射活性随时间推移逐渐下降,而骨骼肌放射活性的从2周时开始逐渐升高,于1月时达到高峰(27.65±3.53 Bq/mg湿重).1月之后,骨髓、骨骼肌放射活性仍保持较高水平.免疫荧光显示移植后24 h、48 h、2周骨骼肌Dys免疫荧光呈阴性,1月后呈阳性,1月、2月、4月阳性率分别为:6.6%、8.4%、8.9%.结论 hBM-MSCs能植入mdx鼠体内,并融合、分化为骨骼肌,部分修复骨骼肌肌膜病变;hBM-MSCs移植入mdx鼠后早期主要分布在骨髓、肝、脾,后期主要分布在骨髓、骨骼肌.

    作者:柳太云;李经伦;姚晓黎;董群伟;苏全喜;冯善伟;李才明;曾缨;刘祖国;张成;刘长征 刊期: 2005年第05期

  • VEGF启动子介导双自杀基因重组腺病毒对LoVo细胞的体外杀伤作用

    目的探讨VEGF启动子驱动的CD/TK双自杀基因重组腺病毒(Ad-VEGFP-CDglyTK)对大肠癌LoVo细胞的体外杀伤作用.方法分别用重组腺病毒Ad-VEGFp-CDglyTK、Ad-CMV-CD、Ad-CMV-TK、Ad-CMV-CDglyTK转染大肠癌LoVo细胞,给予前药5-FC、GCV,测定LoVo细胞的集落形成、细胞存活率及该治疗系统的旁观者效应.结果与Ad-CMV-CD、Ad-CMV-TK相比,Ad-VEGFp-CDglyTK系统对LoVo细胞的集落形成、细胞生长均具有更强抑制作用,并可见较明显的旁观者效应.而与CMV启动子的双自杀基因相比,其作用无显著性差异.结论 VEGF启动子驱动的双自杀基因治疗系统对大肠癌LoVo细胞有确切的杀伤作用,其作用强度与强启动子CMV驱动的双自杀基因治疗系统相似.

    作者:黄宗海;陈建雄;苏国强 刊期: 2005年第05期

  • 不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响

    目的研究不同潮气量机械通气对大鼠支气管和肺组织细胞凋亡的影响,初步探讨细胞凋亡在机械通气所致肺损伤中的作用机制及其意义.方法将30只健康雄性SD大鼠随机分成A、B、C 3组,气管切开、插管后,分别给予不同潮气量(VT)机械通气4h(A组:VT=10 ml/kg;B组:VT=20 ml/kg;C组:VT=40 ml/kg),采用光镜和电镜观察3组大鼠肺组织的病理和超微结构改变,用湿干重比值来比较肺水肿的程度,用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的末端标记法检测损伤的肺组织中细胞凋亡的发生程度,用免疫组织化学技术检测肺组织caspase-3酶的表达及组织分布.结果依次给予A、B、C 3组以小、中、大3种不同的潮气量机械通气后,3组动物大体和病理改变依次加重,肺湿干重比值依次增高,支气管和肺组织细胞凋亡明显增加(P<0.01);在细胞凋亡执行阶段起中心作用的caspase-3酶在肺泡上皮细胞、血管内皮细胞的胞浆和核中的表达也明显增强,尤其以在支气管上皮caspase-3酶的表达增强更为显著.结论给予3组动物3种不同潮气量机械通气后,动物病理改变和细胞凋亡数量及凋亡效应酶caspase-3的变化趋势基本一致,推测细胞凋亡在大潮气量机械通气引起的肺损伤中起重要作用.

    作者:胡国栋;蔡绍曦;陈英华;高枫 刊期: 2005年第05期

  • 高盐对SD大鼠肾脏骨调素mRNA表达的影响

    目的观察高盐饮食对大鼠肾脏骨调素mRNA及其蛋白表达的影响,旨在研究高盐对大鼠肾脏的损伤作用.方法选取10周龄正常盐饮食雄性Sprague-Dawley大鼠48只,随机分为高盐(4%NaCl)或正常盐(0.6%NaCl)饮食组,每组24只.每周测量大鼠鼠尾血压、体质量.于第4、8、12周末每组各处死6只大鼠,测量大鼠肾质量.采用免疫组化方法测定大鼠肾脏OPN表达;荧光定量PCR方法测定大鼠肾脏骨调素mRNA表达.结果两组大鼠血压、体质量及肾质量/体质量比无明显差异(P<0.05),12周后高盐饮食大鼠肾脏骨调素mRNA(0.27±0.16vs 0.15±0.13,P<0.05)及其蛋白表达明显升高(0.78±0.15vs 0.61±0.P<0.01),与正常盐饮食大鼠比较有显著统计学差异.结论高盐饮食摄人增加大鼠肾脏骨调素mRNA及其蛋白表达,表明高盐对大鼠肾脏有一定损伤作用,并且这种损伤作用不依赖于大鼠血压升高.

    作者:郑勇;刘治全;叶涛;何岚;王毅;方园;李建宁;刘萍;叶枫 刊期: 2005年第05期

  • 冠状动脉造影正常的急性ST段抬高性心肌梗死相关因素分析

    目的探讨急性ST段抬高性心肌梗死(STEMI)冠状动脉造影正常病人的相关因素.方法回顾性分析北大深圳医院自2001年1月至2004年10月收治的271例初发STEMI病人的心电图、心脏超声和冠状动脉造影资料,其中STEMI急诊冠状动脉造影正常的病人29例,从其余242例STEMI急诊冠状动脉造影异常的病人中随机抽取60例作为对照组.应用1ogistic回归分析冠状动脉造影正常的STEMI相关因素.结果本组冠状动脉造影正常者STEMI的发生率为10.7%.单因素分析表明,冠状动脉造影正常和异常STEMI病人的性别、高血压、高血脂、平均肌酸肌酶峰值、ST段重新抬高和Q波计数无显著性差异(P>0.05).两组病人年龄、吸烟情况、糖尿病、缺乏梗死前心绞痛、室壁运动积分有显著性差异(P<0.05).多因素分析表明年龄、吸烟、缺乏梗死前心绞痛是冠状动脉造影正常STEMI的相关因素(P<0.05),而糖尿病、高血压、高血脂等冠心病的危险因素与冠状动脉造影正常STEMI没有相关性(P>0.05).住院期间,冠状动脉造影正常的STEMI病人射血分数、心指数、每搏指数和室壁运动积分较冠状动脉造影异常的病人明显改善(P<0.05),心脏病事件少于冠状动脉造影异常的病人(P<0.01).结论冠状动脉造影正常STEMI常见于大量吸烟、缺乏梗死前心绞痛的年轻病人,可能与自发性再灌注有关.

    作者:梁振涛;郭军;余小平;张斌;张卫星;朱仲生;罗华;黄磊 刊期: 2005年第05期

  • 流行性出血热患者并发肝脏损害的临床观察

    目的探讨流行性出血热(EHF)病程中肝功能的变化及其临床意义.方法对103例EHF患者的肝功能检测结果进行回顾性分析.结果 (1)重型及危重型患者肝脏的损害(ALT、SB及白蛋白)较轻型、中型患者有显著性差异;(2)死亡组肝脏的损害(ALT、SB)显著重于存活组(P值分别为0.000;0.000);(3)肝脏的损害(ALT)与患者的临床类型、年龄、血小板、白蛋白、乳酸脱氢酶及肌酐密切相关.结论 EHF患者并发肝脏损害较普遍,以轻、中度肝脏损害多见,而且与患者的临床类型、年龄、血小板、白蛋白、乳酸脱氢酶、肌酐及预后密切相关.病情愈重者,肝脏损害愈严重.因此在流行性出血热(EHF)病程中动态观察肝功能的变化,有助于判断病情和估计预后.

    作者:唐正运;叶晓光;廖云珍;李石好 刊期: 2005年第05期

  • 远端一枚或两枚锁钉对胫骨髓内钉力学性能影响的对比研究

    目的研究髓内钉远端锁钉数目对胫骨加锁髓内钉整体力学性能是否有影响.方法实验共选用20根国产钛合金制造的9mm胫骨加锁髓内钉.将所有髓内钉随机分成两组,即远端安装单枚锁钉的单锁钉组,和远端安装2枚锁钉的双锁钉组.每组中各随机选用5根分别在万能力学实验机上进行压缩和扭转力学测试.测试所用的模型为根据国内外实验结果自行研究的不锈钢模型.结果在压缩实验中,单钉组平均大压缩载荷为1 850N,双钉组的平均大载荷为2150N,双钉组抗压缩能力显著高于单钉组(P<0.05).在扭转实验中,单钉组平均大扭矩、扭角分别为55.54N·m和57.36.,双钉组分别为55.78N·m和58.28.,两组差异无统计学意义(P>0.05).结论胫骨髓内钉远端用单枚锁钉时其整体力学性质能满足临床要求.对于较严重的骨折类型还是推荐安装两枚远端锁钉.本实验采用的力学测量模型方便实用且经济易得,尤其适于髓内钉的力学对比研究.

    作者:宫福良;王坤正;党晓谦;王春生;时志斌 刊期: 2005年第05期

  • 经左锁骨下静脉起搏脉冲引导紧急床边临时心脏起搏

    目的经左锁骨下静脉途径研究起搏脉冲引导行紧急床边临时心脏起搏技术的优越性及可行性.方法以Seldinger法穿刺左锁骨下静脉置入鞘管.设置起搏器频率超过患者自主心率20次/min、输出电流为5 mA、感知电压为3mV,沿鞘管推送电极至心电监护显示脉冲信号及起搏心律.结果 18例患者获良好的起搏效果(操作时间5~10min,平均6.9 min).1例患者开始时起搏效果不良,约2 h后好转;2例患者起搏效果差;后3例操作时间均超20 min.21例患者术后均无并发症.结论由起搏脉冲引导、经左锁骨下静脉行紧急床边临时心脏起搏起效迅速、成功率高且较安全.

    作者:马明远;誉铁鸥;方滨;温伟标;毛克江 刊期: 2005年第05期

  • 颅内神经内分泌癌1例报告

    神经内分泌癌是由神经内分泌肿瘤恶变而来,多见于肺和腹腔器官,作者近期治疗1例极其罕见的颅内神经内分泌癌,报告如下.

    作者:彭林;程江鹏;黄理金;黄传平 刊期: 2005年第05期

  • 双阴性选择法纯化培养人骨髓多能成体祖细胞

    目的建立体外分选纯化及培养人骨髓来源多能成体祖细胞(MAPCs)的方法.方法取健康成人志愿者适量骨髓采用梯度密度离心法分离获取单个核细胞,贴壁培养后,将获取的骨髓贴壁细胞通过CD45、血糖蛋白A(GlyA)免疫微磁珠(miniMACS)负分选,流式细胞术鉴定分选后细胞纯度;对传代到不同阶段的细胞进行CD45、GlyA流式细胞分析,初步了解MAPCs在培养、增殖过程中的免疫学稳定性.结果通过miniMACS分选,平均每1×106/ml骨髓贴壁细胞可分选出约(5~10)×104/ml的MAPCs,分选前后细胞活力分别为(96.7±1.7)%和(96.0±2.4)%,无明显差异;自制的培养基培养分选后的MAPCs生长良好,长传代到第16代;流式细胞仪分析获取的CD45、G1yA-细胞纯度大于98%;流式细胞仪分析传代第4、8、12代MAPCs,CD45-、G1yA-细胞纯度大于98%.结论CD45、GlyA miniMACS负分选可从骨髓中分离高纯度的MAPCs;MAPCs在本室自制的人MAPCs培养基中体外有较强的增殖能力,且能保持较长时间的稳定状态.

    作者:慕宁;高毅;唐力军 刊期: 2005年第05期

  • 黄芪配蒲公英在内科杂病中的运用

    黄芪与蒲公英一温一寒、一补一攻,临证以此药对为君,遣药组方,擅治内科杂病,运用于临床,疗效确切,现简介如下:

    作者:钟洪;赵洁;臧堃堂 刊期: 2005年第05期

  • 具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定

    目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础.方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性.结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物.经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上.免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别.结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值.

    作者:杨培梁;陈晓光;王元占;李华;周晓红;吴焜;言慧 刊期: 2005年第05期

  • 钩吻素子治疗银屑病样动物模型的疗效观察

    目的观察钩吻素子(Kou)对银屑病动物模型的疗效.方法采用鼠尾鳞片表皮和鼠阴道上皮实验模型,不同组别的小鼠给以甲氨蝶呤或不同浓度的Kou,分别观察其对上皮细胞分裂和表皮细胞分化的影响,以及对血清IL-2含量的影响.结果 Kou中、高剂量组能显著抑制阴道上皮细胞有丝分裂、促进鼠尾鳞片表皮颗粒层的生成;Kou低、中、高剂量组均可明显降低小鼠血清IL-2的水平.结论提示Kou可能通过抑制小鼠表皮细胞增殖与促进其分化并减少炎性因子的生成而发挥作用,为其用于银屑病的治疗提供了实验依据.

    作者:张兰兰;黄昌全;张忠义;王志睿;林敬明 刊期: 2005年第05期

  • 微囊藻毒素LR对小鼠的急性毒性研究

    目的了解微囊藻毒素对小鼠的急性损伤作用.方法以BALB/C小鼠为材料,腹腔注射22μg./kg·b.w.和43μg/kg·b.w.剂量的微囊藻毒素LR,测定脏器系数和一系列生化指标.结果肾脏指数与肝脏指数明显增加,表明两种器官都受到损伤;血清中天冬氨酸转氨和丙氨酸转氨酶活力上升,尿素含量下降预示着肝脏损伤,尿酸含量上升则预示肾脏损伤的发生.结论肾脏也可能是易受微囊藻毒素损伤的器官.

    作者:雷腊梅;宋立荣 刊期: 2005年第05期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学