学术投稿

含血管内皮生长因子启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒的制备及其体外杀伤作用观察

陈建发;黄宗海;俞金龙;厉周;车小燕

关键词:腺病毒, 胞嘧啶脱氨酶, 基因治疗, 血管内皮细胞生长因子, 同源重组
摘要:目的应用AdEasier-1系统高效制备含血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒并观察其体外肿瘤杀伤作用.方法以JM109细菌基因组为模板,PCR扩增出含HindⅢ/BamH Ⅰ酶切位点的CD基因,亚克隆到pREP8,继而用HindⅢ/XbaⅠ切出含pA加尾信号的CD基因,插入到预先构建的含VEGF启动子的转移质粒pAdtrack-VEGFP构建pAdtrack-VEGFP-CD.经Pme Ⅰ线性化后转化AdEasier-1细菌,用25 μg/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和Pac Ⅰ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CD.经293细胞包装、扩增获得重组腺病毒Ad-VEGFP-CD,行PCR鉴定.通过测定细胞克隆形成率和细胞存活率观察重组腺病毒对体外培养的LoVo细胞的细胞毒作用.结果构建重组腺病毒质粒的成功率为70%(7/10).包装扩增后重组腺病毒的滴度为4.8×1012CFU/ml,PCR扩增结果与预期相符.在前药5-氟胞嘧啶存在下,重组腺病毒对LoVo具有明显杀伤作用,细胞克隆形成率和细胞存活率都明显下降.结论应用AdEasier-l系统可以成功制备含VEGF启动子驱动CD自杀基因的重组腺病毒,该重组体具有明显的肿瘤杀伤作用.
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  • 肝细胞性肝癌18F-FDG PET显像与血清甲胎蛋白的相关性研究

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  • 超声引导下腔内注射凝血酶治疗假性动脉瘤1例报告

    超声引导下凝血酶注射法(ultrasound-guided thrombininjection,UGTI)是近年来发展快的治疗假性动脉瘤(falseaneurysm,FA)的非手术方法,国内尚未见报道.近我院收治1例FA,并采用UGTI治疗获得成功,现报道如下.

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  • 针刺配合超声波治疗颞下颌关节紊乱病

    目的比较针刺配合超声波治疗与超短波治疗颞下颌关节紊乱病(TMD)的治疗效果.方法将68例TMD患者随机分为两组,分别用针刺配合超声波治疗与单纯超短波治疗,比较两组疗效.结果两组疗效有显著性差异(P<0.05).结论针刺配合超声波治疗TMD方法简单、见效快、疗程短,可迅速消除疼痛症状.

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    目的探讨直流电中药离子导入促进骨折愈合的作用.方法将12只新西兰种兔造成双侧腓骨骨折模型,采用直流电中药离子导入方法进行实验研究.在实验基础上采用同种疗法对102例(其中50例为对照组)临床胫骨骨折患者进行疗效观察.结果总有效率100%.与对照组比较,骨折临床愈合时间平均提前10d.临床随访4~12个月,全部病例骨折愈合,功能恢复良好.结论直流电中药离子导人能改善骨折部位血液循环,加速骨痂生长,为进一步促进骨折愈合提供了一种新方法.

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    目的通过研究钙调神经磷酸酶(CaN)抑制剂对缺氧大鼠右心室心肌CaN活性及血浆一氧化氮合酶(iNOS)、NO、内皮素-1(ET-1)水平的影响,探讨CaN在慢性缺氧性右心室心肌肥厚中的作用.方法将大鼠置于氧浓度为(10.0±0.5)%的大型玻璃舱中,每天24h缺氧,持续7 d,建立大鼠慢性缺氧模型.实验大鼠分3组,即正常组、缺氧组、环孢酶素(CsA)处理组,每组各8只.缺氧组持续缺氧14d,处理组在缺氧的同时腹腔内注射CsA(20mg/kg@d).第14天处死大鼠,取血,测NO、ET-1、iNOS水平,分离心脏称质量,并留右心室测CaN活性水平.结果 (1)缺氧组右室与左室加室间隔的质量比、右室质量/体质量均明显高于正常组和CsA处理组(P<0.01).(2)缺氧组右心室心肌CaN活性明显高于正常组(p<0.01),而CsA处理组则明显低于缺氧组(p<0.01).(3)缺氧组血浆NO、iNOS水平明显低于正常组(p<0.01),ET-1水平则明显高于正常组(p<0.01);而CsA处理后血浆NO、iNOS水平明显高于缺氧组(P<0.01),ET-1水平则明显低于缺氧组(p<0.01),与正常组之间差别无统计学意义(P<0.05).结论 CaN抑制剂CsA对心肌肥厚的抑制作用可能与抑制CaN活性,调节血NO、iNOS和ET-1水平,改善肺动脉压力等有关.

    作者:谭建新;刘郴州;揭育丽;王优;黄宇戈 刊期: 2004年第06期

  • 犬急性肠系膜缺血介入模型的建立

    目的建立一种适合于影像学研究的犬急性肠系膜缺血新模型.方法 10只比格犬分为缺血组(8只)和对照组(2只),将4FCobm导管选择性插入肠系膜上动脉.缺血组对肠系膜上动脉分支行无水乙醇栓塞术,对照组注射相同剂量生理盐水,之后行影像学观察和病理学研究.结果数字减影血管造影显示缺血组肠系膜上动脉部分分支血管闭塞,对照组肠系膜上动脉血管无变化;CT和病理学观察缺血组出现急性肠缺血征象,对照组表现正常.结论采用选择性插管无水乙醇栓塞技术可建立适合影像学研究的急性肠系膜缺血模型.

    作者:杨波;全显跃;俞志坚;杨金城;龙秋洁 刊期: 2004年第06期

  • 腺泡状软组织肉瘤1例报告

    恶性腺泡状软组织肉瘤(alveolar soft-part sarcoma,ASPS)是一种少见的软组织肿瘤,临床容易误诊漏诊,没有明确有效的治疗标准,预后不一.现报告1例ASPS如下.

    作者:邓群峰;肖建秋;许辉;杨先军 刊期: 2004年第06期

  • 对临床医学重点学科建设的几点思考

    根据我校附属医院重点学科建设的实践经验,围绕怎样建设临床医学重点学科这一医院建设的重要课题,重点阐述了重点学科建设中的组织管理、人才建设、科研方向、基础设施、制度建设及动态管理等方面,介绍了学科评估指标体系的建立原则与评估方法-希望对学科建设和管理有很好的借鉴作用.

    作者:葛长荣;周增桓 刊期: 2004年第06期

  • 肾母细胞瘤术前化疗疗效分析

    目的探讨分析肾母细胞瘤术前化疗的优劣.方法对35例手术治疗的肾母细胞瘤患者的临床资料进行回顾性分析,其中27例患者术前给予化疗.结果化疗后肿瘤体积明显缩小17例,出现明显化疗药物毒副反应15例;术中死亡1例、术后切口延迟愈合4例、白细胞仍减少5例.结论肾母细胞瘤术前化疗可有效地减少手术并发症的发生,合理的化疗方案的选择,积极的内科保守治疗可有效预防化疗毒副反应及并发症的发生.

    作者:赵永斌;郑少斌;毛向明;周海宽;张鹏 刊期: 2004年第06期

  • PET/CT图像融合对骨转移瘤放射治疗肿瘤区勾画的影响

    目的评价PET/CT图像融合在三维适形放射治疗骨转移瘤肿瘤靶区勾画中的作用.方法选取3例病理证实原发灶为肺癌、肝癌和肾癌且合并全身多发性骨转移瘤患者,选择腰椎、胸椎、肋骨、髂骨、肩胛骨、股骨转移病灶各1处,标记为BM1~6,由8位放射肿瘤学医师分别在治疗计划CT上勾画6处骨转移瘤的肿瘤区体积(GTV),比较依据CT和PET/CT图像融合资料勾画GTv的差异.结果有骨皮质破坏的病灶BM1~5,依据CT勾画的GTV较依据PET/CT勾画的GTV大(P<0.05),而无明显骨皮质破坏的病灶BM6则相反(P<0.05).依据PET/CT勾画GTV时,不同观察者之间的差异小于依据CT勾画GTV时的差异.结论 PET/CT图像融合能提高骨转移瘤GTV勾画的精确性和重复性,从而减少对周围正常组织损伤而增加放射治疗的增益比.

    作者:朱晓霞;陈永清;陈龙华 刊期: 2004年第06期

  • 子宫内膜异位症患者肝细胞生长因子及其受体c-Met的表达

    目的研究肝细胞生长因子(HGF)及其受体c-Met在子宫内膜异位症发病机制中的作用.方法采用mRNA原位杂交和免疫组织化学技术检测经腹腔镜手术及病理证实的54位子宫内膜异位症妇女(Ⅰ/Ⅱ期患者28例,Ⅲ/Ⅳ期患者26例)在位和异位内膜组织及24例正常对照组妇女在位内膜HGF、c-Met的分子和蛋白表达.结果子宫内膜异位症患者在位内膜HGF、c-met基因和蛋白阳性表达与异位内膜一致,但阳性切片中,异位内膜阳性细胞数及表达强度高于在位内膜.增生期和分泌期的内膜细胞HGF/c-MetmRNA和蛋白的表达相近,无明显差异.对照组、Ⅰ/Ⅱ期患者在位、异位内膜与Ⅲ/Ⅳ患者在位、异位内膜比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率依次上升,组间差异显著(P<0.01).Ⅰ/Ⅱ期、Ⅲ/Ⅳ期患者在位和异位内膜与对照组比较,HGF、c-met基因和蛋白阳性表达频率有显著差异;Ⅰ/Ⅱ期患者与Ⅲ/Ⅳ期患者比较,HGF/c-Met阳性表达频率和表达强度均无显著差异.Ⅲ/Ⅳ期患者c-Met强阳性表达频率与对照组比较,有显著差异.结论 HGF、c-met基因和蛋白表达与子宫内膜异位症发病机制相关,在位内膜性质的改变可能是子宫内膜异位症发病机制的关键环节.

    作者:宗利丽;李亚里;宋三泰;江泽飞;赵军 刊期: 2004年第06期

  • 含血管内皮生长因子启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒的制备及其体外杀伤作用观察

    目的应用AdEasier-1系统高效制备含血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒并观察其体外肿瘤杀伤作用.方法以JM109细菌基因组为模板,PCR扩增出含HindⅢ/BamH Ⅰ酶切位点的CD基因,亚克隆到pREP8,继而用HindⅢ/XbaⅠ切出含pA加尾信号的CD基因,插入到预先构建的含VEGF启动子的转移质粒pAdtrack-VEGFP构建pAdtrack-VEGFP-CD.经Pme Ⅰ线性化后转化AdEasier-1细菌,用25 μg/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和Pac Ⅰ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CD.经293细胞包装、扩增获得重组腺病毒Ad-VEGFP-CD,行PCR鉴定.通过测定细胞克隆形成率和细胞存活率观察重组腺病毒对体外培养的LoVo细胞的细胞毒作用.结果构建重组腺病毒质粒的成功率为70%(7/10).包装扩增后重组腺病毒的滴度为4.8×1012CFU/ml,PCR扩增结果与预期相符.在前药5-氟胞嘧啶存在下,重组腺病毒对LoVo具有明显杀伤作用,细胞克隆形成率和细胞存活率都明显下降.结论应用AdEasier-l系统可以成功制备含VEGF启动子驱动CD自杀基因的重组腺病毒,该重组体具有明显的肿瘤杀伤作用.

    作者:陈建发;黄宗海;俞金龙;厉周;车小燕 刊期: 2004年第06期

  • 抗中暑速效喷雾剂增强大鼠热耐受能力的观察

    目的观察抗中暑速效喷雾剂在高温环境下对大鼠肛温和死亡率的影响,以确定抗中暑速效喷雾剂能否增强大鼠的热耐受性.方法将SD大鼠随机分为3组,A组给抗中暑速效喷雾剂,B组给氯丙嗪作为阳性对照,C组给蒸馏水作为空白对照.3组同时放入温度为41℃,相对湿度为70%的人工热室中受热至死.热暴露前测1次各鼠肛温,热暴露1 h后再测1次肛温,并记录各鼠死亡时间.结果 A组和B组能降低大鼠肛温和死亡率,延长存活时间.结论抗中暑速效喷雾剂能增强大鼠高热环境的耐受能力,具有抗中暑作用.

    作者:王伟;谭晓梅;刘国清 刊期: 2004年第06期

  • 聚乙烯吡咯烷酮接枝壳聚糖的生物相容性评价

    目的评价聚乙烯吡咯烷酮(PVP)接枝壳聚糖的生物相容性,以制备一种新型的组织工程支架材料.方法对材料进行接触角、吸水率的测定,并借助体内埋植和细胞培养实验对材料的生物相容性进行系统性评价.结果接枝后的材料吸水率达1 100%,接触角达到83°~86°;体内埋植3个月后材料部分降解,周围组织无明显的炎症反应,角膜上皮细胞在材料上能较好地生长,没有明显的细胞毒性.结论所制备的PVP接枝壳聚糖具有良好的生物相容性,可作为组织工程支架材料.

    作者:邓政兴;张志雄;李立华;周长忍 刊期: 2004年第06期

  • 口腔癌动脉插管栓塞化疗术

    目的观察晚期口腔癌介入栓塞化疗后的病理学改变及效果.方法 20例患者(舌癌16例,牙龈癌2例,口底癌2例)在DSA监测下,采用Seldinger's技术,由股动脉插管进入同侧颈外动脉并确定相应的供血血管,注入阿霉素、顺铂及丝裂霉素C,同时用明胶海绵栓塞.结果栓塞后1~2周手术,其中1例术后4周手术,组织学光镜及电镜观察发现肿瘤组织发生了明显改变,如细胞数量减少,核固缩、孔泡变性以及局部凝固性坏死,坏死裂解的癌巢由增生的纤维结缔组织包裹机化,同时较多的炎性细胞浸润.结论对晚期口腔癌患者给予动脉插管介入栓塞化疗术可导致肿瘤组织的变性坏死;肿瘤与周围组织界限清楚,有利于术中区别组织界限,提高手术成功率;对于无法手术的患者,该方法可抑制肿瘤的生长,延缓生命.

    作者:李伟忠;马著彬;赵彤 刊期: 2004年第06期

  • 中小型医院腹腔镜手术治疗输卵管妊娠内出血经验(附76例报告)

    目的探讨腹腔镜手术在输卵管妊娠合并内出血治疗中的应用.方法回顾分析76例输卵管妊娠合并内出血经腹腔镜手术的治疗效果.结果 76例均使用腹腔镜手术成功,未发现并发症.结论异位妊娠内出血腹腔镜手术治疗,与操作者的技术水平及腹腔镜设备有关,并具有微创、术后恢复快的优点.

    作者:邹辉璋;曹扬;徐洁萍;罗小琴 刊期: 2004年第06期

  • 99mTc-MDP骨显像评价糖尿病足下肢血流改变

    目的用放射性核素成像法评价糖尿病足下肢血流的变化.方法对56例糖尿病足患者和36例对照者进行99mTc-MDP三相骨显像,每个单足单独进行资料处理.在足背(楔骨和跖骨)、胫骨粗隆各勾画感兴趣区(ROI),计算各ROI放射性浓度(kc/pixel)及足部与胫骨的放射性浓度比值m/t.生成各ROI的时间一活度曲线,从曲线读取各部位的灌注时间Tp,并计算摄取速率V.计算并比较各指标的诊断灵敏度、特异性、准确率.各指标对糖尿病足诊断效能的差异采用u检验.结果 Tp、V值、Rm/t比值在对照组分别为(32.9±9.8)s、(2.301±0.754)counts/s、0.85±0.29,在糖尿病组分别为(36.1±15.3)s、(1.574±0.341)counts/s、0.72±0.31,`两组V值及Rm/t比值有统计学差异.V值诊断糖尿病足的灵敏度为80.2%、特异性为82.8%、准确率为81.5%,Rm/t比值则分别为65.2%、68.8%和67.3%.V值的灵敏度和特异性均优于Rm/t比值(P<0.05).结论糖尿病足由于下肢血流障碍,放射性核素在足部摄取速率明显降低,足部摄取水平降低.摄取速率和足部相对摄取水平均可反映糖尿病足部血流改变,其中摄取速率更灵敏、准确.

    作者:梁英明;范义湘;周琳;黄凯 刊期: 2004年第06期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学