按金葡菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物,以金葡菌基因组DNA为模板,扩增出基因norA中约1155bp的cDNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到感受态大肠埃希菌JM109中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致.从阳性克隆中提取质粒,经Nde I和Xho I酶切,回收1155bp的目的片段,定向克隆到pET-28a(+)表达载体中,转化至感受态大肠埃希菌DH5α中,提取质粒,再次转化到BL21(DE3)中,成功筛选到阳性克隆.经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出norA部分基因的表达.利用得到的纯化蛋白免疫家兔,并通过间接ELISA法检测抗体效价,证明得到相应抗体.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的建立快速筛选细菌耐药整合子的分类方法,并对21株来自临床的菌株进行整合子筛选和分类.方法根据GenBank/EMBL内的第一、第二和第三类的整合酶序列,通过软件Clustal W的多重比对分析设计出各类整合子的特异性引物,用对照菌株建立多重PCR方法并对21株临床菌株进行PCR扩增,通过其PCR扩增产物片段大小的不同进行整合子分类.结果对照菌株实验结果显示,21株临床分离菌株中,15株在565bp处有扩增片段,即为含有第一类整合酶基因;4株在403bp处有扩增片段,即含有第二类整合酶基因;1株在565bp和403bp处均有扩增片段,提示其同时含有第一、二类整合酶基因;1株没有得到任何扩增片段,即不含有这三类整合酶基因;在被测菌株中未发现第三类整合酶基因的阳性菌株.结论本文报道的筛选细菌耐药整合酶基因分类的多重PCR方法效果良好,具有可行性,为更加全面细致研究整合子类型以及整合子介导的细菌耐药机制提供了一种简单易行、快捷有效的方法.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的探讨丝裂霉素对胃癌细胞形态结构和谷胱甘肽转移酶GSTπ表达的影响.方法利用人胃癌细胞株BGC-823进行培养,加入丝裂霉素后5h和10h后采集细胞,进行光、电镜观察和免疫组化染色.结果5h组形态变化不明显,胞质中GSTπ含量下降,胞核中GSTπ增多;10h组细胞破坏明显,细胞器减少,质膜破裂;其胞质与胞核中仍有少量GSTπ表达.结论丝裂霉素对BGC-823癌细胞有明显的杀伤作用,其途径之一可能与抑制GSTπ基因表达有关.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的建立高效液相色谱法同时测定硝酸咪康唑氯倍他索乳膏中硝酸咪康唑和丙酸氯倍他索的含量.方法色谱柱为luna C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为甲醇:乙腈: 0.5%乙酸铵溶液(41:41 : 18),流速1.0ml/min,检测波长240nm.结果硝酸咪康唑和丙酸氯倍他索分别在0.08～3.20和0.021～0.084mg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=1.0000和r=0.9999),高、中、低3种浓度的平均回收率范围为100.7%～101.5%(RSD≤0.3%)和99.8%～100.7%(RSD≤0.5%).结论本方法简单、快速、灵敏度高和重现性好,能够有效地控制药品质量.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的用RP-HPLC法测定注射用头孢他啶/舒巴坦钠中头孢他啶和舒巴坦的含量及其有关物质.方法用ZorbaxSB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);乙腈:[(0.03mol/L磷酸二氢钾溶液:10%四甲基氢氧化铵溶液(795:15),磷酸调pH值为4.0](9:91)为流动相,检测波长230nm,流速1ml/min,进样量10μl,柱温30℃.结果头孢他啶与舒巴坦分别与其相邻杂质峰能完全分离,头孢他啶在18.07～3614.88μg/ml和舒巴坦在73.15～1755.53μg/ml浓度范围内线性关系良好(r=1.0000).结论该法简便、准确、专属性好,可以用于注射用头孢他啶/舒巴坦钠中头孢他啶和舒巴坦的含量测定及有关物质检查.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的建立高效液相色谱法测定注射用亚胺培南/西司他丁钠的含量及含量均匀度.方法采用CAPCELL PAK C18色谱柱(AQ型,250mm×4.6mm,5μm),流动相为含0.2%己烷磺酸钠的0.001mol/L磷酸二氢钾溶液(用0.5mol/L H3PO4调节pH6.8):甲醇(95:5),流速1.0ml/min,柱温50℃,检测波长254nm.结果亚胺培南的线性范围为0.120～0.600mg/ml(r=0.9995,n=5),西司他丁的线性范围为0.120～0.600mg/ml(r=0.9999,n=5),平均回收率分别为99.4%(RSD=0.6%),99.7%(RSD=1.0%).结论本法快速、准确、重现性好,能同时测定制剂中亚胺培南和西司他丁的含量与含量均匀度,还可用于控制该制剂的有关物质.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的采用正交设计法筛选硫酸多黏菌素E脂质体的优处方,建立透析法作为测定脂质体包封率的方法.方法逆相蒸发制备脂质体,紫外分光光度法测定硫酸多黏菌素E含量,正交设计法优化硫酸多黏菌素E脂质体处方.结果采用正交设计法筛选出的脂质体粒径均匀、外观较好,包封率可达50%.结论采用正交设计法可以方便的筛选出硫酸多黏菌素E脂质体的优处方.采用透析法测定硫酸多黏菌素E脂质体的包封率准确性高、重现性好、简便易行.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的探讨从不同类型标本中分离的白念珠菌菌株对常用抗真菌药物的耐药谱,为临床白念珠菌感染性疾病诊断和治疗提供理论和实验依据.方法用真菌鉴定卡及Rosco真菌药敏纸片对分离出的所有白念珠菌作菌种鉴定和药敏实验,采用u检验分析从男性生殖道分泌物、女性生殖道分泌物和痰液中分离出白念珠菌的药物敏感特点.结果从痰液中分离出的白念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、咪康唑、酮康唑和制霉菌素敏感率分别为97.8%、98.9%、83.1%、87.6%和99.9%;男性尿道分泌物中白念珠菌的敏感率分别是76.1%、81.1%、65.3%、71.6%和86.0%;女性生殖道分泌物中菌株分别是58.4%、71.3%、61.4%、62.4%和86.1%,三组之间具有统计学意义(P＜0.01).结论不同标本中分离出的白念珠菌对抗真菌的敏感性有显著性差异.
作者： 刊期： 2005年第10期
以苄青霉素钾盐为原料,用低浓度CH3CO3H作氧化剂,所得苄青霉素亚砜以固体形式直接从溶液中结晶析出,再以对-甲氧基苄氯酯化,制得头孢类药物的母核7-苯乙酰胺基-3-氯甲基头孢烷酸对甲氧苄酯(GCLE)的关键中间体苄青霉素亚砜对-甲氧基苄酯,实验总收率82.6%.本工艺只使用一种有机溶剂,缩短了反应时间,降低了成本,适合规模生产.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的建立大鼠体内头孢硫脒血药浓度和分布浓度的测定方法及进行药动学研究.方法采用高效液相色谱技术测定不同剂量(200.92mg/kg,100.46mg/kg)头孢硫脒大鼠体内不同时间的血药浓度和药物分布浓度.C18反相色谱柱(Hypersil,250nm×4.0nm,5μm),流动相为乙腈:磷酸盐缓冲液(20:80).结果在0.20～50μg/ml范围内呈良好线性关系,r＞0.997,定量限为0.20μg/ml,回收率在95.91%～103.1%.大鼠静注头孢硫脒后,体内分布以膀胱、甲状腺、关节腔、皮肤、前列腺、肾上腺、胃、十二指肠、肾、子宫、淋巴结、眼球、卵巢、肺等脏器的浓度较高,脑、睾丸、脂肪、脾等脏器的浓度较低,主要经尿排泄,约占给药量的95%;体内药动学呈开放二室模型,主要药动学参数如下:ti/2α 0.2950,0.2711h;t1/2β1.345,1.327h;CL 4.284、4.254L/h;Vc0.5540、0.4901L/kg;V 2.077、2.035L/kg;AUC 23.62和46.92(mg·h)/L.头孢硫脒高、低剂量药动学参数值非常相近,表明在高、低剂量范围内药物呈线性动力学特征.结论本方法适用于药动学研究,测定结果为临床合理用药提供了依据.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的评价国产注射用甲磺酸帕珠沙星治疗呼吸道和泌尿道细菌感染的临床疗效和安全性.方法采用多中心双盲随机对照试验设计,以注射用盐酸左氧氟沙星为对照药,试验组用甲磺酸帕珠沙星注射剂每次0.5g,每日2次,静脉滴注;对照组用盐酸左氧氟沙星注射剂每次0.3g,每天2次,静脉滴注,疗程7～14d.结果本研究共入选病例252例,脱落4例,剔除8例,可评价病例240例,试验组120例,对照组120例.试验组与对照组的痊愈率分别为77.50%和74.17%,总有效率分别为98.33%和96.67%,细菌清除率分别为96.97%和95.70%,不良反应率分别为4.03%和2.42%.结论国产注射用甲磺酸帕珠沙星治疗呼吸道和泌尿道细菌性感染疗效确切,安全性好.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的考察盐酸莫西沙星对老年肺部或肠道感染的治疗作用及对肾脏的不良反应.方法盐酸莫西沙星治疗老年肺部感染36例,肠道感染31例.给予盐酸莫西沙星0.4g,每天1～2次,观察临床症状、肾功能及细菌学变化,评价该药的临床疗效及不良反应.结果临床总有效率88.2%,细菌转阴率86.5%,肾功能无改变,患者耐受性好.结论盐酸莫西沙星用于治疗老年患者肺部、肠道感染疗效确切,无不良反应.
作者： 刊期： 2005年第10期
在筛选弹性蛋白酶抑制剂过程中,从福建省永泰青云山土壤中分离到放线菌FIM99468,经分类鉴定为佛罗里达小单孢菌,定名为Micromonospora floridensis FIM99468.经发酵、提取,产生的次级代谢产物Fw99468能够抑制弹性蛋白酶,半数抑制浓度IC50为3.4×10-6mol/L.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的比较不同溶剂法结晶纯化头孢菌素C钠盐收率和质量.方法用HPLC、ESEM等检测方法检测头孢菌素C钠盐的纯度和晶型.结果用无水乙醇、丙酮、异丙醇三种溶剂所得的头孢菌素C钠盐指标均达到国内厂家内控检测标准,超过国外同类产品指标;其中以丙酮结晶法收率较高,乙醇结晶法纯度高,晶型好.结论丙酮结晶法成本较低,为厂家选择结晶工艺提供参考.
作者： 刊期： 2005年第10期
采用RT-PCR法提取天然内生抗菌多肽elafin的基因,通过测序确认后亚克隆构建真核表达载体pEGFP-N1-elafin,再转染至肺上皮细胞A549,荧光显微镜观察pEGFP-N1-elafin在细胞中表达及定位,采用Northern杂交、ELISA检测法分别从转录及蛋白质水平分析表达情况,后通过酶切电泳鉴定证实真核表达载体pEGFP-N1-elafin构建成功,其转染细胞中有elafin的基因表达,且细胞上清液中elafin含量证实其主要是分泌性表达.Elafin基因cDNA真核表达载体的成功构建以及主要呈分泌性表达的特点显示了极具意义的潜在应用价值.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的研究美伐他汀母液回收工艺条件.方法通过水解开环转水相,再通过D317树脂柱,然后用不同浓度的乙醇溶液非连续性洗脱树脂柱,洗脱液经萃取后浓缩,再缩合闭环结晶.结果以HPLC检测方法测定其含量为75%,美伐他汀母液平均回收率为66.5%.结论根据美伐他汀的化学性质设计的开环转水,然后树脂吸附回收工艺,具有过程简洁、收率较高、成本较低的特点.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的评价替考拉宁用于治疗烧伤患者由革兰阳性菌引起的感染的疗效、安全性.方法采用多中心、开放、随机研究单组评估设计,按照每次400mg,首日2次,此后每日1次的方法给药,疗程5～7d.结果替考拉宁治疗50例革兰阳性菌感染烧伤患者总细菌清除率为84.0%,创面感染的临床征象及全身反应明显缓解,未发生不良反应.结论替考拉宁对临床治疗革兰阳性菌,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)引起的烧伤感染有良好的疗效,不良反应少.
作者： 刊期： 2005年第10期
目的建立普卢利沙星的含量测定方法.方法采用高效液相色谱法,以十八烷基键合硅胶柱(Kromasil ODS柱,4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,0.025mol/L的磷酸溶液(三乙胺调pH值2.5):甲醇(50:50)为流动相,流速1.0ml/min,检测波长278nm.结果普卢利沙星在20.03～100.15μg/ml浓度范围内,峰面积与浓度线性关系良好,r=0.9999.结论所建立方法快速、简捷、准确度高,专属性强,适宜于普卢利沙星的含量测定.
作者： 刊期： 2005年第10期
研究梅岭霉素发酵过程中添加其主要组分MB1所拥有的侧链前体-3,3-二甲基丙烯酸,使MB1效价及其在总组分中的比例得到大幅度提高,达到提高产量并控制组分的目的.本文还对侧链前体的添加方式、添加时间以及添加浓度进行了优化.结果显示,0h时添加6mmol/L的侧链前体其产量高,MB1效价比对照高出43%,其在总组分中的比例达到了52.7%.
作者： 刊期： 2005年第10期
细菌生物膜是一个具有结构性、协调性和功能性的高度组织群体,其相关感染因为对抗生素耐药性极强成为临床难治性感染的重要原因之一.本文参阅近年来国内外研究结果,介绍了细菌生物膜的结构及特性,重点讨论其形成发展,抗生素耐药机制及防治策略方面的研究进展,对于寻找有效控制手段,指导临床合理用药和开发新药有重要意义.
作者： 刊期： 2005年第10期
中国抗生素杂志
主管:中国医药集团总公司
主办：中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所,中国医学科学院医药生物技术研究所
