唐霓；黄爱龙；郭树华；张定凤
目的 探讨血清铁代谢对乙型肝炎肝损伤的影响。方法对收治的103例乙型肝炎患者按临床分型，观察铁代谢血清学指标血清铁蛋白、转铁蛋白、血清铁、总铁结合力与乙型肝炎肝损伤的关系。结果血清铁蛋白、转铁蛋白、血清铁和总铁结合、乙型肝炎肝损伤相关。其中，血清铁蛋白、血清铁随肝损伤加重而增加，转铁蛋白、总铁结合力随肝损伤加重而减少。结论铁负荷过重可能协助HBV加重肝损伤，因此检测铁代谢指标可以对乙型肝炎的治疗和预后作出评价。
作者：曹治宸；白玉；刘金星；李兵顺；杨学农；李凤林 刊期： 2001年第01期
目的 观察减毒水痘病毒对乙型肝炎病毒复制的影响。方法分别用减毒水痘病毒接种鸭乙型肝炎模型和HepG2 2.2.15细胞，以斑点杂交和EIA方法分别检测鸭血清中DHBV DNA和细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg的含量。结果减毒水痘病毒两个剂量组均显示鸭血清病毒量下降，200pfu/kg组在给药后第10天和停药5d时，DHBV DNA 吸光度（A）平均值分别由给药前1.17±0.29降至0.59±0.45和0.21±0.21，相比差异有显著性（t＝3.51, P＜0.01和t ＝7.54，P＜0.001）；400pfu/kg组在给药后第5、10天DHBV DNA无下降，停药5d时DHBV DNA A平均值由给药前0.70±0.25 降至 0.32±0.17，差异有显著性（t ＝3.58， P＜0.01）；减毒水痘病毒对2.2.15细胞分泌HBeAg、HBsAg均有抑制作用，大抑制率分别为61%和33%，对HBeAg的抑制较HBsAg强。结论减毒水痘病毒在鸭乙型肝炎模型上可以显著降低血清DHBV DNA水平；在体外能够直接抑制2.2.15细胞分泌HBsAg 、HBeAg ，提示该病毒可能对乙型肝炎病毒复制有干扰或抑制作用。
作者：杨湛；雷春亮；吴婉芬；邓学龙；张奉学；朱宇同 刊期： 2001年第01期
目的 研究凋亡调节基因Fas相关死亡区蛋白（FADD）Mrna及蛋白在肿瘤坏死因子-α（TNF-α）介导的凋亡肝细胞中的表达及意义。方法 尾静脉注射TNF-α于D-氨基半乳糖（GalN）致敏的BALB/c小鼠，造成暴发性肝衰竭模型，用脱氧核糖核酸转移酶介导的缺口原位末端标记技术、电镜及琼脂糖凝胶电泳检测肝组织DNA Ladder观察肝细胞凋亡，分别用免疫组织化学和RT-PCR方法检测FADD Mrna和蛋白的表达情况。结果 TNF-α可介导GalN 致敏小鼠肝细胞凋亡、坏死，终肝功能衰竭死亡,细胞凋亡率分别为0（1.5h），0.3％（3.5h），3.15％（6h）和3.19％（9h），肝组织中FADD蛋白表达阳性率分别为0.2%（1.5h），3.3%（3.5h），14.2％（6h）和16.7％（9h），各时间点FADD Mrna表达的相对单位（FADD积分值/β-actin 积分值）不同，分别为0.48（正常对照组）、0.64（3.5h），0.59（6h）和0.65（9h）。结论 TNF-α可通过上调FADD表达引发肝细胞凋亡的级联过程。
作者：臧国庆；周霞秋；俞红；谢青；王朝夫；姚敏 刊期： 2001年第01期
目的 探讨枯否细胞在大鼠非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis, NASH）发病中的作用。方法 19只雄性SD大鼠随机分为模型组（10只）和正常组（9只），分别予高脂肪饮食和标准饮食饲养12周。HE染色观察肝组织切片病理学改变，透射电镜和溶菌酶免疫组织化学染色观察枯否细胞的数量和形态。结果模型组大鼠均出现肥胖、高脂血症伴肝细胞大泡性脂肪变、小叶内炎症细胞浸润和坏死。与正常组相比，模型组肝小叶内枯否细胞数显著增加，并呈活化状态；模型组枯否细胞变化与其肝病理学改变相一致。结论高脂饮食大鼠肝脏枯否细胞增多，并可能与其脂肪性肝炎的发病有关。
作者：范建高；钟岚；王国良；巫协宁；靖大道；张丕利；李明升 刊期： 2001年第01期
编者按 2000年6月3日在日本福冈举行的亚太肝病学会－国际肝病学会的联合学术大会上，由5个工作小组向大会提交了作为亚太地区“共识”的5个报告。其中关于慢性乙型肝炎治疗的报告及建议已登载于我刊第8卷第4期。现将其中关于慢性丙型肝炎治疗的报告及建议摘要的译文发表，供大家参考。报告组成员：Garrell GC（悉尼）、Omata M(东京)副主席、Sarin SK(新德里)、Shiratori Y (东京)、Chutaputti A(曼谷)、陆志檬（上海）、 Lai M-Y(台北)、Chow W-C（新加坡）、Farrell GC执笔一、背景1. 肝纤维化分期的重要性：研究慢性丙型肝炎的自然病程以及肝脏疾病并发症的危险性要求从组织学上明确肝纤维化的分期。虽然已有数个对慢性肝炎肝脏组织学进行半定量的分期的系统，但将纤维化（F）严重程度分为0～4期的分级法在本地区仍为常用，本报告也将采用这一分期方法。这与日本、Metavir和Scheuer等系统相对应，不同观察者之间的分期结果高度一致。2. 治疗应答：想要达到的治疗应答指标是清除病毒，用敏感的实验方法检测血清HCV-RNA为阴性。治疗结束时HCV-RNA阴性为治疗终末病毒应答（ETVR），持续病毒应答（SVR）的定义为在治疗完成后6个月时HCV-RNA仍为阴性。3. 持续病毒应答：获得持续病毒应答与肝纤维化好转、防止发生HCC及改善其他临床预后有好的相关性。相反，作为肝炎的生物化学指标，丙氨酸氨基转移酶（ALT）存在以下局限性：(1)用ALT定义应答（ETR或SR），有约15%的出错率。(2)用ALT定义无应答，有10%～50%的出错率，取决于其他情况（如存在肝硬化，使用更大剂量的干扰素或药效更强的干扰素，如pegylated（PEG）-IFN）。
作者：崔焱；王宇；贾继东；王宝恩 刊期： 2001年第01期
1. 材料与方法: 雄性Wistar大鼠，40只，随机分为空白组、高铁组、CCl4组和CCl4+高铁组，每组10只。空白组和高铁组均饲以普通颗粒饲料，饮用自来水。其中高铁组腹腔注射右旋糖酐铁(ID)，50mg/kg，每周2次，共5周。CCl4组、CCl4+高铁组，第1～5周饲养及给药情况相应同前述两组；第6～10周，复制CCl4肝损伤模型，共10周。模型复制成功后剖杀各组大鼠。留血清采用比色法检测血清铁（SI）。取肝组织，制成10%肝匀浆，采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛（MDA）。取肝组织0.5g左右，70%酒精固定后，处理样品。上流式细胞仪分析DNA 含量及Bcl-2和Bax含量，计算凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。消化部分肝组织后，用原子吸收/火焰发射分光光度计测定肝组织铁含量（HIC）。统计学处理采用组间方差分析，组内q检验，肝组织铁含量与SI及MDA的关系用直线相关分析。2. 结果：（1）各组SI、HIC、MDA含量变化：各实验组SI水平与空白组比较显著升高（F＝68.67，P＜0.0001)。HIC在补充铁剂组明显升高（F＝83.55，P＜0.0001)。各组MDA含量与空白组比较亦增高显著（F＝45.59，P＜0.0001)，且应用铁剂组尤为显著。SI与HIC呈直线正相关，（r＝0.7916，P＜0.001）。
作者：白玉；曹治宸；勾凌燕；刘景冬 刊期： 2001年第01期
一、资料与方法1. 样本收集：肝癌组织及非癌肝组织取自20例1998年3月～7月在东方肝胆外科医院经手术切除的新鲜原发性肝癌标本，经病理检查证实为肝细胞癌。男19例，女1例，年龄34～60岁，平均44.5岁，20例全伴肝硬化。肝癌分化程度按Edmondson法分级，正常肝组织来源于同期手术切除的5例肝海绵状血管瘤周围正常肝组织。男2例，女3例，年龄34～57岁，平均44.6岁。取肝癌组织、非癌肝组织及正常肝组织各200mg，标本必须自肿瘤离体后30min内置液氮速冻，再转-80℃冰箱冻存备检。2. AFP mRNA定量检测：取-80℃冻存肝癌组织、非癌肝组织及正常肝组织各100mg，加1mlTRIzol（Gibco BRL）试剂于DEPC处理匀浆器内电动匀浆，一步法抽提组织总RNA。PCR辅助转录滴定系统（Patty）法定量检测1μg总RNA中AFP mRNA含量，具体步骤参见文献[1]。3. 统计分析：两组间均数比较用t检验，非参数资料相关性大小用Spearman等级相关分析。二、结果1. AFP mRNA定量检测结果：肝癌组织AFP mRNA水平为106～1010拷贝/μg，平均为3.2×107±20.8拷贝/μg；非癌肝组织为104～107拷贝/μg，平均为6.3×105±5.9拷贝/μg；正常肝组织为104～105拷贝/μg，平均为6.8×104±2.8拷贝/μg。与非癌肝组织相比，60%（12/20）肝癌组织AFP mRNA高出102～106倍，20%（4/20)高出10倍，两组间差异有显著意义（Ｐ＜0.001）。在6例血清AFP阴性（＜30μg/L）肝癌患者中，66.7%（4/6）的肝癌组织AFP mRNA高于非癌肝组织。2. 肝癌组织AFP mRNA水平与肝癌各病理特征的关系：如表1所示，肝癌组织中AFP mRNA水平与肿瘤大小、分化程度及门静脉是否有癌栓无关（Ｐ＞0.20）。
作者：杨业发；吴孟超；陈汉；杨广顺；郁庆明 刊期： 2001年第01期
目的 观察肝刺激因子（hepatic stimulator substance, HSS）对肝细胞酪氨酸蛋白激酶介导信号传导的调节作用。方法自鼠肝提取HSS, 纯化后作用于BEL-7402肝癌细胞, 检测HSS对促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）活性的影响。结果生物化学方法提取HSS与基因重组HSS分子量一致; HSS可活化MAPK, 其作用强度不及表皮生长因子（epidermal growth factor, EGF）; 以PD98059 (0～100μmol/L) 阻断MAPK信号通路后, HSS刺激MAPK的作用逐渐减弱, 呈剂量-效应关系。结论 HSS对酪氨酸激酶信号分子MAPK活性具有调节作用, 可能为其促肝细胞增殖的重要机制之一。
作者：陈莉；安威；谭信；高鼎成；戴杰 刊期： 2001年第01期
乙型肝炎为我国常见病、多发病, 且易转为慢性, 甚至发展为肝硬化及肝癌。乙型肝炎在病程中或治疗后出现HBeAg/抗-HBe转换、HBV DNA转阴、肝功能转为正常，认为系疾病缓解的标志。但部分病人出现HBeAg/抗-HBe转换后，HBV DNA仍然阳性, 肝脏病变仍持续进展, 可能由于HBV DNA出现前C区(1896位核苷G-A变异) 或C区启动区突变(1762位核苷A-T变异，1764 G-A变异)，不能形成HBeAg，但病毒仍能复制及装配。HBeAg阴性慢性乙型肝炎（CHB）经过核酸序列测定，证实有前C区或C区启动区突变的占30%～60%我国部分省市检测HBeAg阴性CHB经过核酸序列测定，证实有前C区或C区启动区突变的占17.6%～78.9%，而HBeAg阳性。乙型肝炎病毒（HBV）有基因前C区变异和野株并存者也占2.9%～50%[1]。HBV基因前C区变异和病毒基因分型有关，南欧地区以D型多见，或和前C区或C区启动区突变多见有关。HBeAg阴性CHB不伴前C区或C区启动区突变者可能为HBV低复制状态。近年来发现乙型肝炎自然康复或抗病毒治疗后康复，均可较长期在体内有低水平HBV DNA复制，不一定伴基因变异，病情不断进展，可以发展成为肝硬化或肝癌, 称之为HBV低复制状态[2]。HBV基因前C区变异和其低复制状态都是体内免疫压力或治疗压力的结果，对病情发展的影响主要取决于机体免疫状态，病毒变异株的作用有限[3]。
作者：张定凤 刊期： 2001年第01期
目的 探讨Bcl-2家族蛋白在TNFα致肝损伤及肝细胞凋亡中的作用。方法 以TNFα联合D-氨基半乳糖诱发小鼠肝损伤，以免疫组织化学法检测Bax、Bak蛋白在鼠肝组织中的表达情况；并以Bcl-2腺病毒载体感染肝细胞，观察其抗肝细胞凋亡作用。结果 TNFα可引起严重的肝损伤并有广泛的肝细胞凋亡，伴Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强；Bcl-2腺病毒感染可使肝损伤小鼠ALT水平由（1372.9±251.4）U/L下降至（796.5±78.7）U/L，统计分析差异有显著意义（P＜0.0005）。结论 TNFα诱导肝细胞凋亡可能与其诱导Bax、Bak蛋白在肝细胞中表达增强有关；Bcl-2腺病毒载体可在小鼠肝细胞中持续表达至少一个月并可部分抵抗TNFα诱发的肝细胞凋亡。
作者：张斌；张定凤；任红；马英 刊期： 2001年第01期
乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后临床表现及转归差别很大，感染者在发生肝硬化和原发性肝癌（HCC）之前的任何阶段感染都可自行消失，而抗病毒药物如干扰素（INF）、核苷类物也可抑制病毒而影响感染的自然过程。弄清其自然史及其影响因素，有助于乙型肝炎的预后判断、药物疗效的分析及药品经济学评估，为其防治提供佐证。那么，HBV感染后的长期过程究竟是怎样的一种状况呢？现就有关研究作一简要综述。HBV可以感染任何年龄的人，不同的感染方式和年龄有不同的自然过程。HBV感染后的慢性携带率与感染的年龄密切相关，年龄越小，慢性化的可能越大。新生儿感染HBV后慢性携带率高达71%～90%，学龄前儿童感染后25%呈慢性携带，青少年和成人在3%以下。因此，母婴传播所造成的慢性携带率较高，中国HBV慢性携带者中40%～50%是通过母婴传播的。有报道在225名HBsAg阳性母亲的新生儿中145人在出生后一年内HBsAg阳转（占64.4%）。至于宫内感染，刘崇柏等[1]用原位杂交检测了HBsAg阳性母亲的引产儿肝片，计算出宫内感染率约５%，与新生儿免疫接种的预防效果相符。而田庚善等[2]也采用分子杂交对HBsAg阳性母亲的引产儿肝脏进行了检测，却发现胎儿感染率高达26.7%，与新生儿免疫预防效果不相符的原因认为与胎儿肝脏中HBV DNA为非复制型或整合型不表达HBsAg有关。
作者：巫贵成；周卫平 刊期： 2001年第01期
根据我们的研究积累和临床实践，对乙型肝炎病毒基因检测技术方面存在的几个问题提出一些个人看法，希望引起重视。一、要合理选择基因检测方法 常用的基因检测方法是杂交法和多聚酶链反应(PCR)法，两种方法各有优势，但各又有不尽人意之处。比较肯定的是：杂交法的特异性优于PCR法，PCR法的敏感度胜过杂交法。 膜斑点杂交技术正逐步被微孔板杂交技术取代。微孔板杂交技术(如bDNA)不仅操作简便，而且由于采用了信号放大探针，提高了灵敏度；更由于检测系统中的夹心探针系化学合成的寡核苷酸，特异性进一步提高。由于成本过高，目前国内主要将bDNA技术用于HBV、HCV基因的定量分析。PCR技术不仅是一种研究手段，更是一类多功能的检验技术。在用于临床实验室诊断方面，PCR有其独特的优势。相对而言，近几年来基因定量PCR发展速度更快，其中竞争PCR和荧光PCR似成为当前的焦点话题。
作者：缪晓辉；孔宪涛 刊期： 2001年第01期
目的 探讨联合经肝动脉插管化疗栓塞术（TACE）及无水酒精瘤内注射术（PEI）治疗复发性肝癌周围静脉血液循环性肝癌细胞的变化及其意义。方法应用巢式RT-PCR检测19例复发性肝癌患者血液循环性肝癌细胞，并经TACE及PEI联合治疗观察其血液循环性肝癌细胞的变化。结果血液循环性肝癌细胞表达阳性的7例复发性肝癌患者（36.8%），经TACE及PEI联合治疗后其血液循环性肝癌细胞均转为阴性（100%，P＜0.01）。结论联合TACE及PEI治疗复发性肝癌可有效地杀灭血液中播散的循环性肝癌细胞，可预防肝癌再复发和转移的发生。
作者：刘扬；张柏和；吴孟超；钱光相；陈汉；傅继梁；黄长辉 刊期： 2001年第01期
一、资料与方法1. 病例选择和治疗：活动性慢性丙型肝炎患者21例，抗HCV和HCV RNA均阳性，ALT异常（＞80U/L)，病程持续6个月以上。HBV标记均阴性，并排除其他因素，如酒精、遗传和自身免疫等因素引起的肝病。根据临床和肝组织学，除2例为伴早期肝硬化外，其余均为活动性慢性肝炎。所有患者均接受IFN-α2a治疗，每天300万单位，连续15d，后每周3次，每次300万单位，共16周。2. 患者PBMC的分离和检测：分别抽取新鲜肝素抗凝全血3～5ml，用淋巴细胞分离液分离PBMC。用作逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR）检测的PBMC，以蛋白酶和RNA酶分别处理，以排除血清中HCV对PBMC的污染可能。所有患者分离的PBMC均以SP免疫组织化学、RT-PCR和常规透射电镜方法分别检测HCVAg、HCV RNA和细胞内HCV颗粒。SP免疫组织化学通用型试剂盒为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术公司。检测HCV RNA的RT-PCR试剂盒，购自北京京师生物技术公司。HCVAg和HCV RNA检测按试剂盒说明书步骤进行。常规透射电镜标本按常规方法制备，1μm切片定位后超薄切片，铀铅双染色后JEM-1200EX透射电镜观察和照相。3. 疗效分析：主要根据治疗前后患者血清ALT和HCV RNA变化，PBMC内HCV RNA和HCVAg改变情况，并参考临床表现，将IFN治疗后患者归为三组，完全应答组:血清ALT降至正常值,HCV RNA转阴，PBMC内HCVAg阳性强度明显减弱，临床症状消失或明显改善；部分应答组：血清ALT复常或明显降低，但血清和PBMC内HCV RNA基本无变化，PBMC内HCVAg阳性强度变弱或无变化，临床症状改善或无变化；无应答组：血清ALT和HCV RNA，PBMC中HCV RNA和HCVAg基本无变化，临床症状基本无改变。二、结果完全应答者7例（33.33%），部分应答者5例（23.81%），无应答者9例（42.85%）。检查结果显示，完全应答组患者，血清ALT降至正常，血清HCV RNA转阴，PBMC内HCV RNA无改变，原5例阳性者仍为阳性，HCVAg２例转阴，其余5例阳性强度减弱，电镜观察该组患者PBMC，治疗前5例均可见到过去我们以电镜和免疫电镜证实的HCV颗粒，治疗后可见者仅2例，光镜下PBMC-HCVAg呈“++”以上阳性者，一般电镜下易见HCV颗粒,该组患者临床症状消失或显著改善。部分应答患者5例，治疗后1例血清ALT复常，4例明显下降，血清HCV RNA 1例转阴，其余4例无改变，PBMC HCV RNA治疗前后无变化，HCVAg治疗前３例阳性者，治疗后阳性强度稍有减弱或无变化，治疗前2例HCVAg原阴性者，治疗后无变化，临床症状改善或无变化。无应答患者9例，治疗前后血清ALT和HCV RNA，PBMC内HCV RNA基本无变化。PBMC内HCVAg阳性程度稍有减弱或无改变。电镜观察治疗前8例可见HCV颗粒，治疗后可见者4例。该组患者临床症状无改善或稍有加重。三、讨论结果表明，IFN对活动性慢性丙型肝炎患者血清和PBMC内HCV表达有直接作用，这一作用与其治疗应答有关。IFN治疗完全应答者、部分应答者或无应答者的PBMC内HCVAg表达均受到不同程度抑制，特别是完全应答组患者更为明显，但PBMC内HCV RNA治疗前后均无变化，表明IFN对慢性丙型肝炎患者PBMC内HCV抗原合成有一定抑制作用，但不能清除PBMC内HCV RNA。因此，在IFN治疗慢性丙型肝炎时，设法清除患者PBMC内HCV RNA比清除血清和肝细胞内HCV RNA可能更为重要和更有价值。
作者：陈良标；田惠英；陈佩兰；刘超英；李琳 刊期： 2001年第01期
我们旨在观察外源性心钠素（ANP）对肝硬化患者血浆肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）的影响，以探讨治疗肝硬化腹水的新途径。一、资料与方法
作者：洪阳；韦举卿；周力 刊期： 2001年第01期
肝窦属不连续毛细血管，窦壁主要由一层内皮细胞组成。肝窦内皮细胞的特点是细胞扁而薄，其窦腔面可见少量微绒毛，扁薄的部分有发达的窗孔，细胞呈筛状形态，内皮窗孔无隔膜。肝窦内皮外无基底膜，仅见少量网状纤维。肝窦是通透性大的血窦之一，是保证血液和肝细胞间正常物质交换的组织学基础。1963年Schaffner发现随着肝硬化的发生，肝窦内皮窗孔数逐渐减少或消失，内皮下基底膜逐渐形成，形似连续毛细血管，称这一过程为肝窦毛细血管化（sinusoid capil-larization）。研究肝窦毛细血管化的形成机理以及和肝纤维化、肝硬化的发生关系已成为世界肝病研究领域的一个热点。一、肝窦毛细血管化的评判各种原因所致的肝纤维化过程中一个显著的病理变化即为纤维间隔近旁肝窦毛细血管化。肝窦内皮细胞的失窗孔和内皮下连续性基底膜的形成是肝窦毛细血管化的两个主要特征[1]。肝窦内皮细胞的失窗孔意味着肝窦内皮细胞的表型（Phenotype）发生了改变，而连续性基膜的形成可能是构成基膜的一些细胞外基质在Disse间隙沉积的结果[2]。1. 正常肝窦内皮细胞表型的标志：肝窦内皮细胞有很强的物质摄取和代谢能力，它可吞噬多种外源性和内源性颗粒和大分子物质[1]。例如，肝窦内皮细胞表达低亲和力的FCγⅡ受体（CD32、OKM5），内吞和降解免疫球蛋白IgG复合体。
作者：陆雄；刘平 刊期： 2001年第01期
目的 通过对丁型肝炎病毒（HDV）感染的乙型肝炎患者临床特点分析，了解HDV感染特征和HDV致病机理。方法对合并HDV感染的507例乙型肝炎患者各临床类型肝炎的发生、预后、临床表现、生物化学指标、肝炎病毒标志物等作统计分析，以213例单纯HBV感染的乙型肝炎患者作对照。结果 HDV感染后重型肝炎、肝硬化的发生率和病死率、及发生出血、腹水、并发症和ALT反复增高及增高幅度均较HDV阴性者高（Ｐ＜0.01或Ｐ＜0.05），重度慢性肝炎和重型肝炎患者的生物化学指标异常也较对照组明显（Ｐ＜0.01）。血清HBeAg检出率降低（Ｐ＜0.01）。急性肝炎、重型肝炎和肝硬化HDAg（+）、HBeAg（-）表达高于HDAg。HBeAg均阳性者（Ｐ＜0.01或Ｐ＜0.05）。结论 HDV感染后重度慢性肝炎、重型肝炎和肝硬化的发生率高，预后差；HDV感染可抑制HBV复制或HBeAg表达；HDV的直接细胞毒性作用在急性肝炎中可能起主要致病作用，在合并有HDV感染的乙型肝炎患者病情加重、病死率增高和慢性化过程中，HDV可能起主要促进作用。
作者：顾小红；李奇芬；王宇明 刊期： 2001年第01期
我们对32例临床确诊肝癌并腹水的标本进行K-ras基因外显子1、2和p53基因外显子5、6、7、8测序分析。1. 材料与方法：(1)标本：32例腹水患者均经确诊为肝癌，男19例，年龄31～68岁，女13例，年龄33～59岁。非癌性腹水27例，男16例，年龄23～67岁，女11例，年龄27～65岁。两组患者均无癌家族史及长期汹酒史。(2)材料：310型测序仪、2400型PCR仪由美国PE公司产，引物由上海生工生物工程公司合成，测序试剂盒、序列胶等由美国PE公司产。(3)方法：引物序列：5′GTACTGGTGGAGT ATTTGATAGTG3′，5′AAGAATGGT CCTGCACCAGTAATA3′，5′AGGTG CACTGTAATAATCCAGACTGTG3′，5′GCACTATAATTACTCCTTAATGT CAGC3′，5′GCAGTTCCTCTTCCTGCA GTACTC3′，5′AACCAGACCTCAGGC GGCTCATAG3′，5′TGTTGTCTCCT AGGTTGGCTCTGACTA3′，5′GTCC TGCTTGCTTACCTCGCTTAGTGC3′。腹穿留新鲜腹水10ml，离心收集细胞沉淀，用蛋白酶K消化，苯酚－氯仿抽提法提取基因组DNA，取基因组1μg的DNA分别扩增K-ras外显子1、2和p53基因外显子5、6、7、8，用双链产物为模板直接测序。2. 结果：32例肝癌腹水中见K-ras基因突变2例，p53基因突变9例，阳性率分别为6.25％和28.13％，其中有2例先在腹水中发现p53基因突变，后发现肝癌，见表1。
作者：顾其华；叶爱慧；李玲芝；杨志毅；舒畅 刊期： 2001年第01期
为了探讨TTV是否能在新西兰长耳兔（以下简称兔）复制,我们进行了TTV对兔传代感染试验，证明它能感染也能传代。一、材料与方法１. 实验动物：由湖南省卫生防疫站提供成年新西兰兔。2. 第一代感染实验：收集六份非甲至非庚型肝炎TTV阳性血清，每只兔由耳静脉注射阳性血清１ml，定期采血（感染前采血，感染后每周采血一次），分离血清，当天检测生化指标，血清标本于－20℃保存备用。第二、第三代感染试验，用四只兔进行接种，其中２只兔感染成功继续接种，方法与第一代实验相同。将第二代感染成功兔血清1ml接种于第三代兔体内。3. 感染指标及测定方法：(1)标本中TTV DNA的检测，用nest－PCR方法检测血清中TTV DNA。(2)生物化学指标检测：对感染兔进行系列采样，定期测定ALT和直接、间接胆红素等各项指标的变化。(3)感染兔体内TTV DNA基因的克隆及序列测定：从感染TTV的血清标本中克隆TTV的部分基因进行序列测定，操作按常规进行,对测定序列采用Golbenkey Clustail及Blast程序软件进行序列比较。
作者：王长奇；陈燕萍；伍淑云；袁绍云；周宪明 刊期： 2001年第01期
生物型人工肝是目前治疗暴发性肝衰竭一种有效的方法[1]，它要求所用肝细胞能提供足够的肝功能支持，且当应用异种肝细胞时还应避免排斥反应的发生，肝细胞的微囊化可解决这些问题[2]。我们在以往研究的基础上[3]，制备微囊化乳猪肝细胞并进行体外培养。1. 材料与方法: (1)采用改进的Seglen原位胶原酶（Ⅳ型）灌注法，经门静脉、腹主动脉双重灌洗分离新生雄性乳猪肝细胞。(2)采用静电液滴法制备海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polyly sine-alginate，APA）微囊肝细胞。(3)取自同一供体猪相同数量（3.5×107)APA微囊肝细胞和游离肝细胞分别以Williams’E培养液（含胰岛素、表皮生长因子、胰高糖素等）于CO2培养箱（37℃，5% CO2）同期培养。(4)APA微囊乳猪肝细胞（1.4×108）置入自制灌流罐以Williams’E培养液100ml循环灌流24h，流速10ml/min（37℃，5%CO2）。(5)统计学处理采用Studen t’s t检验，方差分析，q检验。
作者：张金卷；李涛；杜智；舒桂明；付丽；宋继昌 刊期： 2001年第01期
中华肝脏病杂志
主管:中国科学技术协会
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