王文婷；穆士杰；张献清
microRNA(以下简称miRNA)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码单链小RNA分子,通过与靶mRNA的3' UTR端(非翻译区)互补匹配,在转录水平对基因表达进行负向调控,导致mRNA翻译抑制或降解.在基因调控的研究中,大量使用miRNA,其主要的工具是miRNA的表达载体.miRNA真核表达载体广泛运用于各种生物体内基因的功能研究,该文就近年来miRNA载体构建方法给予综述,为各种基因功能的进一步研究奠定基石.
作者：周琼芝；王玉明；段勇 刊期： 2012年第05期
目的 了解连云港地区临床分离的大肠埃希菌质粒介导喹诺酮类抗菌药物耐药基因的携带状况,为临床喹诺酮类药物耐药的预防提供指导.方法 采用PCR检测88株分离自连云港地区的大肠埃希菌株的质粒介导喹诺酮耐药基因qnrA,qnrB,qnrS和aac(6')-Ib-cr,将阳性结果进行测序分析确认,并通过将aac(6')-Ib序列与Genbank登记序列比对以确定aac(6')-Ib-cr;分析基因阳性菌株的喹诺酮类药物的药敏结果.结果 在检测的大肠埃希菌临床分离株中,共检出qnr基因阳性7株(7.95%),其中qnrB基因2株(2.27%),qnrS基因5株(5.68%),未检出qnrA基因阳性菌株.检出aac(6')-Ib基因阳性菌株12株(13.64%),经测序确定其中6株(6.82%)为aac(6')-Ib-cr基因.检测出的12株qnr和aac(6')-Ib-cr基因阳性的大肠埃希菌中,8株对喹诺酮类耐药,3株对喹诺酮类敏感,1株对左旋氧氟沙星敏感但对环丙氟派酸耐药;有11株为产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株.结论 连云港地区临床分离的大肠埃希菌中存在qnr和aac(6')-Ib-cr基因阳性菌株的流行,喹诺酮类敏感菌株与耐药菌株中均有qnr基因和aac(6')-Ib-cr基因的存在.qnr和aac(6')-Ib-cr基因往往和ESBLs同时存在,应加强临床分离菌株的质粒介导喹诺酮类抗菌药物耐药基因监测,以防止其传播与流行.
作者：张丽；茆海丰；王春梅 刊期： 2012年第05期
目的 了解金黄色葡萄球菌(SA)的临床分布及耐药情况,为临床合理使用抗生素提供可靠的依据.方法 采用API鉴定系统进行菌种鉴定;K-B纸片扩散法进行药敏试验,按NCCLS2009年版标准判断结果;用WHONET软件对239株SA的耐药情况进行回顾性分析.结果 239株SA重症监护室分布多,其次为老年病科和神经外科,分别占35.6%,20.9%,13.8%;标本来源以痰液及脓液为主,分别为65.7%和23.4%;SA对阿奇霉素的耐药率高为86.5%,其次为青霉素及红霉素,分别为86.2%和86.28%,该菌对替考拉宁、万古霉素、利奈唑胺的耐药率都为0%,其次是阿米卡星,但耐药率高达60.1%.结论 SA对抗生素耐药率高且呈现出多重耐药现象,应引起临床高度重视.
作者：王华；苏宝凤；苍金荣 刊期： 2012年第05期
目的 分析迈瑞BS-420全自动生化分析仪测试项目间的试剂携带污染及其规避措施.方法 除脂肪酶为强盛生物试剂外,余均采用迈瑞试剂,根据方法学原理和试剂成分将常规生化检验项目分为六组,各组分别选择几对疑似污染物和被污染物,按照B,A,B,B,B的测试顺序测定(A为疑似污染物,B为被污染物),观察A对B的影响,B值在偏倚允许范围内为影响不显著,否则为影响显著,P值>0.05表示A测试对B测试的差异影响无统计学意义,P值<0.05表示A测试对B测试的影响差异有统计学意义.结果 CK(肌酸激酶,creatine kinase)(A)→Mg(镁,magnesium)(B)偏倚率50%,P<0.05;Lip(脂肪酶,Lipase)(A)→TBA(总胆汁酸,total bile acid)(B)偏倚率338%,P<0.05;TG(三酰甘油,triglyceride)(A)→Lip(B)偏倚率80%,P<0.05;余偏倚率均在4%以下,P值均＞0.05.结论 ①测试试剂中含有高浓度(10倍以上)的另一测试待测成分时对该一测试结果影响显著,6倍以下影响微小;②其余影响可以忽略不计.在日常工作中,合理设置测试顺序,经常注意保养维护仪器,保证各清洗功能良好,是保证分析结果可靠必不可少的一部分.
作者：宋国军；张军阳 刊期： 2012年第05期
目的 探讨成人2型糖尿病患者中无症状性菌尿(asymptomatic bacteriuria,ASB)的患病率及相关危险因素.方法 前瞻性入选2010年9月～2011年12月在北京天坛医院门诊就诊的114名成人2型糖尿病患者,平均年龄57.7±10.21岁,采集年龄、体质指数(BMI)、糖尿病病程、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹血糖、尿细菌计数、肾小球过滤率(Ccr)和24 h尿蛋白定量等资料.114例患者分为2组,ASB阳性组(n=30)和ASB阴性组(n=84).计量资料采用t检验进行比较,计数资料采用χ2检验比较,多因素分析采用Logistic多元回归分析.结果 入选病例中,ASB的患病率是26.32%(30/114),ASB常见病原菌为大肠埃希菌.单因素分析结果显示,两组间年龄(56.4±10.3岁 vs 60.3±9.6岁,t=-1.74,P=0.080),BMI(24.6±3.4 kg/m2 vs 25.0±4.0 kg/m2,t=-0.50,P=0.723),Ccr(87.03±37.8 ml/min vs 77.6±31.5 ml/min,t=1.18,P=0.242)及24 h尿蛋白定量(420.3±104.2 mg vs 452.7±101.3 mg,t=1.41,P=0.171)差异均无统计学意义.两组间HbA1c[(7.7±1.4)% vs (8.4±1.6)%,t=-2.15,P=0.032],糖尿病病程(7.1±8.2 年 vs 11.4±8.5年,t=2.33,P=0.022),空腹血糖(9.5±3.8 mmol/L vs 12.2±5.6 mmol/L,t=-2.73,P=0.007)和尿细菌计数(1 470.4±1 690/μl vs 2 765.4±2 458/μl,χ2=-2.96,P=0.038)差异有统计学意义.以糖尿病是否并发ASB为二分类因变量,入选年龄,BMI,糖尿病病程,HbA1c,空腹血糖,尿细菌计数,Ccr和24 h尿蛋白定量为自变量进行多元Logistic回归分析,结果显示,成人2型糖尿病患者并发ASB的危险因素包括:糖尿病病程[OR=1.23(1.11,1.36),P=0.013],HbA1c[OR=1.54(1.41,1.71),P=0.011]、空腹血糖[OR=1.36(1.24,1.49),P=0.017]、尿细菌计数根据不同计数值分段分析[OR=1.78(1.69,1.90),OR=1.83(1.73,1.97),OR=2.01(1.82,2.11),OR=2.23(2.06,2.26),OR=2.32(2.10,2.43),P均＜0.001]差异有统计学意义.结论 糖尿病病程、高HbA1c、高血糖、尿细菌计数可能是成人2型糖尿病并发ASB的危险因素.
作者：赵轶雯；史振伟 刊期： 2012年第05期
目的 分析无偿献血者血液检测不合格情况,探讨血液报废的原因及对策.方法 对安康地区2007年~2011年无偿献血者的血液检测结果进行统计分析.结果 血液检测总不合格率为4.01%,ALT异常2.06%,HBsAg阳性率1.16%,抗-HCV阳性率0.17%,梅毒-TP阳性率0.50%,抗-HIV阳性率0.12%,ALT超标和HBsAg阳性是血液报废的主要原因.结论 加强献血知识宣传和献血前征询,开展ALT,HBsAg和梅毒-TP 献血前快速筛检并做好质量控制可降低不合格率,减少血液报废.
作者：王会英；李宏 刊期： 2012年第05期
目的 研究分析西安地区无偿献血者ABO血型正反定型不一致的原因,提出解决办法,提高血型鉴定准确率,确保临床用血安全.方法 应用ABO 血型正反定型试验、唾液血型物质检测试验、抗人球蛋白试验、吸收-放散试验和谱细胞鉴定试验等检测ABO血型正反定型不一致的标本.结果 2011年1月～12月西安地区56 536例无偿献血者血型鉴定中,ABO血型正反定型不一致者74例,经血型确认试验检测分析鉴定,其中冷凝集素18例、亚型7例、确定不规则抗体49例,分别为:抗-M 14例,抗-N 10例,抗-Pl 1例,抗-Lea 2例,抗-Leb 10例,抗-Mur 1例,抗-S 5例,抗-HI 1例,抗-Jka 1例,抗-Dia 1例,抗-Dib 2例和抗-I 1例.结论 对于健康无偿献血者,不规则抗体、冷凝集素和亚型是造成血型鉴定正反不一致的主要原因,血站工作人员应熟练掌握疑难血型鉴定方法,分析各种复杂血型产生的原因并熟知其解决方法,以预防输血不良反应.
作者：张玲玲；孙文利；张献清 刊期： 2012年第05期
1型糖尿病,免疫介导形成的糖尿病,是相当普遍的一种疾病,它发生于遗传上易感的个体.此病同一系列抗胰岛自身抗体有关,此抗体可在高血糖发生前数年出现.该文将集中介绍临床和研究工作感兴趣的几种主要自身抗体,它们是:胰岛细胞胞浆自身抗体、谷氨酸脱羧酶自身抗体、胰岛素瘤2有关的自身抗体、胰岛素自身抗体以及锌转运蛋白8自身抗体等.
作者：王继贵 刊期： 2012年第05期
目的 探讨血清标本冷藏保存时间对梅毒甲苯胺红不加热血清(TRUST)试验结果的影响.方法 2011年8月～9月收集45份有临床症状且TRUST试验阳性的梅毒感染患者新鲜血清标本,3 000 r/min离心4 min,血清保存于2～8℃冰箱,连续7天进行TRUST试验.将研究对象分为混合组(45份),效价≥1∶16组(20份),效价<1∶16组(25份).①3组检测结果做重复测量资料方差分析;②分别统计效价≥1∶16组和效价<1∶16组,1～7天转为阴性的比率(转阴率)、效价降低比率及重复测量资料方差分析组内多重比较.结果 ①3组重复测量资料方差分析组间效应比较、组内效应比较差异均具有统计学意义(P<0.05),分组与重复检测时间无交互作用(P=0.961).②3组检测时间多重比较,仅第1天与第2天检测结果差异无统计学意义(P=0.141).③效价≥1∶16组,转阴率7天均为0;效价降低率2～4天均为5%,后3天均>30%;组内多重比较,第2～4天与第1天差异无统计学意义P>0.05.④效价<1∶16组,转阴率前4天均为0,后3天均>8%;效价降低率7天均>16%;组内多重比较,仅第2天与第1天差异无统计学意义(P=0.425).结论 将血清标本保存于2～8℃冰箱,TRUST试验结果2天内稳定(效价≥1∶16的可稳定至第4天),滴度效价从第2天起开始下降.进行TRUST试验,尤其是滴度效价测定时,好使用新鲜血清标本.
作者：李小妹；佘尚扬 刊期： 2012年第05期
目的 评价两种血清降钙素原定量检测系统性能,为实验室合理选择降钙素原检测系统提供依据.方法 参考美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件EP9-A2收集血清标本测定批内精密度、线性、相关系数.结果 检测系统A和检测系统B的低中高值测定结果的批内精密度分别为1.01%～4.44%和1.11%～8.77%之间;PCT测定结果相关系数为0.997 7.结论 两种检测系统降钙素原的检测结果具有较高的稳定性和相关性,但存在一定的偏差,临床实验室可根据需要选择不同的检测系统.
作者：汪丽儿 刊期： 2012年第05期
目的 利用Urisys2400尿液干化学分析仪分析探讨亚硝酸盐项目在尿液干化学分析人工显微镜复检筛选规则中存在的意义.方法 ①对参加实验的两位检验师进行随机标本双盲法人工显微镜检查,评价两者一致性.②用Urisys2400尿液干化学分析仪和KOVA尿液专用计数板人工显微镜检查同时对每日随机尿液标本进行检查.③采用SPSS 13.0软件进行McNemar检验和Kappa检验评价两个检验师人工镜检一致率;用χ2检验进行三联组合(红细胞-ERY,白细胞-LEU,尿蛋白-PRO)和四联组合(红细胞-ERY,白细胞-LEU,尿蛋白-PRO,亚硝酸盐-NIT)的灵敏度、特异度、假阴性(漏检率)、假阳性(复检率)差异统计,差异有统计学显著性意义(P<0.05).结果 ①两位检验师显微镜检查结果差异无统计学显著性意义(P＞0.05,κ＞0.70).②Urisys2400尿液干化学分析仪的三联组合和四联组合筛选方法差异无统计学显著性意义(χ2=1.09,P>0.05).③检查结果中NIT和LEU同时阳性者230例(占NIT阳性总例数的74.2%);NIT和ERY同时阳性者95例(占30.6%);NIT和PRO同时阳性者90例(占29.0%);单NIT阳性者70例(占22.6%).结论 亚硝酸盐项目在尿液干化学分析人工显微镜复检筛选规则中存在的意义不大,选用四联规则与三联规则相比,灵敏度没有提高,特异度有所降低,复检率增高.
作者：任军伟；陈建魁；丛玉隆 刊期： 2012年第05期
目的 建立一种简单、准确的血细胞分析仪性能评价方法.方法 依据CLIA'88规定的实验结果总允许误差(Tea%),用室间质量评价平均偏倚(Bias%)和室内质控变异系数(CV%),在Excel中用X,Y轴散点法作方法决定图(MD)、方法决定总图.结果 5个评价项目X,Y数据点分别为:红细胞(0.95%,2.05%)、血细胞比容(1.44%,0.63%)、血红蛋白(0.96%,3.63%)、白细胞(1.95%,0.19%)、血小板(5.45%,5.93%);方法决定总图5个数据点分别为:(15.83%,34.15%),(24.00%,10.47%),(137.10%,51.83%),(13.00%,1.24%),(21.80%,23.74%).结论 方法决定图评价仪器性能简单、准确,值得临床推广,迈瑞BC-5300血细胞分析仪性能良好.
作者：万延川；周雪宁；权志博 刊期： 2012年第05期
目的 利用杆状病毒表达系统表达耐甲氧西林金黄色葡萄球菌青霉素结合蛋白2a(PBP2a).方法 用EcoR I和BamHⅠ双酶切pGEMT-mecA重组质粒DNA,回收目的 基因mecA,与pFastBac1质粒连接转化入含有穿梭载体bacmid的大肠埃希菌DH10Bac中,筛选重组穿梭载体Bacmid-mecA并转染Sf9细胞,获取完整的重组杆状病毒.用免疫荧光(IFA),Western blot法进行蛋白鉴定.结果 成功地获得含mecA基因的重组杆状病毒.杆状病毒感染Sf9细胞形态变化明显,能够表达出与PBP2a多克隆抗体相结合的蛋白.结论 利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了PBP2a蛋白.
作者：邹玉涵；朱祖怀；闫佩毅；朱元；黄德魁；朱晴晖；金姝 刊期： 2012年第05期
目的 探讨福州地区妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染的分布特点及主要型别,为福州地区宫颈癌防治及流行病学研究提供一定依据.方法 采用PCR-反向点杂交法基因芯片技术,对2010年8月~2011年8月769例门诊妇女进行HPV基因分型检测,以了解福州地区HPV感染的年龄和亚型分布.结果 769例妇女中HPV阳性381例,阳性率49.5%,HPV感染的高峰年龄段为36～40岁,各年龄段HPV感染的阳性检出率差异有统计学显著性意义(χ2=33.02,P<0.01).23种HPV亚型中,检出21种.单亚型感染主要为HPV16,58,6,多亚型感染主要为HPV16,52,58.高危型HPV感染率从高到低依次为:16亚型占21.0%;58亚型占17.6%;52亚型占13.4%;18亚型占8.7%;31亚型占5.8%.低危型HPV感染主要为6亚型,占12.1%和43亚型占11.5%.结论 福州地区妇女高危型HPV感染主要以16,58,52,18,31亚型为主,低危型HPV感染主要以6,43亚型为主.36～40岁妇女为易感人群.
作者：林伟；徐桂秋；刘洁 刊期： 2012年第05期
目的 探讨一种乳腺癌患者石蜡包埋组织乳腺癌组织DNA提取方法并进行验证.方法 选择无自溶、退变或组织结构不清、大片出血的70例10 ml/dl甲醛固定石蜡包埋乳腺癌组织,在避免交叉污染的情况下,经过TES溶液水浴脱蜡后,先后用PBS缓冲液(pH7.2)及无水、95 ml/dl,75 ml/dl浓度梯度的乙醇60℃温浴4 h;加入含蛋白酶K的裂解液56℃消化72 h后,酚氯仿法抽提DNA.通过聚合酶链反应(PCR)、琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度仪测定A260nm/A280nm值,分析所提取DNA的质量.结果 62例(88.57%)石蜡组织标本DNA获得成功提取,所得DNA样本A260nm/A280nm比值为1.78±0.16,采用此条件处理的样本可获得足够数量的完整DNA,抽提率高,可满足后续临床研究需要.结论 改进的石蜡包埋组织提取DNA方法简单、经济,是较理想的非试剂盒法石蜡包埋组织DNA提取方法.
作者：康毓芝；王永兴；杨宝珍；韩恩善 刊期： 2012年第05期
血液输注已成为现代医疗救治过程中非常重要的环节之一,尤其是红细胞的输注.在各种血液病、慢性失血、慢性贫血等患者救治过程中,红细胞输注可有效纠正贫血和改善机体携氧状况,提高机体循环代谢功能.
作者：王文婷；穆士杰；张献清 刊期： 2012年第05期
目的 研究氟达拉宾(fludarabine,FDB)联合格列卫(STI571)诱导对慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562耐药性的影响.方法 通过逐步增加STI571的浓度诱导培养耐药性K562-R细胞,在STI571存在的情况下,用不同浓度(0,1,2,3,4,5 μmol/L)的FDB药物处理K562-R细胞,作用24 h后,收集细胞,进行Hoechst细胞染色计数,流式细胞仪检测肿瘤多药耐药基因MDR-1的表达,实时定量PCR(RT-PCR)检测 bcr-abl融合基因,细胞形态观察,western blot检测相关凋亡蛋白的表达.结果 成功得到K562-R细胞株,该细胞可以在浓度为0.8 μmol/L的STI571中稳定生长并且可以快速增殖,经过FDB药物处理K562-R细胞24 h后发现,实验中任何浓度的FDB均可降低K562-R细胞的耐药性,抑制细胞的生长,抑制率分别为23%,36%,47%,78%和93%,抑制率与FDB浓度呈正相关,并促使细胞进入凋亡期,相关凋亡蛋白的表达均能检测到,同时可以降低MDR-1和bcr-abl融合基因的表达,细胞形态观察也显示细胞出现大量死亡,K562-R的耐药性明显降低.结论 FDB联合 STI571 诱导K562 细胞,可以明显降低K562 细胞的耐药性,提高治疗效果,可为临床抗肿瘤免疫治疗提供新的借鉴与思路.
作者：苗玉迪；焦红侠；王晖；魏绪仓 刊期： 2012年第05期
目的 初步探讨测量不确定度在临床生化检验中的应用.方法 按照GUM和QUAM的要求,采用A,B类不确定度的计算方法,评定肌酸激酶(CK)的测量不确定度.结果 以长期重复性和方法学偏倚(方法学偏倚为参考方法与临床常规方法间的偏倚)为分量进行不确定度的评估,长期重复性和方法学偏倚均是构成不确定度的主要分量.结论 采用A,B类评定方法,以长期重复性和方法学偏倚为分量进行评估可能更能真实地反映测量结果的不确定度,为进一步研究提供一些思路和线索.
作者：张莹；周铁成；岳乔红；童开；郝晓柯 刊期： 2012年第05期
目的 分析两种不同原理的凝血仪检测PT和INR值的差异.方法 以Sysmex1500凝血仪为比对方法,Stago compact凝血仪为实验方法,检测50例体检健康者和患者新鲜血浆的PT和INR值,判断两个检测系统间测定结果的可比性.结果 两种不同原理的凝血仪PT值在11～16 s范围内,PT值的相对偏倚(SE%)分别为6.2%和7.3%,INR值在1.5处的相对偏倚为4.3%,＜1/2允许误差;但在医学决定水平20 s处PT值的相对偏倚(SE%)为7.8%,INR值在3.0处的相对偏倚为14.4%,＞1/2允许误差,偏倚不能接受.结论 实验室应定期对凝血仪的分析性能进行评估并建立不同原理凝血仪的参考值范围,好对来自临床不同科室的样本固定仪器检测,以免两仪器间的结果不同而误导临床诊断治疗.
作者：李芒会；李亚娥 刊期： 2012年第05期
目的 制备HBV-DNA荧光定量PCR检测质控物,评价其稳定性.方法 收集HBV-DNA阳性新鲜血清及HBV-DNA阴性新鲜血清,去除其他阳性指标(HAV-Ab,HCV-Ab,HIV-Ab和梅毒抗体)的标本后,分别充分混合,使用HBV-DNA阴性混合血清将HBV-DNA 阳性混合血清稀释至一定浓度后,灭活、分装,随机分为5组,即A,B,C,D和E组.A组:立即在佳条件下和常规条件下,应用HBV-DNA荧光实时定量PCR 检测试剂盒分别检测20次;B组:放置4℃冰箱48h后检测;C组:放置4℃冰箱48 h后,再置-20℃冷冻24h后复融检测;D组:在满足C组条件后,置-20℃冰箱冷冻24h后二次复融检测;E组:置-20℃保存12个月复融后检测.各组质控物均在常规条件下检测20次,分别计算各组均值的对数值、标准差和变异系数.结果 A,B,C,D,E组HBV-DNA质控物均值的对数值分别为4.611,4.590,4.600,4.638和4.571,经方差分析F=2.32＜F0.05(4,95)2.47,P＞0.05,均值的对数值之间差异无统计学显著性意义;标准差分别为0.211,0.198,0.221,0.191和0.214;变异系数分别为4.5%,4.3%,4.8%,4.1%和4.6%,标准差、变异系数之间差异很小.结论 HBV-DNA质控物制备简单,稳定性良好,适合临床检验中心进行室间质评(EQA)或现场EQA.
作者：邓演超；李全双；沈红艳；徐湛；任思坡 刊期： 2012年第05期
现代检验医学杂志
主管:陕西省卫生厅
主办：陕西省临床检验中心,陕西省人民医院
