学术投稿

实时荧光半定量MSP检测肺癌组织CDH1甲基化水平实验条件的探讨

杨兰辉;向莉;赵滢;韩林;王玉明;段勇

关键词:实时荧光半定量MSP, I型钙黏蛋白基因, 肺癌, 甲基化
摘要:目的 探讨实时荧光半定量MSP检测肺癌组织中CDH1 DNA甲基化水平的适实验条件.方法 通过改变实时荧光半定量MSP反应条件,探讨MSP反应体系适浓度和反应条件.结果 检测CDH1 DNfA甲基化实时荧光半定量MSP反应体系为dATP,dCTP和dGTP 200 μmol/L,dUTP 400 μmol/L,MgCl23.0 mmol/L,引物600 nmol/L,热启动TaqDNA聚合酶0.04 U/μl,模板3μl,DMSO 2.5%,1×SYBGREEN I染料.1×反应缓冲液,总体系25μl.反应条件为95℃预变性12 min,95℃15 s、退火温度1 min(其中62℃2个循环、60℃3个循环和58℃45个循环)、69℃10 S,循环次数50.结论 改进和建立了CDH1 DNA甲基化水平的相对定量检测方法.
现代检验医学杂志相关文献
  • 血清同型半胱氨酸与青壮年脑梗死关系的研究

    目的 探讨血清同型半胱氨酸与青壮年脑梗死的关系.方法 检测79例青壮年脑梗死患者及40例健康对照者血清同型半胱氨酸(Hcy)、叶酸(FA)、维生素B12(VitB12)水平,及传统意义危险因素的血脂、血糖和血压水平.结果 ①脑梗死组血清Hcy水平(16.83±4.92 μmol/L)显著高于对照组(10.46±1.03/μmol/L),差异有统计学显著性意义(P<0.01);脑梗死组血清FA水平(7.48±2.87 ng/L)显著低于对照组(10.10±3.91 ng/L),差异有统计学显著性意义(P<0.01);脑梗死组血清VitB12水平(246.8±118.6 pg/L)显著低于对照组(410.6±190.6 pg/L),差异有统计学显著性意义(P<0.01);血清Hcy与FA、VitB12呈负相关.②血清三酰甘油(TG)水平脑梗死高Hcy组(3.32±2.15 mmol/L)及脑梗死正常Hcy组(3.11±2.13 mmol/L)均高于对照组(1.61±0.63 mmol/L),差异有统计学显著性意义(均P<0.05);脑梗死高Hcy组与脑梗死正常Hcy组血清TG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);三组间血清胆固醇、血糖及血压水平比较,差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 高同型半胱氨酸血症可能为青壮年脑梗死的独立危险因素,血清Hcy水平与FA、VitB12呈负相关.传统危险因素中血清TG升高为突出因素.

    作者:田华;纪宏斌 刊期: 2008年第06期

  • As2O3影响慢性粒细胞白血病细胞VEGF,MMP-2 mRNA表达的实验研究

    目的 研究As2O3对慢性粒细胞白血病(CML)骨髓单个核细胞,血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶2(MMP-2)mRNA及培养上清VEGF蛋白表达的影响作用,从而对白血病的发病机制及As2O3的作用机制进行探讨.方法 用RT-PCR技术检测20例CML患者与5例正常人骨髓细胞MMP-2,VEGF mRNA的表达.用ELlSA方法检测20例CML患者骨髓单个核细胞经As2O3作用前、后培养上清液VEGF水平的变化,用RT-PCR法检测VEGF,MMP-2 mRNA表达阳性患者骨髓单个核细胞mRNA含量的变化.结果 CML患者VEGF,MMP-2 mRNA水平明显高于正常对照者,5×10-6mol/L As2O3可明显下调CML患者骨髓单个核细胞培养上清VEGF蛋白的表达(P<0.05);As2O3对骨髓单个核细胞VEGF,MMP-2 mRNA的表达有下调作用,并为剂量依赖性.结论 CML中VEGF与MMP-2 mRNA表达异常增高.As2O3下调白血病细胞vEGF,MMP-2的表达可能是其抗白血病作用的机制之一.

    作者:连小赟;苗玉迪;魏绪仓;王一;张玎;王岐山 刊期: 2008年第06期

  • 急性冠状动脉综合征患者血清金属蛋白酶变化的临床意义

    目的 探讨急性冠状动脉综合征患者金属蛋白酶(MMP-2,MMP-9)、氧化低密度脂蛋白(oxLDL)、屏氧酶1(paranoxonase-1,PON-1)变化的临床意义.方法 以ELISA法和生化方法检测87例急性冠状动脉综合征(ACS)患者、37例稳定型心绞痛(SAP)患者和23例健康人血清MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1.结果 急性心肌梗死(AMI)组和不稳定型心绞痛(UAP)组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1均显著高于对照组(P<0.01),尤其以AMI组高;AMI组、UAP组的检测结果与SAP组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1也存在显著性差异(P<0.01);SAP组患者的MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1的含量稍高于健康对照组(P<0.05).结论 MMP-2,MMP-9,oxLDL和PON-1在ACS患者血浆中均显著增高,可作为ACS患者诊断的敏感性指标之一.

    作者:俞晓丽;闻平;郭月芳;陈蕾 刊期: 2008年第06期

  • 抗CCP、抗AKA和抗RA33抗体检测在类风湿性关节炎诊断中的应用

    目的 探讨环瓜氨酸多肽(CCP)抗体、抗角蛋白抗体(AKA)、类风湿因子(RF)和抗RA33抗体对类风湿性关节炎(RA)的临床应用价值.方法 88例RA患者和50例其他自身免疫病患者分别采用ELISA法检测抗CCP和抗RA33抗体,免疫荧光法检测抗AKA抗体,速率散射比浊法检测类风湿因子(RF),观察各指标对RA的诊断价值.结果 患者抗CCP抗体、抗AKA抗体、抗RA33抗体和RF的敏感度分别为68.2%,28.4%,39.8%和71.6%,特异度为92.0%,100%,94.0%和70.0%;抗CCP抗体的检测阳性率高于抗AKA抗体和抗RA33抗体(P<0.01),与RF无统计学显著性差异(P=0.622).三种抗体对RF阴性组RA诊断的阳性率为63.0%,37%,44.4%,与RF阳性组RA阳性率70.5%,24.6%,37.7%相比较,两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 抗CCP,抗AKA,抗RA33抗体均是RA诊断的特异性指标,对诊断RF阴性RA具有较高敏感度和特异度,将上述抗体与RF进行联合检测,有助于RA的早期诊断.

    作者:段发兰;李毅;成国娟;胡筱梅 刊期: 2008年第06期

  • 婴幼儿急性上呼吸道感染淋巴细胞亚群的改变

    目的 研究婴幼儿上呼吸道感染时细胞免疫状况的变化情况.方法 采用流式细胞仪检测急性上呼吸道感染患儿及正常对照组外周血Th1和Th2的百分率,CD4+与CD8+细胞百分率,CD4+/CD8+比值及CD19+和CD19+CD23+的表达水平,以探讨婴幼儿急性上呼吸道感染T淋巴细胞亚群的变化及B淋巴细胞的活化状况.结果 上呼吸道感染的患儿的外周血Th1,Th2的细胞百分率(13.15%±6.23%及4.57%±3.10%)均显著高于对照组(7.14%±5.09%及2.03%±0.95%),患儿组CD4+细胞百分率亦较对照组为高(P<0.05),CD8+,CD4+/CD8+比值均与正常对照组之间无统计学差异(P>0.05),CD19+与CD19+CD23+的表达阳性率无明显升高.结论 婴幼儿上呼吸道感染时可活化T辅助淋巴细胞亚群,表现为Th1和Th2细胞百分率均增加,Th1和Th2细胞免疫反应增强,而B淋巴细胞状况无明显改变.

    作者:岳乔红;杨柳;苏明权;马越云;郝晓柯 刊期: 2008年第06期

  • 西安地区不动杆菌产β-内酰胺酶与耐药关系的分析

    目的 了解西安地区不动杆菌β-内酰胺酶的产生情况,分析其与抗生素耐药的关系.方法 采用NCCLS推荐方法及文献所使用方法,对收集的120株不动杆菌进行产ESBLs,AmpC的检测和药敏实验.结果 120株不动杆菌,产ES-BLs有20株,检出率为16.7%,产AmpC酶31株,检出率为25.8%,产酶株耐药率明显高于非产酶株.结论 产AmpC酶和ESBLs是西安地区不动杆菌耐药的主要机制.

    作者:马列婷;王林川;于燕;王亚文;雷金娥 刊期: 2008年第06期

  • 聚醇醚碘消毒液杀菌效果及稳定性试验观察

    目的 观察聚醇醚碘的杀菌效果及稳定性.方法 采用悬液定量杀菌试验及37℃保存试验进行了实验观察研究.结果 以含有效碘300 mg/L的聚醇醚碘对悬演内金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌作用1 min,杀灭对数值均>5.00;对白色念珠菌作用1 min,杀灭对数值均>4.00;以原液涂擦皮肤表面作用1 min,对自然菌的杀灭对数值均>1.00;将该消毒液原包装于37℃恒温保存3个月,有效碘含量下降率为2.82%.结论 该消毒液杀菌效果良好,性能稳定.

    作者:刘小娥;王继红;苏宝凤;苍金荣 刊期: 2008年第06期

  • 6σ质量管理体系在临床化学分析中的应用研究

    目的 以Beckman LX20全自动生化分析系统为平台,进行6σ质量管理体系在临床化学分析中的应用研究,证明6σ质量标准能指导临床化学检验更系统、深入地进行全面质量管理,更好地为临床诊疗服务.方法 ①用Beckman公司提供的Beckman LX20全自动生化分析仪及配套试荆构建LX20分析系统;以Beckman公司提供的校准液及低、中、高定值质控物对该分析系统进行溯源、校准、系统证实.②确定该系统检测有可溯源性,校准通过,系统证实可靠.③低、中、高定值质控物连续测定30 d,计算各检测项目的x,s以及与各项目定值的偏差bias(bias=x-T);根据CLIA'88查找各参数的大允许误差(TEa).④根据公式σ=(TEa-bias)/s计算其各参数的σ值.结果 低值各项目σ值在4.2~7.3之间,中值各项目σ值在4.4~7.6之间,高值各项目σ值在4.1~9.3之间.结论 6σ质量标准能指导实验室人员在临床化学检验方面更系统、深入地进行全面质量管理.

    作者:莫凡;黄与双;赵洁;韦宁;何英;陆学东 刊期: 2008年第06期

  • Dimension RXL全自动生化分析仪电解质定标未通过的故障排除

    西门子医疗诊断公司生产的Dimension RXL全自动生化分析仪在日常使用中有时会出现电解质定标不能通过的现象,现根据笔者在工作中的一点感受将其原因及故障排除做以下小结,供使用该仪器的同行参考.

    作者:金敬富;曹蓉;赵云峰 刊期: 2008年第06期

  • 抗核抗体核型及滴度与免疫球蛋白和补体的关系

    目的 探讨抗核抗体(ANA)核型及滴度与免疫球蛋白和补体的关系.方法 采用散射比浊法对328例抗核抗体阳性患者血清进行免疫球蛋白(IgG,IgA,IgM)和补体(包括C3,C4)检测,取120例抗核抗体阴性体检者为对照组.针对不同抗核抗体核型及滴度进行分组,分别研究各组免疫球蛋白和补体浓度情况.结果 抗核抗体滴度≥1∶100时,IgG,IgA显著升高(P<0.01),抗核抗体滴度≥1∶3200时,IgM显著升高(P<0.01),抗核抗体阳性各组中,当抗核抗体滴度≥1∶1000时,C3,C4水平显著降低(P<0.01).根据受检者血清中抗核抗体核型进行分组,各组间IgG,IgA,C3,C4水平比较,差异有统计学意义(P<0.01).各核型组IgG,IgA均比对照组显著增高(P<0.01),而C3,C47,有在胞荣型、核颗粒型、核均质型等靶抗原分布较广的核型组显著降低(P<0.01).结论 免疫球蛋白与补体的含量与ANA核型及滴度有一定的关系.

    作者:曹华军;程艳杰;李桂新;徐裕海;杨光晗 刊期: 2008年第06期

  • 实时荧光半定量MSP检测肺癌组织CDH1甲基化水平实验条件的探讨

    目的 探讨实时荧光半定量MSP检测肺癌组织中CDH1 DNA甲基化水平的适实验条件.方法 通过改变实时荧光半定量MSP反应条件,探讨MSP反应体系适浓度和反应条件.结果 检测CDH1 DNfA甲基化实时荧光半定量MSP反应体系为dATP,dCTP和dGTP 200 μmol/L,dUTP 400 μmol/L,MgCl23.0 mmol/L,引物600 nmol/L,热启动TaqDNA聚合酶0.04 U/μl,模板3μl,DMSO 2.5%,1×SYBGREEN I染料.1×反应缓冲液,总体系25μl.反应条件为95℃预变性12 min,95℃15 s、退火温度1 min(其中62℃2个循环、60℃3个循环和58℃45个循环)、69℃10 S,循环次数50.结论 改进和建立了CDH1 DNA甲基化水平的相对定量检测方法.

    作者:杨兰辉;向莉;赵滢;韩林;王玉明;段勇 刊期: 2008年第06期

  • 生物安全柜动态条件下空气细菌污染监测与影响因素分析

    目的 研究生物安全柜在动态条件下柜内空气细菌污染情况及其影响因素分析.方法 采用平板自然沉降法对生物安全柜内消毒净化的空气及柜外周边区消毒空气,在静止和工作状态下每隔10 min进行空气采样并计数细菌数.设对照组、干预组(限制人员活动)、未干预组.分别取有代表性的从操作开始10,20,40,60 min四组的空气细菌数进行对比分析,经t,F检验,分析生物安全柜内空气细菌菌落数随时间变化的趋势.结果 在静止柜内空气细菌总数在不同时间段与周边区空气相比均明显降低,差别有统计学显著性意义(P均<0.01);在工作状态下柜内空气细菌总数不论是在干预组还是未干预组与静止状态下相比差别均无统计学显著性意义(P均>0.05);未干预组柜内空气细菌总数虽与干预组相比有所增加,但差别均无统计学显著性意义(P均>0.05);在工作状态下不论是在干预组还是未干预组柜内空气细菌总数均显著低于周边区,而周边区空气细菌总数随采样次数的增加有增加的趋势,而生物安全柜内空气却无此趋势.干预组还是未干预组柜内空气细菌总数在各时间段经方差分析差别均无统计学显著性意义(P均>0.05).空气中细菌以葡萄球菌属、草绿色链球菌检出率高.结论 生物安全柜在动态条件下可有效保证柜内空气细菌的洁净并保持稳定,人员活动并不影响柜内空气的洁净.

    作者:宋庆璋;刘瑞东;马志国 刊期: 2008年第06期

  • 中国汶川大地震受难者血清电解质特征

    目的 分析汶川地震受难者血清电解质异常状况,并探讨其可能的病理机制.方法 测定400例受难者(其中挤压伤206例、非挤压伤194例)血清K+,Na+,Cl-,Ca2+,Mg2+和P浓度,其结果经统计学处理.结果 挤压伤患者和非挤压伤患者之间各电解质成分均有显著差异.相关关系显示:除Cr--Mg2+和Ca2+-P之间的相关关系从正相关转变为负相关,无显著性差异;Mg2+-P之间从负相关(r=-0.306,P=0.997)转变成正相关(r=0.280.P=0.000),且差异有统计学显著性意义外,其余电解质成分之间在挤压伤和非挤压伤的相关变化基本一致.多元统计分析表明:风险因子高的是血清K+(OR=28.037),其次为Ca2+(OR=7.284),Cl-(OR=4.457),P(OR=2.754),Na+(OR=1.780)和Mg2+(OR=0.592).ROC曲线分析结果显示:诊断挤压伤特异度(Sp)高的是血清K+,为98.5%(cut off=5.8 mmol/L),其次是血清P.Sp=84.3%(cut off=1.61 mmol/L);灵敏度(Se)高的是Ca2+(cut off=1.75 mmol/L),Se=81.1%,其次是Cr-,Se=78.3%(cut off=90 mmol/L);曲线下的面积(AUC)以血清K+高,为0.859(95%可信限:0.819~0.898),其它依次为P,Na+,Cl-,Mg2+和Ca2+,结果分别是0.550(0.494~0.607),0.507(0.450~0.564),0.442(0.386~0.498),0.424(0.368~0.479)和0.358(0.303~0.412).结论 自然灾害发生后,挤压伤患者的血清电解质异常较多见,常规性检测受难者血清电解质对正确评估其体内代谢状况和救护生命很有帮助.

    作者:俸家富;曾平 刊期: 2008年第06期

  • IL-1与选择素CD62L,CD62P,CD62E在小儿早期颅内感染性疾病中的临床意义

    目的 研究白细胞介素及选择素在小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎的临床诊断、治疗、病情转归和判断预后的应用价值.方法 以ELISA法分别检测小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗前以及正常对照组脑脊液白细胞介素1(Interleukine-1,IL-1);用流式细胞仪测定选择素CD62L,CD62P,CD62E含量.并探讨各指标与颅内感染鉴别诊断与预后的关系.结果 小儿急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗前脑脊液IL-1,选择素CD62P,CD62E,CD62L含量较对照组明显升高(P<0.01);急性细菌性脑膜炎及病毒性脑膜炎患者治疗后以上各指标明显下降(P<0.05).结论 脑脊液IL-1,选择素CD62L,CD62P,C62E含量水平的变化与颅内感染的临床变化有较密切的关系,可以作为大脑炎症病情变化的监测指标和预后判断指标,同时也为在脑膜炎发病早期使用抗黏附分子抗体及药物治疗提供临床实验依据.

    作者:孙宗钦;陈永生 刊期: 2008年第06期

  • HMGB1 A盒与LBPK95A融合基因的构建和原核表达

    目的 克隆、表达高迁移率族蛋白1 A盒(HMGB1 A box)与LBPK95A的融合基因.方法 经加端-PCR获得HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.该基因克隆到pGEX-4T-2载体中转化TOP10感受态细胞,测序鏊定.将A-LBP质粒转化E.coli BL21,30℃诱导表达4 h,超声裂解后经GSTrap FF蛋白纯化柱纯化,进行SDS-PAGE分析.结果 DNA测序证明,获得了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.SDS-PAGE分析表明,A-LBP融合蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的28%,GSTrap FF纯化后获得目的蛋白.结论 成功表达和纯化了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合蛋白.

    作者:姜南艳;于文彬;苏明权;沈建军;李立文;郝晓柯;张惠中 刊期: 2008年第06期

  • 原子吸收光谱法全血铅测定分析性能的初步评价

    目的 应用EP10-A2初步评价北京博晖BH2100型铅镉微量元素分析仪的检测性能.方法 依照EP10-A2实验方案,每天用仪器配套的高(203μg/L)、中(104μg/L)、低(51μg/L)三种国家二级标准物质进行铅检测,计算铅的偏差、总不精密度、斜率、携带污染、非线性、漂移,并进行t检验.结果 高值、中值和低值偏差分别为2.4,1.47,-0.07μg/L;总不精密度:高值4.12%,中值9.24%,低值10.12%;线性:1.459,携带污染率:1.522,非线性:0.008,漂移:-0.083.结论 BH2100型铅镉元素分析仪全血铅测定的偏差、总不精密度均在允许范围;在一定的范围内有良好的线性关系,携带污染率较低,稳定性较好,各项指标均能满足临床要求.

    作者:林莲英;徐建华;黄宪章;庄俊华;陈信;欧财文;郑智明;王云秀 刊期: 2008年第06期

  • 血脂异常与高尿酸血症的相关探讨

    目的 了解血脂异常患者血尿酸含量变化和临床意义.方法 选取血脂异常患者335例,其中男162例,女173例,年龄35~55岁,以体检无血脂异常健康人群376名为对照组.结果 血脂异常组有64例(19.1%)和对照组有8例(2.13%)血尿酸(UA)≥420μmol/L,两组患病率差异有统计学显著性意义(P<0.001),其中血脂异常高尿酸患病率男性比例高于女性(0.05

    作者:丁丽;马列婷;张阳;崔喜赟;党沛 刊期: 2008年第06期

  • Bayer ADVIA 120血细胞分析仪鞘液的研制和应用

    目的 研制Bayer ADVIA 120血细胞分析仪鞘液试剂,并与进口试剂进行比较.方法 分析原装试剂和自制试剂成分、理化性质,并进行重复性试验,相关性试验,数据结果做配对t检验和相关性分析.结果 自制鞘液的各项检测指标和进口试剂的检测结果基本一致,差异无统计学显著性意义(P>0.05),相关性良好(r>0.94).结论 自制鞘液可替代进口鞘液,值得推广应用.

    作者:李鹏;马列婷;王亚文;张宁;李雯;崔喜赟 刊期: 2008年第06期

  • 冠心病患者血清脂联素和超敏C-反应蛋白测定的临床意义

    目的 探讨冠心病患者血清脂联素(APN)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)改变的临床意义.方法 对148例疑诊冠心病的患者进行冠状动脉造影检查,根据造影结果分为冠心病组和非冠心病组,分别对其血清进行脂联素和超敏C反应蛋白的测定,并对结果进行分析.结果 冠心病患者血清APN水平(7.42±2.63 mg/L)显著低于对照组(13.12±2.87mg/L),而hs-CRP(9.62±3.12 mg/L)显著高于对照组(1.42±0.44 mg/L),两者之间呈负相关(r=-0.38,P<0.05).结论 检测hs-CRP和APN对冠心病的辅助诊断、疗效观察及预后判断具有重要价值.

    作者:戴丽萍 刊期: 2008年第06期

  • SYBR Green I实时荧光定量多重PCR快速筛查葡萄球菌中常见大环内酯类耐药基因

    目的 评价SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合熔解曲线分析快速筛查葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因的可行性,利用此筛查方法了解深圳地区葡萄球菌中大环内酯类耐药基因的分布情况.方法 选取经测序鉴定携带有大环内酯类耐药基因ermA,ermB,ermC,msrA的葡萄球菌,用一个包括这四种耐药基因引物的SYBR Gteen I多重实时荧光定量PCR检测,经荧光定量曲线和熔解温度曲线(Tm值)确证和反应条件优化后建立针对大环内酯类常见耐药基因的初筛体系;随机选取临床136株葡萄球菌,利用此初筛体系对136株葡萄球菌是否携带常见大环内酯类耐药基因进行检测,并对检测结果和表型、电泳、测序结果进行比较,从而对此方法进行评价.对携带有大环内酯类耐药基因的细菌进行基因型别的鉴定,以了解大环内酯类耐药基因的分布情况.结果 此SYBR Green I实时荧光定量多重PCR初筛体系检测葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因与表型检测比较达到94.8%(129/136)的一致性,与琼脂糖凝胶电泳结果和测序结果比较达到100%的一致性.136株葡萄球菌检出msrA,ermA,ermB,ermC四种耐药基因,耐药基因总检出率为75.7%(103/136),并发现多株携带多种大环内酯类耐药基因的葡萄球菌.结论 SYBR Green I实时荧光定量多重PCR可以快速准确地筛查葡萄球菌是否携带有常见的大环内酯类耐药基因;深圳地区葡萄球菌大环内酯类耐药率较高,主要耐药基因是ermC 56.6%(77/136),msrA24.2%(33/136),ermA12.5%(17/136).

    作者:夏成静;黄烈;陆学东;刘键;杨来智;张海燕 刊期: 2008年第06期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院