张定凤
我们使用不同凝集素对碱性磷酸酶（ALP）糖链结构进行分析，以寻找新的肝癌标志物。1．资料与方法：正常血清来自体检健康者，不同疾病患者血清取自住院患者，疾病诊断均经临床或病理证实；糖链分析采用凝集素亲和层析法，包括L型红腰豆凝集素(L-PHA)、小扁豆凝集素(LCA)和蔓陀萝凝集素 (DSA)；统计方法为t检验。2．结果：不同疾病患者血清ALP的凝集素结合率结果见表１；经相关分析，血清ALP的L-PHA、LCA、DSA 结合率与肿瘤（单个癌结节）大直径及AFP水平有关。3．讨论：凝集素是一类能与特定糖链结构结合的糖蛋白，我们使用多种凝集素亲和层析发现原发性肝癌患者血清ALP的N-糖链结构发生改变，多天线 (L-PHA、DSA结合)、核心岩藻糖 (LCA结合) 糖链结构明显增多。若取正常对照组血清ALP凝集素结合率的单侧99%作为参考范围，则血清ALP的L-PHA、LCA和DSA结合率在原发性肝癌患者中的阳性率分别为75.0%、56.9%和44.4%，在AFP阴性的原发性肝癌患者中阳性率也分别高达54.5%和40.9%和31.8%，且 L-PHA结合率和LCA结合率特异性较高。
作者：陈国千；张万忠；吕元 刊期： 2001年第01期
为探讨HBV复制程度高低对重叠丁型肝炎（HD）的影响，以及本地区HD的临床特征，我们对163例患者进行了研究。1. 对象和方法(1)一般资料：在1230例慢性乙型肝炎患者中，发现重叠HD160例，感染率为13.0％。均系本院1996年3月～1999年8月住院患者。平均年龄（39.6±12.7）岁（12～74岁）；男126例，女34例。另在50例HBsAg阳性无症状体检者中发现3例HD 患者（血清由宁波市卫生防疫站提供），感染率为6％。(2)检测方法：血清HBV标志物：HBsAg、、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc、抗-HBcIgM采用RIA法，试剂由山东潍坊3V诊断技术公司提供。HBV DNA采用斑点杂交法，试剂由上海医科大学协恒公司提供。血清丁型肝炎病毒（HDV）标志物：HDAg和抗-HDV IgM采用ELISA法，试剂由广州丽珠试剂公司提供。HDV RNA采用巢式PCR法[1]，引物设计由上海细胞研究所合成，HDV RNA抽提试剂由美国GIBCO-BRL公司提供，以美国Promega逆转录系统在PE公司热循环仪上作PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳检测和Southern杂交分析。(3)统计方法：资料统计采用χ2检验，并作相关性分析。
作者：叶俊茂 刊期： 2001年第01期
目的 研究HCV对人B淋巴细胞的感染，建立HCV感染的丙型肝炎患者B淋巴细胞模型（CBCL)，并进行HCV的形态学研究。方法用EB病毒转化B细胞建立B细胞系，以逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）、免疫组织化学、原位杂交方法检测B细胞系上清液及细胞内的HCV抗原及HCV RNA，并通过电镜对HCV进行形态学研究。结果细胞系上清液中HCV RNA呈阳性，细胞内HCV抗原及HCV RNA均呈阳性，电镜观察结果发现细胞内存在65nm和110nm圆球型病毒颗粒，并可见病毒芽生形成现象。结论 HCV可感染人B细胞并在其中复制。病毒在感染细胞胞质空泡部位合成和组装，以芽生方式进入胞质空泡内形成病毒颗粒。
作者：姚鹏；陈良标；胡学玲；陈佩兰；胡大荣 刊期： 2001年第01期
根据我们的研究积累和临床实践，对乙型肝炎病毒基因检测技术方面存在的几个问题提出一些个人看法，希望引起重视。一、要合理选择基因检测方法 常用的基因检测方法是杂交法和多聚酶链反应(PCR)法，两种方法各有优势，但各又有不尽人意之处。比较肯定的是：杂交法的特异性优于PCR法，PCR法的敏感度胜过杂交法。 膜斑点杂交技术正逐步被微孔板杂交技术取代。微孔板杂交技术(如bDNA)不仅操作简便，而且由于采用了信号放大探针，提高了灵敏度；更由于检测系统中的夹心探针系化学合成的寡核苷酸，特异性进一步提高。由于成本过高，目前国内主要将bDNA技术用于HBV、HCV基因的定量分析。PCR技术不仅是一种研究手段，更是一类多功能的检验技术。在用于临床实验室诊断方面，PCR有其独特的优势。相对而言，近几年来基因定量PCR发展速度更快，其中竞争PCR和荧光PCR似成为当前的焦点话题。
作者：缪晓辉；孔宪涛 刊期： 2001年第01期
为提高对慢性乙型病毒性肝炎的抗病毒治疗效果，我们采用动态观察HBV DNA定量变化来指导抗病毒治疗，现将结果报告如下。1. 材料：男性48例，女性12例，年龄12～52岁，平均（38±6）岁，病程＞1年，血清HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性（ELISA法，试剂由上海科华公司提供）HBV DNA基因拷贝>1×102/ul（PCR荧光法），血清谷丙转氨酶（ALT）＞100U/L。诊断均符合1995全国第五次传染病与寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案。2. 方法：HBV DNA基因拷贝定量1×102～9.9×103/μl的30例为A组。1×104～108/μl的30例为B组。两组年龄、性别具可比性。两组均采用相同治疗方案，1个月α-1b干扰素（赛若金，深圳科兴生物制品公司）3MU肌注1次/d，胸腺肽100mg（长春、长生实业有限公司提供）静滴1次/d。
作者：周岳进；王开鉴；许雪延；郑金莉 刊期： 2001年第01期
我院自1994年4月以来对13例HCC自发性破裂出血患者采取了急诊肝动脉栓塞（TAE）抢救，取得了较满意的疗效。1. 资料与方法：13例HCC自发性破裂出血，男12例，女1例，年龄43～68岁，平均57岁。所有病例均按《中国常见恶性肿瘤诊治规范，第二分册：原发性肝癌》诊断标准确诊。患者均因突然腹痛、腹胀、头晕24h内入院，临床上有不同程度休克表现。13例腹腔穿刺均能抽出暗红色不凝固液体。其中5例有中至大量腹腔积血。术前术后均有肝肾功能，血甲胎蛋白、凝血酶原测定，B超和CT资料。入院后立即吸氧、补液、输血。术中监测血压、心电图、血氧饱和度。采用Seldinger技术经股动脉穿刺插管用5Fr Yashiro导管4Fr超滑导管，3Fr微导管先作肝总动脉造影。了解肿瘤分布情况，有无门静脉癌栓，动-静脉瘘及出血部位、范围后再进行超选择性插管至出血动脉分支再次作造影分析出血动脉条数，粗细，出血速度，并将DSA表现分为４型，根据分型选择合适的栓塞材料进行栓塞。其中1例行TAE前用5一氟脲嘧啶1000mg，顺铂80mg肝动脉灌注（TAI）。术后均给予护肝、抗炎、抗休克治疗。次日腹腔穿刺抽出陈旧血液。2. 结果：所有病例血管造影均有典型的肿瘤血管和肿瘤染色。病灶凸出肝脏表面12例，肿瘤呈巨块型中央坏死1例。表现为小动脉喷血型1例，微动脉洒血型4例，毛细血管渗血型6例，隐匿型2例，13例经急诊TAE后出血全部马上得到控制，除1例术后第5天死于严重肝肾功能衰竭外，其余12例均在3d后病情逐渐好转，无严重并发症。2周后复查肝功能，ALT下降10例，总胆红素和直接胆红素下降并接近正常11例。1月后复查AFP，12例均有不同程度下降，2例接近正常值。9例于1月后接受每月1次的TAE和TAI治疗，共治疗4次、3次、2次的分别为2例、5例、2例。存活3月2例，3～8月8例，13月1例，超过28月1例，1年存活率为15.4%。3. 讨论：栓塞前行DSA分型可为选择栓塞材料提供依据，我们按出血动脉粗细、条数、范围及出血速度分为四型。小动脉喷血型（Ⅰ型）：出血动脉直径＞1mm，造影剂自病灶的出血动脉向外喷出呈火山口征或出血间歇期可见小动脉痉挛截断现象。微动脉洒血型（Ⅱ型）：出血动脉分支直径为0.5～1.0mm，多条血管出血，造影剂自病灶表面流出呈洒水征。毛细血管渗血型（Ⅲ型）：肿瘤表面毛细血管床破裂造影剂外渗。隐匿型（Ⅳ型）：因出血部位与肿瘤染色重叠或处于出血间歇期虽无造影剂外渗现象，但病灶凸出肝表面，肝与膈肌间隙增宽呈肝－膈分离征，且随着造影剂的注射膈下密度逐渐增高亦应视为出血现象。Ⅰ型因动脉粗，出血速度快，单用明胶海绵难以止血，宜加用弹簧圈栓塞。Ⅱ型为多支末梢血管出血，在使用弹簧圈之前应先用真丝线段、明胶海绵颗粒栓塞，以达到彻底止血。Ⅲ型和Ⅳ型宜用碘油、真丝线段及明胶海绵浆栓塞。如有肝动－静脉瘘时，必须禁用真丝线段，因其直径小易通过瘘口造成肺栓塞。术中应避免大剂量化疗药灌注，但可选择对肝肾毒性小、剂量低的化疗药如表阿霉素掺入碘油栓塞，利用碘油的“载体”作用将抗癌药选择性地带入肿瘤组织可减轻副作用。TAE适应证宽，即使有严重肝硬化，凝血机能障碍甚至轻中度休克，仍可采用超选择性插管行肝亚段动脉栓塞保护了正常肝组织，具有创伤小，并发症少，恢复快，止血效果可靠等特点。术后配合腹腔穿刺抽出陈旧血液减少感染机会。因此，我们认为临床上一旦确诊为HCC自发性破裂出血即应不失时机地选择TAE治疗以有效地抢救生命。
作者：虞希祥；林友岳；黄林芬；王玉珠；李阳 刊期： 2001年第01期
目的 观察肝刺激因子（hepatic stimulator substance, HSS）对肝细胞酪氨酸蛋白激酶介导信号传导的调节作用。方法自鼠肝提取HSS, 纯化后作用于BEL-7402肝癌细胞, 检测HSS对促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）活性的影响。结果生物化学方法提取HSS与基因重组HSS分子量一致; HSS可活化MAPK, 其作用强度不及表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）; 以PD98059 (0～100μmol/L) 阻断MAPK信号通路后, HSS刺激MAPK的作用逐渐减弱, 呈剂量-效应关系。结论 HSS对酪氨酸激酶信号分子MAPK活性具有调节作用, 可能为其促肝细胞增殖的重要机制之一。
作者：陈莉；安威；谭信；高鼎成；戴杰 刊期： 2001年第01期
目的 建立简便、特异的鸭乙型肝炎病毒（DHBV）感染及免疫血清学检测系统。方法制备、纯化检测所需的抗DHBV前S区单克隆抗体腹水、DHBsAg和rDHBcAg，对随机筛选的80份感染血清及实验感染1日龄重庆麻鸭系列血清分别进行DHBsAg和抗-DHBc、抗-DHBs检测。结果 PCR方法检测出阳性66份，阴性14份。选用PCR阳性的66份标本，经DHBsAg ELISA检测出62份阳性，斑点杂交检出阳性份数为58份。与DHBV PCR相比较，灵敏度分别为87.9%和 93.9%，而8只实验感染鸭仅2只在感染后第3周血清抗-DHBc阳性，抗体效价为1:10，至第4周测定已为阴性，抗-DHBs则在所有标本均为阴性。结论 DHBV感染及免疫血清学酶联免疫方法的建立，为进一步研究DHBV感染后复制规律及体内免疫应答状况奠定了基础。
作者：唐霓；黄爱龙；郭树华；张定凤 刊期： 2001年第01期
目的 探讨HBeAg阴性的慢性重型乙型肝炎患者HBV前C区变异及前C区T1862突变体对e抗原合成和分泌影响。方法选取9例重型乙型病毒性肝炎患者，用PCR方法扩增血清中HBV前C/C基因区，并克隆后测序和序列分析；构建HBV前C区T1862位点突变体表达质粒pGEMT，经体外翻译比较野毒株和变异株的表达产物。结果 HBV前C区有3个位点变异使氨基酸序列改变, A1896、A1899和T1862；A1899并不单独出现。前C区T1862突变并不阻止HBVe前体蛋白体外合成。同时，有2例并未检测到前C区的变异。结论部分重型肝炎HBeAg阴性原因除了T1896变异外，还存在T1862变异。前C1862突变对HBVe抗原前体蛋白合成并无影响，可能e抗原前体在分泌过程中受阻。
作者：郭亚兵；侯金林；骆抗先；冯筱榕 刊期： 2001年第01期
1. 材料与方法: 雄性Wistar大鼠，40只，随机分为空白组、高铁组、CCl4组和CCl4+高铁组，每组10只。空白组和高铁组均饲以普通颗粒饲料，饮用自来水。其中高铁组腹腔注射右旋糖酐铁(ID)，50mg/kg，每周2次，共5周。CCl4组、CCl4+高铁组，第1～5周饲养及给药情况相应同前述两组；第6～10周，复制CCl4肝损伤模型，共10周。模型复制成功后剖杀各组大鼠。留血清采用比色法检测血清铁（SI）。取肝组织，制成10%肝匀浆，采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）。取肝组织0.5g左右，70%酒精固定后，处理样品。上流式细胞仪分析DNA 含量及Bcl-2和Bax含量，计算凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。消化部分肝组织后，用原子吸收/火焰发射分光光度计测定肝组织铁含量（HIC）。统计学处理采用组间方差分析，组内q检验，肝组织铁含量与SI及MDA的关系用直线相关分析。2. 结果：（1）各组SI、HIC、MDA含量变化：各实验组SI水平与空白组比较显著升高（F＝68.67，P＜0.0001)。HIC在补充铁剂组明显升高（F＝83.55，P＜0.0001)。各组MDA含量与空白组比较亦增高显著（F＝45.59，P＜0.0001)，且应用铁剂组尤为显著。SI与HIC呈直线正相关，（r＝0.7916，P＜0.001）。
作者：白玉；曹治宸；勾凌燕；刘景冬 刊期： 2001年第01期
乙型肝炎为我国常见病、多发病, 且易转为慢性, 甚至发展为肝硬化及肝癌。乙型肝炎在病程中或治疗后出现HBeAg/抗-HBe转换、HBV DNA转阴、肝功能转为正常，认为系疾病缓解的标志。但部分病人出现HBeAg/抗-HBe转换后，HBV DNA仍然阳性, 肝脏病变仍持续进展, 可能由于HBV DNA出现前C区(1896位核苷G-A变异) 或C区启动区突变(1762位核苷A-T变异，1764 G-A变异)，不能形成HBeAg，但病毒仍能复制及装配。HBeAg阴性慢性乙型肝炎（CHB）经过核酸序列测定，证实有前C区或C区启动区突变的占30%～60%我国部分省市检测HBeAg阴性CHB经过核酸序列测定，证实有前C区或C区启动区突变的占17.6%～78.9%，而HBeAg阳性。乙型肝炎病毒（HBV）有基因前C区变异和野株并存者也占2.9%～50%[1]。HBV基因前C区变异和病毒基因分型有关，南欧地区以D型多见，或和前C区或C区启动区突变多见有关。HBeAg阴性CHB不伴前C区或C区启动区突变者可能为HBV低复制状态。近年来发现乙型肝炎自然康复或抗病毒治疗后康复，均可较长期在体内有低水平HBV DNA复制，不一定伴基因变异，病情不断进展，可以发展成为肝硬化或肝癌, 称之为HBV低复制状态[2]。HBV基因前C区变异和其低复制状态都是体内免疫压力或治疗压力的结果，对病情发展的影响主要取决于机体免疫状态，病毒变异株的作用有限[3]。
作者：张定凤 刊期： 2001年第01期
目的 建立乙型肝炎病毒（HBV）转基因小鼠模型，探讨该模型能否用于抗HBV药物的验证、筛选。方法原核显微注射法制备HBV转基因小鼠，用巢式PCR、southern杂交、免疫组织化学、ELISA等检测HBV基因的整合与表达。筛选60只血清HBV DNA、HBsAg阳性的小鼠，随机分为6组，3组为实验组，分别给予拉米夫定灌胃，胸腺肽腹腔注射，HBV S基因DNA疫苗，多点肌肉注射；另3组分别为生理盐水对照组。结果显微注射产生的HBV转基因小鼠中有HBV的复制和表达。拉米夫定、胸腺肽、DNA疫苗用于转基因小鼠后，均能使血清HBV DNA阴转，以拉米夫定阳转率高，并可看出作用开始、持续时间及反跳情况。结论拉米夫定、胸腺肽、DNA疫苗可抑制转基因小鼠HBV的复制；HBV转基因小鼠有可能成为抗HBV药物验证、筛选的有力工具。
作者：熊一力；贾彦征；王洪敏；刘光泽；任红 刊期： 2001年第01期
一、妊娠剧吐妊娠剧吐多见于早孕期。常见到累及肝脏的病例,50%的病人转氨酶异常，通常＜1000U/L；少数严重病例可出现黄疸。肝活检显示轻微的、非特异性的改变。治疗呕吐的经验包括休息和静脉输液。据报导异丙嗪或氟哌利多的应用还是有效的。少数病人需要肠内或肠外营养。二、妊娠期肝内胆汁淤积症妊娠期肝内胆汁淤积症国内发病率为0.3%～4.4%。其主要症状是瘙痒，往往在妊娠中期开始出现症状，分娩后一段时间内消退。发病机理不明。肝组织活检仅发现轻微的胆汁淤积，大部分无明显变化。初的治疗是应用镇静剂和止痒剂以改善瘙痒症状，熊去氧胆酸有一定疗效。消胆胺已在临床上应用，但在这种条件下可加重脂肪的吸收障碍。现在一般支持S-腺苷蛋氨酸用于治疗，但结果尚不肯定。唯一有效的方法是分娩，可以在胎儿肺发育成熟时提前中止妊娠，大部分病例在38周，少数在36周。对母亲唯一远期后遗症是患胆结石的几率稍微增加。三、溶血、肝酶升高，血小板降低综合征、妊娠急性脂肪肝在后半孕期肝功异常时应考虑血小板降低综合征和妊娠急性脂肪肝。3%～10%的孕妇有先兆子痫，其中20%患有严重先兆子痫的病人患血小板降低综合征。常见的症状是腹痛。很多病人没有特殊的表现，实验室检查确诊。转氨酶升高是这种综合征的标志，AST升高水平从70～6000U/L，大多数平均在250U/L，无黄疸，溶血是明显的，在未梢血片中可见到裂红细胞和粘附细胞。肝活检可见典型的先兆子痫的表现：门静脉周围出血和纤维蛋白沉积。产科治疗包括仔细进行胎儿监护，及时终止妊娠。血小板降低综合征可导致极少数病例被膜下出血而发生肝破裂，应及时手术修补肝脏裂口。血小板降低综合征也可以发生肝坏死，CT或MRI扫描可以确诊。血小板降低综合征和肝血肿可以在再次怀孕时复发。一旦分娩，婴儿没有肝病或血小板减少症，并且发育与孕期相符，母亲也没有什么远期后遗症。孕妇患妊娠急性脂肪肝较少见，也可以在产后发病，而且容易被忽视。从无症状的转氨酶升高到暴发性肝衰竭均可发生。发病机理不明确。实验室检测发现凝血酶原时间延长和纤维蛋白原降低，转氨酶多数升高，＜1000U/L。肝活检显示在中心区空泡形成，呈灰白色，特殊染色或电子显微镜下观察可见细小囊状脂肪滴浸润。治疗包括在大限度支持治疗促进肝脏恢复情况下及时分娩。四、其它肝病孕妇急性甲型或乙型病毒性肝炎的病程并不改变,也并不一定引起妊娠停顿或早产。但急性乙型肝炎在第二或第三个三月期有传染给胎儿的危险。单纯疱疹病毒和戊肝病毒在中东和亚洲呈局部流行,二者均可引起孕妇暴发性肝坏死，母亲死亡率高，尤其在第三个三月期。典型的单纯疱疹病毒感染的病人转氨酶升高，但无黄疸。这些病人病程呈急性，可以通过静脉滴注阿昔洛韦治疗，因此，不需要早期中止妊娠。孕妇易患胆石症，在孕期形成胆汁泥沙样结石和胆囊结石，可以在分娩后恢复非妊娠状态的生理条件下分解。如果可能的话在第一和第三个三月期好用保守治疗方法。孕妇一般处于高凝血状态，有潜在的血栓形成的可能性，如果本身遗传缺乏蛋白质C和蛋白质S，或存在抗心脂或抗磷脂抗体,在怀孕期间形成血栓的风险增大。这可导致Budd-chiari综合征发生。并可出现肝衰竭和门静脉高压而出现腹水。孕期可以发生恶性肿瘤并转移到肝脏，也可能出现妊娠促进肿瘤发展的现象。既往存在肝脏疾病，当严重时，一般与妊娠不能相容。这些病人一般排卵停止，不能生育。然而，很多感染有慢性乙型及丙型肝炎的病人情况较好，她们可以受孕并继续妊娠，并不给她们增加危险性，但是对后代有传染的可能性。患有自身免疫性肝炎或Wilson’s病的孕妇治疗后病情改善，恢复了生育能力，可以受孕。这些病人在怀孕期间应继续治疗。同其他患有慢性肝病的病人一样，她们患先兆子痫和早产的几率也是增大的。
作者：杨列永；于咸怀 刊期： 2001年第01期
为了探讨TTV是否能在新西兰长耳兔（以下简称兔）复制,我们进行了TTV对兔传代感染试验，证明它能感染也能传代。一、材料与方法１. 实验动物：由湖南省卫生防疫站提供成年新西兰兔。2. 第一代感染实验：收集六份非甲至非庚型肝炎TTV阳性血清，每只兔由耳静脉注射阳性血清１ml，定期采血（感染前采血，感染后每周采血一次），分离血清，当天检测生化指标，血清标本于－20℃保存备用。第二、第三代感染试验，用四只兔进行接种，其中２只兔感染成功继续接种，方法与第一代实验相同。将第二代感染成功兔血清1ml接种于第三代兔体内。3. 感染指标及测定方法：(1)标本中TTV DNA的检测，用nest－PCR方法检测血清中TTV DNA。(2)生物化学指标检测：对感染兔进行系列采样，定期测定ALT和直接、间接胆红素等各项指标的变化。(3)感染兔体内TTV DNA基因的克隆及序列测定：从感染TTV的血清标本中克隆TTV的部分基因进行序列测定，操作按常规进行,对测定序列采用Golbenkey Clustail及Blast程序软件进行序列比较。
作者：王长奇；陈燕萍；伍淑云；袁绍云；周宪明 刊期： 2001年第01期
目的 通过对丁型肝炎病毒（HDV）感染的乙型肝炎患者临床特点分析，了解HDV感染特征和HDV致病机理。方法对合并HDV感染的507例乙型肝炎患者各临床类型肝炎的发生、预后、临床表现、生物化学指标、肝炎病毒标志物等作统计分析，以213例单纯HBV感染的乙型肝炎患者作对照。结果 HDV感染后重型肝炎、肝硬化的发生率和病死率、及发生出血、腹水、并发症和ALT反复增高及增高幅度均较HDV阴性者高（Ｐ＜0.01或Ｐ＜0.05），重度慢性肝炎和重型肝炎患者的生物化学指标异常也较对照组明显（Ｐ＜0.01）。血清HBeAg检出率降低（Ｐ＜0.01）。急性肝炎、重型肝炎和肝硬化HDAg（+）、HBeAg（-）表达高于HDAg。HBeAg均阳性者（Ｐ＜0.01或Ｐ＜0.05）。结论 HDV感染后重度慢性肝炎、重型肝炎和肝硬化的发生率高，预后差；HDV感染可抑制HBV复制或HBeAg表达；HDV的直接细胞毒性作用在急性肝炎中可能起主要致病作用，在合并有HDV感染的乙型肝炎患者病情加重、病死率增高和慢性化过程中，HDV可能起主要促进作用。
作者：顾小红；李奇芬；王宇明 刊期： 2001年第01期
我们采用流式细胞术（flow cyto-metry）对慢性HBV感染者外周血CD4+NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况进行分析，并对细胞样品进行51Cr细胞毒性试验，以鉴定其细胞毒性。一、资料与方法1. 对象：病例为第一军医大学南方医院感染内科1999年5月至9月门诊及住院病人。选择慢性HBV携带者（AsC）18例、经肝组织活检证实的慢性乙型病毒性肝炎（中度）（CHB）18例，正常对照组12例取自门诊健康体检者。48例受检者中女14例，男34例，年龄17～42岁（平均32.4岁）；36例慢性HBV感染者均为HBsAg阳性（ELISA），27例HBeAg阳性，9例抗-HBe阳性；正常对照组除5例抗-HBs阳性外，其余对照者HBV血清标志物全部阴性。2. 方法：流式细胞检测（FACS）分析CD4+ NK-T、CD8+NK-T细胞的分布情况新鲜抗凝全血4ml，常规分离PBMC，在RPMI 1640培养液中、37℃培养2h，移去贴壁的单核细胞。2×106/ml非贴壁细胞继续以20U/ml rhuIL-12及100U/ml rhuIL-2刺激培养14d，加入FITC标记鼠抗人CD4单克隆抗体（mAb）或CD8 mAb、PE标记CD56-mAb 45min，作FACS，获得CD4+ NK-T和CD8+ NK-T细胞的百分率。所有病例均同步设一鼠抗人IgG（PE、FITC）细胞样品作为对照。
作者：姜荣龙；骆抗先；富宁 刊期： 2001年第01期
目的 探讨Bcl-2家族蛋白在TNFα致肝损伤及肝细胞凋亡中的作用。方法 以TNFα联合D-氨基半乳糖诱发小鼠肝损伤，以免疫组织化学法检测Bax、Bak蛋白在鼠肝组织中的表达情况；并以Bcl-2腺病毒载体感染肝细胞，观察其抗肝细胞凋亡作用。结果 TNFα可引起严重的肝损伤并有广泛的肝细胞凋亡，伴Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强；Bcl-2腺病毒感染可使肝损伤小鼠ALT水平由（1372.9±251.4）U/L下降至（796.5±78.7）U/L，统计分析差异有显著意义（P＜0.0005）。结论 TNFα诱导肝细胞凋亡可能与其诱导Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强有关；Bcl-2腺病毒载体可在小鼠肝细胞中持续表达至少一个月并可部分抵抗TNFα诱发的肝细胞凋亡。
作者：张斌；张定凤；任红；马英 刊期： 2001年第01期
我们对32例临床确诊肝癌并腹水的标本进行K-ras基因外显子1、2和p53基因外显子5、6、7、8测序分析。1. 材料与方法：(1)标本：32例腹水患者均经确诊为肝癌，男19例，年龄31～68岁，女13例，年龄33～59岁。非癌性腹水27例，男16例，年龄23～67岁，女11例，年龄27～65岁。两组患者均无癌家族史及长期汹酒史。(2)材料：310型测序仪、2400型PCR仪由美国PE公司产，引物由上海生工生物工程公司合成，测序试剂盒、序列胶等由美国PE公司产。(3)方法：引物序列：5′GTACTGGTGGAGT ATTTGATAGTG3′，5′AAGAATGGT CCTGCACCAGTAATA3′，5′AGGTG CACTGTAATAATCCAGACTGTG3′，5′GCACTATAATTACTCCTTAATGT CAGC3′，5′GCAGTTCCTCTTCCTGCA GTACTC3′，5′AACCAGACCTCAGGC GGCTCATAG3′，5′TGTTGTCTCCT AGGTTGGCTCTGACTA3′，5′GTCC TGCTTGCTTACCTCGCTTAGTGC3′。腹穿留新鲜腹水10ml，离心收集细胞沉淀，用蛋白酶K消化，苯酚－氯仿抽提法提取基因组DNA，取基因组1μg的DNA分别扩增K-ras外显子1、2和p53基因外显子5、6、7、8，用双链产物为模板直接测序。2. 结果：32例肝癌腹水中见K-ras基因突变2例，p53基因突变9例，阳性率分别为6.25％和28.13％，其中有2例先在腹水中发现p53基因突变，后发现肝癌，见表1。
作者：顾其华；叶爱慧；李玲芝；杨志毅；舒畅 刊期： 2001年第01期
目的 探讨联合经肝动脉插管化疗栓塞术（TACE）及无水酒精瘤内注射术（PEI）治疗复发性肝癌周围静脉血液循环性肝癌细胞的变化及其意义。方法应用巢式RT-PCR检测19例复发性肝癌患者血液循环性肝癌细胞，并经TACE及PEI联合治疗观察其血液循环性肝癌细胞的变化。结果血液循环性肝癌细胞表达阳性的7例复发性肝癌患者（36.8%），经TACE及PEI联合治疗后其血液循环性肝癌细胞均转为阴性（100%，P＜0.01）。结论联合TACE及PEI治疗复发性肝癌可有效地杀灭血液中播散的循环性肝癌细胞，可预防肝癌再复发和转移的发生。
作者：刘扬；张柏和；吴孟超；钱光相；陈汉；傅继梁；黄长辉 刊期： 2001年第01期
目的 探讨枯否细胞在大鼠非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）发病中的作用。方法 19只雄性SD大鼠随机分为模型组（10只）和正常组（9只），分别予高脂肪饮食和标准饮食饲养12周。HE染色观察肝组织切片病理学改变，透射电镜和溶菌酶免疫组织化学染色观察枯否细胞的数量和形态。结果模型组大鼠均出现肥胖、高脂血症伴肝细胞大泡性脂肪变、小叶内炎症细胞浸润和坏死。与正常组相比，模型组肝小叶内枯否细胞数显著增加，并呈活化状态；模型组枯否细胞变化与其肝病理学改变相一致。结论高脂饮食大鼠肝脏枯否细胞增多，并可能与其脂肪性肝炎的发病有关。
作者：范建高；钟岚；王国良；巫协宁；靖大道；张丕利；李明升 刊期： 2001年第01期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
