学术投稿

pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定

李佳凌;李尹凤;汤军;蔡延森

关键词:梅毒螺旋体, 原核表达载体, 质粒pET 22b, 重组蛋白的表达
摘要:目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础.方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体.以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段.PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和Xho Ⅰ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接.连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定.后将质粒转化至BL21菌株中.挑取克隆,提质粒,进行鉴定.结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符.结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础.
西南医科大学学报杂志相关文献
  • 肾间质纤维化发生机制研究进展

    肾间质纤维化(interstitial fibrosis,RIF)是指由各种损伤因素引起的肾脏病理过程,组织学表现为肾间质内的成纤维细胞显著增生和细胞外基质的过度沉积.RIF是慢性肾病的终末阶段,预后很差;因此,深入了解RIF的形成机制,对指导其防治具有重要意义.长期以来,肾小管上皮细胞-间叶细胞转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)被认为是RIF的重要原因,不过新近有学者提出不同观点,认为EMT与肾间质纤维化无关,而是与周细胞-间叶细胞转分化以及间质微血管稀疏化密切相关,本文将就此作一综述.

    作者:王丽 刊期: 2014年第03期

  • 鼻咽癌常规放疗两种射野衔接方式的剂量分布研究

    目的:通过拍片方式比较鼻咽癌常规照射中心矢状面共线和完全共线两种衔接方式的剂量分布.方法:剂量胶片置于6 cm厚的固体水模中间,射野分别采用中心矢状面共线衔接和完全共线衔接两种方式布野.90°和270°射野y-设定为7.3cm,各出束200 MU拍片,0度颈切野Y+设定为7.4 cm为出束400 MU后再拍片,测量胶片的剂量曲线分布.结果:完全共线衔接方式拍片,中间的剂量跌落区宽度为2~3 mm;中心矢状面共线衔接方式拍片,中间剂量跌落区宽度为1~2 mm.结论:临床鼻咽癌常规放疗可采用矢状面共线方式衔接,并适当重叠照射.

    作者:孙小扬;杨波;庞皓文;罗惠群;吴虹;吴敬波 刊期: 2014年第03期

  • 门诊系统健康教育在高危妊娠管理中的作用

    目的:探讨在高危妊娠管理中门诊系统健康教育的重要性.方法:比较实施以孕妇学校培训和个体化健康教育相结合的系统健康教育与常规产前检查及健康教育对2组高危妊娠管理的影响及孕产妇满意度.结果:高危妊娠的不良结局发生率明显减少,两组新生儿窒息发生率比较有较大差别,观察组明显低于对照组(x2=3.431,P<0.05).观察组重度高危例数明显下降(x2=4.27,P< 0.05).孕产妇满意度提高,医患纠纷明显降低.结论:在产科门诊开展系统的健康教育,是加强高危妊娠管理的重要措施,是减少高危妊娠不良结局,提高产科质量的重要保障.

    作者:王惠英;潘旅平 刊期: 2014年第03期

  • 糖尿病大鼠胃黏膜内质网应激及大黄素调控

    目的:探讨内质网应激是否参与糖尿病大鼠胃黏膜损伤以及大黄素对其调节.方法:SD大鼠随机分为对照组、糖尿病组与大黄素组,成模10周后,免疫组化法检测各组胃黏膜细胞GRP78,Caspase12蛋白表达情况.结果:①与对照组相比,糖尿病组与大黄素组大鼠于造模后均出现多尿、多饮、多食症状,成模10周时,体重减轻(P<0.05);血糖浓度显著增高(P<0.05).②与对照组相比,糖尿病组大鼠胃黏膜GRP78、Caspase12蛋白阳性表达细胞显著增多(P<0.05);与糖尿病组相比,大黄素组GRP78、Caspase12蛋白阳性表达的胃黏膜细胞显著减少(P<0.05).结论:内质网应激途径可能介导了糖尿病大鼠胃黏膜损伤,大黄素可降低糖尿病大鼠胃黏膜细胞的内质网应激反应,从而实现对胃黏膜的修复.

    作者:赵宏贤;胥建辉;邹礼乐;刘广益;陈霞 刊期: 2014年第03期

  • pET 22b-TP17表达载体的构建与鉴定

    目的:采用原核基因工程技术构建表达梅毒螺旋体外膜脂蛋白TP17的载体,并进行酶切鉴定,为获得重组抗原TP17及其用于梅毒血清学诊断试剂的研究奠定基础.方法:将化学合成的寡核苷酸(oligo)通过PCR的方法拼接成TP17目的基因的序列,并将合成好的序列克隆入pMD18-T Simple载体.以pMD18-T Simple-TP17为模板,PCR扩增TP17基因片段.PCR产物通过1.5%琼脂糖凝胶电泳回收TP17条带,随后用EcoRⅠ和Xho Ⅰ对TP17回收所得片段及目的载体pET 22b进行双酶切并连接.连接产物电转化至感受态细胞DH10B中后,挑取克隆,提取质粒并鉴定.后将质粒转化至BL21菌株中.挑取克隆,提质粒,进行鉴定.结果:PCR扩增片段、双酶切均出现445 bp大小的目的基因条带,与预期结果相符.结论:本研究成功构建了重组质粒pET 22b-TP17,为下一步用IPTG诱导BL21菌株表达重组目的蛋白的研究奠定了基础.

    作者:李佳凌;李尹凤;汤军;蔡延森 刊期: 2014年第03期

  • 20G玻璃体切割术临床效果分析

    目的:探讨20G玻璃体切割手术的安全性和有效性.方法:选取2013年2月至2013年4月在我院行20G玻璃体切割术的患者44例(44眼).结果:术后视网膜完全解剖复位44眼(100%);玻璃体切割手术前与手术后1、2、3d眼压的差异具有统计学意义(P<0.05),与手术后1月眼压之间的差异无统计学意义(P>0.05);手术前与手术后1、2、3d、1月佳矫正视力的差异具有统计学意义(P<0.05),术后1d视力较术前提高21眼(47.7%);术后2d视力较术前提高25眼(56.8%);术后3d视力较术前提高27眼(61.4%);术后1月视力较术前提高32眼(72.7%);对术后视力<0.1与≥0.1的病例分析发现,视力的好坏与手术时间的长短存在关系(t=2.959,P=0.005);高度近视眼与非近视眼术后1月佳矫正视力之间的差异有统计学意义(x2=4.528,P=0.033),且非近视眼较高度近视眼手术效果好.结论:20G玻璃体切割术仍然是一种治疗玻璃体视网膜疾病安全有效的技术,手术成功率高、术后视力恢复理想、术后眼压控制理想.

    作者:田敏;吕红彬;何跃;欧阳科;李友谊;周琦 刊期: 2014年第03期

  • 外踝内固定器的临床初步应用研究

    目的:通过临床试验研究,论证外踝内固定器治疗外踝骨折的可行性及实用性.方法:病例30例均为闭合性骨折,随机分甲、乙两组,每组15例,分别选择外踝内固定器、重建钢板固定.术前对所有患者踝关节功能Baird-Jackson标准评分;术后复查记录X线片、内固定拆除时间、踝关节功能等.结果:30例患者术后9~20月随访,平均13.4±2.8月.甲组无术口感染、钢板松动或折断等并发症;乙组2例术口感染致乙级愈合,1例术后钢板螺钉松动借助石膏外固定3月终骨折愈合,遗留踝关节疼痛.两组骨痂生长定量指标、内固定拆除时间及术后踝关节功能评分等均有统计学意义(P< 0.05).结论:外踝内固定器系统适用于成人外踝Weber B和部分Weber C、Weber A骨折患者,对外踝特殊类型骨折如粉碎性骨折、骨质疏松患者更为适用;对骨折行三维立体环抱式固定,术后骨折愈合快,患肢功能恢复优良,临床应用取得满意效果.

    作者:葛建华;鲁晓波;卓乃强;万永鲜;罗雷茗 刊期: 2014年第03期

  • 腹腔镜右半结肠癌根治术46例临床体会

    目的:探讨腹腔镜右半结肠癌根治术可行性.方法:回顾性分析2012年3月至2013年12月行腹腔镜右半结肠癌根治术46例.全身麻醉,采用头高脚低两腿分开位,气腹压力12~14 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)采用五孔法,脐下10 cm处为观察孔,从中间入路解剖.结果:45例取得成功.手术时间100~160 min,术后7~12 d出院,1例因胃结肠静脉干出血中转开腹.结论:腹腔镜右半结肠癌根治术安全可行,术后随访2~12月无肿瘤复发,无并发症.但手术难度大,学习时间长,在有条件的医院可以推广.

    作者:王家兴;林龙英;李捷;李萍 刊期: 2014年第03期

  • 短期酸碱雾气暴露对作业工人肺功能的影响

    目的:探讨短期接触酸碱雾气对作业工人肺功能的影响.方法:选择318名短期接触酸碱雾气工人(酸碱组)和88名非接触工人(对照组)进行问卷调查和肺功能测定,以FEV1/ FVC%<70%,FEV1%<80%为肺功能异常标准.结果:在肺功能正常的情况下,无论吸烟否,酸碱组的第1秒用力肺活量(FEV1) (3.82±0.49/3.75±0.49)、用力肺活量(FVC) (4.35±0.56/4.23±0.57)均高于对照组FEV1(3.59±0.43/3.48±0.45)、FVC(4.00±0.44/3.87±0.44),差异有统计学意义(P<0.05);酸碱组中亚组分析显示,FEV1/FVC<80%亚组的FEV1、FEV/FVC%低于FEV1/FVC≥80%亚组,而FVC相反,若同时有吸烟,则同时存在MMEF、PEFR、MVV、FEF 25%~75%降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:短期接触酸碱雾气可致作业工人大气道功能代偿性增加,但若同时有吸烟,则存在小气道气流受限.

    作者:江丽;徐静静 刊期: 2014年第03期

  • 胰母细胞瘤的诊疗研究进展

    胰母细胞瘤是小儿胰腺恶性肿瘤中常见的一种[1-2].1977年,Dhebri等[3]首先提出了胰母细胞瘤(pancreatoblastoma)的概念,在此之前,这些肿瘤被描述为“婴幼儿胰腺癌”或“胰腺少年腺癌”[4].胰母细胞瘤好发于1~8岁的儿童,平均发病年龄为5岁.也有其他年龄组患者的报道,包括新生儿和老年人.男女之比为1.14∶1,Chung等[5]提出胰母细胞瘤多发生于亚裔患者,其中日本入居多.自1957年起,国内外报道约200例,多为独立个案,很难统计其确切的发病数.胰母细胞瘤发病率极低,小于1%,仅占胰腺非内分泌肿瘤的0.5%.正是由于胰母细胞瘤的罕见性,它的诊断与治疗给肿瘤科和外科医生带来了严峻的挑战,也需要我们进一步的探索与研究.

    作者:黄崇明 刊期: 2014年第03期

  • 小鼠颈动脉血栓模型的建立

    目的:探讨并建立颈动脉血栓模型.方法:采用FeCl3致颈动脉损伤,造成血栓形成,激光多普勒记录血栓形成曲线,HE染色观察血栓形态.结果:10%FeCl3损伤后,约137~366 s形成稳定血栓.结论:利用此方法所造颈动脉血栓模型操作简单,成功率高,适用于抗血栓药物筛选.

    作者:任美萍;李蓉;陈妮;罗茂;高驰丹;吴剑波 刊期: 2014年第03期

  • 关节镜清理术治疗膝骨性关节炎56例的临床研究

    目的:探讨膝关节镜关节清理术对膝关节骨性关节炎的疗效.方法:2006年4月至2012年5月对56例(59膝)膝关节骨性关节炎患者应用关节镜行关节清理术.术前和术后第6、12、24月观察膝关节疼痛、肿胀、关节功能情况并进行膝关节评分.结果:本组有53例(55膝)患者获得随访,随访时间6~24月.所有随访患者术后1~2月疼痛、肿胀明显缓解.无感染、无血肿形成、无深静脉栓塞.膝关节综合评分:术前与术后6、12、24月优良率的比较,差异均有统计学意义(P<0.05),术后2年内优良率大于70%,但有逐年下降趋势(P<0.05).结论:膝关节镜下关节清理术对膝关节炎早期病变有较好的近期疗效.

    作者:张孝华;吴元勇;胡奇 刊期: 2014年第03期

  • 手术室舒适护理模式对老年股骨头置换患者心理及心率的影响

    目的:观察分析手术室舒适护理模式对老年股骨头置换患者的心理情绪及心率的影响.方法:选取60例老年股骨头置换患者为研究对象,随机分为观察组和对照组各30例,对照组采用手术室常规护理模式,观察组采用舒适护理模式.采用焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)评价心理状况,监测并观察麻醉前及麻醉后心率波动范围,比较上述指标在2组患者中的差异,分析2种护理模式的效果.结果:2组患者术前1 d SAS和SDS评分无显著性差异,在不同护理模式下均顺利完成手术,术中未出现大出血、骨水泥漏等严重并发症.观察组麻醉前及麻醉完全苏醒后心率波动范围的差值也显著低于对照组(P<0.(05),术后1d观察组患者SAS和SDS评分显著低于对照组(P<0.05).结论:手术室舒适护理模式可降低患者术后的焦虑、抑郁等负性心理情绪,可避免术前及术后患者心率波动范围过大,维持心率稳定.

    作者:洪梅;程勇;曾莉兰 刊期: 2014年第03期

  • 优质护理服务在前列腺气化手术护理中的应用

    目的:探讨优质护理服务在前列腺气化手术护理中的效果.方法:将我院2012年到2013年收治的前列腺增生实施气化手术患者90例,按入室顺序编号分成2组,每组45例,对照组给予常规护理,试验组给予优质护理服务措施.护理前和护理后使用汉密顿焦虑量表(HAMA)进行评定;根据术前访视和术后回访患者所填满意度调查评定,观察优质护理服务在前列腺气化手术护理中的效果.结果:护理后,试验组的HAMA值为15.12±1.54,对照组的HAMA值为22.18±3.16,试验组明显低于对照组;护理后,试验组的满意度达到100%,明显高于对照组.2组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:优质护理服务在前列腺气化手术护理中的应用,大大提高了患者的心理耐受力和生理舒适度,对保障手术安全顺利进行起到了积极推进作用,值得推广.

    作者:葛晓莉 刊期: 2014年第03期

  • 离子色谱法测定替硝唑片中亚硝酸盐的含量

    目的:用离子色谱法测定替硝唑片中亚硝酸根的含量.方法:采用IonpacAS 11-HC型分离柱(4 mm×250 mm);淋洗液:氢氧化钾溶液(20mmoL/L);电导检测法.结果:亚硝酸根进样量在0.001~0.05 μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率为99.6%.结论:本方法简便、准确、快速,适用于替硝唑片中亚硝酸根的含量测定.

    作者:凌小云;余敏灵;陈文秋;陈彦 刊期: 2014年第03期

  • 姜黄素对氧化应激损伤后海马神经元血红素加氧酶-1的表达影响

    目的:探讨姜黄素对氧化应激损伤后的海马神经元血红素加氧酶-1 (heme oxygenase-1,HO-1)的表达影响.方法:将培养的原代海马神经元,分为6组:空白对照组、损伤对照组、姜黄素不同剂量治疗组(2.5μmol/L,5 μmol/L,10 μmol/L,20μmol/L).利用1 mmol/L的H2O2处理海马神经元1h,制作神经元氧化应激损伤模型.按照以上分组情况加入等浓度的姜黄素培养液,37℃、5% CO2孵箱孵育6h,采用倒置相差显微镜观察细胞的形态变化;免疫荧光、PCR半定量检测细胞内HO-1的表达.结果:①5 μmol/L组、10 μmol/L组细胞形态变化不明显;损伤对照组和2.5 μmol/L组细胞损伤明显;②损伤对照组与空白对照组比较,P< 0.05;损伤对照组与2.5 μmol/L组、20 μmol/L组两两比较差异无统计学意义(P>0.05);5μmol/L组、10μmol/L组与损伤对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);PCR检测结果提示20 μmol/L组比2.5μmol/L组HO-1的表达量减少.结论:姜黄素对氧化应激损伤海马神经元的保护机制可能是通过上调HO-1的表达实现的.

    作者:肖兴莉;杨朝鲜;高小青;陈秀 刊期: 2014年第03期

  • PNF技术对肘关节恐怖三联症术后功能恢复的影响

    目的:观察本体感觉神经肌肉促进疗法(PNF)对恐怖三联症术后肘关节功能恢复的临床疗效.方法:选取恐怖三联症术后患者40例,随机分为对照组和PNF组各20例.2组均于术后第2d、患者病情稳定后,进行常规肌肉牵伸、肌力训练、关节被动活动等康复治疗.PNF组增加等张训练、收缩-放松、动态反转和稳定性反转等PNF技术.4个月后,用关节活动度和Mayo评分对恐怖三联症术后肘关节功能恢复情况进行评估.结果:4个月后,PNF治疗组的关节活动度和Mayo评分均显著优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:PNF技术对恐怖三联症术后功能恢复有明显疗效,值得临床推广应用.

    作者:袁丽;郭声敏;LEE Lai Yee 刊期: 2014年第03期

  • 植皮联合VSD处理足踝创伤的临床疗效分析

    目的:观察负压封闭引流(VSD)装置结合游离植皮在治疗足踝创伤性皮肤缺损中的临床疗效.方法:20例足踝皮肤缺损的患者,一期先行清创手术,之后使用VSD持续负压吸引创面7~14 d,待创面新鲜无感染、肉芽新鲜时,行二期厚皮片或中厚皮片移植覆盖创面后继续予以VSD治疗10~14 d.结果:移植皮片全部成活,无感染等并发症发生.结论:对于下肢足踝皮肤缺损患者,采用VSD联合植皮治疗可有效助组织瓣修复创面,提高皮片成活率,降低感染风险.

    作者:尹一然;陈歌;鲁晓波 刊期: 2014年第03期

  • 石灰水致原发刺激性接触性皮炎1例

    1 临床资料患者,女,38岁.面部红斑、丘疹、渗液、脓痂伴瘙痒9d.9d前因家中粉刷油漆后于颜面部出现大小不等的红斑、丘疹、肿胀,感明显瘙痒,未予以重视.听说“石灰水”能中和油漆,遂自行外用“石灰水”外敷,皮损立即加重,出现明显渗液,之后自行服用“阿莫西林胶囊”治疗6d后,未见好转,且逐渐加重累及整个面部及耳后,表现为黄色脓性痂壳.病程中不伴畏寒、发热、咳嗽、腹痛、心慌等不适.为进一步诊治来诊,门诊以“接触性皮炎伴感染”收入院.自发病以来,患者食欲、睡眠欠佳,精神尚可,大小便正常.否认家族中有类似疾病.体检:全身系统检查未见异常.

    作者:张馨月;钟建桥;许飏 刊期: 2014年第03期

  • 输入性恶性疟疾1例并文献复习

    疟原虫是一类危害人体健康的寄生虫,其中因以恶性疟原虫感染所致的恶性疟疾的临床症状为严重,感染率及致死率在各种疟原虫中占首位,且逐年升高[1].恶性疟疾主要流行于热带和亚热带,随着外出务工人员、旅游人员等的来往频繁,国内输入性恶性疟疾病例数呈上升趋势.在恶性疟疾初发患者的末梢血中恶性疟原虫以小滋养体(环状体)为主,其体积小、形态多样,难以辨别,如果检验工作者缺乏经验,有可能导致镜检结果准确性降低,导致误诊或误报.现将笔者在临床工作中发现并确诊的恶性疟疾患者1例,报道如下.

    作者:王友强;兰由玉 刊期: 2014年第03期

西南医科大学学报杂志

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主管:四川省教育厅

主办:西南医科大学