学术投稿

HPLC-MS/MS测定人血浆中伏立康唑质量浓度及其生物等效性研究

向瑾;余勤;梁茂植;秦永平;南峰

关键词:伏立康唑, 高效液相色谱-串联质谱法, 血药浓度, 生物等效性研究
摘要:目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中伏立康唑的方法,并进行伏立康唑片生物等效性研究.方法 采用双周期随机交叉自身对照试验设计,48例健康男性受试者分别单次空腹口服两种伏立康唑片200 mg,采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立康唑质量浓度,以WinNonlin(R) 6.1软件计算主要药动学参数,并评价两种伏立康唑片的生物等效性.结果 伏立康唑标准曲线范围均为1~5 000 ng/mL,日内及日间精密度[相对标准偏差(RSD)]均小于11%,准确度在100.00%~109.73%之间,以内标基质效应校准后的伏立康唑基质效应RSD小于15%,萃取回收率大于50%,各项稳定性考察结果合格.伏立康唑峰浓度(Cmax)和药-时曲线下面积(A UC0-t 、A UC0-∞)的90%置信区间在80.00%~125.00%等效区间之内,受试制剂与参比制剂间达峰时间(Tmax)差异无统计学意义(P>0.05).结论 所建立的HPLC-MS/MS方法可用于人血浆中伏立康唑质量浓度的测定,伏立康唑片受试制剂与参比制剂生物等效.
四川大学学报(医学版)杂志相关文献
  • SF-12v2与SF-36v2在成都市居民人群中的等效性评价

    目的 根据SF-12量表研制初衷,探讨SF-12v2与SF-36v2在评价成都市居民人群生命质量中的等效性.方法 通过信度、效度和反应度等方面来评价SF-12v2与SF-36v2的等效性.结果 SF-36v2与SF-12v2的8个维度分数范围分别是64.13~89.15和47.45~87.92,SF-12v2各维度的标准差增大.两量表均无地板效应;但在生理功能(PF)、生理职能(RP)、身体疼痛(BP)、社会功能(SF)、情感职能(RE)维度有较高的天花板效应,分别是50.14%~63.87%和56.66%~68.32%之间,且SF-12V2高于SF-36v2对应维度.SF-36v2和SF-12v2各维度的Cronbach'sα分别在0.60~0.97和0.51~0.94之间,复测信度范围分别是0.61~0.85和0.55~0.80;因子分析均提取两个公因子代表生理和心理健康,解释SF-36v2和SF-12v2累积方差贡献分别为64.05%和55.79%;SF-12v2的PCS、MCS分数解释SF-36v2领域分数总变异R2分别为91.0%和80.3%;PCS-12和PCS-36对不同健康状况人群的效应尺度在0.78~2.77之间,MCS-12和MCS-36较低,在0.00~0.57之间;PCS12与PCS-36相对效度(RV)在0.89~0.94之间,MCS-12与MCS-36在0.60~0.75之间.结论 SF 12v2作为SF-36v2的简化版量表在成都市居民生命质量评价中具有较好的信度、效度和反应度,测量结构基本符合原量表测量模型,PCS-12对PCS-36和MCS-12对MCS-36有较好的等效性,但由于SF-12条目减少,各个维度分数精确性下降,不推荐计算维度分数.

    作者:赵龙超;杨展;胡晓;何燕;刘丹萍;李宁秀 刊期: 2018年第01期

  • 157例感染性心内膜炎患者的病原菌构成及临床特点分析

    目的 总结分析感染性心内膜炎培养阳性病例的临床特点,为临床合理诊治提供依据.方法 收集2008年1月至2015年8月住院的符合Duke标准且培养阳性的157例感染性心内膜炎患者的临床资料进行回顾性分析.结果 157例患者平均发病年龄为40.85岁,101例(64.3%)存在各种基础心脏病,其中以先天性心脏病为主[44例(28.0%)],风湿性心脏病15例(9.6%).临床表现以贫血(147例,93.6%)、发热(137例,87.3%)、心脏杂音(120例,76.4%)为主.12例(7.6%)经胸壁心脏超声(TTE)未发现赘生物而经食管心脏超声(TEE)发现赘生物.链球菌感染76例(48.4%)居首位(其中草绿色链球菌70例),其次为葡萄球菌感染33例(21.0%)(其中金黄色葡萄球菌18例,11.5%).所有患者均给予抗菌药物治疗.85例(54.1%)患者接受了手术治疗,其中72例进行了换瓣手术.27例患者痊愈出院,88例患者显效,38例患者无效,4例患者死亡.其中手术组疗效优于非手术组(P<0.05).结论 感染性心内膜炎的特点包括发病年龄较往年增大,基础疾病以先天性心脏病为主,发热仍是主要的临床表现之一,草绿色链球菌是常见的病原体.外科手术治疗可有效改善患者预后.

    作者:赵菲菲;陆杨;叶慧;钟册俊;黄亮;吕晓菊 刊期: 2018年第01期

  • 中老年视力障碍患者抑郁症状及其影响因素研究

    目的 了解中老年视力障碍患者的抑郁症状流行水平及危险因素,为降低视力障碍患者抑郁症状检出率提供依据.方法 数据来源于2013年中国健康与养老追踪调查,选择自报失明或半失明患者作为研究对象,经过筛选得到有效样本1 462例,采用流调用抑郁自评量表(CES-D)得分评定抑郁症状,单因素分析采用卡方检验,多因素分析采用二分类logistic回归.结果 调查对象平均年龄(65±10)岁,抑郁症状率为45.6%,抑郁症状平均得分为(10±7)分.55~64岁年龄组抑郁症状检出率高于≥75岁年龄组[比值比(OR)=1.679,P<0.01];女性抑郁症状检出率高于男性(OR=1.310,P<0.05);城市患者抑郁症状检出率低于农村患者(OR=0.480,P<0.001);未患慢性病的患者抑郁症状检出率低于患慢性病的患者(OR=0.534,P<0.001);自评总体健康好的患者抑郁症状检出率低于自评差的患者(OR=0.324,P<0.001);无其他残疾患者抑郁症状检出率低于患有其他两种及以上残疾的患者(OR=0.570,P<0.01);睡眠时间较短的患者抑郁症状检出率高于睡眠时间正常的患者(OR=1.570,P<0.01);自评记忆力好的患者抑郁症状检出率低于自评差的患者(OR=0.380,P<0.001);生活极度满意的患者抑郁症状检出率低于一点也不满意的患者(OR=0.126,P<0.001).结论 中老年视力障碍患者抑郁症状检出率较高,其抑郁症状检出率与年龄、性别、城乡、是否患慢性病、自评总体健康、是否患有其他残疾、睡眠时长、自评记忆力、生活满意度有关.

    作者:杨展;刘银;张文婕;李宁秀 刊期: 2018年第01期

  • 血液肿瘤患者大肠埃希菌血流感染的耐药性及死亡危险因素分析

    目的 了解四川大学华西医院血液肿瘤患者大肠埃希菌血流感染的耐药性及死亡危险因素,为其治疗和预后提供参考.方法 采用病例对照研究,选择近5年我院110例血液肿瘤患者大肠埃希菌血流感染为研究对象,比较感染产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌组(产ESBLs组,n=77)与非产ESBLs大肠埃希菌组(非产ESBLs组,n=33)患者的耐药性及临床特征;同时比较30d内死亡者(死亡组,n=20)与存活者(成活组,n=64)死亡的危险因素.结果 大肠埃希菌对碳青霉烯类和阿米卡星的耐药率低于10%.产ESBL组和非产ESBL组患者的临床症状、既往抗生素/抗真菌药使用、易感因素、30 d死亡率差异均无统计学意义(P>0.05).Logistic回归分析发现血液肿瘤未缓解(比值比=9.575,95%可信区间1.546~59.312,P=0.015)和早期不合理使用抗生素(比值比=8.806,95%可信区间1.527~50.772,P=0.015)是大肠埃希菌血流感染30 d内死亡的独立危险因素.结论 早期快速启动有效抗菌治疗(碳青霉烯类,必要时联合阿米卡星)可降低血液肿瘤患者大肠埃希菌血流感染死亡风险.

    作者:张为利;黄杰;吴思颖;刘雅;龙芳;肖玉玲;谢轶;何超;康梅 刊期: 2018年第01期

  • CYP2D6基因多态性对国产磷酸二甲啡烷片在中国健康人体内药代动力学的影响

    目的 研究CYP2D6基因多态性对国产磷酸二甲啡烷片在中国健康人体内药代动力学的影响.方法 采用PCR方法对12例健康受试者CYP2D6* 10基因型进行分组.12例受试者在两个研究周期分别单次及连续口服20 mg磷酸二甲啡烷片.给药后不同时间点采集血样,高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)法检测二甲啡烷血药浓度,计算药代动力学参数.结果 12例受试者中,CYP2D6* 10 CC型2例,CYP2D6* 10 CT型4例,CYP2D6* 10 TT型6例.与CYP2D6* 10 CC和CYP2D6* 10 CT基因型相比,CYP2D6* 10 TT基因型受试者的峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC)增加,表观分布容积(V/F)和清除率(Cl/F)降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CYP2D6* 10基因多态性影响国产磷酸二甲啡烷片在中国健康人的药代动力学特征.

    作者:罗柱;余勤;王颖;向瑾;苗佳 刊期: 2018年第01期

  • 弥漫大B细胞淋巴瘤血浆循环游离DNA水平的动态监测及临床意义

    目的 了解循环游离DNA在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的水平以及与疗效的关系.方法 收集DLBCL患者治疗前后的血浆标本及临床资料,同步采集体检的健康人群血液标本作为对照,采用荧光染料法对循环游离DNA进行定量,分析循环游离DNA水平与患者临床特征及疗效的关系.结果 共纳入98例初诊DLBCL患者,80例健康体检者.DLBCL患者诊断时循环游离DNA水平为845.0(321.5~2 195.0) ng/mL,高于健康对照组[209.0(157.5~266.8)ng/mL](P<0.000 1);疾病处于晚期、伴有B症状、乳酸脱氢酶(LDH)升高以及国际预后指数(IPI)评分为高风险的患者其血浆循环游离DNA水平更高(P<0.05).化疗后获得完全缓解或部分缓解的患者其循环游离DNA水平较化疗前降低,且低于未缓解患者(P<0.001);完全缓解患者循环游离DNA水平较部分缓解患者降低(P<0.001);与健康对照组相比,缓解后的血浆循环游离DNA水平仍升高(P<0.05).缓解后复发的患者其循环游离DNA水平再次明显升高.结论 循环游离DNA的定量检测对DLBCL患者的疗效判断以及疾病监测具有重要价值.

    作者:李茂;徐娟;曹迪;蒋昱;徐才刚 刊期: 2018年第01期

  • 腺病毒介导hCTR1转染用于治疗顺铂耐受宫颈癌的基础研究

    目的 诱导培养对顺铂耐药的人宫颈癌细胞株,并进一步研究针对宫颈癌细胞耐药的机制和相应的治疗方法.方法 采用浓度梯度递增法使用顺铂处理人宫颈癌细胞C-33A,诱导出顺铂耐药细胞株C33A/cis后,通过Western blot检测铜离子转运蛋白(copper transporter 1,CTR1)的表达改变,使用顺铂耐药细胞株C-33A/cis建立肿瘤皮下荷瘤模型,使用转染有hCTR1基因的腺病毒注射液(ad-hCTR1)并联合顺铂给药,观测肿瘤体积的改变,并在后一次注射10d后处死小鼠,通过免疫组化方法检测肿瘤组织中CTR1的表达.结果 浓度梯度递增法诱导出的耐药细胞株C-33A/cis较亲代细胞C-33A对顺铂引起的细胞毒性敏感性下降,顺铂的半致死剂量浓度(IC50)由(1.86±0.08)μmol/L提升至(8.11±0.21) μmol/L.Western blot结果显示耐药细胞C 33A/cis中CTR1的表达降低.利用顺铂耐药细胞株C-33A/cis建立的皮下瘤模型,在给予ad-hCTR1后,肿瘤组织内可检测到CTR1表达增高;对荷瘤鼠给予腺病毒转染CTR1联合顺铂给药后,肿瘤体积增长受到抑制.结论 腺病毒转染CTR1联合顺铂给药可能提高耐药性宫颈癌的治疗效果.

    作者:吴秀丽;郭涛;蔡华伟 刊期: 2018年第01期

  • 缺氧诱导因子及其抑制因子调控肾癌细胞生长的实验研究

    目的 检测缺氧诱导因子抑制因子(FIH-1)在肾癌细胞中的基因和蛋白表达情况,以进一步了解FIH-1对肾癌细胞生长调控的机制.方法 选取人肾癌细胞株786-0及OS-RC-2,运用real-time PCR(RT-PCR)和Western blot方法检测细胞株中FIH-1、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子2α(HIF-2α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平.并人工构建FIH-1过表达质粒,将其转入上述的两种细胞株中,运用RT-PCR和Westernblot方法观察转染后FIH-1、HIF及VEGF的表达情况;同时运用MTT方法分析转染后两种肿瘤细胞的增殖情况.结果 RT-PCR和Western blot检测结果都显示,786-0和OS-RC-2细胞中都能检测到FIH-1和VEGF的表达;OS-RC-2细胞中同时存在HIF-1α和HIF-2α表达,而786-0细胞中只有HIF-2α的表达;786-0细胞中FIH-1表达比OS-RC-2细胞高,VEGF的表达比OS-RC-2低;转染FIH-1过表达质粒后,OS-RC-2细胞内的FIH-1表达量明显升高,下游蛋白HIF-1α的表达量降低,VEGF的表达量也降低,而HIF-2α的表达量前后不变;在786-0细胞内的FIH-1表达量明显升高时,HIF-2α的表达量不变,VEGF的表达量也不变.在OS-RC-2细胞中,转染FIH-1过表达质粒后细胞的增殖变缓,而786-0细胞的增殖则没有明显的变化.结论 在肾癌细胞中存在FIH-1/HIF-1α/VEGF信号通路,FIH-1反向调节HIF-1α的表达,HIF-1α正向调节VEGF的表达.在HIF-1α及HIF-2α都存在时,FIH-1可通过对HIF-1α调控影响HIF-1α下游基因表达,抑制肾癌细胞的增殖.

    作者:邓实;杨博;任正举;董强 刊期: 2018年第01期

  • 参附注射液对紫杉醇外周神经毒性的影响

    目的 研究参附注射液减轻紫杉醇外周神经毒性的作用,探讨其可能的作用机制.方法 28只成年雄性Wister大鼠均分为4组(n=7):空白对照组、紫杉醇组、紫杉醇+参附低剂量组、紫杉醇+参附高剂量组.除空白对照组外,各组大鼠腹腔注射紫杉醇8 mg/kg,每4日一次,共注射4次.于实验第1天起,紫杉醇+参附低、高剂量组每日腹腔注射参附注射液(4 mL/kg、8 mL/kg),共21 d;空白对照组于实验第1天起,每日子等容量生理盐水腹腔注射,共21 d.分别于紫杉醇首次注射前(0 d),首次注射后6d、14d测定机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于第22天测定血清中神经生长因子(NGF)值后处死大鼠,用透射电镜观察坐骨神经超微结构.结果 紫杉醇组14 d时,大鼠MWT和TWL值较0d时及同期空白对照组升高(P<0.05);与同期紫杉醇组相比,参附低、高剂量组MWT和TWL值下降,且与参附高剂量组的差异有统计学意义(P<0.05);与同期空白对照组相比,参附低、高剂量组MWT和TWL值均无明显升高(P>0.05).与空白对照组相比较,紫杉醇组NGF值下降明显(P<0.05),参附低、高剂量组NGF值均较紫杉醇组升高,高剂量组升高明显(P<0.05).与空白对照组比较,紫杉醇组大鼠坐骨神经纤维结构普遍破坏,髓鞘肿胀、碎裂、空泡化,雪旺氏细胞中内质网肿胀,基质结构紊乱,参附低剂量组破坏程度较紫杉醇组轻,参附高剂量组神经纤维结构较完整.结论 参附注射液具有减轻紫杉醇外周神经毒性的作用,其机制可能与促进血清中NGF的表达有关.

    作者:熊绍权;邹晓玲;郑巧;晋帅;谢美;王莉娟;宋婷婷;何成诗;万里 刊期: 2018年第01期

  • 全口服药治疗肾移植术后慢性丙型肝炎3例报告

    病例1,52岁女性,因慢性肾功能不全进展至尿毒症期于2012~2013年维持性血液透析1年,并于2013年进行同种异体肾移植术,术后1年出现肝功能异常并呈进行性加重,查肝肾功能:谷丙转氨酶(ALT) 241 IU/L、谷草转氨酶(AST) 151 IU/L、肌酐80 μmol/L,完善HCV-RNA为4.8×106拷贝/mL,鉴于干扰素可能带来的不良反应,未行抗病毒治疗.

    作者:杨国丽;雷学忠 刊期: 2018年第01期

  • 支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖试验对侵袭性肺曲霉菌病的诊断价值

    目的 评价支气管肺泡灌洗液(BALF)半乳甘露聚糖(GM)质量浓度对侵袭性肺曲霉病的诊断价值.方法 参照欧洲癌症研究和治疗组织/侵袭性真菌感染协作组(EORTC/IFICG)和美国真菌病研究组(MSG)标准、美国感染病学会(IDSA)指南,将我校华西医院295例高危感染侵袭性肺曲霉病(IPA)患者分为IPA确诊组(42例)、临床诊断组(68例)、拟诊组(61例)和排除组(124例).采用酶联免疫吸附法试剂盒检测患者BALF中GM质量浓度(BALF GM试验)、血清中GM的质量浓度(血清GM试验),以临床确诊和临床诊断侵袭性肺真菌感染(invasive pulmonary fungal inffection,IPFI)为金标准(+),以排除为金标准(一),以GM试验中GM值≥拟定的GM阈值为诊断性试验阳性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线),了解BALF GM检测在不同阈值下对IPFI的诊断效率,以约登指数大确定本研究BALF GM的佳诊断点.结果 以BALF GM结果做ROC曲线,曲线下面积为0.932,当BALF GM值为1.5 ng/mL时,以此为值诊断点,其敏感性为87.5%,特异性96.7%,阳性预测值为87.5%,阴性预测值为96.7%.BALF GM值和血清GM值均为确诊组>临床诊断组>排除组,差异有统计学意义(P<0.05);血清GM阈值以0.5 ng/mL为临界值,BALF的GM阈值以1.5 ng/mL为临界值,计算阳性率,发现BALF GM在确诊组、临床诊断组的阳性率高于血清组(P<0.05);并且血清GM中存在较高的假阳性及假阴性.结论 测定BALF的GM浓度具有快速、准确、高灵敏度和特异性的优点,有助于IPA的早期诊断.

    作者:邓劲;吴思颖;刘雅;马莹;谢轶;陈知行;戴仲秋;邓杰伦;康梅 刊期: 2018年第01期

  • 肝婴儿型血管内皮瘤的临床与超声特征分析

    目的 探讨肝婴儿型血管内皮瘤(IHE)的常规超声表现特征.方法 回顾性分析2010年1月至2016年10月在我院经手术或肝穿活检病理证实为IHE的患者,对其一般临床资料、常规超声声像图进行分析.结果 8例IHE患者中,男4例,女4例,年龄15 d~3岁,其中年龄<3月者6例.7例为单发病灶,1例为多发病灶;病灶长径(8.2±1.0) cm;声像图上表现以低回声(4例)、等回声病灶(3例)为主;病灶以边界清楚(7例)、形态规则(7例)为主;内部回声多表现为不均匀(4例),偶可见钙化和周边声晕.彩色多普勒超声显示内部可见点线状或较丰富的血流信号(6例),以静脉血流为主.结论 IHE发病年龄常小于3月龄,超声声像图上表现多为单发、边界清楚、形态规则的实性肿块,或瘤体内可出现钙化时应考虑到IHE的可能.

    作者:王红;张欢;邱婷婷;彭玉兰 刊期: 2018年第01期

  • BORIS通过表观修饰对人肝癌细胞SOCS3表达的调控

    目的 探讨人肝癌细胞系中印记位点结合因子(BORIS)对细胞因子信号传导抑制因子-3(SOCS3)表达的调控方式.方法 通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SOCS3 mRNA在肝癌细胞中的表达;Westernblot检测敲低和过表达BORIS的肝癌细胞中SOCS3蛋白的表达;在敲低和过表达BORIS的肝癌细胞系中使用甲基化特异性PCR(MSP-PCR),检测SOCS3基因启动子区域甲基化状态;通过UCSC数据库分析,找到SOCS3基因启动子区潜在的BORIS结合位点,使用染色质免疫共沉淀(ChIP)-实时定量PCR(ChIP-qPCR)探索内源性高表达BORIS细胞中BORIS在SOCS3启动子区的富集状况;通过ChIP-qPCR检测敲低和过表达BORIS对SOCS3启动子区组蛋白甲基化状态.结果 在肝癌细胞中SOCS3 mRNA表达较高,在敲低或过表达BORISmRNA肝癌细胞中,SOCS3蛋白表达相应下调或上调,即在肝癌细胞中BORIS以正向调控的方式调控SOCS3蛋白质的表达;MSP-PCR实验显示在SMMC-7721和HepG2细胞SOCS3启动子为非甲基化,敲低BORIS不改变甲基化状态,Huh7细胞的SOCS3启动子区为甲基化状态,过表达BORIS后,SOCS3启动子区转变为非甲基化状态,但在HCCLM3中SOCS3启动子为非甲基化,过表达BORIS不影响甲基化状态;ChIP-qPCR表明在内源性高表达BORIS的细胞中,BOR IS特异性结合在SOCS3启动子区;组蛋白甲基化检测结果表明,敲低BORIS减少了BORIS在SOCS3启动子区富集,同时减少该区域H3K4 me2,增加H3K27 me3,而在过表达BORIS的细胞中呈现相反的结果.结论 BORIS作为一个表观遗传调控因子调控SOCS3基因启动子区的甲基化状态和组蛋白甲基化修饰,影响SOCS3的表达,进而参与肝癌发生发展的过程.

    作者:何靖炀;刘秋英;魏玲;刘中建;黄元;俞小琴;李波;覃扬 刊期: 2018年第01期

  • HPLC-MS/MS测定人血浆中伏立康唑质量浓度及其生物等效性研究

    目的 建立高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定人血浆中伏立康唑的方法,并进行伏立康唑片生物等效性研究.方法 采用双周期随机交叉自身对照试验设计,48例健康男性受试者分别单次空腹口服两种伏立康唑片200 mg,采用HPLC-MS/MS法测定人血浆中伏立康唑质量浓度,以WinNonlin(R) 6.1软件计算主要药动学参数,并评价两种伏立康唑片的生物等效性.结果 伏立康唑标准曲线范围均为1~5 000 ng/mL,日内及日间精密度[相对标准偏差(RSD)]均小于11%,准确度在100.00%~109.73%之间,以内标基质效应校准后的伏立康唑基质效应RSD小于15%,萃取回收率大于50%,各项稳定性考察结果合格.伏立康唑峰浓度(Cmax)和药-时曲线下面积(A UC0-t 、A UC0-∞)的90%置信区间在80.00%~125.00%等效区间之内,受试制剂与参比制剂间达峰时间(Tmax)差异无统计学意义(P>0.05).结论 所建立的HPLC-MS/MS方法可用于人血浆中伏立康唑质量浓度的测定,伏立康唑片受试制剂与参比制剂生物等效.

    作者:向瑾;余勤;梁茂植;秦永平;南峰 刊期: 2018年第01期

  • 烟酰胺磷酸核糖转移酶在扩张型心肌病中的表达及机制初探

    目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase,NAMPT)在扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)中的表达及其与DCM发生发展的关系.方法 收集2010~2013年期间经四川大学华西医院确诊的131例中国汉族DCM患者外周血,随机选择在四川大学华西医院体检中心体检的中国汉族健康人137例作为对照组.利用ELISA和Real time-PCR检测DCM组及对照组各样本NAMPT血浆蛋白及细胞内NAMPT mRNA表达水平.同时构建细胞内NAMPT过表达及空质粒转染大鼠心肌细胞系H9C2细胞,通过WST-1、细胞周期及流式细胞术检测NAMPT对H9C2细胞增殖、H2 O2诱导氧化应激前后细胞凋亡的影响.结果 DCM组血浆细胞外NAMPT蛋白水平高于对照组(P<0.05),且不同心衰程度及左室大小之间患者血浆NAMPT蛋白水平差异有统计学意义(P均< 0.05).DCM组细胞内NAMPT mRNA水平低于对照组(P<0.05).体外实验中,转染NAMPT过表达质粒后H9C2细胞增殖能力较空质粒组显著增强,S期比例增加.直接转染或转染后用H2O2诱导氧化应激前后,NAMPT过表达组H9C2存活细胞比例高于空质粒组,晚期凋亡及坏死细胞比例降低.结论 细胞外NAMPT血浆蛋白水平的高表达与外周血细胞内NAMPT mRNA水平的低表达是DCM的生物学特征之一.细胞内NAMPT降低可能是DCM发病机制中的重要因素.

    作者:窦青瑜;周斌;彭瑛;张奎;代小惠;宋雅平;饶莉 刊期: 2018年第01期

  • 生物型APC重建股骨近端瘤性骨缺损的保肢技术及疗效分析

    目的 探讨生物型同种异体骨-假体复合物(allograft-prosthetic composite,APC)重建股骨近端肿瘤切除后骨缺损的手术方法和中期疗效.方法 收集2007~2011年在我科接受股骨近端肿瘤切除、生物型APC重建的15例患者资料及病理结果;术后第1、3、6、9、12月及之后每半年对患者进行影像学检查及功能随访评估.影像学评估主要包括骨-骨界面愈合情况及大转子骨吸收情况;采用骨与软组织肿瘤协会评分(MSTS)及Harris髋关节评分(HHS)评估患者关节功能,采用查体评估患者外展肌肌力.结果 本组15例患者中,男7例,女8例,平均年龄25.1岁(17~56岁);平均随访时间32.8月(18~48月);病理学诊断:骨巨细胞瘤4例,骨肉瘤3例,软骨肉瘤3例,恶性纤维组织细胞肿瘤2例,骨母细胞瘤2例,尤文氏肉瘤1例.15例患者异体骨-宿主骨界面均获骨性愈合,愈合时间为5~9月;至末次随访时,未出现感染、异体骨-宿主骨愈合处骨吸收、髋关节脱位、异体骨超敏反应、髋臼磨损及肿瘤复发和转移等并发症.3例患者术中出现假体周围骨折,以钢丝环扎术固定.术后6例患者出现大转子骨吸收.15例患者平均MSTS评分和HHS评分,术前为11.3分(7~15分)和47.3分(40.3~58.5分),末次随访时为26.1分(24~29分)和80.1分(66.2~92.7分).结论 生物型APC应适用于年龄轻、预期生存时间长及术后功能要求高的股骨近端骨肿瘤患者.

    作者:王延岭;闵理;段宏;周勇;张闻力;石锐;罗翼;屠重棋 刊期: 2018年第01期

  • 铜绿假单胞菌重组Bb-pGEX-OprI疫苗的构建及其保护力的研究

    目的 构建并鉴定含有铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)外膜蛋白I(OprI)基因与两歧双歧杆菌(Bi idobacterium bi idum,Bb)疫苗(Bb-pGEX-OprI),并研究该疫苗对小鼠Pa感染的保护作用.方法 PCR扩增OprI抗原编码基因并将其定向克隆至pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-OprI,将pGEX-OprI电穿孔转化Bb,构建Bb-pGEX-OprI疫苗,进行双酶切、PCR和测序鉴定后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分别分析并鉴定表达产物.21只小鼠随机分为3组,分别灌胃接种Bb-pGEX-OprI疫苗、空载体疫苗(Bb-pGEX-1λT)和Bb.首次免疫后4周用PA01株攻击.攻击后2周处死小鼠取肺组织,计数肺组织的细菌菌落数.免疫前、首次免疫后4周和PA01株攻击后2周采小鼠静脉血,常规ELISA检测血清IgG及其亚类和IgE.结果 PCR成功扩增出194 bp的OprI抗原编码基因;双酶切、PCR和测序证实OprI基因成功克隆入pGEX-1λT中,并且pGEX-OprI成功转化Bb,构建为Bb-pGEX-OprI疫苗;SDS-PAGE显示Bb-pGEX-OprI表达相对分子质量约32×103的OprI-谷胱甘肽转移酶(GST)融合蛋白;Western blot证实融合蛋白能被Pa感染的鼠血清特异性识别.Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠肺组织的细菌菌落数低于Bb-pGEX-1λT组和Bb组(P<0.01),Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清IgG、IgG2b、IgG3和IgE水平在首次免疫后4周和攻击后2周依次升高,相同时间点Bb-pGEX-OprI疫苗组小鼠血清抗体水平均高于Bb-pGEX-1λT和Bb组(P<0.01或P<0.05).结论 成功构建了重组疫苗Bb-pGEX-OprI,其在小鼠抗Pa感染过程中可产生有效的体液免疫应答.

    作者:刘潇;李文桂;罗广旭 刊期: 2018年第01期

  • LC-MS/MS法测定人血浆中替诺福韦质量浓度及其生物等效性研究

    目的 建立液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法测定人血浆中替诺福韦质量浓度,并应用于高脂餐后及空腹口服国产和进口替诺福韦二吡呋酯片的生物等效性研究.方法 采用四周期随机交叉自身对照试验设计,24例健康男性受试者高脂餐后及空腹分别单剂量口服国产和进口替诺福韦二吡呋酯片300mg,LC-MS/MS法测定血浆中替诺福韦质量浓度,Winnonlin6.3软件计算主要药动学参数,并评价两种替诺福韦二吡呋酯片餐后及空腹服用的生物等效性.结果 替诺福韦血浆标准曲线在3.13~500 ng/mL范围内线性良好;批内、批间精密度相对标准偏差(RSD)均小于5.43%,回收率高且样品稳定性好.无论是高脂餐后给药还是空腹给药,药时曲线下面积A UC0t 、A UC1-∞和峰浓度(Cmax)的90%置信区间均在80.00%~125.00%范围内,达峰时间(Tmax)经非参数秩和检验,不同制剂间差异无统计学意义(P>0.05),两生物制剂等效.结论 所建立的LC-MS/MS方法适用于人血浆中替诺福韦质量浓度的测定,国产替诺福韦二吡呋酯片与进口制剂生物等效.

    作者:陈枳潓;冯仕银;南峰;余勤;梁茂植 刊期: 2018年第01期

  • 血尿酸水平与糖尿病前期及2型糖尿病患者胰岛功能的相关分析

    目的 研究糖尿病前期及2型糖尿病(T2DM)患者的血尿酸(SUA)水平与胰岛功能的关系.方法 纳入受试者4 112例,根据口服葡萄糖耐量试验(OGTT)将受试者分为3组:正常糖调节组(NGR) 493例、糖调节受损组(IGR)1 251例和T2DM组2 368例,分别测定3组SUA、空腹胰岛素(FIns)、餐后2h胰岛素(2 h-Ins)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA IR),比较3组间SUA、胰岛素水平及HOMA-IR的差异;进一步对不同性别的SUA水平进行分层,比较各分层组间胰岛功能;通过双变量关联性分析IGR患者中SUA与胰岛功能异常的相关性.结果 IGR组SUA水平高于NGR及T2DM组(P<0.000 1),同时IGR组2 h Ins水平高于NGR组及T2DM组(P<0.0001);T2DM组FIns、HOMA-IR及糖化血红蛋白(HbA1c)水平高于NGR及IGR组(P<0.000 1).对SUA水平分层分析发现,在男性不同SUA水平组,2 h-Ins水平在IGR组高,而HOMA-IR及HbA1c在T2DM组高.在女性不同SUA水平组,均是2 h-Ins水平在IGR组高,而FIns、HOMA-IR及HbA1c在T2DM组高.在男性和女性各SUA分组中,FIns及2 h-Ins随SUA水平的增高呈上升趋势.HOMA-IR在各SUA水平分组中,也随SUA增高呈上升趋势,且T2DM组高.在相关性分析中,IGR组及T2DM组的FIns、2 h-Ins及HOMA-IR均与SUA有相关性,而HbA1c仅在T2DM组与SUA呈负相关.结论 SUA水平可能与糖尿病前期患者胰岛功能异常相关,因此SUA水平的检测对评估糖尿病前期患者进展为T2DM有潜在的应用价值.

    作者:吴伊恬;何訸;王霞;张玫;安振梅;黄亨建 刊期: 2018年第01期

  • 侵袭性乳腺癌ASPH基因表达与启动子甲基化的临床意义

    目的 探讨侵袭性癌(IBC)癌组织中天冬氨酰-β-羟化酶基因(ASPH) mRNA的表达和基因启动子区域甲基化与临床病理参数的关系.方法 收集91例IBC患者癌组织与配对的癌旁正常组织(MNT),使用逆转录实时荧光定量PCR(qRT PCR)技术检测ASPH基因mRNA在组织中的表达,使用甲基化特异性PCR(MSP)法检测ASPH基因启动子区CpG岛甲基化状态,进一步分别分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系.结果 在IBC中ASPH mRNA的表达量高于MNT(P<0.001),ASPH mRNA的表达与乳腺癌中的标志物E-cadherin阳性表达有关(r=0.195,P=0.041).ASPH基因在癌组织与MNT中的启动子甲基化阳性率分别为47.3%(43/91)和89.0%(81/91),差异有统计学意义(P<0.05).基因启动子甲基化率与E-cadherin和肿瘤大小相关(P<0.05).结论 ASPH基因的表达及启动子甲基化率可能参与了乳腺癌的发生发展.

    作者:黎川;李宏江;陈璩;张雪梅;李昌龙 刊期: 2018年第01期

四川大学学报(医学版)杂志

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主办:四川大学