目的通过对三种检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD突变方法的比较,评价其在监测拉米夫定抗HBV治疗中发生耐药突变的价值. 方法用熔解曲线法、聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫吸附法(PCRmnh-ELISA)和错配聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析法(mPCR-RFLP)对拉米夫定治疗过程中出现HBV DNA由阴转阳的44例慢性乙型肝炎患者的血清进行YMDD突变检测,比较它们的敏感性,并与直接测序法比较它们的特异性. 结果 mPCR-RFLP法、PCRmnh-ELISA法和熔解曲线法检出HBV DNA的灵敏度分别为104、105和106拷贝/ml.44例患者血清中,用mPCR-RFLP法检出26例为YMDD突变株,18例为野生株.在26例突变株中,熔解曲线法检出16例,PCRmnh-ELISA法检出18例;而在18例野生株中,熔解曲线法检出2例突变株,PCRmnh-ELISA法检出13例突变株.将上述三种方法检测结果不一致的16例标本进行测序,mPCR-RFLP法、熔解曲线法和PCRmnh-ELISA与测序的符合率分别为93.8%(15/16)、43.8%(7/16)、18.8%(3/16),差异有极显著性(χ2＝18.7,P<0.01). 结论 mPCR-RFLP法检测YMDD突变株具有较好的可靠性,是监测拉米夫定耐药株的一种非常有效的方法;熔解曲线法和PCRmnh-ELISA法需要进一步完善以提高敏感性和特异性.
作者：胡盈莹；江家骥；李丹；林彩文；李勤光；陈怡 刊期： 2003年第07期
作者： 刊期： 2003年第07期
目的探讨Toll样受体是否参与小鼠肝脏缺血再灌注损伤及其机制. 方法用Toll样受体缺损小鼠(C3H/Hej,Hej组)和野生型(C3H/Heouj,Heouj组)小鼠复制部分肝脏缺血再灌注损伤模型,于缺血45min,再灌注1h和3h处死动物,检测血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血清肿瘤坏死因子α(TNFα)的含量;并以northern blot及髓过氧化物酶(MPO)试验分别检测缺血肝组织TNFα mRNA的表达和MPO的含量. 结果 (1)再灌注1、3h,与假手术组相比,小鼠血浆AST明显升高,但Hej组明显低于Heouj组(661.83U/L±106.09U/L和1215.5U/L±174.03U/L,t＝-6.65,P<0.01;1145.17U/L±132.43U/L和2958.17U/L±186.81U/L,t＝-5.57,P<0.01);(2)再灌注3h时,与假手术组相比,Hej组和Heouj组小鼠血清TNFα浓度明显升高,且前者明显低于后者(152.39pg/ml±43.3pg/ml和249.12pg/ml±51.89pg/ml,t＝-3.13,P<0.05);(3)再灌注1h,除假手术组外,Hej组和Heouj组小鼠缺血肝组织内可见TNFα mRNA的表达,但前者的表达水平明显低于后者,杂交带密度分析显示两者之间差异有显著性 (80.3±28.8与189.4±24.6,t＝-3.25,P<0.05);(4)再灌注3h,与假手术组相比,Hej组和Heouj组小鼠缺血肝组织内MPO含量明显升高,且前者含量明显低于后者(0.059±0.004和0.173±0.025,F＝33.49,P<0.01). 结论 Toll样受体可能通过其介导的炎性通路参与了小鼠肝脏缺血再灌注损伤.
作者：吴河水；王琳；田元；Ori Rotstein 刊期： 2003年第07期
丙型肝炎(简称丙肝)是慢性肝病的主要病因之一,目前全世界约有1.7亿名丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染者,而慢性丙肝易发展为肝硬化、甚至肝细胞癌.有关丙肝慢性化的机制涉及到病毒准种复杂度(quasispecies complexity)、病毒基因型、宿主因素以及信号转导异常等多个方面.
作者：樊文梅；朱万孚 刊期： 2003年第07期
循环肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)为一内分泌系统,能分泌血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ),AngⅡ具有广泛的生物学效应,作用于全身多个器官,主要通过AngⅡ和特异性的膜受体作用来调控.在许多组织或器官,如肾脏、心脏和血管中存在着独立的局部RAS[1],亦可合成AngⅡ,AngⅡ以旁分泌、自分泌、细胞内分泌等形式作用于组织和细胞,与组织细胞特异性受体结合,发挥一系列功能调控作用.新近研究表明,肝脏亦存在着局部RAS[2,3],肝脏局部RAS、循环RAS与肝纤维化、肝硬化有着密切的关系.
作者：申凤俊；阴赪宏；王宝恩 刊期： 2003年第07期
自发性细菌性腹膜炎(SBP)是慢性重型肝炎(简称慢重肝)和肝硬化腹水常见并发症,多数为医院感染.对168例慢重肝和肝硬化腹水并发SBP患者的临床资料进行分析,旨在探讨SBP早期诊断,合理有效使用抗菌药物,减少SBP危险因素.
作者：张玉江；张仕岭；王巧林；闫洪凤；谭永星 刊期： 2003年第07期
自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis, SBP)是肝硬化合并腹水患者的常见与严重的并发症,发生率高达10%～30%,这与肝硬化患者免疫功能明显降低,特别是肝内网状内皮系统严重受损、巨噬细胞吞噬功能以及白细胞黏附趋化与吞噬功能降低等原因有关.
作者：翁心华 刊期： 2003年第07期
乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异被认为与拉米夫定治疗有关[1-3].为证实YMDD变异是由药物所致,还是因为其本身与野生株病毒共存,在药物作用下逐渐成为优势株,对未经治疗的110例慢性乙型肝炎(CHB)患者进行YMDD变异株的检测.
作者：颜鸣鹤；张长；凌乔；周仁芳 刊期： 2003年第07期
目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者病程中出现肝功能异常的情况及可能的影响因素. 方法普通型SARS组91例,重型23例,普通肺炎组61例,入院后检测肝功能情况. 结果普通型SARS组肝功能异常发生率68.1%,显著高于普通肺炎组的24.6%(χ2＝27.7,P<0.01),以丙氨酸氨基转移酶和天门冬氨酸氨基转移酶的轻、中度升高为主.重型患者肝功能异常发生率高达95.7%,年龄明显增大. 结论 SARS患者发生肝功能损害的机会较大,可能与疾病本身有关,程度较轻,重型SARS的肝功能损害则与年龄有关.
作者：童裕维；尹炽标；唐小平；贾卫东 刊期： 2003年第07期
作者： 刊期： 2003年第07期
目的研制乙型肝炎病毒(HBV)DNA国家定量标准品. 方法收集各地乙型肝炎患者和健康献血员血样,用不同厂家HBV DNA试剂、表面抗原试剂盒、核心抗体试剂盒等检测.以世界卫生组织标准品标定国家HBV DNA定量标准品,通过加速实验检测该标准品的稳定性并推断其有效期. 结果经7次独立标定,得到线性灵敏度标准品的拷贝数,其中L0～L5拷贝数对数值的变异系数均小于15%,表明结果可信.以研制的国家定量标准品作为标准,各厂家对HBV DNA聚合酶链反应试剂进行了改进,多数厂家试剂经改进后基本符合要求,部分厂家试剂仍有待于进一步完善. 结论建立了HBV DNA国家定量标准品,共由24份血清组成,其中8份为阴性血清,9份为阳性血清,7份为线性灵敏度血清.
作者：吴星；王佑春；张华远；杨军；于洋；林京香；辜文洁；蓝海云；李河民 刊期： 2003年第07期
在慢性重型肝炎患者的肝组织切片中,除肝细胞大面积坏死、纤维组织增生、炎症细胞浸润及不同程度的肝细胞再生等病理特征外,还常有明显的胆管增生现象,但这种胆管增生的本质及意义尚不清楚.新近提出肝组织内胆管增生与肝干细胞活化、增殖可能有一定关系.对8例慢性重型肝炎患者及2例正常肝组织标本进行免疫组织化学研究,旨在探讨慢性重型肝炎患者肝组织内胆管增生的性质及其与肝卵圆细胞活化、肝细胞再生的可能联系.
作者：陈耀凯；王宇明；郎松；殷育松；李俊刚 刊期： 2003年第07期
目的探讨肝硬化患者与血小板α-颗粒膜蛋白(CD62P)、血小板糖蛋白(CD63)、血浆CD62P(SCD62P)水平及血小板[Ca2+]i的关系. 方法利用流式细胞术检测血小板CD62P、CD63,酶联免疫吸附法测定SCD62P和荧光分光光度法测定血小板[Ca2+]i. 结果肝硬化患者血小板[Ca2+]i、CD62P、CD63、SCD62P分别为(103.1±22.2)nmol/L、(47.6±20.0)%、(47.1±24.6)%和(67.6±37.6)μg/L,对照组分别为(57.6±13.1)nmol/L、(3.1±0.7)%、(2.5±0.7)%和(24.0±6.5)μg/L,两组比较差异有显著性,t值为6.148～19.067,P＜0.05;上消化道出血组分别为(120.3±18.8)nmol/L、(64.9±14.7)%、(70.9±14.5)%和(103.6±14.9)μg/L,无出血组分别为(91.1±14.3)nmol/L、(34.6±11.9)%、(30.2±14.4)%和(40.8±24.0)μg/L,两组比较差异有显著性,t值为5.380～14.601,P＜0.05.但两组间血小板数差异无显著性(t＝0.161,P>0.05). 结论肝硬化患者血小板高度活化,检测血小板CD62P、CD63、SCD62P对判断肝硬化的严重程度有一定参考价值.
作者：唐中；周京国；黄文方；杨明清 刊期： 2003年第07期
乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)潜在的促凋亡和抗凋亡作用一直受到争议,现通过建立一个可调控HBX蛋白表达的系统来探讨HBX对人肝细胞系L02的影响.
作者：王海平；陈孝平；何松清；丁磊 刊期： 2003年第07期
患者,男,67岁,因腰痛伴双下肢放射性疼痛半年入院.入院前半年无明显诱因出现腰痛,并伴有双下肢放射痛,呈进行性加重.
作者：陈映霞；何泽明；常英展；秦叔逵 刊期： 2003年第07期
目的构建大鼠肝再生增强因子(rALR)酵母重组表达质粒,在毕赤酵母菌GS115中进行表达.表达产物经超滤方法纯化后在体外进行生物活性研究. 方法以重组质粒pcDNA3.1-rALR为模板,聚合酶链反应(PCR)扩增rALR编码区的DNA,构建重组质粒pPIC9K-rALR,然后电转化至毕赤酵母菌GS115中,在甲醇诱导下进行表达.表达产物经1.5% SDS-PAGE电泳和western blot鉴定后进行超滤纯化.用3H-TdR掺入法检测重组大鼠ALR(rrALR)体外刺激QGY和HepG2人肝癌细胞株和原代大鼠肝细胞的增殖情况. 结果重组质粒经酶切及PCR证实rALR编码区DNA正确插入质粒载体中.重组大鼠ALR被GS115菌以外分泌方式表达,其DNA分子量约为1.5×104,与理论预期值相符,western bolt鉴定发现rrALR能与抗人ALR多克隆抗体发生特异性反应,说明人和大鼠ALR抗原性上存在部分交叉.超滤纯化获得大量高纯度的rrALR.在所测定的剂量范围内,rrALR在体外以剂量依赖方式刺激QGY和HepG2肝癌细胞株增殖,但对原代大鼠肝细胞无刺激增殖作用. 结论 rrALR在毕赤酵母菌GS115中获得分泌性高效表达,rrALR在体外以剂量依赖方式刺激QGY和HepG2肝癌细胞株增殖,但对原代大鼠肝细胞无刺激增殖作用,表明肝癌细胞和正常肝细胞表达的ALR受体不同.人和大鼠ALR在生物学活性和抗原性上存在交叉.
作者：余慧峰；刘杞 刊期： 2003年第07期
乙型肝炎病毒(HBV)变异与人体特异性免疫应答的之间的关系,是阐明变异的生物意义的关键之一,但受方法学的限制迄今所知甚微[1].应用计算机表位预测和人白细胞抗原(HLA)肽复合物技术,分析了我国HBV慢性感染者C基因热点变异I97L和(或)S87G对HLA-A2限制性T细胞表位的影响.
作者：周最明；郭亚兵；骆抗先；侯金林 刊期： 2003年第07期
自发性细菌性腹膜炎(spontaneous bacterial peritonitis,SBP)在肝硬化患者的发生率为10.0%～25.0%,重型肝炎患者SBP的发生率为17.7%～47.0%.
作者：秦波；郭树华 刊期： 2003年第07期
以DNA测序结果为标准,采用寡核苷酸芯片技术和基于荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的UniArray技术分析24例使用拉米夫定治疗12个月以上的慢性乙型肝炎(CHB)患者YMDD变异的情况,检测HBV DNA和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,以探讨上述两种方法检测YMDD突变的价值及拉米夫定治疗乙型肝炎过程中出现的耐药状况.
作者：张红河；张卫英；陈岳明；项国谦；雷勇 刊期： 2003年第07期
目的通过前S2合成肽对肝细胞癌(HCC)组织中浸润T淋巴细胞亚群表达状况的分析,探讨前S2合成肽是否能改变乙型肝炎病毒(HBV)导致的HCC组织中浸润T淋巴细胞亚群表达的百分数和CD4+/CD8+比值,达到特异性治疗HCC. 方法用Merrifield固相化学合成法合成HBV中前S2抗原性强的P120～146多肽段.测序后,用0.01mol/L磷酸盐缓冲液溶解除菌后作为抗原.选择12例术后病理诊断为HCC,术前血清经酶联免疫吸附法测得HBsAg、HBeAg、抗-HBC阳性和HBV DNA阳性,且HBsAg在HCC组织中表达为阳性病例作为研究对象.在96孔培养板上,每孔加入经密梯度离心获得的单个核细胞悬液100μl(1×106细胞),设每孔含量为1μg、5μg、10μg、白细胞介素-2 500U和阴性对照共5组,每组均设3复孔,作用7d后制片,采用APAAP法观察CD3+、CD4+、CD8+的百分数和CD4+/CD8+的比值变化. 结果 发现在含有前S2合成肽5μg/孔组中,CD4+表达明显增加(34.1±3.2),与自身对照(29.3±3.5)相比差异有显著性 (t＝3.508,P<0.01),CD4+/CD8+比值(1.19±0.43)与自身对照(0.81±0.41)相比差异有显著性(t＝2.235,P＜0.05).在白细胞介素-2组中,CD3+表达有增加,与自身对照相比有差异,其它各组T淋巴细胞亚群几乎处于不变化的状态. 结论在适当的剂量下,前S2合成肽能够改变HCC组织中T淋巴细胞亚群的表达,使CD4+增加,并能改变CD8+静息状态,使二者互为达到杀伤肿瘤细胞的目的,为特异性运用前S2蛋白提供客观依据.
作者：郑仕诚；魏筱玉；徐朝斌；谢惠琴 刊期： 2003年第07期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
