我们检测了慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者血清TNF-α水平,并同步观察了肝组织FasL的表达,现将结果报告如下。一、资料与方法 1. 病例来源:我院1999年3月~2000年3月经过肝穿刺活检确诊的28例慢乙肝患者。男23例,女5例。年龄18~56岁。慢性轻度8例,中度10例,重度10例。肝组织病理学改变符合1995年病毒性肝炎修订的诊断标准。
作者:郑瑞丹;张闽峰;徐忠玉;林福地;饶日春;张阳根 刊期: 2001年第02期
目的通过离散因子/肝细胞生长因子(scatter factor/Hepatocyte growth factor,SF/HGF)cDNA转染肝癌SMMC7721细胞来探讨SF/HGF对肝癌生长和转移的影响。方法用脂质体法进行基因转染,以ELISA和western blot检测SF/HGF及其受体c-met的表达,通过生长曲线、划痕实验比较转染前后细胞的增长状况及细胞的运动能力。以转染前后细胞分别接种裸鼠,观察移植瘤的生长及转移情况。结果转染后细胞表达SF/HGF的量为694pg/ml,其受体c-met量未见明显变化;转染后细胞增殖明显加快,运动能力增强,并伴明显的形态学变化。初步动物实验显示转染后细胞生长较快,瘤组织中有瘤栓形成,并在肺内发现转移灶。结论 SF/HGF在肝癌细胞中的高表达能促进肝癌细胞生长、侵袭及转移。
作者:谢倩;刘康达;胡美玉;吴祥甫;周康 刊期: 2001年第02期
对慢性肝炎肝纤维化及早期肝硬化之中医治疗多以活血化瘀为主,兼以益气补虚、养血柔肝或滋补肝肾。国内研究发现抗肝纤维化有效的单味中药有丹参、黄芪、柴胡、桃仁、当归、冬虫夏草、齐墩果酸、葫芦素B等;而各家根据中医理论、临床经验或动物实验研究结果所拟定的中药复方,亦取较好的效果,并运用现代细胞及分子生物学手段对其抗纤维化机理进行了较为深的研究。比较有代表性抗肝纤维化中药复方有861合剂、319方、鳖甲软肝片等。
作者:贾继东;王宝恩 刊期: 2001年第02期
业已肯定肝纤维化及早期肝硬化尚有逆转的可能。通过抗肝纤维化治疗可使肝纤维化程度明显减轻,早期肝硬化者肝脏假小叶消失。 1. 抗肝纤维化治疗的某些新的认识:(1)肝纤维化的治疗与抗肝纤维化治疗两者含义不同,前者即为慢性肝病的治疗,目的是祛除原发病因和减轻、中止、逆转肝脏的病理改变(包括抗炎、抗肝损伤与抗肝纤维化);后者指用抗肝纤维化药物进行治疗。
作者:蔡卫民 刊期: 2001年第02期
目的探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC) 热休克蛋白70(heat shock proteins 70,HSP70)的表达及其与自发性癌细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法和原位末端转移酶标记法(TUNEL)检测68例HCC手术标本中HSP70表达和细胞凋亡指数,以癌旁肝组织作为对照。结果 HCC和癌旁组织中HSP70阳性率分别为71%和28%,过表达分别为53%和21%,两组之间差异有非常显著意义(P<0.01),HSP70阳性率和凋亡指数有正相关关系(r=0.8765,P<0.05),两者都随HCC 组织学分级增高而增加。结论 HCC组织中存在HSP70过表达和自发性癌细胞凋亡,两者正相关性机理尚不明了,可能是HCC生物学恶性行为的标志。
作者:尹燕明;秦庆亮;赵晶;张长丽;张伟;于建国 刊期: 2001年第02期
一氧化氮(NO)在门静脉高压以及肝病的损伤过程的作用受到重视。本实验目的在于了解肝硬化消退中肝组织NO水平的变化。 1. 材料与方法:大鼠肝硬化模型以CCl4加乙醇法制备,共12周。第12、16、19、22、25周各取5~6只行病理检查及NO测定。肝组织切片按照Knodell和国际肝病协会推荐的慢性肝炎诊断标准、王宝恩等的肝纤维化分级标准分别进行组织炎症活动性和纤维化评分。肝组织NO测定应用南京建成公司试剂盒。NO与组织学改变的相互关系应用相关分析,相关系数的显著性差异应用t检验。
作者:张弛;王吉耀;贺伯明 刊期: 2001年第02期
我们利用Vero、 HepG2两种细胞系同时来验证人乳铁蛋白的抗HCV作用并初步确定蛋白的作用对象—细胞还是病毒,以此为该蛋白用于抗HCV临床治疗提供理论依据。一、材料与方法 1.细胞和血清:HepG2细胞系(Dr. Schinazi馈赠),Vero细胞系(由湖北医科大学病毒研究所保存);细胞培养方法见文献[1]。阳性血清:7份HCV患者血清,混合后作为病毒接种物(测得HCV阳性混合血清的+RNA阳性,-RNA阴性;HCV RNA 拷贝数为5×104;HAV和HBV阴性)由湖北医科大学附属第一和第二医院传染科提供;阴性血清:2份(HCV和抗-HCV均为阴性)来自一健康体检者。
作者:洪俊;林雨霖;洪流 刊期: 2001年第02期
我们应用一种活体荧光标记对E-cadherin表达被E-cadherin单抗阻断后肝癌7721细胞粘附力的变化进行研究。对深入研究肿瘤细胞的侵袭转移机制和防治具有重大意义。一、材料与方法 1. 细胞系:SMMC-7721细胞引自上海细胞生物学研究所。
作者:贺建宇;周信达;刘银坤;汤钊猷;姚 刊期: 2001年第02期
目的研究中药复方861对肝星状细胞NF-κB活性的影响。方法将5mg/ml的复方861加入体外培养的大鼠肝星状细胞系作用48h。NF-κB活性的检测采用凝胶电泳移动抑制法,细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA法,细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测。结果复方861作用使体外培养的肝星状细胞NF-κB结合活性比未加药的空白对照组显著减弱,细胞培养液中的IL-6和sICAM水平减低(P<0.05),星状细胞凋亡增加(P<0.01)。结论复方861显著抑制体外培养的肝星状细胞NF-κB活性可能为治疗肝纤维化中的重要机理之一。
作者:尤红;王宝恩;马雪梅 刊期: 2001年第02期
目的研究醛固酮合成酶基因-CYP11B2在大鼠肝组织中的表达与肝纤维化的关系及安体舒通抗肝纤维化的作用。方法取雄性Wistar大鼠120只,随机分为3组,每组40只。模型组:CCl4油0.25ml/100mg皮下注射,3次/周;安体舒通组:CCl4油注射的同时予以安体舒通20mg·kg-1·d-1灌胃,1次/日;对照组:橄榄油皮下注射。光镜下动态观察组织学改变,图像分析系统测量胶原面积。RT-PCR和原位杂交检测CYP11B2的表达。结果原位杂交及RT-PCR显示CYP11B2表达定位于肝星状细胞胞浆,在纤维化形成时表达增强。第4周、6周,安体舒通组肝纤维化分级、胶原面积低于模型组(P<0.05)。第8周,安体舒通组与模型组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论 CYP11B2在纤维化肝脏的肝星状细胞中表达增强。安体舒通对早中期肝纤维化具有一定的治疗作用。
作者:李旭;杨希山;孟莹;吴平生;李素梅;赖文岩;张虹 刊期: 2001年第02期
一、资料与方法 1. 标本:13例正常肝组织来自尸检标本;15例HCC组织和15例HCC癌旁组织取自手术患者。 2. 方法:N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GlcNAcT-Ⅴ)、N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ(GlcNAcT-Ⅲ)、(1,6核心岩藻糖转移酶(α1-6 FucT)和β-肌动蛋白(β-actin)四种扩增基因引物由Primer3引物设计程序设计。以β-actin 为内标,采用RT-PCR法检测以上三种基因mRNA的表达情况。PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳后用ImageMaster VDS图像分析系统处理并计算基因表达值。基因表达值(%)=[各基因条带面积×(条带辉度-背景辉度)]÷[β-actin基因条带面积×(条带辉度-背景辉度)]×100。
作者:陈国千;关明;苏兵;吕元 刊期: 2001年第02期
目的为激发机体对HBsAg的CTL反应,寻求对慢性乙型肝炎更有效的治疗方法。方法构建了共表达HBsAg及B7-2抗原的E1区插入重组腺病毒载体,用脂质体法转染293细胞,经空斑筛选表达目的抗原的重组腺病毒,用ELISA法及Western blotting法分别检测HBsAg及B7-2抗原表达。在293细胞中扩增,再纯化、浓缩后,体内感染C57小鼠,检测体液免疫反应和细胞免疫反应。结果重组腺病毒在体外培养的293细胞及HepG2细胞中高效表达HBsAg及B7-2抗原。感染小鼠体液免疫较弱,但可通过注射乙型肝炎疫苗而加强;重组腺病毒载体能诱导强而有效的细胞免疫反应;未观察到明显毒副作用。结论 HBsAg及B7-2抗原重组腺病毒载体体外感染293、HepG2细胞后高效表达目的抗原,感染免疫后诱导有效的细胞免疫反应。初步结果显示腺病毒载体是一种高效、安全的载体系统。
作者:周智;张定凤;任红 刊期: 2001年第02期
食管胃底静脉曲张破裂出血是门静脉高压主要的并发症,常引起出血性休克或诱发肝性脑病,如不及时采取有效措施,可导致患者死亡。食管胃底静脉曲张出血的内科治疗程序如下。 1. 基础治疗:补充血容量,纠正酸碱失衡。(1)大出血病人应立即进行的是恢复血容量治疗而不是急诊内镜检查,进行快速补液,常用的是平衡液或糖盐水。
作者:尚佳主任 刊期: 2001年第02期
目的探讨经输血传播病毒(TTV)在肝及肝外组织的定位、分布及其意义。方法采用PCR及原位杂交方法,对13例非甲-非庚型病毒性肝炎患者的尸解肝、胰、肾、脾、睾丸和心脏石蜡包埋组织中的TTV DNA进行了检测。结果 5例肝组织、3例肾脏及胰腺、脾脏组织各2例中检出了TTV核酸杂交信号,2例睾丸及心肌组织各检出1例。阳性信号主要定位于肝及肝外组织实质细胞的核内。这些肝外组织未见明显的病理损伤改变。PCR的检出率与原位杂交基本一致。结论 TT病毒能感染肝及肝外组织,肝外组织中的感染可能与TT病毒的再度感染及在不同人群中的较高感染率有关。
作者:郎振为;金荣华;阎惠平;罗朝霞;黄德庄;王勇;周育森 刊期: 2001年第02期
噬菌体单链抗体(ScFv)弥补了传统McAb制备繁琐、抗原性强、穿透力弱等不足,为HCC临床和基础研究提供新的手段。我们用基因工程技术和噬菌体表面呈现技术构建和筛选特异性抗HCC噬菌体ScFv库。 1. 材料与方法:(1)抗HCC噬菌体ScFv库的构建:应用HCC细胞常规免疫BALB/C小鼠,从其脾脏提取tRNA并纯化mRNA,逆转录合成cDNA,PCR扩增抗体轻链和重链可变区,应用linker-(Gly4Ser)3装配ScFv基因,在其5′端和3′端分别引入内切酶SfiⅠ和NotⅠ酶切位点,连接到噬菌体载体pCANTAB 5E,转化大肠杆菌TG1细胞,铺SOBAG平板,记数菌落。
作者:毕向军;杨冬华;崔俊;范子荣 刊期: 2001年第02期
细针穿刺细胞学是早期诊断肝癌的有效方法之一。现将本院1999年32例肝脏穿刺涂片介绍如下。 1. 资料与方法:我院1999年间行细针穿刺而且有病理学诊断的病例32例。均经B超或CT定位,皮肤消毒,用9号带槽套管针对肝脏肿块进行穿刺,穿出物立即涂片,固定于甲醇溶液中,常规HE染色,显微镜观察。
作者:丁伟 刊期: 2001年第02期
肝纤维化是肝脏对各种原因所致肝损伤的修复反应,其形成与发展是肝病慢性化的重要成因。肝纤维化的治疗包括病因防治、抗肝纤维化及对症治疗三方面,但不少病例祛除原发病因后,主动性肝纤维化仍继续发展,故抗肝纤维化治疗成为控制慢性肝病进展不可缺少的环节。
作者:曾民德 刊期: 2001年第02期
目的观察内毒素肝损伤过程中库普弗细胞(KC)清道夫受体(SR)表达的动态变化,进而探讨内毒素肝损伤的机理。方法经尾静脉内注射不同剂量(1mg/kg、10mg/kg)大肠杆菌内毒素(LPS),复制内毒素肝损伤模型。采用免疫组织化学方法观察小鼠肝脏SR表达变化;酶联免疫吸附法(ELISA)测定肝组织TNFFα、IL-6的水平,光镜观察肝组织学变化。结果 (1)内毒素肝损伤过程中,KC表面SR表达呈进行性下调,且与内毒素呈明显的量效关系。(2)SR表达的平均光密度值(A值)与肝组织TNFα、IL-6及血清ALT、TBil呈显著的负相关。结论内毒素肝损伤过程中,随着SR表达下调,KC对内毒素的清除作用下降,内毒素对KC的激活作用则相应增强。KC SR表达变化与肝损伤密切相关。
作者:谢国旗;蒋建新;朱佩芳;王正国;邱俊 刊期: 2001年第02期
目的探讨bcl-2、bax及肝细胞凋亡在丁型肝炎发病机理中的作用。方法采用免疫组织化学单、双标记染色和TUNEL技术,检测77例丁型肝炎患者肝组织HDAg、bcl-2、bax及肝细胞凋亡表达,以67例乙型肝炎作对照。结果 bcl-2和bax均以肝细胞浆表达为主。HDAg以肝细胞核表达为主。HDAg和Bax与凋亡细胞表达及分布有相关性,三成分在各型肝炎中的表达强度差异有显著意义(P<0.05)。结论 HDAg、bax和肝细胞凋亡表达强度和阳性细胞分布均与肝组织炎症活动及病理损害程度相关,HDV感染可诱导肝细胞表达bax,增强肝细胞凋亡,这一机制在丁型肝炎发病机理中可能有一定重要作用。
作者:顾小红;李奇芬;王宇明 刊期: 2001年第02期
在众多的肥胖者中发生脂肪肝的患者尚不足20%[1],同样是肥胖,脂肪的代谢特点各有差别。 一、资料与方法 男79例,女47例。询问病史,排除有病毒性肝炎、酗酒、糖尿病、内分泌病史等。体重指数(BMI)= 体重(kg)/身高2(m)计算,BMI>25以上为肥胖。
作者:徐芸;王振豫;李继昌;尚佳 刊期: 2001年第02期