学术投稿

青霉素结合蛋白2a C-末端在大肠杆菌M15中的表达、纯化及鉴定

和生琦;丁国富;李斌;李军;罗平;董燕;张蓉;颜伟;周红

关键词:金黄色葡萄球菌, 青霉素结合蛋白2a, 大肠杆菌, mecA基因
摘要:目的 构建含目的基因mecA C末端的重组子并在大肠杆菌M15中进行蛋白表达.方法 采用PCR方法扩增mecA C末端DNA,将其与表达载体pQE30连接;再通过PCR及双酶切鉴定连接产物.将含目的基因片段的阳性重组质粒转化大肠杆菌M15后,用1mmol/L的IPTG进行诱导表达.应用Ni-NTA琼脂糖进行亲和层析纯化目的蛋白,并用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行鉴定.结果 成功构建pQE30-mecA重组表达质粒,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,亲和层析纯化获得分子量为39.7 kDa的蛋白;Westem blotting和肽指纹图谱证实该蛋白为带有多聚组氨酸标签的融合蛋白.结论 在大肠杆菌内成功表达具有活性的PBP2a,为后期研究和开发抗MRSA药物奠定了基础.
创伤外科杂志相关文献
  • 进一步提高对脓毒症免疫机制及调理策略的认识

    脓毒症的发生与机体免疫功能紊乱密切相关.随着脓毒症的进展,机体可能经历免疫抑制状态,表现为淋巴细胞的增殖能力下降,呈现以Th2型反应为主的免疫反应、大量淋巴细胞凋亡以及非特异性免疫功能障碍等,从而导致机体对病原体的易感性明显增加.近年来关于树突状细胞、调节性T细胞与脓毒症关系方面的研究渐成热点.深入探讨脓毒症中免疫功能紊乱的病理生理基础,可进一步阐明脓毒症的发病机制,并有针对性地制定相关调理策略,为其预防和治疗开拓新的思路.

    作者:姚咏明;黄立锋;林洪远 刊期: 2007年第01期

  • 急诊选择性动脉造影与栓塞在腹部创伤中的应用

    目的 评价选择性动脉造影与栓塞在腹部创伤中的应用价值.方法 对54例腹部创伤行121支血管造影,其中48例行选择性动脉栓塞,6例仅用立止血1~2ku局部灌注.结果 121支血管造影中56支血管有损伤表现,52例54支靶血管经栓塞和(或)立止血局部灌注,术后出血停止,有效率96.3%(52/54).2例栓塞术后手术治疗.18例肾脏损伤栓塞术后1个月作静脉肾孟造影(IVU)检查显示患肾功能正常.结论 选择性动脉造影与栓塞治疗对腹部损伤有诊断明确、止血迅速、疗效肯定、并发症少的优点,值得推广.

    作者:岳伟东;孙晓龙;段君华;石红春;张德川 刊期: 2007年第01期

  • 邻指皮瓣修复拇指食指指端缺损320例分析

    讨论拇指食指指端缺损的手术治疗方式.取同手中指中节背皮瓣缝合创面,供皮区游离植皮.本法取邻指皮瓣简单易行,皮瓣成活高,因而值得在临床上推广应用.

    作者:赵国艺;颜海波 刊期: 2007年第01期

  • 烫伤大鼠高迁移率族蛋白B1的变化及其对脾淋巴细胞免疫反应的影响

    目的 观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠烫伤延迟复苏模型中的变化规律及其对淋巴细胞免疫功能的影响.方法 96只大鼠随机分为假伤组(n=32)、烫伤组(n=32)和丙酮酸乙酯(EP)治疗组(n=32),分别于伤后1、3、5、7天活杀动物.应用Western blot方法检测血浆中HMGB1含量,采用噻唑蓝法和ELISA检测脾淋巴细胞增殖能力及培养上清中白介素-4(IL-4)和干扰素-γ(IFN-γ)浓度.结果 与假伤组相比,烫伤后1、3、5天大鼠血浆HMGB1含量显著升高(P<0.05或P<0.01).同时,脾淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应在伤后1~7天明显受抑制(P<0.05);伤后1、3天脾淋巴细胞培养上清中IL-4水平明显增加(P<0.05),而伤后7天IFN-γ含量显著降低(P<0.05).给予丙酮酸乙酯(EP)治疗组1、3、5天血浆HMGBI含量均明显下降(P<0.05),并明显减轻伤后1~7天脾淋巴细胞的增殖抑制状态,同时提高IFN-γ水平(P<0.05),而IL-4水平在伤后1、3天显著降低(P<0.05).结论 HMGB1对烫伤大鼠脾淋巴细胞免疫功能具有显著影响,它参与了烫伤延迟复苏后机体细胞免疫功能紊乱的发病过程.

    作者:董月青;姚咏明;董宁;于燕;盛志勇 刊期: 2007年第01期

  • PLLA可吸收螺钉内固定治疗三踝骨折31例报告

    采用可吸收螺钉内固定治疗三踝骨折31例,探讨结晶型聚L乳酸(PLLA)可吸收螺钉内固定治疗三踝骨折临床效果.本组治疗优良率87.1%,认为PLAA 可吸收螺钉是治疗三踝骨折较理想的内固定物.

    作者:聂宇;杨述华;杨操;叶哲伟;傅德皓;胡勇 刊期: 2007年第01期

  • 闭合复位3枚空心螺钉治疗青壮年股骨颈骨折临床观察

    手术治疗122例青壮年股骨颈骨折,平均3.4年随访,其中22例发生股骨头缺血性坏死,10例骨折不愈合,功能优良率78.7%.

    作者:周建伟;黄钢勇;吴建国;汤超亮;陈建伟;王世龙;黄煌渊 刊期: 2007年第01期

  • 交锁髓内钉在股骨骨折钢板内固定失败中的应用

    10例钢板内固定失败病例,2例改用伽玛钉,2例倒置髓内钉,6例顺置髓内钉内固定.术中均扩髓,静力交锁,功能恢复良好.

    作者:胡国伦;陈代全;龚定华;申茂明;吕国庆 刊期: 2007年第01期

  • 脊髓损伤动物模型的制备及神经功能评价

    脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是医学界面临的难题和研究热点之一.脊髓损伤动物模型的制备对脊髓损伤相关基础研究具有重要意义.笔者现就目前国内外常用的脊髓损伤动物模型的制备及神经功能评价的方法综述如下.

    作者:徐帆;陈建敏;张晓 刊期: 2007年第01期

  • 髋臼骨折

    髋臼骨折大多系高能量钝性损伤,其治疗极富挑战性,必须注意合并损伤,并相应调整手术治疗时机.细致的X线检查对这些损伤的成功处理非常重要;骨折的准确分型有助于正确选择手术入路;尽可能地解剖复位和患者的早期活动是临床治疗成功的标准.

    作者:杨述华;傅德皓 刊期: 2007年第01期

  • 原发性脑干损伤的临床特点和治疗措施

    探讨原发性脑干损伤的临床特点和治疗措施,及时有效地保持呼吸通畅、纠正低血压及采取综合治疗等可降低死亡率.

    作者:钟远强;魏建功;宋同均;刘道斌;王锡铭 刊期: 2007年第01期

  • 多层螺旋CT在面部外伤诊断中的应用

    对50例面部外伤的X线平片检查和螺旋CT检查做回顾性分析比较.认为多层螺旋CT扫描和三维重建是普通X线检查的不可缺少的补充手段.

    作者:吕庆波;任金平;温琳峰 刊期: 2007年第01期

  • 股骨粗隆间骨折内固定术式的探讨

    对87例股骨粗隆间骨折使用3种不同内固定术式治疗进行回顾性分析,认为股骨近端解剖钢板在治疗股骨粗隆间骨折时手术创伤小,操作简单,角度易调整,固定牢靠,抗旋转,并发症少.

    作者:李智;庾明;王玉川 刊期: 2007年第01期

  • 机械通气治疗胸部创伤后ARDS的体会

    总结胸部创伤所致急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床治疗经验.认为在病因治疗及综合治疗的同时,使用机械通气(PEEP)治疗,可以增加功能残气量,防止完全的肺泡萎陷,防止气道关闭和使萎陷的肺泡复张,使血管外肺积水重新分布,改善通气血流比,改善氧合.

    作者:王宗林;周楠;谢晓阳;李季;易军;高健 刊期: 2007年第01期

  • PTEN对脂多糖攻击RAW264.7细胞核因子-κB转录活性的影响及其意义

    目的 探讨PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten)全县对脂多糖(LPS)攻击RAW264.7细胞核因子-κB转录活性的影响.方法 NF-κB-LUC质粒与PTEN质粒或其突变质粒分别共转染RAW264.7细胞,通过检测NF-κB反应性荧光素酶报告基因表达,观察PTEN在LPS攻击巨噬细胞时对NF-κB转录激活的影响.结果 野生型PTEN过表达可促进LPS诱导的NF-κB活性增强,而突变型PTEN则没有明显作用.结论 PTEN可正性调控LPS诱导的NF-κB转录因子的激活,从而有可能在内毒素所诱导的炎症反应中发挥重要的调控作用.

    作者:尹华华;夏浩;朱京慈;程晓刚;徐祥;袁科;Qi Wan;李磊 刊期: 2007年第01期

  • 创伤后急性肾功能衰竭临床多因素分析

    目的 探讨创伤后急性肾功能衰竭(ARF)的病因、伤情评分、治疗以及预后.方法 回顾性分析2000~2005年我院创伤外科收治的创伤后ARF26例,对ARF发生的病因、治疗及预后等多因素进行统计分析.结果 创伤后ARF病因以失血性休克和多器官功能不全综合征(MODS)常见.MODS为ARF的主要死亡原因.与存活组比较,死亡组APACHEⅡ、ATN-ISI评分值高(P<0.01),且多合并MODS(P<0.01).透析后血尿素氮、血肌酐和出院血肌酐显著下降(P<0.05).早期透析病死率低于晚期透析(P<0.05).结论 失血性休克、MODS为创伤后ARF的主要病因,MODS为主要死亡原因.积极防治休克和MODS有利于防止创伤后ARF的发生.早期防治MODS和肾替代治疗是改善创伤后ARF预后的重要措施.

    作者:杨文华;白祥军 刊期: 2007年第01期

  • 多发伤后全身炎症反应综合征相关因素分析

    目的 探讨多发伤后全身炎症反应综合征(SIRS)的发生率和病死率,以及SIRS评分对早期预测患者预后的有效性.方法 对我院创伤外科108例多发伤患者进行SIRS评分,分为非SIRS组和轻、中、重度SIRS组共4组,比较各组间的病死率,并分析相关因素的影响及SIRS评分的关系.结果 SIRS组病死率明显高于非SIRS组(P<0.05);且随着SIRS严重程度的增加,患者病死率明显升高(P<0.01).同时多发伤病死率也随着相关因素的增加而增高(P<0.05).结论 入院后SIRS评分操作简单,对独立预测多发伤患者预后、进行早期干预、提高救治水平具有临床指导意义.

    作者:杨帆;刘开俊;李永灯;白祥军 刊期: 2007年第01期

  • 两种有限接触接骨板固定不同类型骨表面特征评估

    目的 对比评估新研制的点接触锁定加压接骨板(PC-LCP)与有限接触加压接骨板(LC-DCP)固定不同类型骨时的表面特征.方法 应用PC-LCP及LC-DCP固定人尸体标本肱骨、尺骨、桡骨及新鲜山羊胫骨,通过压力敏感膜与图像分析系统分析两种接骨板固定以上不同骨时的表面接触面积、压力及应力变化.结果 PC-LCP与骨面接触面积较LC-DCP明显减少,两者有显著差异(P<0.01),LC-DCP较PC-LCP易受骨表面形态影响.结论 新研制的点接触锁定加压接骨板(PC-LCP)能有效减少与骨表面的接触面积,大限度地保护骨皮质下骨血运.

    作者:邢叔星;王爱民;赵玉峰;刘东北 刊期: 2007年第01期

  • 可吸收棒内固定治疗桡骨小头骨折

    对12例桡骨小头骨折(MasonⅡ型)行可吸收棒内固定,随访6~24个月,骨折全部愈合.提示可吸收棒内固定是治疗桡骨小头骨折有效方法之一.

    作者:蔡海源;帅克宁;张明勇 刊期: 2007年第01期

  • 严重创伤对小鼠体内单核细胞向树突状细胞分化及迁移过程的影响

    目的 观察严重创伤对小鼠体内单核细胞向树突状细胞分化及迁移的影响.方法 皮下注射FITC荧光微球,细胞计数,流式细胞仪检测等观察引流淋巴结荧光阳性细胞数量及所占比例;荧光显微镜观察注射局部炎性细胞浸润情况及局部组织荧光强度;丙酮提取法检测局部残余荧光物质并计算局部荧光物质清除率.结果 严重创伤动物引流淋巴结FITC荧光阳性细胞百分比(0.021±0.009)%及绝对数量[(492±211)个]均显著低于正常对照组动物[(0.040±0.012)%,P<0.05;(726±218)个,P<0.05];伤后早期创伤动物微球注射局部炎性细胞浸润明显增强;严重创伤动物耳片荧光微球清除率在注射微球后1、2、4和6天均显著高于正常对照组动物,差异显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01).结论 严重创伤后小鼠体内单核细胞向树突状细胞的分化并迁移的过程发生了障碍,该障碍并非是由于单核细胞浸润炎性病灶和吞噬细胞摄取抗原及迁移启动受阻所致.

    作者:韩健;梁华平 刊期: 2007年第01期

  • 脓毒性休克患者的病死率和危险因素研究

    目的 探讨三级甲等医院的ICU脓毒性休克患者的病死率及死亡危险因素.方法 采用多中心、前瞻性临床研究的方法,对2003~2005年333例脓毒性休克患者的临床资料,应用卡方自动交互检测对其死亡危险因素进行统计学分析.结果 脓毒性休克病死率高达73.3%.其中男性155/211例(73.5%),女性89/122例(73.0%).死亡组的年龄、APACHEⅡ评分、收缩压、舒张压、平均动脉压和24小时尿量与存活组有显著差异.随着功能障碍器官数目的增加,病死率逐渐升高.平均动脉压<45 mmHg者预计死亡概率高,>60 mmHg死亡概率降低.结论 脓毒性休克患者平均动脉压是影响预后的重要指标,应用多巴胺的基础上应用多巴酚丁胺或去甲肾上腺素对患者的预后无影响.

    作者:张淑文;苏强;王超;阴赪宏;王红;王宝恩 刊期: 2007年第01期

创伤外科杂志

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主管:第三军医大学

主办:第三军医大学,大坪医院,野战外科研究所