学术投稿

人源乙型肝炎病毒表面抗原抗体Fab片段与IFN-α融合蛋白表达载体的筛选

罗荣城;尤长宣;韩焕兴;胡栋平;王传斌;苏瑾

关键词:乙型肝炎表面抗原, 干扰素, 融合蛋白, FAB
摘要:目的探讨如何在无药物抗性改变,无转化细胞生物指示系统改变的情况下准确快速地筛选出人源抗乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)抗体Fab片段/IFN-α融合蛋白原核表达载体.方法在IFN-α基因两端加上XbaⅠ酶切位点后用PCR法扩增,再重组入以抗体库技术筛选得到的人源抗HBsAg-Fab片段表达载体的相应位点上,构建anti-HBsAg-Fab/IFN-α融合蛋白表达载体.取PCR扩增得到的IFN-αDNA,用地高辛标记系统进行化学标记,制备IFN-αDNA探针.取构建的融合蛋白表达载体转化受体菌,增菌后,以溶菌酶加煮沸法批量制备载体DNA,点样于硝酸纤维膜上,80℃烤2 h,预杂交液42℃,2 h膜预杂交,标记探针42℃,4 h杂交,洗膜后用酶标抗地高辛抗体显色.同时设单纯人源抗HBsAg-Fab片段表达载体为阴性对照,IFN-α质粒为阳性对照.阳性克隆再以SacⅠ和XbaⅠ酶切,琼脂糖电泳鉴定.结果 40株转化细胞中筛选出7个阳性克隆, 酶切鉴定显示两者符合率达100%,成功地筛选出了anti-HBsAg-Fab/IFN-α融合蛋白表达载体.结论人源HBsAg抗体Fab片段/IFN-α融合蛋白表达载体的成功构建和筛选,为表达该融合蛋白打下了基础.
南方医科大学学报杂志相关文献
  • 门静脉海绵样变的CT诊断

    目的分析门静脉海绵样变(CTPV)病人的CT表现和特征,探讨CT诊断该病的价值.材料与方法 10例门静脉海绵样变病人均做腹部CT平扫和增强扫描,分析其CT表现,其中6例经数字减影血管造影(DSA)证实,4例经手术证实.结果主要CT表现为门静脉走行区结构紊乱,正常结构消失;在门静脉走行区出现血管样结构或迂曲、扩张窦隙样血管结构,在门静脉期明显强化;在动脉期可见周围肝实质短暂灌注异常,表现为带状高密度影,而在静脉期迅速消失.结论 CT是诊断门静脉海绵样变性的有效方法,可为临床采取正确的治疗措施提供必要的依据.对CT表现不典型病例,结合DSA或超声检查(US)可提高诊断准确性.

    作者:赵修义;张雪林 刊期: 2000年第02期

  • 赠卵体外受精-胚胎移植16个治疗周期临床报道

    目的分析14例16个周期赠卵体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的临床结果.方法采用长周期GnRHa/Gn超促排卵方案,受卵者采用激素替代治疗(HRT)或GnRHa/HRT方案,应用戊酸雌二醇(EV)12~42 d,供卵者经阴道取卵与受者丈夫的精子行体外受精及胚胎培养48~72 h,于受卵者应用黄体酮3~5 d后行胚胎移植.妊娠后继续用雌、孕激素治疗直至妊娠12周为止.结果每周期取卵数(14.1±5.2)个(7~22个),每周期移植胚胎数(4.3±1.6)个(3~5个),15个移植周期中,临床妊娠8次(53.3%),胚胎着床率30.0%(18/58).3例于早期流产, 5例继续妊娠达8~35周.讨论赠卵IVF-ET是治疗卵巢功能衰退患者的有效方法.应用雌激素时间的长短变异范围较大,不影响妊娠,用孕激素3~5 d后行移植胚胎取得了良好的妊娠率.

    作者:陈士岭;孔令红;黄敏珍;邢福祺 刊期: 2000年第02期

  • 雌激素对大鼠血小板聚集性的影响

    目的研究大鼠人工绝经及补充雌激素 (estrogen, E) 后血小板聚集性的变化及其部分机制.方法将24只SD雌性大鼠随机分为3组:假手术组、单纯去势组、去势+补充雌激素组.观察其血小板聚集性、一氧化氮(Nitric oxide, NO)、前列环素(Prostacyclin, PGI2)、血栓烷A2 (Thromboxane A2, TXA2) 及血栓烷A2与前列环素的比值(TXA2/PGI2)的变化.结果单纯去势组大鼠血小板聚集性较假手术组明显增加,去势+补充雌激素组较单纯去势组下降;单纯去势后雌性大鼠TXA2/PGI2上升,补充雌激素组下降;去势后雌性大鼠NO明显降低,补充雌激素后升高.结论绝经后补充雌激素可通过降低TXA2/PGI2、升高NO 抑制血小板聚集,对绝经后妇女冠心病有防治作用.

    作者:董凤英;吴赛珠 刊期: 2000年第02期

  • 宫腔电切术治疗子宫颈良性病变76例临床分析

    目的探讨宫腔电切术治疗子宫颈良性病变的临床意义.方法应用宫腔电切镜,对76例保守治疗无效的宫颈慢性炎症、肿瘤等良性病变患者行宫颈内膜、肿瘤电切术.结果手术全部成功,术后随访65例,随访时间为3个月至2年半,未见复发.术中术后合并症不多.结论宫腔电切术治疗宫颈良性病变,合并症少,创伤小,且能保留患者生育功能,是治疗宫颈良性病变的较好方法.

    作者:何援利;丁晓平;宗利丽;温总莲;杨进;陈炜 刊期: 2000年第02期

  • 上皮型钙粘蛋白与大肠癌临床病理因素的关系

    目的探讨上皮型钙粘蛋白(E-cadherin,E-CD)在大肠癌中的表达与其临床病理因素的关系.方法采用免疫组织化学的方法研究大肠癌组织标本E-CD的表达情况.结果 E-CD在正常大肠粘膜上皮组织均保留表达;而在大肠癌标本中的保留表达率为66.7%(70/105).结论与其它肿瘤相比较,E-CD在大肠癌中的减弱表达率较低,但是E-CD的减弱表达与大肠癌患者的年龄、病理组织学分化程度、临床Dukes分期有显著的相关性,可以作为肿瘤预后的一个指标.

    作者:南清振;高蕾;杨希山;肖冰;张亚历 刊期: 2000年第02期

  • 食指背侧岛状皮瓣修复第1掌指关节周围皮肤缺损

    我院自1993年1月至1998年1月行食指背侧岛状皮瓣修复第1掌指关节周围皮肤缺损19例,效果满意,报道如下:

    作者:杨绍安;余斌;肖晓桃 刊期: 2000年第02期

  • 大面积高浓度氢氟酸烧伤2例临床报告

    氢氟酸为一种强烈腐蚀剂,氢氟酸烧伤后大致具有如下特点:(1)迟发性深部组织剧痛,高浓度时也可即时发生疼痛而无潜伏期;(2)进行性组织损伤;(3)严重时可引起致命性低钙血症[1].近我们收治了2例大面积氢氟酸烧伤患者,其中1例为55%氢氟酸致11%体表烧伤,另1例为50%氢氟酸致25%体表烧伤,2例均于5 h内死亡,但在治疗过程中,发现一些值得注意的临床征象,现将其中较典型1例报告如下.

    作者:张文振;荣新洲;郑庆兴;陈惠英 刊期: 2000年第02期

  • 液态媒质中鸡胚心脏瞬间心电向量的综合

    目的和方法在电导率不同的2种液态媒质中,采集60个5日龄鸡胚心脏2组相反方向上若干离场源不同距离的测试点心电图,分别比较相同媒质中相反方向上相同距离点的心电图形态和R(r)波振幅,判断该单腔心瞬间心电向量综合的可能性.结果无论是高电导率的生理盐水,还是低电导率的蒸馏水,相同媒质相反方向相同距离点上的心电图皆为正立,其R(r)波振幅的差异不显著(P>0.05);心电在高电导率液态媒质中的衰减幅度远大于在低电导率的液态中的衰减幅度.结论单腔心相反方向的心肌除极所形成的瞬间心电向量可能由于心腔内高电导率血液的衰减效应而无法实现跨越心腔的相互综合.任一瞬间的心电活动可能无法用单一的综合心电向量来表示.

    作者:周翔;农德斌;喻德旷 刊期: 2000年第02期

  • 监测FasL表达评估异基因造血干细胞移植后T细胞免疫功能状态

    目的评估异基因造血干细胞移植后T淋巴细胞免疫功能状态. 方法采用三色荧光标记的流式细胞术,对4例异基因造血干细胞移植、2例自体干细胞移植患者移植前后的T淋巴细胞及其亚群的FasL表达进行监测.结果移植前T细胞的FasL表达率仅(2.13±2.02)%,与正常对照组无显著差异(P>0.05),移植后异基因造血干细胞移植患者FasL表达水平升高,尤以急性GVHD患者表达升高显著(P<0.05),而自体干细胞移植患者的FasL表达未见明显改变.结论异基因造血干细胞移植术后部分T淋巴细胞处于激活状态;FasL表达可能与aGVHD相关;对FasL表达的监测可从细胞、免疫分子两个层次对T细胞免疫功能状态进行评估,该体系的完善对临床判断预后、指导治疗可能有较直接的参考价值.

    作者:冯晓勤;周淑芸;冯茹;张建军;王随照;伍伯松;朱为国;杨艺 刊期: 2000年第02期

  • 慢性胃病患者临床症状与胃运动功能的关系:胃肌电活动和腔内压力变化的同步分析

    目的从胃运动功能的角度探讨胃器质性疾病患者各种临床症状的产生机制,以为临床治疗提供依据.方法采用胃窦内同步记录胃肌电活动和腔内压力变化的方法,研究了45例慢性胃病(含慢性胃炎和胃溃疡)患者有关临床症状与胃运动功能的关系.结果慢性胃病患者中常见胃肌电节律紊乱(以快速型为主)和肌电-压力脱偶联现象;呕吐和反酸分别与慢波节律紊乱和压力波频率减少有关;嗳气、腹鸣均与平均压力波幅值及3种不同形态压力波的平均幅值的增高有关;恶心与平台型波平均幅值的下降有关.结论提示上消化道症状的产生与胃肌电节律异常及胃平滑肌收缩功能均有关系,且不同的症状可能以不同的胃运动功能改变为基础.

    作者:张兵;张万岱 刊期: 2000年第02期

  • p16基因对脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的影响

    目的探索p16基因在脑胶质瘤发生发展过程中的作用及其与脑胶质瘤细胞顺铂化疗敏感性的关系.方法采用脂质体转染的方法,将外源野生型p16基因导入胶质瘤细胞株U251,观察p16基因长期稳定转染对胶质瘤细胞的作用,并筛选阳性克隆.同时以空载体质粒 PCDNA3为对照.免疫组化、Northern杂交检测p16基因表达,对转染后细胞生长情况、细胞周期及细胞对顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)敏感性的变化进行分析.结果外源p16基因的高水平表达显著抑制了胶质瘤U251细胞的生长,克隆形成率减少,肿瘤细胞发生了G1期阻滞,同时,细胞对顺铂的敏感性降低,化疗药物诱导的凋亡细胞数减少.结论外源野生型p16基因可抑制胶质瘤细胞恶性增殖,同时降低U251细胞对顺铂的化疗敏感性.p16 基因转染后对顺铂诱导凋亡作用的抑制可能是其主要机制.

    作者:陈一招;徐如祥;张世忠;邹玲 刊期: 2000年第02期

  • L929细胞条件培养液减轻氧化应激引起的U937细胞DNA断裂损伤

    目的揭示巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的抗动脉粥样硬化作用是否与其保护单核细胞免受过氧化损伤有关.材料与方法用富含M-CSF的L929细胞条件培养液(L929-CM)作为M-CSF来源,以凝胶电泳、DNA断裂定量等方法观察了M-CSF对叔丁基氢过氧化物(tbOOH)诱导的U937细胞DNA断裂损伤的影响.结果 tbOOH可以引起U937细胞的DNA断裂损伤,且损伤随tbOOH作用时间的延长而趋明显;而L929-CM可以减轻tbOOH诱发的U937细胞DNA断裂损伤.结论 M-CSF对单核细胞具有一定的保护作用,可减轻其氧化损伤.

    作者:庞战军;周玫;陈瑗 刊期: 2000年第02期

  • TGFα对胃癌细胞周期的作用及tyrphostin 51对TGFα作用的抑制

    目的探索TGFα对胃癌细胞周期的促进作用,以及PTK抑制剂对这种作用的抑制效应.方法利用细胞体外培养技术,观察TGFα对胃癌SGC7901细胞的促增殖作用;细胞经G1期同步化后,用流式细胞仪检测TGFα作用不同时间的细胞周期变化,用3H-TdR掺入法检测TGFα对细胞DNA合成的影响;加PTK抑制剂tyrphostin 51 处理后用流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 TGFα对SGC7901具有明显的促增殖作用,细胞生长曲线上移;TGFα作用4、6 h后S期细胞和作用8、10 h后G2+M 期细胞均明显增加,作用5 h 后DNA合成也显著高于对照组.tyrphostin 51作用48 h后出现了细胞凋亡.结论 TGFα能够刺激胃癌SGC7901细胞生长,促进其细胞周期进程,而tyrphostin 51通过抑制TGFα受体的PTK活性,使细胞发生凋亡.

    作者:梁卫江;肖冰;赖卓胜;张万岱 刊期: 2000年第02期

  • 大鼠脑损伤时神经细胞c-fos 、c-jun和c-myc基因表达变化

    目的观察大鼠脑损伤后不同时间皮质神经细胞早期快反应基因c-fos 、c-jun和c-myc表达变化.方法应用Northern杂交、原位杂交和免疫组织化学方法检测皮质神经细胞中c-fos、c-jun和c-myc的表达.结果脑损伤后15 min,伤侧皮质神经细胞出现上述3种基因mRNA的表达,随时间的延长,表达逐渐增加,于伤后3 h达高峰并持续至伤后24 h,伤后72 h恢复至对照水平.c-fos和c-jun蛋白表达亦于伤后15 min出现,c-myc蛋白表达于伤后30 min出现,并均于伤后3 h达高峰,持续至伤后6 h,伤后24 h表达消失.结论脑损伤后上述3种基因表达特点与其它脑损害不同,可能与损伤机制和继发性神经细胞损害有关.

    作者:王清华;徐如祥;钟世镇 刊期: 2000年第02期

  • 重型颅脑外伤后持续性植物状态患者的促醒与康复

    目的探讨重型颅脑外伤后持续性植物状态患者的促醒与康复.方法对29例重型颅脑外伤后持续性植物状态患者(Glasgow昏迷量表评分3~8分)进行中西医结合促醒治疗,醒后进行认知训练和语言治疗及精心护理.结果 29例患者中26例被促醒(89.7%),醒后能参加简单工作的5例(17.2%)、生活能基本自理的14例(48.3%)、需要他人协助生活的5例(17.2%)、生活完全依靠他人的2例(6.9%)、未醒3例(10.3%).结论重型颅脑外伤后持续性植物状态患者经过早期积极的中西医结合促醒治疗及醒后的认知训练和语言治疗可以得到大限度的康复.植物状态持续时间越长,促醒越困难,醒后留有残疾越重.

    作者:洪军;王升旭;马文龙;邓爱文;张建宏;蔡文智 刊期: 2000年第02期

  • 4例睾丸扭转的彩色多普勒流动显像和治疗体会

    1995年1月至1998年10月共收治睾丸扭转4例,经彩色多普勒流动显像(CDFI)得到诊断.CDFI对阴囊内急症应视为首选方法,若诊断明确或疑睾丸扭转,应及早手术探查,以提高睾丸的获救率.

    作者:陈勃华;毛向明 刊期: 2000年第02期

  • 女性绝育术并发症的防治

    输卵管绝育术是女性计划生育的重要措施,随着计划生育的普遍开展,国内外都在寻找安全、易被妇女所接受的绝育方法.但输卵管结扎术仍是当前常用的绝育手术.如何提高手术质量,避免因操作不当引起的术中及术后并发症,直接关系到受术者的身心健康和生命安全.本文报告本县1984年12月至1997年12月年间输卵管结扎中发现和处理并发症36例的体会,并就防治问题作简要分析.

    作者:强兆容 刊期: 2000年第02期

  • 乙型及丙型病毒性肝炎发病机制的新设想

    近几年来的实验研究提示,肝细胞凋亡在肝炎的发病机制中起重要作用.表现在:(1)乙型及丙型肝炎病人肝组织中肝细胞凋亡的数量显著高于正常人;(2)乙型及丙型肝炎病人肝细胞Fas的表达水平与炎症活动程度是相关.(3)小鼠实验模型中大量肝细胞的凋亡可引起重型肝炎,而抑制凋亡能减轻肝组织的损伤.(4) 在细胞毒性T淋巴细胞引起的转基因小鼠的肝炎模型中,肝炎的发生先后经历了细胞凋亡、细胞坏死几个不同的阶段.本文将试图阐述我们对肝细胞凋亡与乙型及丙型肝炎发病机制间可能关系的认识.

    作者:刘定燮;骆抗先 刊期: 2000年第02期

  • 自体外周血CD34阳性细胞的纯化及其移植治疗非何杰金氏淋巴瘤

    自体造血干细胞移植作为恶性肿瘤治疗的重要措施之一已被临床广泛应用,为降低自体造血干细胞移植后肿瘤复发的可能性,多种体外净化的方法相继而生.近年来通过筛选CD34阳性造血干/祖细胞的净化方法已从实验室过渡到临床,并显示出移植后效果的优越性[1、2],我们在1999年6月进行了1例自体外周血CD34阳性细胞移植,现报告如下.

    作者:冯茹;孟凡义;刘启发;伍柏松;周淑芸;杨艺;牛京娜 刊期: 2000年第02期

  • 4种细胞因子对K562/S及其耐药细胞株K562/A02积蓄柔红霉素的影响

    目的通过检测4种常用细胞因子对白血病细胞株K562/S及其多药耐药细胞株K562/A02积蓄柔红霉素(DNR)能力的影响,评价细胞因子在抗白血病细胞多药耐药性方面的应用前景.方法用流式细胞仪及荧光法检测重组人α-干扰素(IFN-α)、白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF)、重组人粒-单集落刺激因子(GM-CSF)对K562/S及K562/A02积蓄柔红霉素能力的影响.结果 IL-2、TNF、GM -CSF作用后K562/S及K562/A02细胞株对柔红霉素的积蓄无改变,而IFN-α可显著提高耐药细胞系K562/A02细胞内DNR浓度,在150 min时升高了4.01倍(P<0.05).结论小剂量(500 U/ml)α-干扰素作用后,多药耐药细胞株K562/A02对抗肿瘤药物DNR的积蓄作用大大提高,提示IFN-α具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用.

    作者:平宝红;周淑芸;刘启发;杨纯正 刊期: 2000年第02期

南方医科大学学报杂志

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主管:广东省教育厅

主办:南方医科大学