学术投稿

CD105特异性shRNA表达质粒的构建和筛选

屈超义;唐罗生;曾杰西;陈百华;罗静;魏为;王文军

关键词:CD105, 质粒, 短发夹RNA, RNA干扰, 脉络膜新生血管
摘要:目的:使用Pgenesil-1质粒构建CD105RNA干扰重组体,在激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型中,筛选高效抑制CD105基因表达的shRNA.方法:根据CD105基因序列信息设计了3条shRNA以及1条非特异阴性序列,利用含U6启动子的表达质粒Pgenesil-1构建其RNA干扰重组体.采用视网膜下注射的方法使shRNA表达质粒转染大鼠视网膜和脉络膜,观察质粒所携带绿色荧光蛋白基因表达情况.根据不同的表达质粒对BN大鼠CNV模型2wk时CD105基因mRNA表达的抑制效果与空白对照及仅加转染试剂组比较分析,筛选有效的抑制序列.结果:转染后1d,在荧光显微镜下可见有明显的绿色荧光分布于实验眼视网膜全层,包括RPE层.2~3wk荧光强度比1wk增强,并持续表达4wk.空白对照眼无绿色荧光表达.构建了3条CD105shRNA和阳性对照Pgenesil-HK,基因测序证实目的序列成功插入质粒Pgenesil-1中.研究发现不同的质粒转染后对CD105在CNV高峰期的表达干预效果不同.Pgenesil-eng2和Pgenesil-eng3可明显抑制CNV模型在2wk时CD105mRNA的表达,抑制效率分别为(78±5)%(P<0.01);(52±3)%(P<0.01).转染Pgenesil-engl, Pgenesil-HK组及仅加转染试剂组与空白对照组相比CD105mRNA表达水平无明显变化.结论:在阳离子脂质体辅助下,Pgenesil-1质粒可以成功地将目的基因转染至大鼠视网膜各层次,且表达强度高,时间长于4wk.Pgenesil-eng2能明显抑制BN大鼠视网膜组织CD105mRNA的表达.
国际眼科杂志相关文献
  • 罕见梅毒性视神经周围炎1例

    目的:报告1例罕见的由梅毒感染引起的视神经周围炎,经皮质类固醇治疗后严重视力缺损得到显著改善.方法:病例报告.结果:一名66岁马来裔女性患者来我院就诊,一眼突然出现视力缺损,动眼时有疼痛感.视力无光感,右眼出现相对性瞳孔传入缺陷(relative afferent pupillary defect, RAPD).血清学和放射学检查证明为梅毒性视神经周围炎.肌肉注射苄星青霉素,静脉注射甲基醋酸泼尼松龙,然后长期口服类固醇,剂量逐渐降低.经过治疗,患者视力明显提高,恢复到6/18.随访4mo,未出现复发和类固醇相关的副作用.结论:本病诊断正确、治疗及时,能使患者视力得到显著改善.

    作者: 刊期: 2008年第06期

  • 自体角膜缘干细胞移植联合羊膜移植术治疗复发性翼状胬肉的临床研究

    目的:了解自体角膜缘上皮干细胞移植联合羊膜移植术治疗复发性翼状胬肉的临床疗效.方法:82例(91眼)复发性翼状胬肉,随机分成3组,角膜缘上皮干细胞联合纯甘油保存羊膜移植组(联合组)31例(34眼);羊膜移植组(羊膜组)26例(30眼);角膜缘上皮干细胞移植组(干细胞组)25例(27眼).进行定期随访观察疗效评价.结果:82例患者(91眼)术后随访时间4~31(平均15.30±8.31)mo.联合组31例(34眼),术后随访时间平均(15.43±8.31)mo,无1例复发;单纯羊膜组26例(30眼),术后随访时间平均(14.80±8.86)mo,有4眼复发,复发率为13%;单纯干细胞移植组25例(27眼),术后随访时间平均(15.58±8.06)mo,有3眼复发,复发率为11%.联合组与羊膜组及干细胞组的复发率(P<0.05)有显著性差异,而羊膜组与干细胞组的复发率无显著性差异.全部病例均无感染、排斥、复视和眼球运动障碍等并发症.结论:角膜缘上皮干细胞移植联合羊膜移植术是治疗复发性翼状胬肉有效手术方法.特别对翼状胬肉多次复发患者或伴有睑球粘连患者应作为首选的治疗方法.

    作者:夏又春;张明昌;吕文秀 刊期: 2008年第06期

  • 激光周边虹膜切除术治疗原发性房角关闭的短期临床效果观察

    目的:评价激光周边虹膜切除术(laser peripheral iridectomy, LPI)治疗原发性房角关闭(primary angle closure, PAC)患者的短期临床效果.方法:对诊断为PAC的患者33例49眼行LPI,观察术前、术后眼压及房角变化.结果:通过(9.9±4.8)mo的短期随访,LPI治疗前眼压(17.69±3.25)mmHg,治疗后终末眼压(16.33±3.42)mmHg,房角均有不同程度的加宽(100%);45眼眼压得到控制,有效率92%,4眼(8%)眼压控制不佳,其中1眼(2%)手术治疗,3眼(6%)予加降眼压药物治疗.结论:对于PAC患者,LPI治疗短期内对降低眼压、加宽房角有效.

    作者:柳力敏;王琳;胡悦东;万超;才娜;陈蕾 刊期: 2008年第06期

  • 球结膜瓣下植入生物羊膜在难治性青光眼滤过手术中的应用

    目的:观察难治性青光眼小梁切除术中不同位置植入生物羊膜对滤过泡及眼压的影响.方法:随机选择我院住院45例难治性青光眼患者,随机分为三组,A组为小梁切除术后球结膜下植入生物羊膜(15眼),B组为小梁切除术后巩膜瓣下植入生物羊膜(15眼).C组为单纯小梁切除术(15眼)术后观察眼压,滤过泡,以及术后并发症.结果:随访6mo,A组术后眼压平均波动为11.80~21.22mmHg,B组术后眼压平均波动为12.48~21.52mmHg,C组术后眼压平均波动为10.60~28.48mmHg,术后6mo条件成功率A、B、C三组分别为93.3%,86.7%,66.7%.结论:生物羊膜能有效提高难治性青光眼滤过手术的条件成功率.球结膜下植入羊膜操作简单,条件成功率高于其他两组,同时加固了球结膜,减少薄壁滤过泡的发生.

    作者:张娇;王雅文;陈宾;李若溪 刊期: 2008年第06期

  • 实验性糖尿病小鼠视网膜电图振荡电位的变化

    目的:探讨高血糖对糖尿病小鼠视网膜电图振荡电位(OP)的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠80只分为正常组10只和糖尿病组70只.糖尿病组用STZ造模,4wk后将符合条件的小鼠纳入观察组.检测4,8,12,16,20wk时小鼠OP的表现.结果:在STZ诱导造模后,糖尿病组小鼠与对照组相比体质量增长明显降低,差异有明显统计学意义(P<0.05);建模后糖尿病组血糖明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);建模后4wk起,糖尿病小鼠视网膜电图OP1, OP2, OPs振幅有下降趋势,峰潜时延长,与对照组小鼠相比差有统计学意义(P<0.01);20wk时糖尿病小鼠OP1,OP2,OPs振幅降低,峰潜时延迟,与4wk时比较差异有统计学意义(P<0.01).结论:高血糖可使糖尿病小鼠OP振幅下降,峰潜时延长;且随病程的延长其影响逐渐增强.

    作者:郑奇;袁志兰;戈应滨 刊期: 2008年第06期

  • Allegretto Wave Eye-Q准分子激光治疗仪眼球跟踪测试方法的改良

    介绍一种改良的Allegretto Wave Eye-Q准分子激光治疗仪眼球跟踪测试方法.它材料易得,结果判断清晰明确,操作简单,节约眼球跟踪测试片,有效地提高了测试的效率,降低了成本.

    作者:孙涛;植玉婷;胡碧兰;高松;班梅 刊期: 2008年第06期

  • 青光眼小梁切除术后浅前房的原因及治疗

    目的:探讨青光眼小梁切除术后前房形成迟缓的原因及处理方法,掌握其临床规律.方法:青光眼小梁切除术112例124眼.术中在显微镜下做以穹隆为基底结膜瓣,做约4mm×5mm长方形1/2厚板层巩膜瓣.前房穿刺缓慢放出房水,切除小梁组织约1mm×3mm,剪除根部虹膜,缝合结膜瓣.庆大霉素2万U+地塞米松2mg结膜下注射.结果:术后浅前房共40眼(34例);其中Ⅰ度34眼,Ⅱ度5眼,Ⅲ度1眼.发生率为32.3%.引流过畅22眼,脉络膜脱离12眼,结膜瓣渗漏3眼,房水生成不足2眼,恶性青光眼1眼.结论:(1)青光眼滤过手术后,多数7d内自然形成前房,若未形成,对于Ⅰ度、Ⅱ度浅前房先行保守治疗,减轻炎症的同时,前房多可自行恢复.对于Ⅲ度浅前房,先行保守治疗,无效后行手术治疗.(2)术后浅前房的常见原因为引流过畅所至.

    作者:姚琳 刊期: 2008年第06期

  • Bevacizumab (Avastin)抑制角膜新生血管的应用新进展

    诱发角膜新生血管的因素涉及各种生长因子.研究表明:在角膜新生血管中广泛存在的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)起着主要作用.一种可行的治疗角膜新生血管策略是:通过特异性的中和抗VEGF抗体竞争性的结合VEGF,从而抑制VEGF活性.近年来,利用抗VEGF治疗策略,抑制脉络膜新生血管获得了很好的效果.靶向VEGF治疗药物的疗效和安全性已经证明.因此我们设想,局部应用新的抗VEGF药物,如贝伐单抗、兰尼单抗等可以有效地抑制角膜新生血管,恢复角膜透明和视力.

    作者:荆国利;高晓唯;肖云 刊期: 2008年第06期

  • 转化生长因子-β受体Ⅰ/Ⅱ在大鼠视网膜中基因表达的定量检测

    目的:定量检测转化生长因子-(受体Ⅰ(transforming growth factor-(typeⅠ receptor, TβRⅠ)和受体Ⅱ(TβRⅡ)基因在大鼠视网膜中的表达水平,探讨TGF-(不同受体在视网膜中表达的差异及其意义.方法:分离取出大鼠视网膜,抽提RNA并逆转录,实时荧光定量PCR技术分析视网膜中TβRⅠ和TβRⅡ的mRNA含量.结果:TBRⅠ相对于18S的mRNA含量是0.00034±0.00013,TβRⅡ相对于18S的mRNA含量是0.0001±0.00005,差异有统计学意义(P<0.01).在大鼠视网膜中以TβRⅠ表达为主,TβRⅠ和TβRⅡ比值的平均值为3.9±1.7.结论:实时荧光定量PCR技术能够针对性地精确分析极少量组织细胞的基因表达,TβRⅠ的mRNA在视网膜中的表达明显高于TβRⅡ,提示这可能是与TβRⅠ及TβRⅡ本身结构特点和在TGF-β信号转导过程中的不同作用有关.当TβRⅠ/TβRⅡ比例改变时,可影响细胞对TGF-β的应答反应,可能是增殖性视网膜病变的发生机制之一.

    作者:沈炜;柳林 刊期: 2008年第06期

  • CD105特异性shRNA表达质粒的构建和筛选

    目的:使用Pgenesil-1质粒构建CD105RNA干扰重组体,在激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管模型中,筛选高效抑制CD105基因表达的shRNA.方法:根据CD105基因序列信息设计了3条shRNA以及1条非特异阴性序列,利用含U6启动子的表达质粒Pgenesil-1构建其RNA干扰重组体.采用视网膜下注射的方法使shRNA表达质粒转染大鼠视网膜和脉络膜,观察质粒所携带绿色荧光蛋白基因表达情况.根据不同的表达质粒对BN大鼠CNV模型2wk时CD105基因mRNA表达的抑制效果与空白对照及仅加转染试剂组比较分析,筛选有效的抑制序列.结果:转染后1d,在荧光显微镜下可见有明显的绿色荧光分布于实验眼视网膜全层,包括RPE层.2~3wk荧光强度比1wk增强,并持续表达4wk.空白对照眼无绿色荧光表达.构建了3条CD105shRNA和阳性对照Pgenesil-HK,基因测序证实目的序列成功插入质粒Pgenesil-1中.研究发现不同的质粒转染后对CD105在CNV高峰期的表达干预效果不同.Pgenesil-eng2和Pgenesil-eng3可明显抑制CNV模型在2wk时CD105mRNA的表达,抑制效率分别为(78±5)%(P<0.01);(52±3)%(P<0.01).转染Pgenesil-engl, Pgenesil-HK组及仅加转染试剂组与空白对照组相比CD105mRNA表达水平无明显变化.结论:在阳离子脂质体辅助下,Pgenesil-1质粒可以成功地将目的基因转染至大鼠视网膜各层次,且表达强度高,时间长于4wk.Pgenesil-eng2能明显抑制BN大鼠视网膜组织CD105mRNA的表达.

    作者:屈超义;唐罗生;曾杰西;陈百华;罗静;魏为;王文军 刊期: 2008年第06期

  • 结膜吸吮线虫病1例

    1 病例报告男,60岁.右眼痒、不适、异物感10d.曾在外院诊断为结膜炎、干眼症,给予消炎、人工泪液眼药水治疗无效,来我院就诊.眼科检查:患者视力1.0,裂隙灯检查右眼睑结膜充血,轻度水肿,球结膜轻度充血水肿,角膜透明,KP(-).

    作者:周妍丽 刊期: 2008年第06期

  • IOL-Master的临床应用观察

    目的:比较Zeiss IOL-Master与传统超声生物测量在人工晶状体测量中的准确性,并探讨不同测量方法的临床应用特点.方法:分析2007-11/2008-01在我院行白内障摘除及人工晶状体植入术的患者91例147眼,根据眼轴长度(L)分别分为五组(L≤22mm,22mm28mm),术前分别用Zeiss IOL-Master,超声生物测量仪及角膜曲率计测量眼轴长度,角膜曲率和计算人工晶状体度数,并将结果进行比较.结果:用Zeiss IOL-Master和超声生物测量仪测得的眼轴长度:L≤22mm组分别为21.69±0.298mm和21.97±0.623mm(P>0.05);22mm0.05);24.5mm0.05):26mm0.05);L>28mm组分别为31.59±1.852mm和31.22±1.718mm(P>0.05).两种方法测得的眼轴长度在各组间无显著差异性.用IOL-Master和超声生物测量仪测得的各组的人工晶状体度数:L≤22mm组分别为23.73±1.29D和22.94±1.44D(P>0.05);22mm0.05);24.5mm0.05);L>28mm组分别为-4.28±4.52D和-3.53±4.76D(P>0.05),显示各组间无显著性差异.IOL Master和角膜曲率计检测到的角膜曲率分别为43.65±1.62和43.70±1.71,两者比较无显著差异(P>0.05).结论:IOL-Master用于人工晶状体度数的测量具有非接触、精确性高、操作简单、安全可靠和患者容易接受的特点.而传统的超声生物测量要接触患者角膜,对操作者的手法及患者的配合程度要求较高,但在屈光间质混浊明显的患眼测量中则明显较IOL-Master更为准确,因此临床上应根据个体情况选择不同的测量方法及计算公式以获得准确地人工晶状体度数.

    作者:钟勇;宋德禄;金玉梅;许鹏 刊期: 2008年第06期

  • 增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体手术并发症分析

    目的:探讨糖尿病视网膜病变玻璃体手术并发症及防治.方法:82眼增殖性糖尿病视网膜病变行玻璃体手术治疗,并随访3~24mo,对其术中和术后并发症进行回顾性分析.结果:术后视力较术前不同程度的提高者62眼(72%),但部分患眼出现不同情况的并发症,包括高眼压、玻璃体出血、并发性白内障、医源性视网膜损伤等.结论:糖尿病视网膜病变进行玻璃体手术能挽救大多数眼球并恢复一定的有用视力,但对手术并发症应重视并积极预防治疗,以提高玻璃体手术的效果.

    作者:王冰;陈平;翁景宁 刊期: 2008年第06期

  • 用于白内障超声乳化训练的活体白内障动物模型

    目的:制备用于白内障超声乳化训练的活体白内障动物模型.方法:狗在全身麻醉下用26号带有斜面的针刺破左眼的晶状体前囊,制备自内障模型,形成白内障后,行超声乳化手术.结果:眼部检查显示晶状体后部皮质混浊开始于穿刺术后5~7d,并于术后75d白内障全部形成,在所有的白内障形成的眼上行超声乳化手术,并植入人工晶状体,所有的狗均恢复了视力.结论:考虑到无经验的眼科医生在行白内障超声乳化手术的初始阶段引起的巨大损失,我们认为这个活的动物模型明显优于目前用于训练超声乳化手术的尸体眼.

    作者: 刊期: 2008年第06期

  • 视盘边缘出血原因分析

    目的:探讨视盘边缘出血的临床特征和发病的相关因素.方法:对眼底检查时发现的98例视盘边缘出血者进行视力、视野、眼压、三面镜、荧光素眼底血管造影(FFA)及血压检查.部分病例迸行了头颅CT扫描和实验室检查.将检查结果综合分析确定视盘边缘出血的相关疾病.结果:除1例未查出确切的原因外,其余97例中与盘缘出血相关的疾病有14种.结论:盘缘出血是一种常见的临床体征.盘缘出血不但与眼部本身的一些病变如:视盘水肿、AION、视盘的非特异性炎症、眼外伤等相关;而且与某些先天性视盘病变以及一些全身疾病有关;还应特别注意是否有青光眼的存在.临床上发现有盘缘出血者应该进行详细全面地检查,尽可能找出相关的疾病.

    作者:金庆新 刊期: 2008年第06期

  • LASIK术后5a角膜瓣移位1例

    1 病例报告女,25岁,5a前行双眼LASIK手术,于2007-05-17T19,下蹲与自家小狗玩耍过程中,不慎被突然跃起的狗头部撞及右眼,当时右眼视物模糊,异物感明显.

    作者:王在忠;柳昕;陈丽玲;裴文艳;程颖 刊期: 2008年第06期

  • FLK-1单克隆抗体抑制实验性视网膜血管新生的实验研究

    目的:观察血管内皮生长因子受体2(FLK-1)单克隆抗体(anti-FLK1 mAb)对视网膜新生血管形成(retinal neovas-cularization, RNV)的抑制作用,同时分析其对缺血性视网膜病变的影响.方法:将生后第7d的C57BL/6幼鼠置于高氧箱中饲养5d后取回至正常空气环境诱导RNV模型,生后第12,13,15d利用腹腔注射的方法给与实验组小鼠anti-FLK1 mAb 500μg(对照组给与等量的大鼠免疫球蛋白),生后第17d处死动物行视网膜铺片和免疫组织化学染色检查,测量视网膜血管无灌注区的面积,计数RNV内皮细胞核数目,定量分析anti-FLK1 mAb对于缺血性视网膜病变以及实验性RNV形成的影响.结果:对照组和实验组均成功建立了RNV模型,实验组RNV的形成明显受到抑制(P<0.01),同时anti-FLK1mAb也加重了RNV模型的缺血过程(P<0.05).结论:拮抗FLK-1可以有效抑制RNV的形成,提示拮抗FLK-1可能成为治疗RNV有效的生物学方法之一,其可能加重缺血性视网膜病变的潜在副作用需进一步探讨.

    作者:张含;刘哲丽 刊期: 2008年第06期

  • 深低温保存羊膜治疗严重睑球粘连的临床观察

    目的:探讨深低温保存羊膜移植治疗严重睑球粘连的临床价值.方法:对43例46眼有严重睑球粘连及假性胬肉的患者,进行睑球粘连松解后,应用羊膜移植重建球结膜和角膜表面,观察其临床效果.结果:在随访期内(平均13±3.5mo),24例患者疗效为优,眼睑球粘连均得到明显改善,眼表基本恢复正常;15例疗效为良,睑球粘连部分复发,但较术前有所改善;7例因上下睑球全粘连、结膜囊闭锁愈后效果较差.结论:对于严重的睑球粘连,深低温保存羊膜移植重建眼表是较理想的治疗方法.

    作者:何庆华;王大江;尹东芳;刘莉 刊期: 2008年第06期

  • 屈光参差与双眼视觉相关性的临床观察

    目的:观察远、近视性屈光参差对患者双眼视功能的影响.方法:采用颜少明等的<立体视觉检查图>和同视机,对矫正视力≥0.9的近视和远视性屈光参差患者174例,分别测定其近立体视和同视机三级视功能.结果:(1)远、近视性屈光参差患者视力矫正后双眼视功能明显好于裸眼,两者矫正前后比较差异均有统计学意义(P均<0.05).(2)矫正后近视性屈光参差近立体视及融合功能正常者的例数明显多于远视性屈光参差者(P均=0.000);远视性屈光参差远立体视功能正常者的例数明显多于近视性屈光参差者(P=0.000).(3)矫正后近视性屈光参差者的近立体视锐度与屈光参差差值大小相关(P=0.000),屈光参差差值越大,近立体视功能越差;远视性屈光参差者的近立体视锐度与屈光参差差值大小相关性不明显(P=0.159).(4)远、近视性屈光参差患者矫正后,近立体视正常患者的构成比小于正常范围为17%及44%.结论:(1)远、近视性屈光参差对双眼视功能的影响不相同,远视性屈光参差对双眼视功能的影响大于近视性屈光参差.(2)无论近视或远视性屈光参差,其对双眼视觉的损害是明显的.

    作者:孙省利;卢炜;李林;林楠 刊期: 2008年第06期

  • 基层医院扶贫白内障复明手术方式与效果分析

    目的:比较、分析基层医院扶贫白内障复明手术方式及效果.方法:比较随机选取的2006/2007在基层医院采取现代囊外白内障摘除(extracapsular cataract extraction, ECCE)、大切口(隧道)无缝线白内障(囊外)摘除(sutureless large incision manual cataract extraction, SLIMCE),并人工晶状体(intraocular lens, IOL)植入手术各200例.统计术后视力,术中、术后并发症,手术耗品及费用.结果:术后视力在0.5以上的:ECCE+IOL手术组115例(57.5%),SLIMCE+IOL手术组139例(69.5%);术中后囊膜破裂:ECCE+IOL手术组7例(3.5%),SLIMCE+IOL手术组6例(3.0%);角膜水肿:ECCE+IOL手术组13例(6.5%),SLIMCE+IOL手术组10例(5.0%).平均每例手术耗品及费用SLIMCE+IOL手术组稍高.结论:在基层医院施行扶贫白内障复明手术,手术要安全、效果要好,手术费用要低,ECCE+IOL植入手术目前还是主要的手术方式.SLIMCE+IOL植入手术采用隧道无缝线切口,操作步骤减少、时间缩短、能够减少术后散光,获得更好的效果,值得提倡.但手术耗费稍增加,对手术操作者的手术技巧要求较高.无论是哪一种手术方式,复明是永恒的主题,需要培养大批有爱心的技术优秀的眼科专业人员,才能使数以百万计的白内障盲患者重见光明.

    作者:许道成;罗燕珊;庄曼贤;郭伟如 刊期: 2008年第06期

国际眼科杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:中华医学会西安分会