学术投稿

解脲支原体Ⅰ型MB抗原主蛋白氮端基因的克隆及原核表达

张菊;阎小君;郭晏海;李丁;段杰;苏成芝

关键词:解脲支原体, MB抗原主蛋白基因, 克隆/表达
摘要:目的从新鲜培养的解脲支原体(URA)Ⅰ型培养液获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,并体外表达,获得具有抗原活性的原核表达蛋白,为研制广谱、低廉及方便准确的URA感染的诊断及治疗方法提供物质基础.方法从新鲜培养的URA标准株Ⅰ型培养液提取DNA模板,采用特异引物及聚合酶链方法获得其MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因,经克隆入测序载体验证DNA大小及序列后,将MB抗原主蛋白N端1/3保守区的基因克隆入高效原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,初步以Western-blot测定表达产物的抗原性即与感染者阳性血清的反应活性.结果以笔者设计的特异引物,能得到预期大小的PCR产物,并能插入预定的克隆载体中测序,所得基因的序列符合目的基因的序列,其插入原核表达载体能获得表达,且表达产物具有抗原活性,能与感染患者的血清发生抗原抗体反应.结论所得到的MB抗原主蛋白N端1/3保守区片段的基因,与GENE BANK检索序列一致.在大肠杆菌中表达此片段所获得的表达产物,有抗原活性,有望用于URA抗体检测及疫苗研制.
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    作者:陈松劲;蒋百华 刊期: 2002年第03期

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    目前,临床急诊生化检验中多使用干化学方法,相对于全自动生化分析仪的透射比色方法,干化学法多采用测定反射光强度,这就为通过加入清除层去除干扰物,如:胆红素、脂浊以及血红蛋白,提供了方便.但是在一些情况下,测定结果仍然不同程度受到包括血红蛋白等干扰物质在内的多种因素的干扰.笔者利用美国生产的VITROS-250全自动干化学生化分析仪检测不同血红蛋白浓度的标本中的ALT的浓度来探讨标本溶血对ALT结果的影响.

    作者:郑军 刊期: 2002年第03期

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    作者:谢万红 刊期: 2002年第03期

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    我们应用PCR-TRAP、免疫组化染色对92例原发性肝癌(PHC)患者端粒酶、P53、RB、PCNA进行了检测,探讨它们在原发性肝癌发生、转移和浸润中的作用及相互关系.

    作者:陆东东;张锡然 刊期: 2002年第03期

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    作者:徐燕;袁幼红 刊期: 2002年第03期

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  • 低滴度HBsAg胶体金免疫层析测定可行性探讨

    HBsAg胶体金免疫层析测定(Gold immnnochromatography,GICA)(简称金标法),由于操作简单、快速、特异性高、易观察,已广泛应用于非固定采血点对献血者HBsAg进行初筛.但对低滴度HBsAg的应用价值值得商榷.本文就三种国产金标试纸条的渗透速度、均一性进行观察以及其敏感性与酶联免疫吸附法进行对比,以探讨其对低滴度HBsAg测定的可行性.

    作者:丰炳亮;张伟强;张洁 刊期: 2002年第03期

  • 高效液相色谱法测定血浆中同型半胱氨酸

    目的高同型半胱氨酸血症是周围血、脑、冠状血管阻塞性病变的独立危险因素,同型半胱氨酸测定对预测心血管病具有重要意义.方法用高效液相色谱法(HPLC)测定血浆中同型半胱氨酸.结果该法线性范围为0~40 μmol/L,相关系数r=0.998(Y=0.02+0.006X),批内变异系数为4.7%,批间变异系数为6.4%.正常值为5.98~15 μmol/L.结论方法简单、灵敏、准确、精密度较高,无干扰峰影响,是一种理想的测定方法.

    作者:郝万鹏;王忠;夏晓利;路航;田飞 刊期: 2002年第03期

  • Baker System 9120+全自动血细胞计数仪常见故障及排除方法

    Baker System 9120+全自动血细胞计数仪是近年我院从美国引进,具有测定参数多、速度快、结果准确可靠、重复性好、性能稳定等优点,为血常规检查的理想仪器之一.但使用中不免遇到故障,现将使用时出现的常见故障及排除方法报告如下:1 故障一不吸样.1.1 原因①血标本有凝块,堵塞吸样针或剪切阀;②剪切阀旋转不到位.

    作者:王亚强;颜平;王福党 刊期: 2002年第03期

  • 全自动电脑血沉仪检测ESR及动态曲线变化的观察

    红细胞沉降率(以下简称ESR)多年来均采用魏氏法,由于手工操作干扰因素多,用血量大,等候时间长,给检验工作及患者带来诸多不便.全自动电脑血沉仪操作简便,测量快速,用血量少,干扰因素少,既可测出ESR数据,又可打印出ESR动态曲线图,为疾病的诊断提供了新的依据.

    作者:白慧霞;刘小玲;孟小红 刊期: 2002年第03期

  • TR与MIC在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用

    目的对TR和MIC值在酵母菌的体外药敏试验中的临床应用进行评价.方法应用常规方法及VITEK YBC鉴定酵母菌,采用微量稀释法测定MIC值,分析酵母菌对7种抗真菌药物耐药性.并计算TR值,对TR、MIC、血药峰值、给药途径进行综合分析.结果所分离的酵母菌以白色念珠菌多,共214株,占78.1%.其对5-氟胞嘧定高度敏感,其TR与MIC的几何均数之比亦高,为619.82 μg/ml(口服2 000 mg)和1 033.04 μg/ml(静滴2 000 mg).结论应用TR与MIC联合报告对指导临床选用有效的抗菌药物和佳给药途径具有重要意义,可使小的用药剂量和药物副作用达到佳杀菌效能.

    作者:刘慧敏;穆小燕;李娟;高洁;阚耀东 刊期: 2002年第03期

  • CoulTER○ RAc*TdiffTM分析仪常见故障及排除

    CoulTER○ RAc*TdiffTM分析仪是美国贝克曼库尔特公司生产的新型全自动三分类血细胞分析仪.该仪器性能稳定、结果准确、重复性好、用血量少、故障率低、易于维护,是目前国内较为理想的血细胞分析仪.我科于2000年3月引进一台该机,经过一年多使用,发现并总结出一些该机可见故障的排除方法,现介绍给同行们以供参考.

    作者:曹三成;武歌婷;周玲莉 刊期: 2002年第03期

  • APTT法监测体外循环中血浆肝素含量及临床应用

    目的探讨活化的部分凝血活酶时间(APTT)与血浆肝素含量之间的关系,及其在体外循环中的应用.方法用APTT法检测血浆中不同浓度的肝素含量,建立工作曲线,并用基质血浆与患者血浆进行倍比稀释测定.结果发现血浆肝素含量在一定范围内与凝固时间的对数值呈良好的线性关系(直线回归,r=0.99),批内变异系数为2.3%~3.2%,批间变异系数为2.7%~4.9%.结论 APTT较为准确地反映血浆中肝素含量,通过倍比稀释,扩大了检测范围,可适用于大剂量肝素抗凝体外循环的监测,为实行剂量个体化给药提供了基础.

    作者:张明金 刊期: 2002年第03期

  • 介绍一种快速测定凝血四项的方法

    凝血四项(APTT、TT、PT、Fbg)仪器的测定,代替了以往玻片法凝血时间,为临床提供了凝血因子的多项参数,受到了临床医师普遍欢迎.但我们在实际工作中发现,凝血四项的测定从留取标本到出结果需时太长,尤其不利于外科单个急诊病人急查,为此作者进行了有益的探索,取得了良好的效果,现予介绍.

    作者:杜忠斌 刊期: 2002年第03期

  • AVL990型血气分析仪标本采集与保存及其常见故障排除

    血气分析与酸碱平衡诊断试验是临床抢救和监护危重病人的一组重要生化指标,它可反映病人体内急性和潜在的酸碱平衡和气体交换的内环境状态的变化.AVL990分析仪是用两个准确已知并且精确的值对一个相对测量系统来定标,标定时通过调整放大器的斜率和零点使总的定标直线趋于理想的定标直线,仪器所测标本结果的精确度不仅取决于操作者正确的操作和当时仪器的功能状态,更多的还是制造者所能控制的范围之外的各种外部因素的影响,标本收集与保存处理不当所引起的误差远远大于仪器分析过程中所产生的误差,所以正确的标本采集与保存尤为重要.

    作者:王帆;张莉;何明逊 刊期: 2002年第03期

  • 苛养菌药敏试验方法

    1 概述临床微生物实验室正面临着准确地检测一些苛养菌产生新兴耐药的严峻挑战.苛养菌(Fastidious Organisms)的培养及药敏试验对培养基和生长环境有较高的要求.因此,增大了实验室药敏试验的技术难度.临床微生物实验室不可能依靠一种药敏试验方法或商业化产品检测所有细菌的耐药.要达到此目的,需综合运用肉汤稀释或琼脂稀释试验、特定药物浓度筛选试验以及修正药敏试验解释标准等[1].

    作者:张银旺 刊期: 2002年第03期

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