学术投稿

幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达

韩飞;杨致邦

关键词:幽门螺杆菌, hp1188基因, 表达
摘要:目的:重组表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)hp1188基因,为研究该基因所编码蛋白在H.pylori的黏附过程中的作用奠定基础.方法:以H.pylori标准株NCTC 11637基因组DNA为模板,PCR扩增hp1188基因片段,克隆至质粒pQE-30中获得重组质粒pQE30-hp1188,经DNA测序确认后将重组质粒转化大肠杆菌DH5 α,IPTG诱导表达.Ni2+-NTA树脂亲和层析纯化表达蛋白,SDS-PAGE检测表达,Western blot鉴定相应抗原表位.结果:扩增的hp1188基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%.SDS-PAGE显示表达产物相对分子量约为30 600 Dalton,与预期相符;大肠杆菌裂解液中表达产物接近可溶性蛋白总量的一半,但沉淀中仍能检测到表达蛋白.目标蛋白纯化后均一性接近90%,Western blot证实与多克隆抗体有良好结合能力.结论:成功克隆了hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达.
重庆医科大学学报杂志相关文献
  • 重组人胰岛素注射液(优思灵R)强化治疗2型糖尿病的疗效和安全性

    目的:以诺和灵R为对照,采用随机对照临床试验,说明预混人胰岛素注射液优思灵R治疗2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)的有效性和安全性.方法:共入选44例T2DM患者,按1∶1的比例随机分为优思灵R组(n=22)和诺和灵R组(n=22),治疗前和12周后分别测定受试者糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、餐后2 h血糖(2 hPG)水平,肝肾功能、体重和BMI值变化以及不良反应发生率.结果:治疗12周后,2组患者HbA1c、FPG和2 hPG水平均明显降低(P≤0.05),但两组间无显著性差异(P>0.05).治疗前后两组间血脂、肝肾功能、体重和BMI值无显著性差异(P>0.05).结论:与诺和灵R相比,优思灵R在治疗T2DM方面具有一定的有效性和安全性,并具有良好的耐受性.

    作者:曾俊;杨刚毅;徐秋;李伶;李钶;李生兵;陈文雯 刊期: 2010年第06期

  • 小鼠子宫蜕膜化对uNK细胞分布及成熟性的影响

    目的:探讨子宫自然杀伤(Uterine natural killer,uNK)细胞在小鼠妊娠早期子宫的分布及其调节.方法:用uNK细胞特异性的DBA-lectin抗体,对正常妊娠、延缓着床和人工诱导蜕膜化子宫壁内uNK细胞进行免疫组织化学标记.结果:在胚胎着床前,DBA-lectin染色主要分布于一些血管内皮细胞.至妊娠第5 d,胚胎着床以后,NK细胞分布于子宫的系膜侧基质中,主要是一些小的、未成熟的uNK细胞.至妊娠第7、8 d时,NK细胞分布于子宫的系膜侧蜕膜中,且逐渐变大和成熟,胞浆颗粒变得越来越致密.在人工诱导蜕膜化模型中,uNK细胞在子宫内膜的分布及成熟性与正常妊娠过程基本相似.结论:在妊娠早期,小鼠uNK细胞分布及成熟性主要受子宫内膜蜕膜化的影响.

    作者:张莉;徐宏;张保平;彭婧;况海斌 刊期: 2010年第06期

  • 缺氧对胃癌细胞侵袭转移和血管形成的影响

    目的:通过体外实验,研究缺氧对胃癌细胞侵袭转移及血管形成的影响,并初步探讨其作用机制.方法:运用3-(4,5二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-Dimethylthiazo1-2-y1)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT)法观察缺氧对人胃癌细胞SGC-7901粘附能力的影响;选用Boyden Chamber膜侵袭系统,观察缺氧对SGC-7901游走和侵袭的影响以及诱导内皮细胞形成新生血管的影响;免疫细胞化学观察缺氧对SGC-7901细胞转化生长因子-β1(Transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)表达的影响.结果:缺氧处理后,SGC-7901细胞粘贴率增加(P<0.05),游走穿膜细胞数(167±46、196±9)或侵袭穿膜细胞数(84±5、122±8)均明显高于对照组(114±7,60±4,P<0.05),诱导内皮细胞形成管腔数(203±6.21、356±5.11)及长度(387±5.93、439±8.43)均高于对照组(129±3.45,261±6.28,P<0.05),缺氧能增加TGF-β1的表达.结论:缺氧能促进胃癌侵袭转移及血管形成.其促进侵袭转移的机制可能与增加胃癌细胞异质粘附、游走、侵袭能力有关.

    作者:张俊文;王丕龙 刊期: 2010年第06期

  • 子宫内膜增生和子宫内膜癌危险因素探讨

    目的:性激素治疗的参与,使我们重新认识围绝经期功血和绝经后阴道出血的治疗,寻找相关的危险因子,有利于优化治疗方案,减少不必要的诊刮.方法:选择绝经妇女45例和未绝经妇女182例,发病年龄、体质指数(Body mass index,BMI)、病程、经量多、高血压、糖尿病、激素替代(Hormone replacement therapy,HRT)、乳腺癌术后用药、甲状腺疾病、多囊卵巢综合征(Polycystic ovary syndrome,POS)、子宫内膜厚度作为观察指标,通过Logistic回归,研究其与异常子宫内膜的相关性.结果:行Logistic单因素和多因素回归,当未绝经妇女子宫内膜厚度≥7mm,与子宫内膜增生和子宫内膜癌有相关性,P=0.02;绝经后内膜厚度≥9 mm时有相关性P<0.009,其余指标无明确的相关性.结论:绝经期妇女子宫内膜厚度<5 mm,可以不做诊刮;未绝经妇女子宫内膜厚度<7mm,完全不需要诊刮,内膜厚度<9mm,可以先选择正规激素治疗,治疗无效再诊刮.大约1/3患者免除刮宫痛苦.

    作者:龚祝萍;郝丽娟;刘玉明;刘畅 刊期: 2010年第06期

  • 不同浓度葡萄糖对成骨细胞凋亡的影响

    目的:观察不同浓度葡萄糖对体外培养的MC3T3-E1成骨细胞凋亡的影响.方法:不同浓度的葡萄糖、甘露醇分别刺激体外培养的MC3T3-E1成骨细胞1、3、7、12 d,用流式细胞术检测成骨细胞的凋亡.结果:甘露醇组MC3T3-E1成骨细胞凋亡较正常对照组有一定的增加,但无统计学差异(P>0.05);而葡萄糖呈浓度、时间依赖性诱导MC3T3-E1成骨细胞凋亡(P<0.05,P<0.01).结论:高糖状态下,MC3T3-E1成骨细胞凋亡显著增加.

    作者:冯正平;邓华聪;杜佳;陈丹燕;姜蓉 刊期: 2010年第06期

  • 高强度聚焦超声治疗兔乳腺移植瘤的病理变化

    目的:观察兔乳腺移植瘤经高强度聚焦超声(High intensity focused ultrasound,HIFU)治疗后的病理变化.方法:42只实验兔随机分成HIFU组(n=35)、对照组(n=7),HIFU组在B超监控下接受HIFU治疗,辐照后采集标本行病理检查.结果:HIFU辐照后靶区呈灰白色;即刻HE染色显示肿瘤细胞形态、排列与对照组无明显变化;电镜显示细胞膜、核膜断裂,细胞器破坏,胞质内出现无膜结构大小不等的空泡;琥珀酸脱氢酶(Succinate dehydrogenase,SDH)、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)阴性表达,提示肿瘤细胞已死亡;随着时间的延长坏死肿瘤组织逐渐液化吸收,纤维化.结论:HIFU能有效地灭活肿瘤细胞,为HIFU开展治疗乳腺癌的临床应用提供参考价值.

    作者:邹文兵;牛陵川;向理科;朱辉;王智彪 刊期: 2010年第06期

  • 骨髓间充质干细胞Hey1基因表达水平荧光定量RT-PCR方法的建立

    目的:建立骨髓间充质干细胞中Notch信号通路靶基因Hey1表达水平的荧光定量RT-PCR方法.方法:培养骨髓间充质干细胞(C2C12),提取总RNA,验证内参基因β-actin和目的基因Hey1的扩增效率,优化PCR条件,分析扩增曲线、融解曲线,凝胶电泳验证定量PCR产物.结果:内参基因β-actin和目的基因Hey1扩增效率一致(扩增曲线斜率差<0.1),提示可以使用比较Ct法对Hey1进行相对定量分析;扩增曲线、融解曲线及凝胶电泳结果提示PCR产物特异性好.结论:本研究所建立的用于Hey1基因表达分析的定量RT-PCR检测方法,准确可靠,可用于Bmp9和Notch信号通路的研究.

    作者:刘强;翁亚光;唐敏;罗敏 刊期: 2010年第06期

  • 黄芪对兔耳增生性瘢痕作用的实验研究

    目的:观察黄芪(Radix astragali)对日本大耳白兔增生性瘢痕的作用.方法:日本大耳白兔20只,建立兔耳增生性瘢痕动物模型.待创面上皮化(伤后21 d)将其随机分为5组,每组4只,实验组A、B、C分别局部注射不同浓度的黄芪注射液,对照组D局部注射生理盐水,对照组E为空白对照.分别在伤后32、43 d测量瘢痕厚度、硬度,并常规做HE染色,RT-PCR观察瘢痕组织中转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)mRNA水平的变化,免疫组化观察TGF-β1蛋白的表达.结果:治疗组中瘢痕厚度、硬度与药物浓度呈负相关(P<0.05),治疗组瘢痕组织中TGF-β1mRNA和其蛋白水平均明显减少,呈剂量效应关系;与生理盐水和空白对照组比较,差异有统计学意义,实验组在伤后32、43 d时两组间差异有统计学意义(P<0.05),对照组在伤后32、43 d时两组间差异无统计学意义(P>0.05).结论:黄芪注射液通过减少TGF-β1mRNA水平合成,减少TGF-β1蛋白的表达,从而抑制兔耳增生性瘢痕组织增生,显示黄芪注射液可能是治疗增生性瘢痕较好的药物.

    作者:张艳;邱林;吴清华;李明勇 刊期: 2010年第06期

  • 显微修复肌内神经对断裂股直肌恢复的作用

    目的:探讨显微修复肌内神经对损伤骨骼肌恢复的影响.方法:30只新西兰大白兔随机分为A、B 2组.2组均选取实验动物右侧股直肌作为实验侧,左侧股直肌作为空白对照侧.A组切断一侧股直肌后修复肌肉残端及肌内神经,B组仅修复肌肉.术后28周,测量股直肌湿重及力量,通过HE染色、Masson三色染色、肌球蛋白三磷酸腺苷酶(mATPase)染色及还原型辅酶Ⅰ四唑氮还原酶(NADH-TR)染色观测股直肌的形态学指标,通过t检验、ANOVA分析比较A、B2组自身及组间在各指标上的差异情况,从而判断显微修复肌内神经对损伤骨骼肌恢复的影响效果.结果:术后28周,与对照侧相比,肌内神经断伤组实验侧股直肌湿重、等长收缩力下降(P<0.05),Ⅰ型、Ⅱa型、Ⅱb型肌纤维横断面面积均恢复较差(P<0.05),肌肉萎缩、脂肪浸润及纤维变性明显,肌纤维再生状况欠佳,肌纤维直径变异较大.肌内神经修复组除Ⅱb型肌纤维恢复较差(P<0.05),其余各项指标基本恢复正常.结论:通过显微技术修复肌内神经,能够促进损伤骨骼肌的肌纤维再生,减轻肌肉萎缩及纤维变性,恢复肌纤维的正常形态及组成方式,促进损伤骨骼肌的恢复.

    作者:郑江;邓忠良;李开南 刊期: 2010年第06期

  • 反相高效液相色谱法分析肝癌血清蛋白质组

    目的:建立肝癌血清蛋白质组RP-HPLC技术筛选肝癌血清差异蛋白质.方法:8例肝癌和20例正常组血清样品采用Agilent高丰度蛋白质分离系统洗脱白蛋白等高丰度蛋白质后,样品采用色谱柱ZORBAX 300SB-C18(250mm×4.6mm,5 μm)分离,以A=0.1%三氟乙酸溶液,B=0.09%三氟乙酸乙腈为流动相梯度洗脱,在波长280 nm处检测.结果:在肝癌血清和健康志愿者血清的RP-HPLC图谱中存在一组疏水性较强的差异蛋白质.结论:建立的血清蛋白质RP-HPLC技术可以发现肝癌发生发展过程中血清蛋白表达谱质的变化,从而为肝癌的早期诊断及治疗打下基础.

    作者:罗婵;黄丽华;母昭德 刊期: 2010年第06期

  • 14256名无症状小儿泌尿系统超声筛查分析

    目的:分析本市市区及其周边地区无症状小儿泌尿系统患病特点及超声在筛查无症状小儿泌尿系统异常中的作用.方法:对2008年9月至2008年10月集中在我院进行泌尿系统超声筛查的14256名无症状小儿按年龄、性别、发病部位及病变程度分组进行统计分析.结果:共筛查泌尿系统异常患儿409例,总患病率为2.87%;其中明显异常284例,依次包括肾积水、肾结石、输尿管扩张、肾发育异常、肾囊性病变、重复肾等;以肾积水多,130例,占45.77%(130/284),男性患病率1.18%(92例),而女性为0.59%(38例),男性高于女性,差异有统计学意义(u=13.51,P<0.001).诉食用三聚氰胺污染奶粉致小儿泌尿系结石机率是未食用三聚氰胺污染奶粉的5.17倍,其总体相对危险度的95%CI为[3.28,8.14].结论:①超声筛查是发现无症状小儿泌尿系统异常的有效方法;对小儿开展泌尿系统超声筛查,有利于CAKUT、泌尿系结石等疾病的早期诊断及早期治疗,从而减少肾功能衰竭发生的机率;②无症状小儿肾积水男性患病率高于女性;③三聚氰胺是小儿泌尿系结石高发的一个危险因素.

    作者:阳海平;罗娟;李翠萃;李秋;张高福;王莉;徐珍娥;陶红;范忠祥 刊期: 2010年第06期

  • FAT方案治疗复发/难治急性白血病临床观察

    目的:研究氟达拉滨(Flu)、阿糖胞苷(Ara-C)及拓扑替康(Top)联合应用(FAT方案)治疗复发/难治急性白血病的疗效和不良反应.方法:Flu 25 mg/(m2·d)静脉滴注30min,d 1~5;Ara-C 1~2 g/(m2·d)静脉滴注4h,d 1~5;Top 1.2mg/(m2·d)静脉滴注2 h,d 1~3;在WBC<1×109个/L时用G-CSF 5μ g/(kg·d)直至WBC>4×109个/L共治疗9例复发,难治急性白血病.结果:9例患者6例获得完全缓解,1例部分缓解,2例无效;毒副反应包括骨髓抑制、发热、腹泻、轻度肝损伤等.结论:FAT方案治疗复发难治急性白血病有较好的疗效,且毒副作用可以耐受,可用于治疗其他化疗方案无效的复发,难治急性白血病,为患者赢得了进行造血干细胞移植的时机.

    作者:罗云;娄世锋;陈姝;陈林;周慷;邓建川 刊期: 2010年第06期

  • ATRA诱导下MSCs在损伤肺组织的招募及对MMP-9mRNA的影响

    目的:对全反式维甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)诱导骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)在损伤肺组织的招募情况同组织中基质金属蛋白酶9信使核糖核酸(Matrix metalloproteinase 9 mRNA,MMP-9 mRNA)的表达情况进行相关性的研究.方法:对实验动物随机给予MSCs及ATRA的方式,分别于2、3、4周后取肺组织切片,激光共聚焦显微镜下观察植入细胞的招募情况,RT-PCR法检测组织中MMP-9 mRNA的表达变化.结果:随着时间的延长,在各时间点:在实验组,可见较多经过标记后的MSCs分布于肺泡表面,与MSCs移植组,ATRA干预组及病例对照组相比较其积分光密度(Integral optical density,IOD)明显增强,差异有统计学意义(P<0.05).同时MMP-9 mRNA在病例对照组及ATRA干预组较高水平表达,而MSCs移植组中随着MSCs移植后时间延长,其表达水平随之降低,比较差异有统计学意义(P<0.05),而实验组MMP-9 mRNA在2、3、4周表达又较MSCs移植组低,两者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:ATRA对肺损伤组织中移植MSCs的招募作用的影响与组织中MMP-9 mRNA水平的降低有关.

    作者:杨威;温剑虎 刊期: 2010年第06期

  • 射频消融治疗肝血管瘤的疗效及预后分析

    目的:评价射频消融(Radiofrequency ablation,RFA)治疗肝脏血管瘤(Hepatic hemangiomas)的有效性和预后.方法:应用绵阳立德LDSF-120S射频仪和7电极射频针在超声引导下施行RFA治疗肝血管瘤16例20个病灶直径3.0~10.0 cm,其中直径>3.5 cm者予以分层多点或多次叠合消融.局部麻醉,配合全身镇痛处理.结果:16例均成功实施RFA.反应期2~5 d,包括局部疼痛不适、发热、ALT升高等,无胆漏、出血等并发症.16例随访1~3年,平均1年8个月,经1次治疗完全缓解(CR)15例,部分缓解(PR)1例,缓解率(CR+PR)100%;血管瘤直径平均缩小62.0%(50.1%~84.7%).结论:在掌握好适应证和操作技巧的前提下,RFA可发挥微创、安全、有效之优势,可作为治疗肝血管瘤的一种理想选择方法.

    作者:郑军;肖文波;王济明;李茂萍 刊期: 2010年第06期

  • 小鼠间充质祖细胞向神经元样细胞诱导分化的实验研究

    目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性.方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免疫学表型.取生长良好的第三代MPC,神经元原代培养上清液定向诱导,对诱导后的MPC,以神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)及神经丝蛋白(Neurofilament protein,NF)为对照,应用免疫细胞化学染色法,检测神经元标志物的表达.结果:成功培养原代MPC,传代后生长良好,流式细胞术检测CD29、CD44组阳性率与其同型对照组相比有明显差异(P<0.05).经神经元原代培养上清液诱导后,MPC可表达神经元特异性标志物NSE及NF.结论:从小鼠密质骨碎片分离培养出的间充质祖细胞获得率高,并可诱导分化为神经元样细胞.

    作者:杨里;万立华;粟永萍;彭毅;赵文勇 刊期: 2010年第06期

  • 移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布

    目的:观察不同数量大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)移植于溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠模型,探讨BMSC移植的适数量.方法:分离培养、DAPI荧光标记SD大鼠BMSCs.免疫复合法建立大鼠UC模型,分A、B、C组分别经尾静脉注射1×106、5×106、1×107个DAPI标记的BMSCs.移植后第7、14 d各处死5只大鼠,取结肠做恒冷切片,荧光显微镜下记数各组DAPI标记BMSCs在病灶部位和周围正常部位的细胞数.结果:移植7、14 d,各组均见BMSCs分布于结肠黏膜,溃疡部位阳性细胞数明显高于非溃疡部位阳性细胞数(P<0.05).移植7、14 d,B组损伤部位的荧光标记细胞多于A组(P<0.05),但B组与C组间差异不明显.结论:经静脉给UC大鼠移植BMSCs的适数量为5×106个.

    作者:陈晓云;徐艳华;姜蓉;汪维伟 刊期: 2010年第06期

  • SHOX基因异常及其表型特征的研究

    目的:研究矮小患者中矮小同源盒(Short stature homeobox containing,SHOX)基因的异常及与表型之间的关系.方法:采用微卫星分析及外显子测序对203例矮小症患者进行基因分析,并测量体征,收集其左前臂正位及左腕部正位X片,观察表型特征.结果:203例矮小患者中1例外显子突变,11例缺失;体征测量示SHOX异常引起某些体征异常,如短前臂和短下肢等.结论:本研究所选矮小患者的SHOX异常的频率是5.9%,发现基因异常与表型之间的具有某些相关性.

    作者:曹艳丽;朱岷;解芳;熊丰 刊期: 2010年第06期

  • 静磁场对口腔嗜酸乳杆菌生长影响体外实验

    目的:研究磁性附着体(Magnetic attachment)静磁场对口腔嗜酸乳杆菌生长的影响.方法:将口腔嗜酸乳杆菌分别分为12.5 mT,120 mT强度的静磁场加载组和未加载磁场对照组,厌氧培养20 h,从培养后第8 h开始,每2 h测定菌液吸光度值并活菌计数.结果:12.5 mT静磁场组嗜酸乳杆菌吸光度值及活菌数与对照组相比未见显著变化,(P>0.05),120mT静磁场组细菌的吸光度值及活菌数低于对照组(P<0.05).结论:12.5mT静磁场对口腔嗜酸乳杆菌生长无影响,120mT静磁场抑制细菌的生长,静磁场对其它口腔微生物生长影响尚需要深入研究.

    作者:夏熹;胡常红;王权 刊期: 2010年第06期

  • 血管内支架成形术治疗椎动脉颅外段狭窄的研究

    目的:评价椎动脉颅外段狭窄支架成形术的安全性、可行性和远期疗效.方法:40例椎动脉颅外段狭窄患者接受了支架成形手术治疗.结果:4例患者同时植入颈动脉支架,2例患者同时植入双侧椎动脉支架,40例患者共置入支架46枚,技术成功率100%.平均随访18个月,其中6例在半年后行DSA复查时有2例出现再狭窄,狭窄率分别为10%和15%.未见临床上后循环缺血发生.结论:支架成形术治疗动脉硬化性椎动脉狭窄有效可行,可作为脑血管病二级预防的选择.

    作者:马海;姚晓峰;赵雄飞;陈东明;陈康宁 刊期: 2010年第06期

  • 耐铬菌株CQMUXH-1耐受和还原Cr(Ⅵ)的特性研究

    目的:探讨菌株CQMUXH-1耐受和还原Cr(Ⅵ)的特性.方法:实验室模拟含Cr(Ⅵ)环境,于各种不同的条件下(反应时间、pH、温度、Cr(Ⅵ)浓度、其它污染物)培养细菌,测定细菌的生长量和(或)剩余Cr(Ⅵ)浓度以评价菌株耐受和还原Cr(Ⅵ)的能力.结果:菌株CQMUXH-1在30℃振荡培养5~20h为对数生长期;该菌株对Cr(Ⅵ)的耐受能力明显高于对照菌大肠杆菌DH5 α;该菌株在恒温振荡培养(37℃,200 r/min)下,对100 mg/L Cr(Ⅵ)的去除率为84 h 73%;弱碱环境对CQMUXH-1的生长有较大影响,37℃培养能加快细菌的生长,Hg2+、As3+能明显抑制、Cu2+能促进CQMUXH-1的生长.结论:菌株CQMUXH-1能耐受和还原较高浓度Cr(Ⅵ),可有效应用于废水中Cr(Ⅵ)污染的生物治理.

    作者:白群华;肖虹;贾燕;张永光 刊期: 2010年第06期

重庆医科大学学报杂志

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