学术投稿

白细胞、降钙素原和C反应蛋白在血流感染早期诊断中的应用价值研究

李军;邹明祥;豆清娅;胡咏梅;王海晨;晏群;刘文恩

关键词:血流感染, 白细胞, 降钙素原, C反应蛋白
摘要:目的:探索白细胞(WBC)、C‐反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT )在血流感染(BSI)早期诊断中的临床应用价值,为BSI的早期诊断提供依据。方法回顾性分析48例血液培养阳性患者(血培养阳性组)与50例血液培养阴性患者(血培养阴性组)WBC、PCT和CRP测定结果,比较两组及血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者各指标检测结果;绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC);采用二分类Logistic回归对3项指标预测血培养阳性的作用大小进行方程拟合。结果血培养阳性组PCT和CRP水平明显高于血培养阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),而两组WBC计数比较差异无统计学意义(P>0.05)。血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者仅 PCT 水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。WBC、PCT和CRP的AUC分别为0.579、0.746和0.624。二分类Logistic回归显示仅PCT 对预测诊断具有统计学意义(P=0.013);三者联合预测诊断的阳性率为71.4%。结论三者均可作为BSI的早期诊断指标,而PCT 和CRP较WBC有更重要的意义,并且PC T能较好地区分革兰阳性菌与革兰阴性菌感染。
国际检验医学杂志相关文献
  • 葡萄膜炎患者检查人类白细胞抗原B27的重要性

    部分出现葡萄膜炎的患者其人类白细胞抗原B27(HLA‐B27)检测为阳性,对于眼部疾病症状先于脊柱关节病变症状出现的患者,在临床诊断时 H L A‐B27应当作为一项排除强直性脊柱炎的筛查指标,从而可以早期发现强直性脊柱炎并针对性地对患者进行治疗,具有重大的临床意义。本文对眼部病变先于脊柱病变的强直性脊柱炎患者检测 H L A‐B27的重要性及治疗方法进行综述。

    作者:刘薇;李嘉(综述);吴振彪(审校) 刊期: 2016年第05期

  • 3种缺血修饰清蛋白试剂盒分析性能的验证试验

    目的:验证3种缺血修饰清蛋白(IMA)检测试剂盒的主要分析性能。方法在Olympus AU5800全自动生化分析仪上对上海艾康生物技术有限公司、浙江夸克生物科技有限公司和北京九强生物技术有限公司的比色法IM A试剂(试剂A、B、C)进行性能验证,参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP6‐A、EP15‐A、EP7‐A文件和《WS/T 420‐2013临床实验室对商品定量试剂盒分析性能的验证》要求对3种试剂的精密度、线性范围、正确度、抗干扰能力进行评估。结果试剂A、B、C的批内变异系数(CV )分别为0.59%~0.82%,0.27%~0.54%,0.62%~0.69%,批间 CV分别为0.98%~1.74%,0.99%~1.01%,0.71%~0.78%,均小于试剂盒声明的不精密度;线性范围分别为11~142 U/m L (相关系数 r2=0.993)、10~120 U/m L ( r2=0.996)、14~123 U/mL(r2=0.992),试剂A、B、C的线性范围均良好。当干扰物维生素C小于或等于10 mg/dL ,血红蛋白小于或等于200 mg/dL ,总胆红素小于或等于40 mg/dL ,三酰甘油小于或等于500 mg/dL 时,3种 IM A 试剂检测结果偏差均不超过±10%,对3种试剂无明显干扰。结论3种IM A检测试剂盒均具有较高的精密度,可满足临床要求,但抗干扰能力存在一定的差异。

    作者:何谦;杨锐华;王琪 刊期: 2016年第05期

  • 基于W S/T 405-2012行标的血细胞分析参考区间验证

    目的:探讨《WS/T 405‐2012血细胞分析参考区间》(简称WS/T 405‐2012)是否适用于该实验室所在区域人群及实验室检测系统。方法根据《WS/T 402‐2012临床实验室检验项目参考区间的制定》(简称WS/T 402‐2012)与WS/T 405‐2012文件要求,选择健康参考个体40例(男、女各20例),采用性能评价符合要求的Sysmex XN‐1000全自动血液分析仪检测血液标本,对WS/T 405‐2012中血细胞分析项目的参考区间进行验证。结果参与验证的血细胞分析项目测定结果均符合WS/T 402‐2012要求。结论 WS/T 405‐2012规定的血细胞分析参考区间可用于该实验室。

    作者:魏红璐;王萍 刊期: 2016年第05期

  • p53和K i-67表达在乳腺癌中的临床意义

    目的:分析p53、K i‐67在乳腺癌组织中的表达,并探讨其与临床病理特征间的关系。方法采用免疫组织化学染色(S P法)检测58份乳腺癌组织标本中p53、K i‐67的表达情况,并结合临床资料进行分析。结果 p53表达阳性率为60.3%,与患者年龄、绝经与否无明显相关性(P>0.05),而与淋巴结转移和TNM分期有相关性(P<0.05);Ki‐67表达的阳性率为53.4%,与患者年龄、绝经与否、淋巴结转移无明显相关性(P>0.05),而与 TNM 肿瘤分期有相关性(P<0.05)。结论 p53、Ki‐67阳性表达在乳腺癌组织中具有重要的临床意义,与乳腺癌的发生、发展密切相关。

    作者:张景华 刊期: 2016年第05期

  • 甲状腺球蛋白与降钙素检测改善甲状腺癌患者诊疗

    随着临床研究进展,甲状腺球蛋白(Tg)和降钙素(Calcitonin)等血清肿瘤标志物在分化型甲状腺癌(DTC)、甲状腺髓样癌(MTC)等鉴别诊断、治疗监测、术后评估及随访中的重要价值已被逐渐认可。日前,在北京举办的肿瘤标志物大师班交流会上,西班牙巴塞罗那临床医院生化实验室癌症研究中心主任Rafael Molina教授分别就 Tg和Calcitonin在DTC与MTC患者诊疗中的临床应用进行了分享交流。

    作者: 刊期: 2016年第05期

  • 高效价Rh系统抗体致新生儿溶血病研究

    目的:调查Rh系统抗体引起新生儿溶血病(HDN)患儿的抗体特异性和效价,探讨直接抗人球蛋白试验(DAT)阳性在血清学检测中的重要性。方法对新生儿鉴定母婴血型,做HDN三项试验(DA T、游离抗体试验和放散试验)和间接抗人球蛋白试验(IAT),并检测母婴红细胞放散液中可致敏新生儿红细胞的血型抗体特异性和效价。结果2例新生儿DAT均呈强阳性;患儿1 IA T阳性、患儿2阴性。2例新生儿均检出高效价致敏红细胞的抗体,分别为:患儿1检出抗‐Ce ,其中抗‐C效价为128,抗‐e为64;患儿2检出抗‐D ,效价为256。结论 DAT阳性对确诊新生儿Rh溶血病具有决定性作用,对 HDN试验的后续展开分析具有方向性作用。

    作者:贺坤华;马丽琼;崔会芬;沈俊;胡映峰 刊期: 2016年第05期

  • 降钙素原检测在心脏介入治疗中的应用价值

    目的:探讨降钙素原(PC T )对心脏介入治疗患者抗菌药物运用的指导意义。方法选取2011年10月至2014年3月响水县人民医院收治的154例行心脏介入术的患者,将其中行PC T检测的患者纳入观察组,未行 PC T 检测的患者纳入对照组,观察组PCT≥0.5 ng/mL者使用抗菌药物,比较分析两组患者的住院时间、抗菌药物使用率及治疗有效率。结果观察组患者平均住院时间为(4.3±0.2)d,对照组为(6.3±0.4)d,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者抗菌药物使用率(3.8%)低于对照组(42.8%),差异有统计学意义(P<0.05);而两组治疗有效率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PCT检测对心脏介入患者减少预防性抗菌药物的使用具有指导意义。

    作者:朱习海;魏立平;金宁娟;王刚;陈海娅;胡健 刊期: 2016年第05期

  • 不孕妇女锌铜微量元素检测结果分析

    目的:分析妊娠妇女和不孕妇女锌、铜两种微量元素的水平及比值,为不孕症的现代医学治疗方法提供客观依据。方法选取2014年1月至2015年6月于广济妇产医院与贺州市人民医院就诊的不孕症患者127例作为观察组,另选取于门诊进行产前保健的孕妇(孕3~12周)169例作为对照组。采用微分电位溶出法检测两组妇女全血铜和锌水平及比值。结果观察组铜元素和锌元素水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);观察组铜/锌比值低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论不孕妇女与妊娠妇女锌和铜水平及比值有明显差异,但仍在正常值参考范围内。

    作者:唐钧;陈善昌 刊期: 2016年第05期

  • 受试者工作特征曲线分析心型脂肪酸结合蛋白在早期急性心肌梗死中的应用价值

    目的:探讨心型脂肪酸结合蛋白(HFABP)在急性心肌梗死(AMI)、心绞痛、再梗死中的应用价值。方法选取2014年2月至2015年2月收治的45例A M I患者(A M I组)及16例心绞痛患者(心绞痛组),另选取20例体检健康者作为对照组。检测对照组、心绞痛组及AMI组患者发病后0~<4、4~<8、8~<10 h的血清HFABP与心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平进行比较分析,绘制并分析 HFABP与cTnI的受试者工作特征(ROC)曲线评价 HFABP的诊断效能。结果心绞痛组及 AMI组患者各检测时间段HFABP与cTnI水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);且AMI组各检测时间段 HFABP及cTnI水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。HFABP在AMI发生后0~<4、4~<8、8~<10 h的ROC曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度均高于cTnI。AMI发生后8~<10 h若 HFABP>68.6 ng/mL ,再梗死的发生与 HFABP水平呈良好的相关性(r=0.86,P<0.05)。结论检测 HFABP在早期诊断心肌梗死及预测再梗死中有一定的应用价值。

    作者:刘彦明;曹越;张健;吴良银;吴勤如;何凤屏 刊期: 2016年第05期

  • 丙型肝炎患者血清细胞因子检测及其临床意义

    目的:分析丙型肝炎患者血清细胞因子的表达及其与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT )水平的关系,探讨血清细胞因子在丙型肝炎发病机制中的意义。方法选取丙型肝炎患者(丙型肝炎组)与体检健康者(健康对照组)各51例,采用全自动生化分析仪检测血清ALT水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测血清白细胞介素‐6(IL‐6)和白细胞介素‐2(IL‐2)表达水平。结果与健康对照组比较,丙型肝炎组患者血清IL‐6水平升高,血清IL‐2水平降低,差异有统计学意义( P<0.05);血清IL‐6水平与ALT水平呈正相关(r=0.437,P=0.013)。结论丙型肝炎感染患者血清辅助性T淋巴细胞1(Th1)/辅助性T淋巴细胞(T h2)细胞因子水平失衡可能与丙型肝炎的炎性反应相关。

    作者:唐正能 刊期: 2016年第05期

  • 2型糖尿病胰岛素抵抗与血清γ-谷氨酰转肽酶及尿清蛋白肌酐比值的相关研究

    目的:探讨2型糖尿病患者(T2DM )血清γ‐谷氨酰转肽酶(GGT )及尿清蛋白/肌酐比值(ACR)与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法选取2014年10月至2015年4月该院收治的T2DM 患者111例和体检健康者40例(对照组),测定其血清GGT、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)及尿清蛋白、尿肌酐,计算ACR和胰岛素抵抗指数(HMOA‐IR)。并按照尿 ACR将 T2DM 患者分为正常清蛋白尿组(NA组)、微量清蛋白尿组(MA组)、显性清蛋白尿组(CA组),分析各组间各临床指标的关系。结果各 T2DM 疾病组 ACR、GGT、FPG、FINS、TG、HO‐MA2‐IR均高于对照组,LDL低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);MA组和CA组ACR、GGT均高于NA组,差异有统计学意义(P<0.05);CA组 HOMA2‐IR、FINS均高于NA组,差异有统计学意义(P<0.05)。 T2DM 患者 HOMA2‐IR与 ACR、GGT、TG呈正相关性(相关系数 r值分别为0.592、0.402、0.411,P<0.05)。结论 T2DM 患者随着IR的加剧,血清GGT 水平及尿ACR随之升高,血清GGT和尿ACR对T2DM及其并发症的早期诊断及防治有一定的临床价值。

    作者:赵应飞;李晗;钱成荣;银广悦 刊期: 2016年第05期

  • 医学检验技术专业学生实习质量调查分析

    临床实习是医学生从医学理论转向实践、从课堂迈入工作岗位的第一步[1]。医学检验技术专业临床实习是培养检验专业学生实践能力的重要阶段,是影响学生毕业素质和就业的重要环节,是理论联系实践的重要纽带。实习质量如何直接关系到实习生能否成为适应社会的高素质人才。开展针对医学检验技术专业学生实习情况的调查,了解实习生的实习情况、医院对实习生的带教及管理情况等,有助于促进实习生更好地完成实习,促进教学水平的提高,实现与用人单位的“零距离对接”,帮助学校和医院相互促进、共同提高[2]。

    作者:郝坡;邓晶荣;牟凤林;王静;肖忠华 刊期: 2016年第05期

  • 白细胞、降钙素原和C反应蛋白在血流感染早期诊断中的应用价值研究

    目的:探索白细胞(WBC)、C‐反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT )在血流感染(BSI)早期诊断中的临床应用价值,为BSI的早期诊断提供依据。方法回顾性分析48例血液培养阳性患者(血培养阳性组)与50例血液培养阴性患者(血培养阴性组)WBC、PCT和CRP测定结果,比较两组及血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者各指标检测结果;绘制受试者工作特征(ROC)曲线并计算ROC曲线下面积(AUC);采用二分类Logistic回归对3项指标预测血培养阳性的作用大小进行方程拟合。结果血培养阳性组PCT和CRP水平明显高于血培养阴性组,差异有统计学意义(P<0.05),而两组WBC计数比较差异无统计学意义(P>0.05)。血培养阳性组中革兰阳性菌与革兰阴性菌感染者仅 PCT 水平比较差异有统计学意义(P<0.05)。WBC、PCT和CRP的AUC分别为0.579、0.746和0.624。二分类Logistic回归显示仅PCT 对预测诊断具有统计学意义(P=0.013);三者联合预测诊断的阳性率为71.4%。结论三者均可作为BSI的早期诊断指标,而PCT 和CRP较WBC有更重要的意义,并且PC T能较好地区分革兰阳性菌与革兰阴性菌感染。

    作者:李军;邹明祥;豆清娅;胡咏梅;王海晨;晏群;刘文恩 刊期: 2016年第05期

  • 3种抗双链DNA抗体检测方法比较及其联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值研究

    目的:分析间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的差异,以及联合检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的应用价值。方法选取2012年1月至2015年3月确诊的SLE患者50例,以及同期其他自身免疫病(AID)患者100例和体检健康者100例。分别采用3种方法检测其血清抗dsDNA抗体,比较3种方法的灵敏度与特异度,并分析3种方法联合检测的灵敏度与特异度。结果 IIF法特异度(99.5%)高,ELISA 法灵敏度(74.0%)高。IIF与ELISA法、IIF与IBT法、ELISA与IBT法检测SLE患者抗dsDNA抗体的检出率比较,差异均有统计学意义(χ2值分别为11.435、13.994、4.539,P<0.05);且一致性检验的Kappa值(κ)分别为0.411、0.522、0.278。3种方法串联检测特异度提高到99.5%,并联检测的灵敏度提高到82.0%。结论3种检测抗dsDNA抗体的方法中,IIF特异度高,ELISA灵敏度高,联合检测可提高检测灵敏度与特异度。

    作者:杨育红;田卫花;张邦能;周思彤;邢福军;马文媛;杨邵华 刊期: 2016年第05期

  • 肺心病患者上呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的检测

    目的:检测反复呼吸道感染(RRI)慢性肺心病患者咽拭子培养产超广谱β‐内酰胺酶(ESBLs)病原菌,回顾分析其耐药性。方法收集2012年10月至2015年1月于该院就诊的1098例老年肺心病伴RRI患者咽拭子标本进行培养,用法国生物梅里埃细菌分析软件对患者进行菌株鉴定及药敏试验,结果按美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准判读,并进行统计分析。结果共检出大肠埃希菌197株、肺炎克雷伯菌156株,其中产ESBLs菌株的检出率分别为44.16%、30.77%。产ESBLs菌株较非产ESBLs菌株有更强的耐药性,两者对亚胺培南、哌拉西林/舒巴坦及阿米卡星高度敏感,但对三代以下头孢类抗菌药物呈多重耐药性。结论慢性肺心病合并RRI患者产ESBLs病原菌检出率较高,该类细菌对头孢类抗菌药物呈较高耐药性,依据细菌培养结果及药敏试验进行治疗是治疗成功的关键。

    作者:王向臣 刊期: 2016年第05期

  • 影响医学检验临床实习教学质量的原因分析与对策

    检验医学是临床医学的一个重要分支,是现代科学实验技术与诸多学科相互渗透结合的综合性学科,其目标和任务是为临床疾病的诊断、治疗、病程监控提供准确、迅速的数据及分析评价。随着医学的快速发展和人们不断增长的健康需求,加上循证医学的快速发展,检验医学在疾病诊疗中的作用越来越重要,是诊疗不可或缺的有力依据和证据。为此,临床对医学检验专业技术人员的综合素质和专业能力提出了更高的要求,临床实习是检验学生从书本走向医院,从理论走向实际操作的桥梁阶段,如何通过临床实习和专业实践帮助医学检验学生从学校成功地走进医院,从学生转变成专业技术人员,培养他们热爱专业、自觉钻研专业、努力为患者服务的精神,使其成为专业技术水平合格、职业信念坚定的检验人才是教学人员必须不断认真探索和思考的问题。本文结合多年专业理论教学和临床实践教学的经验,就目前医学检验临床教学实践中存在的一些问题进行分析,并针对实际情况进行可行的方法改进,取得了满意的效果。

    作者:段立中;陈俊明;陶臣;杨玉萍 刊期: 2016年第05期

  • N-端脑钠素前体应用于急性冠状动脉综合征早期诊断及疗效监控的优势性研究

    目的:研究N‐端脑钠素前体(NT‐proBNP)在急性冠状动脉综合征(ACS)早期诊断及疗效监测中的临床优势。方法选取2014年2~12月因胸部疼痛或不适感明显在该院心内科就诊且行冠状动脉造影的患者97例,其中34例非ACS患者纳入对照组,63例ACS患者分别纳入ST段抬高型心肌梗死(STEM)组、非ST段抬高型心肌梗死(NSTEM)组、不稳定型心绞痛(UA)组。观察各组患者血糖、血脂、血压及NT‐proBNP等指标。结果各组患者空腹血糖均在正常参考值范围内,而血脂、血压、NT‐proBNP均高于正常参考值范围,且NT‐proBNP水平远高于预后良好的标准(NT‐proBNP<200 pg/mL)。各组血浆NT‐proBNP水平比较差异有统计学意义(P<0.05),其余各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ACS患者的各治疗阶段血脂、NT‐proBNP水平及血压均明显降低。结论心肌标志物NT‐proBNP在ACS早期诊断中具有较高的准确度,可用于临床疗效监测,指导合理地选择治疗策略。

    作者:唐敏儿 刊期: 2016年第05期

  • 海洋创伤弧菌LAM P快速诊断方法的建立与评价

    目的:利用环介导等温扩增(LAM P)技术,建立海洋创伤弧菌快速、简便、特异且敏感的检测方法,并对该方法的特异性和灵敏度进行评价。方法选取海洋创伤弧菌溶细胞素(vvhA)基因作为靶基因,根据GenBank公布的序列设计4条LAMP引物;对47株细菌(包括20株弧菌属细菌)进行LAMP和聚合酶链式反应(PCR)扩增,并做特异性比较;对创伤弧菌M06株增菌液10倍倍比稀释,提取DNA后进行灵敏度的检测,并与常规PCR作比较;构建含vvhA基因片段的重组质粒,作为LAM P反应体系的标准阳性对照。结果常规PCR实验出现假阳性结果,而LAM P实验只有海洋创伤弧菌出现阳性扩增,其他样品均为阴性,无假阳性和假阴性结果,表明引物的特异性较好,加入钙黄绿素和电泳结果相一致;针对vvhA基因建立的LAMP技术其低检测下限为每个反应4×10 CFU ,是常规PCR(每个反应4×102 CFU )的10倍,呈现较好的灵敏度。重复实验过程两遍,PCR和LAMP技术检测结果稳定。结论建立了一种用于检测海洋创伤弧菌的LAMP检测方法,该方法特异性强,灵敏度高,方便快捷,特别适合用于现场和床旁的快速检测。

    作者:张丽娜;王明义;杨小蕾;曹源;张萍萍;胡成进 刊期: 2016年第05期

  • CA125、CA724、HE4和CEA 联合检测在卵巢癌诊断中的应用

    随着人类生活水平的提高,寿命的延长,内分泌代谢疾病的增加,近年来卵巢癌发病率逐年上升且有年轻化的趋势。卵巢癌是发病率仅次于子宫颈癌和子宫内膜癌的一种女性生殖系统常见肿瘤,并且其病死率位居妇科肿瘤之首。主要原因是卵巢癌早期症状与卵巢良性病变相似,且进展迅速。由于缺乏有效的早期诊断手段,仅有不到25%的患者就诊时属于早期[1]。卵巢癌晚期5年生存率仅20%~30%,且术后复发率高达70%,而早期发现卵巢癌并选择适当的手术治疗与有效的化疗,其5年生存率高达90%[2],故早期发现、及时治疗对改善卵巢癌预后意义重大。目前临床上常采用盆腔检查、宫腔镜、阴道超声、诊断性刮宫和血清肿瘤标志物(T M )对卵巢癌进行诊断,可是至今仍没有高灵敏度的特异指标用于卵巢癌早期诊断、发现复发、监测治疗反应和判断预后。由于附件在盆腔内的位置较深,频繁卵巢外扩散使盆腔检查及影像学检查的应用受到限制。而卵巢癌患者在亚临床阶段有一些相关基因的变异,产生一些相应的代谢产物,这些代谢物即为 TM ,近年来发现其出现在血液或其他体液中并可以被检测用以协助诊断。此外,TM 在影像学改变及出现临床症状前数月即升高[3],因此早期 T M 检测有助于卵巢癌的早期诊断。目前, TM已广泛用于卵巢癌的早期诊断,常用标志物有糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原199(CA199)、糖类抗原153(CA153)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原724(CA724)等,几种标志物诊断价值并不完全重叠。本文就卵巢癌常用标志物CA125、HE4、CEA及CA724的联合应用进行综述。

    作者:白珊珊(综述);何雅军(审校) 刊期: 2016年第05期

  • 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a转肽酶区的克隆、表达及纯化鉴定

    目的:构建编码耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)青霉素结合蛋白2a (PBP2a)转肽酶区基因片段的原核表达载体,并表达、纯化及鉴定蛋白。方法从临床标本中分离鉴定M RSA ,设计针对编码 PBP2a转肽酶区基因片段的引物,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因片段,克隆至pET28a(+)载体,双酶切鉴定并测序,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS株;用0.7 mmol/L异丙基硫代‐β‐D‐半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,利用Ni亲和层析技术纯化目的蛋白;蛋白免疫印迹法(WB)鉴定重组蛋白。结果重组表达载体经BamHⅠ、EcoRⅠ酶切,产物在预期大小处出现条带,测序结果显示有两个碱基突变,无移码突变。所表达的PBP2a蛋白经十二烷基硫酸钠‐聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS‐PAGE)和WB鉴定,在相对分子质量38×103处可见一新生蛋白条带。结论成功构建了PBP2a转肽酶区原核表达载体,并获得了高效表达,制备了高纯度的目的蛋白。

    作者:马洪玉;兰小鹏;陈敏 刊期: 2016年第05期

国际检验医学杂志

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主管:重庆市卫生局

主办:重庆市卫生信息中心