人胰激肽释放酶基因的克隆及表达载体的构建

杜珙；李体远；黄瑞芳；陈德珩；戴勇

关键词：胰酶, 基因, 克隆, 分子, 序列分析

摘要：目的:克隆中国人胰组织激肽释放酶基因,构建原核、真核表达载体,为开发生产人源激肽释放酶基因工程产品及人源激肽释放酶基因药物奠定基础.方法:提取人胰腺组织总RNA,逆转录后琼脂糖电泳初步鉴定PCR产物.将激肽释放酶cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对激肽释放酶基因进行序列测定分析.用双酶切法,插入原核表达载体PET-28b,真核表达载体pBacPAK9质粒中.酶切鉴定后,进行序列测定分析.结果:本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比,碱基序列相同.测序分析表明人胰组织激肽释放酶基因经酶切,正确插入到原核表达载体PET-28b,真核表达载体pBacPAK9质粒中.结论:克隆并构建成功中国人组织激肽释放酶基因的原核、真核表达载体,可用于基因工程产品及基因药物的深入研究工作.

实用医学杂志相关文献

顺铂对人舌癌Tca8113细胞hTERT蛋白表达和端粒酶活性的影响

目的:探讨顺铂处理人舌癌Tca8113细胞前后细胞增殖活性和凋亡以及人类端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白表达和端粒酶活性的改变,进一步揭示顺铂的抗癌机制并初步探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性.方法:以1/2血药峰值浓度的顺铂处理人舌癌Tca8113细胞12～72 h,应用MTT法检测细胞增殖活性,光镜观察细胞凋亡变化特征并计算调亡指数,用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白含量,同时行TRAP-PCR-ELISA端粒酶活性检测.结果:Tca8113细胞在顺铂作用后,细胞增殖活性明显下降;出现明显的凋亡;hTERT蛋白表达下降的同时端粒酶活性也相应下降,而且四者都有一定的时间依赖性.结论:顺铂可使细胞增殖活性明显下降,诱导凋亡产生,下调hTERT蛋白表达及抑制端粒酶活性,且这四者有一定的相关性.

作者：陈鹏；雷德林；刘冰；郭涛；商洪涛刊期： 2002年第11期
微型钛板内固定在颌面部骨折中的应用

颌面部骨折造成面部外形、咬合关系及其它功能的异常.微型钛板坚强内固定术是近10多年来国际上流行的方法,微型钛板坚固内固定技术具有许多独特的优点,在颌面部骨折固定中的应用越来越多,已基本取代钢丝等的内固定[1].

作者：丘仿松；冯柏悦；施伟文刊期： 2002年第11期
人胰激肽释放酶基因的克隆及表达载体的构建

目的:克隆中国人胰组织激肽释放酶基因,构建原核、真核表达载体,为开发生产人源激肽释放酶基因工程产品及人源激肽释放酶基因药物奠定基础.方法:提取人胰腺组织总RNA,逆转录后琼脂糖电泳初步鉴定PCR产物.将激肽释放酶cDNA回收、补平后插入克隆质粒KS,酶切鉴定后,对激肽释放酶基因进行序列测定分析.用双酶切法,插入原核表达载体PET-28b,真核表达载体pBacPAK9质粒中.酶切鉴定后,进行序列测定分析.结果:本实验克隆的激肽释放酶基因与GenBank报告的激肽释放酶基因相比,碱基序列相同.测序分析表明人胰组织激肽释放酶基因经酶切,正确插入到原核表达载体PET-28b,真核表达载体pBacPAK9质粒中.结论:克隆并构建成功中国人组织激肽释放酶基因的原核、真核表达载体,可用于基因工程产品及基因药物的深入研究工作.

作者：杜珙；李体远；黄瑞芳；陈德珩；戴勇刊期： 2002年第11期
猝死的临床特征

1猝死定义猝死是由各种原因引起的、以急性症状开始、突然发生的不可预料的非人为的自然死亡.

作者：谢志泉；黄翠瑶刊期： 2002年第11期
幽门螺杆菌引起的胃外疾病

自1983年Warren和Marshal[1]首次从胃炎患者黏膜组织中分离出幽门螺杆菌(Hp)以来,大量临床与实验研究[2]证明,Hp是慢性胃炎及消化性溃疡的重要致病因素,同时还发现Hp与胃癌的发生也有密切联系.

作者：杨蓬勃；马骢刊期： 2002年第11期
妊娠中期结肠假性梗阻1例

患者女,28岁.孕1产0.因停经25+2周,腹胀、腹痛、恶心2 d于2000年7月18日入院.患者2 d前吃少量西瓜后感腹胀、腹部隐痛、恶心、无腹泻,无畏寒及发热.自认为消化不良,未引起重视.

作者：周春艳；马军利；黄素坚刊期： 2002年第11期
新生儿先天性膈疝治疗及围手术期的呼吸管理

目的:探讨新生儿先天性膈疝(NCDH)治疗及围手术期的呼吸管理.方法:回顾分析12例由我院新生儿重症监护中心转运的NCDH患儿的治疗情况,在院前建立呼吸通道,转运暖箱内保暖,并针对新生儿膈疝的特点加强围手术期的呼吸管理.其中10例为左后外侧疝,2例为右侧;均伴有肺发育不良;2例并有肺动脉高压.结果:11例经腹疝复位、膈肌修补术,其中1例行肠切除吻合术,另1例右侧膈疝行经胸膈肌修补术.9例治愈(75%),2例死亡,1例术后放弃治疗.9例存活患儿术后使用呼吸机36～76 h,其中2例使用高频振荡通气.结论:准确及时地进行院前抢救及转运,建立有效的呼吸管理,尽量解除肺脏受压,入院后适时行膈疝修补术,并作好围手术期的呼吸管理,是提高NCDH治愈率的有效措施.

作者：罗爱明；陈运彬刊期： 2002年第11期
猝死的研究现状与展望

猝死(SD)是指猝不及防,以急性症状开始1 h内、骤然发生、出乎意料的自然死亡.

作者：黄翠瑶；邵尉刊期： 2002年第11期
胸膜腔廓清术治疗儿童脓胸14例

儿童脓胸是指发生于儿童的化脓性胸腔积液.我院自1995年7月～2001年12月之间共收治此类患儿14例,均行胸膜腔廓清术,痊愈出院,疗效满意,现总结报告如下.

作者：谈进；章镜平；徐克平刊期： 2002年第11期
外科治疗肺血栓栓塞2例

我院2000年11月～2002年3月收治2例肺血栓栓塞病人,均经药物治疗无效,采用外科急诊手术治疗,取得满意的效果,现总结如下.

作者：滕泽林刊期： 2002年第11期
神经导航下颅脑肿瘤显微神经外科手术

目的:探讨神经导航下颅脑肿瘤显微神经外科手术的应用.方法:运用美国Stealthstation手术导航系统对26例颅脑肿瘤进行显微神经外科手术.结果:全切除19例(73%),次全切除7例(27%),导航引导的注册精度误差平均为2.8 mm.结论:在显微手术中运用导航技术可以精确地寻找和切除脑内肿瘤,减少手术并发症.

作者：赵鹏来；刘宏毅；陈永严；常义刊期： 2002年第11期
膀胱滑动疝32例

膀胱滑动疝较少见,作者在2000年6月～2002年6月期间参加中国援非洲赤道几内亚医疗队,在首都马拉博总医院外科工作,共进行腹股沟疝680例,其中滑动性膀胱疝32例,约占腹股沟疝4.7%,现就本组病例临床特点报告如下.

作者：柯扬；Florincio Obyang 刊期： 2002年第11期
低钾性麻痹58例临床分析

低钾性麻痹是临床上常见的疾病,常表现为全身疲乏,四肢肌肉软瘫、无力,临床化验检查显示有明显的低钾血症,但有不少患者合并有甲亢,或者为甲亢的早期表现,甲亢治愈后低钾性麻痹发作亦可消失.

作者：吴海东刊期： 2002年第11期
脑外伤并发脑疝32例救治体会

随着工业交通发展,我国颅脑创伤发生率逐年增加,如何降低死亡率和伤残率仍是神经外科的重要课题,而脑外伤并发脑疝至今死亡率仍高达85%以上.

作者：康良刊期： 2002年第11期
重度肉毒中毒14例机械通气的应用体会

我科自1990年～2002年3月共收治肉毒中毒病人70余例,其中14例因呼吸肌麻痹而使用了机械通气.现将抢救经验总结报告如下.

作者：孟学刚；苟安栓；徐文仪；高红艳刊期： 2002年第11期
康宁克通-A局部注射治疗斑秃58例观察

我们采用康宁克通-A(美国施贵宝大药厂生产)作局部皮损内注射治疗斑秃58例,同时对42例采用常规治疗方法作疗效比较,现将结果报告如下.

作者：王恂刊期： 2002年第11期
IT:一种特殊的妊娠滋养细胞

IT,即中间型滋养细胞(intermediatetrophoblast,IT),它既可在胎盘部位正常存在,又可分化为良性和恶性胎盘部位滋养细胞病变,还可在异位妊娠部位形成良性增生[1].

作者：李胜平；王宇刊期： 2002年第11期
大隐静脉高位结扎剥脱术后猝死1例

患者男,59岁.因右侧大隐静脉曲张伴酸胀感7年,于1999年6月5日入院,要求手术治疗.查体:右侧大隐静脉隆起,蜿蜒成团.

作者：王燕刊期： 2002年第11期
双黄连、利巴韦林注射液合用治疗流行性腮腺炎

笔者自1995～2002年采用双黄连针、利巴韦林注射液合用治疗流行性腮腺炎,疗效显著,现报告如下.

作者：冯少玲刊期： 2002年第11期
生精细胞形态学检查在男性不育诊治中的意义

目的:观察男性不育患者生殖道感染与生精细胞形态学的关系.方法:根据精液培养结果分阳性组35例和阴性组20例.结果:阳性组病例精子畸形率、生精细胞比率及细胞凋亡率明显高于阴性组.结论:生殖道感染与生精细胞形态关系密切,可以引起生精细胞大量脱落,严重者出现生精细胞凋亡.

作者：郑军；林飞鸿刊期： 2002年第11期