学术投稿

酶联免疫反应加速仪在酶联免疫反应的实验评价

陆奎英;包广宇;姚颖;张敏

关键词:酶联免疫反应加速仪, 评价
摘要:目的 通过对ELISA方法影响因素的分析,对酶联免疫反应加速仪进行评价.方法 应用正交试验设计对ELISA反应外界影响因素(温度、振动频率、反应时间)的优化,以检测HBsAg为例来进行评价.结果 在ELISA反应的三个影响因素中,振频和反应时间对结果有显著性影响(P<0.05),温度虽对结果有一定的影响但无显著性意义;酶联免疫反应加速仪检测HBsAg的低检出限与常规法都为1 ng/ml,二者差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 酶联免疫反应加速仪能够加速反应进行,反应的灵敏度和阳性检出率符合检测要求,而且具有良好的重复性和特异度.
现代检验医学杂志相关文献
  • 胰腺癌肿瘤标志物单项和联合检测的评价

    目的 应用受试者工作特征(ROC)曲线,对肿瘤标志物CA199,CEA在胰腺肿瘤诊断中的应用价值进行评价.方法 采用电化学发光免疫分析法检测胰腺癌患者、胰腺良性疾病患者及健康对照者血清中的CA199,CEA含量,分析并比较单项检测和联合检测的意义,通过ROC曲线评价CA199,CEA在胰腺肿瘤诊断中的应用价值.结果 与良性胰腺疾病组及健康对照组相比,胰腺癌组血清CA199,CEA含量差异均有统计学显著性意义(P<0.01);CA199+CEA,CA199,CEA的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.89,0.80,0.68.结论 通过ROC曲线评价CA199,CEA联合检测对胰腺肿瘤诊断有显著意义.

    作者:陈红梅;居会祥;孙明忠;肖丽华 刊期: 2011年第02期

  • 实验性2型糖尿病兔模型的建立及其血清物质变化研究

    目的 构建完整的、实用的、有效的2型糖尿病动物模型,动态监测2型糖尿病病理改变过程中血清指标的变化情况.方法 20只家兔随机分成2组:对照组5只,常规饲养,实验组15只,采用高脂高糖饲料喂养加5次耳缘静脉注射40 mg/kg链脲佐菌素(STZ)联合诱导的方法建立2型糖尿病兔动物模型,以空腹血糖≥11.0 mmol/ L作为造模成功的标准.观察糖尿病兔血清中血糖(FBG)、血脂(TG、TC)、C-反应蛋白(CRP)、胰岛素(INS)水平的变化.结果 实验组在饲养过程中,TG,INS,CRP水平升高,显著高于对照组(t为2.61,3.11,3.46,均P<0.05).首次注射STZ后2~7 d FBG,INS,CRP升高达到高峰,与对照组比较差异有统计学显著性意义(t=3.14,P<0.01;t=3.21,P<0.05;t=3.63,P<0.01),平均FBG≥16.0 mmol/L,无动物死亡,成模率80%.结论 高脂高糖饲料喂养加小剂量多次注射STZ可建立稳定的兔2型糖尿病模型,方法简便易行,死亡率低、成模率较高,可作为研究2型糖尿病的理想动物模型.

    作者:万莉;王旻晋;杨秋 刊期: 2011年第02期

  • 癌症病人循环无细胞DNA检测的意义

    该文内容涉及循环无细胞DNA的生物学、方法学以及癌症时循环无细胞DNA(cfDNA)的定量和质量特性改变的临床意义.关键是要用标准化的、分析敏感度较高的检测方法,使结果具有可比性.

    作者:王继贵 刊期: 2011年第02期

  • 凝血检测标本的采集、运送、处理和保存

    目的 探讨对血凝标本的采集、运送、处理和保存方法.方法 通过仔细研究凝血标本的采集、运送、处理和保存过程中可能存在的影响因素,探索保证检测结果的准确性的具体措施,并参照美国临床和实验室标准化研究院(CLSI) H21-A5及相关文件对常规方法进行优化.结果 优化后的方法在标本采集时强调了患者的隐私和抗凝剂与标本的比例;标本的运送、处理和保存方面根据标本的类型(基于血浆和基于分子两种标本类型)和检测项目提出了具体的优化措施.结论 实验室应该注意血凝检测标本采集、运送、处理和保存的规范化.

    作者:胡丽涛;王治国 刊期: 2011年第02期

  • PCR-HRM技术在华法林佳用药剂量关联基因单核苷酸多态性检测中的应用

    目的 新研究显示华法林佳用药剂量关联基因CYP2C9,CYP4F2和VKORC1可指导临床个体化用药,该成果的临床应用有赖于临床快速分子诊断方法的建立,为此该论文建立PCR-HRM(High-resolution melting)技术检测华法林佳用药剂量关联基因单核苷酸多态性(SNP)并进行应用评价.方法 采用国际前沿的基因突变筛查技术-HRM和新型荧光染料Eva Green对华法林佳用药剂量关联基因CYP2C9*2,CYP2C9*3,CYP4F2 V433M和VKORC1 1173C/T四个SNP位点先进行染料法荧光PCR,接着进行PCR产物的高分辨熔解,依据熔解峰的特点进行SNP分型即PCR-HRM技术建立,后通过检测临床181例标本进行临床应用评价.结果 在181例服用华法林的患者中检测到CYP2C9*2杂合子2例,CYP2C9*3杂合子15例,CYP4F2 V433M杂合子74例,纯合子14例,VKORC1 1173C/T杂合子33例.随机选择各类基因型PCR产物共24例进行测序,验证结果与检测结果一致.结论 PCR-HRM技术检测华法林佳用药剂量关联基因SNP是一种灵敏、简便、快捷的低成本检测方法,可用于临床常规化分子诊断.

    作者:王芳芳;尤崇革;李光迪;潘云燕;郜莉娜;李菲菲 刊期: 2011年第02期

  • 血浆置换治疗重型病毒性肝炎患者肝功能指标变化探讨

    目的 探讨血浆置换术对重型病毒性肝炎患者干预性治疗,通过观察治疗前与治疗后(72 h)肝功能、血凝检测结果指标变化,评估血浆置换术治疗重型病毒性肝炎的疗效.方法 回顾性的分析2008~2010年期间收治的108例重型病毒性肝炎实施血浆置换术患者血清肝功能、血凝检测指标变化,观察治疗前与治疗后(72h),总胆红素(TBIL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆汁酸(TBA)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、谷氨酰转肽酶(GGT)、胆碱酯酶(CHE)、总蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、总胆固醇(CHOL)、三酰甘油(TG)、钾离子(K+)凝血酶原时间(PT)、部分活化凝血酶原时间(APTT)、凝血酶原时间的国际标准化比值(INR)的变化.结果 108例实施血浆置换术的患者治疗后(72h)TBIL,ALT,AST,GGT,LDH,HBDH,PT,APTT和INR比治疗前低(P<0.01),TP,CHOL,TG治疗后比治疗前高(P<0.01),TBA治疗后比治疗前低(P<0.05),CHE,ALB,K+治疗后比治疗前高(P<0.05),以上项目差异均具有统计学意义.分析发现对血浆置换术疗效更具临床检测意义的项目是TBIL,ALT,AST,TBA,CHOL,PT(s)和INR等,而其余检测项目治疗前与治疗后差异虽有统计学意义,但对临床治疗的指导意义尚待进一步证实.108例重型病毒性肝炎患者接受血浆置换术治疗共222次,其中1次的有39例,2次的有36例,3次的有21例,4次的有12例,观察发现,早期行血浆置换的患者存活率较高,而在晚期患者即使给予多次血浆置换,存活率往往较低.因此,应强调对重型病毒性肝炎早期进行血浆置换治疗.结论 血浆置换术能够改善重型病毒性肝炎患者的肝功能和凝血水平,为肝功能的恢复和肝细胞的再生创造条件,是缓解重型病毒性肝炎患者的病情、等待肝移植手术的重要辅助治疗手段之一.

    作者:张宝华;林秀清;陈宇 刊期: 2011年第02期

  • 酶标仪自检方法的建立和应用评价

    目的 建立酶标仪的自检方法,检定酶标仪的各项性能指标.方法 参照<中华人民共和国国家计量检定规程-酶标分析仪>并利用分光光度计,对Multiskan MK3酶标仪各项性能指标进行检定.结果 Multiskan MK3酶标仪示值稳定性(0.001A)、波长示值误差(-1.0 nm)、波长重复性(0 nm)、吸光度示值误差(0.006 A)、吸光度重复性(0.17%)、灵敏度(0.018 L/mg)、通道差异(0.005A)及线性(1.88%)均检定合格.结论 具有性能优良分光光度计的临床实验室可进行酶标仪的自检.

    作者:余久如;黎增文;潘桂红;鞠萍 刊期: 2011年第02期

  • 联合试验对儿童珠蛋白生成障碍性贫血筛查的评价

    目的 评价红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、红细胞分布宽度(RDW)和红细胞脆性试验在珠蛋白生成障碍性贫血筛查中的价值.方法 应用血液分析、红细胞渗透脆性试验、醋酸纤维薄膜电泳分步对2009年6月17日~7月24日在云南省西双版纳州3个县的0~7岁儿童2 635例进行珠蛋白生成障碍性贫血筛查.结果 MCV,MCH,RDW及红细胞脆性试验单项检测在儿童珠蛋白生成障碍性贫血筛查中,各单项试验在筛查珠蛋白生成障碍性贫血时,除MCV灵敏度达97.7%、阴性预测值达97.9%外,其余指标则灵敏度不高.与单项检测比较显示,平行联合检测提高了诊断的灵敏度和阴性预测值,系列联合检测提高了诊断的特异度和正确率.结论 应用MCV,MCH,RDW-CV试验进行两两联合检测是筛查珠蛋白生成障碍性贫血较合理的方法.

    作者:姚莉琴;浦剑;邹团标;张艳;刘锦桃;赵钟鸣 刊期: 2011年第02期

  • DKK1在肺癌中的表达及其对肺癌细胞侵袭能力的影响

    目的 检测Dikkopf 1(DKK1)在肺癌组织及肺癌细胞系中的表达,并探讨其对肺癌细胞侵袭能力的影响.方法 采用免疫组化的方法检测DKK1在肺癌组织中的表达,应用Western blot检测了肺癌组织及其配对的正常肺组织和10个非小细胞肺癌细胞系中DKK1蛋白表达水平.通过已构建好的DKK1过表达的真核表达载体,将其转染到非小细胞肺癌细胞95C中,观察细胞侵袭能力的改变.结果 免疫组化检测肺癌组织中DKK1阳性表达率为76.2%.Western blot检测表明DKK1在肺癌组织中的表达明显高于配对的正常肺组织,在10个非小细胞肺癌细胞系中均有不同程度的表达.在非小细胞肺癌细胞系95C中过表达DKK1,95C细胞穿过Boyden小室的细胞数目明显增加.结论 DKK1在肺癌组织中呈高表达,并且在多个肺癌细胞系中表达,DKK1的过表达能够增加95C细胞的侵袭能力.

    作者:李书军;刘雪峰;闫洪江;牛秀兰;田刚;崔爱荣;吴文新 刊期: 2011年第02期

  • Sysmex XT-1800i,XS-800i和Mythic-22检测结果可比性研究

    目的 探讨日本Sysmex XT-1800i,Sysmex XS-800i和瑞士Mythic-22全自动血细胞分析仪对同一份标本测定结果的可比性.方法 以Sysmex XT-1800i为目标检测系统(对比方法),并对其进行精密度、准确度评价.以Sysmex XS-800i和Mythic-22为实验检测系统(实验方法).以门诊和部分住院患者新鲜全血进行血常规检测,对WBC及分类、RBC,HGB,HCT和PLT计算相关系数和回归方程,以美国临床实验室修正法规(CLIA'88)规定的室间质量评价允许误差的1/2为标准,判断不同检测系统WBC,RBC,HGB,HCT和PLT的可比性.结果 Sysmex XT-1800i血细胞分析仪WBC,RBC,HGB,HCT和PLT精密度在允许范围内,质控项目中除Sysmex XS-800i RBC高值外,其余项目在不同检测系统上的测定结果均具有可比性.非质控项目白细胞分类只有嗜碱性粒细胞相关性差,分别为r=0.349和r=0.427.结论 对该室内不同血细胞检测系统定期进行测定结果的可比性分析,以及时发现系统误差,并进行校准,为临床和患者提供准确的可比性报告.

    作者:高峰;张宏杰 刊期: 2011年第02期

  • 自体外周血干细胞移植治疗家兔肢体缺血

    目的 建立家兔肢体缺血模型并观察自体外周血干细胞移植的治疗效果.方法 连续4 d G-CSF7.5 μg/kg,每天皮下注射进行干细胞动员,分离外周血单个核细胞制成干细胞悬液.结扎离断腹股沟韧带至膝关节所有动脉分支并剔除股动脉,制备缺血模型,将干细胞悬液分10~12个点注射于手术切口两侧.结果 术后多普勒超声显示手术肢体的血液供应阻断,模型制备成功.4 w后实验组家兔缺血部位肌肉毛细血管密度平均为19.7个,对照组为12.4个,差异有统计学显著性意义(P<0.05).结论 自体外周血干细胞移植能促进新生血管生成,可有效改善肢体缺血.

    作者:韩光宇;任思坡;谭昆;拾莉;杨钦湘;房昉;耿跃春 刊期: 2011年第02期

  • 结肠癌组织中胆囊收缩素B受体的表达

    目的 探讨胆囊收缩素B受体(CCK-B)在人结肠癌组织及结肠癌旁组织中的表达情况,以筛选出有效的结肠癌生物学标志.方法 收集外科手术切除结肠癌组织标本41例和对应癌旁正常结肠组织,采用RT-PCR法检测结肠癌和癌旁组织中CCK-B受体mRNA的表达;采用免疫组化染色法检测CCK-B受体蛋白在结肠癌组织中的表达水平以及与临床分期和病理分级之间的关系.结果 经RT-PCR检测41例结肠癌组织中有36例CCK-B受体mRNA呈阳性,阳性表达率为87.8%;癌旁组织CCK-B受体mRNA有10例表达,阳性表达率为24.4%.两组间CCK-B受体mRNA阳性表达率经统计学处理,差异有统计学显著性意义(P<0.05).免疫组化检测显示41例结肠癌组织中CCK-B受体蛋白有34例呈阳性表达,阳性表达率为82.9%,癌旁组织CCK-B受体蛋白有6例表达,阳性表达率为14.6%,两组间CCK-B受体蛋白阳性表达率经统计学处理,差异有统计学显著性意义(P<0.05).结肠癌组织不同病理学分级各组间CCK-B受体阳性表达率经统计学处理,差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 CCK-B受体在肿瘤的发生发展过程中起一定的作用,CCK-B受体的表达可能是结肠癌发生的早期事件,可作为结肠癌临床诊断的生物学标志,并为结肠癌的临床治疗提供了有效的靶受体.

    作者:黄东凤;潘骅;张弘;章建国 刊期: 2011年第02期

  • 乙型肝炎影响孕妇产前筛查结果的研究

    目的 探讨乙型肝炎(简称乙肝)对于孕妇孕中期产前筛查结果的影响.方法 对14 611例正常孕妇和168例乙肝标志物HBsAg,HBeAg和HBcAb阳性(简称乙肝大三阳)的孕妇、364例乙肝标志物HBsAg,HBeAb和HBcAb阳性(简称乙肝小三阳)的孕妇进行神经管缺陷(NTD)筛查,并且对筛查出的高危NTD进行B超及随访至新生儿出生,评价三组的阳性率及假阳性率.结果 乙肝大三阳的孕妇高危NTD的阳性率为5.4%,假阳性率为5.3%,均高于正常孕妇(0.75%,0.5%)及乙肝小三阳孕妇(0.3%,0.3%).结论 乙型肝炎是导致孕妇产前筛查结果假阳性率增高的主要原因,建议对于乙肝大三阳的孕妇建立适合的风险判断标准.

    作者:何亚萍;乔国昱;轩维清;刘树平 刊期: 2011年第02期

  • 酶联免疫反应加速仪在酶联免疫反应的实验评价

    目的 通过对ELISA方法影响因素的分析,对酶联免疫反应加速仪进行评价.方法 应用正交试验设计对ELISA反应外界影响因素(温度、振动频率、反应时间)的优化,以检测HBsAg为例来进行评价.结果 在ELISA反应的三个影响因素中,振频和反应时间对结果有显著性影响(P<0.05),温度虽对结果有一定的影响但无显著性意义;酶联免疫反应加速仪检测HBsAg的低检出限与常规法都为1 ng/ml,二者差异无统计学显著性意义(P>0.05).结论 酶联免疫反应加速仪能够加速反应进行,反应的灵敏度和阳性检出率符合检测要求,而且具有良好的重复性和特异度.

    作者:陆奎英;包广宇;姚颖;张敏 刊期: 2011年第02期

  • 在AU2700生化分析仪上测定IgG限额参数MaxOD的设置

    对基于抗原抗体反应的免疫透射比浊反应当抗原过量(出现等价带及后带反应)时,其浊度大小与抗原含量的正比关系即不存在,可能导致错误结果.现以科华公司IgG测定为例,在AU2700生化分析仪上通过设定限额参数MaxOD,来自动识别抗原过量.

    作者:史连义;刘继勇;谢卫;张继领;王鑫 刊期: 2011年第02期

  • 肝功能血清学指标异常对抗核抗体检测结果的干扰分析

    目的 探讨肝功能损伤时引起的肝功能血清学指标升高对抗核抗体(anti-nuelear antibodies,ANA)检测结果是否存在干扰,从而造成ANA(1∶40)低滴度结果出现,为临床提供参考.方法 回顾性收集157例间接免疫荧光法检测ANA为1∶40低滴度的病例,按新华医院分诊制度分12岁以上成人组125例,12岁及12岁以下儿童组32例,分析其肝功能血清学指标:主要以丙氨酸氨基转移酶 (ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),碱性磷酸酶(ALP),γ-谷氨酰转肽酶(GGT)为主,同时分别收集成人66例,儿童42例ANA阴性的样本作为对照.结果 成人组125例ANA结果为1∶40低滴度的样本中,ALT阳性率为28.0%;AST阳性率35.2%;ALP阳性率26.4%;GGT阳性率33.6%,与ANA阴性对照组统计,P均<0.05,说明差异有统计学意义;儿童组32例,ALT阳性率为31.3%;AST阳性率43.8%;ALP阳性率90.6%;GGT阳性率25.0%,与ANA阴性对照组统计,除ALP组外,其它三组均P<0.05,说明差异有统计学意义.结论 肝功能损伤时引起的肝功能血清学指标异常升高,均对ANA检测结果存在干扰,会产生低滴度的结果.儿童因正常生长发育而引起的ALP升高,对ANA检测结果无干扰.

    作者:余悠悠;潘秀军 刊期: 2011年第02期

  • 自主研发血清尿素生化诊断试剂的临床研究

    目的 进行自主研发的血清尿素(Urea)生化诊断试剂自身的性能评价及研发试剂与进口优质Urae生化诊断试剂对血清Urae实验检测的可比性及偏倚评估,确认研发试剂是否符合临床要求,能否应用于临床.方法 自主研发血清Urea酶偶联速率法生化诊断试剂自身的性能评价:做空白吸光度、重复性和线性检测.两种试剂的比对和偏倚评估依据美国(CLSI)EP9-A文件标准[1],科学设计试验方案,以进口德国OLYMPUS(OLYMPUS)诊断试剂为对照组(X),国内中生北控生物科技公司(中生)诊断试剂为试验组(Y),在日本奥林巴斯(OLYMPUS) AU5421自动生化分析仪上测定血清Urea含量.标本选择高、中、低值血清Urea含量的临床患者血清共计100份,每天10份,每份标本正序、倒序各测定1次,记录测定结果,做统计学分析.结果 自主研发血清Urea生化诊断试剂空白吸光度、重复性和线性检测符合要求,X组试剂和Y组试剂对临床标本Urea的检测结果经统计学处理显示:方法内重复性检查,DX′i≤4DX′,DY′i≤4DY′、离群点检查Eij≤4E,Eij′≤4E′、线性回归r=0.999 0、系统误差的估计值及其置信区间 |(B)clow,(B)chigh|<允许误差,系统误差符合国际标准要求.结论 自主研发的Urea生化诊断试剂与公认的优质进口OLYMPUS生化诊断试剂两者间具有良好的相关性;自主研发Urea生化诊断试剂自身性能良好,安全性和有效性符合临床应用要求.

    作者:王惠萱;滕毅;佘文婕;贾雄飞;唐建国;陈忠明 刊期: 2011年第02期

  • 脓毒症和脓毒性休克的实验室诊断进展

    脓毒症(sepsis)是多器官功能障碍(MODS)的前兆,是当前危重病医学面临的棘手问题,由其导致的脓毒症性休克仍然是ICU中的主要死亡原因.尽管目前我国尚无确切的统计学数据,有资料显示:美国每年约有75万人发生脓毒症休克,病死率达50%以上[1].因此早期识别、诊断脓毒性休克,并及时进行充分、恰当的治疗是减少死亡、降低病死率的关键.

    作者:李小平;殷俊;朱卫平 刊期: 2011年第02期

  • Sysmex SF-3000血细胞分析仪复检规则的制定及应用

    目的 制定血细胞显微镜复检标准,保证血细胞分析结果准确性.方法 根据国际血液学复检专家组推荐的41条复检规则和涂片镜检阳性规则,结合齐齐哈尔医学院附属第三医院的具体情况制定血细胞镜检标准,对3 126份标本的数据分析,评价标准的可行性.结果 利用Sysmex SF-3000对3126份标本的结果分析,真阳性率12.83%,假阳性率17.79%,真阴性率66.5%,假阴性率2.88%.根据本实验室仪器性能特点,提出血细胞计数和白细胞分类的涂片复检规则,通过验证试验结果显示,血液病细胞无漏检情况.结论 制定血细胞显微镜复检标准,能够加强血细胞检查准确度,为临床提供更有价值的信息.

    作者:邢颖;曲妍;李亚东;高华增 刊期: 2011年第02期

  • 过敏性紫癜患儿Th17细胞表达及意义

    目的 探讨Th17细胞在儿童过敏性紫癜(henoch-schonlein purpura,HSP)免疫发病机制中的作用.方法 过敏性紫癜急性期患儿55例,采用流式细胞分析法检测外周血Th17细胞的比例,ELISA法检测血浆相关细胞因子IL-17和IL-6的水平,并进行相关性分析.同期选取20例同龄健康儿童作为对照.结果 HSP患儿外周血Th17/CD4+T细胞比例显著高于对照组[(1.91±0.78)% vs(0.52±0.24)%,(P<0.01)];HSP患儿血浆IL-17和IL-6的水平亦明显高于对照组[IL-17:(47.4±17.6)pg/ml vs (15.6±11.2) pg/ml;IL-6:(273.8±42.4)pg/ml vs(228.7±37.4)pg/ml,(P<0.01)].患儿血浆IL-17和IL-6的水平呈正相关(r=0.762,P<0.01).结论 过敏性紫癜急性期患儿Th17细胞比例增加,IL-17和IL-6水平升高,提示Th17细胞可能参与了HSP的发病及其炎性反应过程.

    作者:孟凡茹;李玮;杨静慈;王秀丽;庞晓璐 刊期: 2011年第02期

现代检验医学杂志

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主管:陕西省卫生厅

主办:陕西省临床检验中心,陕西省人民医院