周洪；沈佰华；李宁丽；郑泽铣；周光炎
目的建立一套新的同时纯化和复性工艺,用于基因重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的纯化.方法采用高效疏水作用色谱,直接从表达rhTNF-α的大肠杆菌裂解液中纯化rhTNF-α,并采用稀释法和透析法对上述样品进行复性研究.结果高效疏水作用色谱在纯化rhTNF-α的同时,可获得高复性效率.同时,也使原来需要几步才能完成的操作,在疏水作用色谱上一次完成,大大简化了操作步骤.用SDS-PAGE和考马斯亮兰染色,对纯化的rhT-NF-α进行分析和鉴定,其一步纯化的纯度达到95%以上,活性回收率分别较稀释法和透析法高2倍和3.5倍.结论建立的纯化及同时复性的新工艺,具有简单、快速和纯度高的优点.
作者：郭立安；黄亚渝；耿信笃 刊期： 2001年第06期
sTNF-R是细胞表面膜结合型肿瘤坏死因子受体(mTNF-R),经蛋白激酶等裂解而形成的.sTNF-R有两型:sTNF-RI和sTNF-RIⅡ.TNF(包括TNF-α和TNF-β)是一种具有多种生物学效应的炎性介质,其生物学活性通过与mTNF-R结合而介导[1].为了探讨HSP患儿血清sTNF-R的水平变化及其意义,我们检测了过敏性紫癜(HSP)患儿治疗前后、有无并发肾炎HSP患儿及其中9例治疗后复发的急性期HSP患儿血清sTNF-R的水平.
作者：马庆海；王玉龙；杨文东；安振国；綦映柳；魏延波 刊期： 2001年第06期
目的研究Doxycycline抑制雄性激素非依赖型前列腺癌细胞PC-3细胞金属蛋白酶蛋白酶的表达及其与体外侵袭转移能力的关系.方法以免疫组织化学方法和transwell小室法研究不同浓度的Doxycycline对PC-3中金属蛋白酶的表达的影响及对体外侵袭转移能力的影响.结果免疫组织化学方法检测结果表明Doxy-cycline可以抑制PC-3细胞对金属蛋白酶蛋白的表达,transwell小室法结果显示Doxycycline可以抑制PC-3的侵袭转移能力,且两者均具有浓度依赖性.结论Doxycycline可以抑制PC-3的侵袭及转移,与其抑制金属蛋白酶的表达有关.为Doxycycline治疗前列腺癌提供了实验依据.
作者：高晓康；王禾 刊期： 2001年第06期
目的研究新型凋亡因子-TRAIL基因在肿瘤基因治疗中的作用.方法用RT-PCR法,从Balb/e小鼠脾脏的总RNA中扩增出编码凋亡诱导功能区的TRAIL cDNA片段,并克隆入pUC-T载体中.经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入真核表达载体pSEC-hy-gromycin的免疫球蛋白κ链信号肽编码区的下游,形成含有κ链信号肽与TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,构建可分泌表达TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL.该重组载体经阳离子脂质体转染入小鼠前胃癌细胞株MFC615中,以台盼蓝拒染法和Hoechst3258荧光染色法,观察重组TRAIL对肿瘤细胞的凋亡效应.结果TRAIL的cDNA克隆成功,构建了可高效分泌表达可溶性TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL,该产物能显著促进MFC615肿瘤细胞凋亡.结论重组真核表达载体pSEC/TRAIL的成功构建,为研究肿瘤的基因治疗提供了理想的工具.
作者：居中华；苗怡；戴冰冰；钱关祥；陈诗书 刊期： 2001年第06期
多肽抗原需要与适当载体形成复合物才能诱导有效的免疫应答,但载体效应又难以避免.目前所用佐剂和连接方式很多,包括:将多肽抗原与BSA、KLH和HSP等蛋白偶联;以多抗原肽(MAP)连接方式提高多肽的拷贝数和相对分子质量(Mr);与一些毒素偶联;与树突状细胞(DC)共孵育;以QS-21或Quil A为佐剂;与其它多肽或MHC分子偶联形成复合物;以含CpG基序的寡核苷酸为佐剂;以HIV-1病毒M型的Tat(第53～68)、O-型的Tat(第9～20)和功能结构域Tat(第21～40)等多肽为佐剂;以LT(R192G)制作的粘膜免疫佐剂等.此外,还在构建脂肽和免疫刺激复合物(ISC0M)等方面做了大量的探索,取得了一些成果,但效果却各说不一.特别是人用佐剂还有不少问题,制作T细胞疫苗或CTL疫苗的佐剂还需要做更多的工作.
作者：吕凤林；何凤慈 刊期： 2001年第06期
目的观察培养人视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)核因子κB(Nucleartranscriptionfactor-κB,NF-κB)的表达,及地塞米松对其表达的影响.方法培养人RPE细胞接种于24孔板,随机分为阴性对照组、脂多糖(Lipolysaccharide,LPS)刺激组和地塞米松及LPS作用组,做免疫组化ABC法染色,显微镜下观察.结果对照组NF-κB在培养RPE细胞胞浆中表达,LPS刺激后转入胞核表达,地塞米松作用后,再以LPS刺激,RPE细胞核及细胞浆内NF-κB的表达减弱,胞核中表达水平减弱明显,且减弱的程度与地塞米松浓度有关.结论LPS能够激活RPE细胞的NF-κB使其向核内转入,一定浓度的地塞米松对RPE细胞的NF-κB表达及向胞核转入有抑制作用.
作者：田艳明；惠延年；宋宗明 刊期： 2001年第06期
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
作者：季洪赞；缪东培；段苏友；杨继红；李琳；胡拥军；商玮；邱龄龄；胡兰萍 刊期： 2001年第06期
目的建立人乳头瘤病毒16型E5基因的无性繁殖系,为进一步研究其致癌机理作准备.方法用PCR技术从HPV16质粒DNA中扩增出E5基因序列,连接到pGEM-T载体,将阳性的重组pGEM-T用BamH Ⅰ/EcoRⅠ双酶切并回收目的片段连接到原核表达载体pGEX-2T,转化DH5α菌株.取工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定.结果①经PCR、测序和双酶切鉴定,认为HPV16E5正确插入上述表达载体,建立了该转化基因的无性繁殖系.②经IPTG诱导的pGEX-2T-E5质粒表达出约42KD的融合蛋白,分析含有约16KD HPV16 E5蛋白,与预期含HPV16 E5的融合蛋白分子量相符.结论①采用PCR克隆技术,扩增HPV16 E5转化基因目的片段,将其克隆到pGEM-T载体在国内首次建立了HPV16 E5转化基因的无性繁殖子.②成功构建HPV16 E5基因的原核表达质粒,并表达出GST-E5融合表达蛋白.
作者：曹春霞；楚雍烈；刘文康；杨娥 刊期： 2001年第06期
IL-1是一种单核因子,主要由活化的单核一巨噬细胞产生,IL-1可作用于机体的各个系统,如参与免疫调节,介导炎症反应和影响组织代谢.IL-4是一种由TH2细胞产生的具有多种生物学活性的细胞因子,IL-4可抑制单核一巨噬细胞分泌IL-1和TNF-α,而且促进IL-1受体拮抗剂的表达.我们对慢性乙肝、肝硬化患者血清中IL-1β、IL-4水平进行了检测,旨在探讨IL-1β和IL-4在肝炎发病过程中的作用.
作者：王茸；金国娴；李正求；解放军第 刊期： 2001年第06期
随着人类基因组计划的完成,蛋白质的功能研究将成为后基因组时代的主要任务[1].任何蛋白质功能的发挥,离不开与其他蛋白质之间的相互作用.随着分子生物学方法的发展,出现了以基因文库为基础的蛋白探测、噬菌体呈现等技术,但这些方法反映的都只是蛋白的体外相互作用.酵母双杂交系统是一种新的直接在真核细胞内检测蛋白相互作用的新方法,灵敏度高[2,3].双杂交系统是基于一些转录激活因子(如酵母的Gal4蛋白和细菌的Lex4蛋白),往往由两个在结构上可以分开、功能上相互独立的结构域构成,这两个结构域在同一细胞内只要空间上靠近,就可以激活下游报道基因的表达[4].第三代酵母双杂交载体系统由pGBKT7和pGADT7组成,编码诱饵蛋白的基因一般融合到质粒pGBKT7中,表达文库一般构建在质粒pGADT7中.
作者：吴元明；陈苏民；陈南春；程轶梦；纪宗玲；杨力军 刊期： 2001年第06期
目的研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG-¨凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG-44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养.以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达.采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG-44胶质瘤细胞的凋亡.观察导人人PTEN基因对SHG-44细胞裸鼠致瘤能力的影响.结果获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG-44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达.透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现.流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰(12.9%).细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的梯状条带.转染空载体及未转染的SHG-44细胞未见明显的凋亡表现.转染PTEN基因后,SHG-44细胞对裸鼠致瘤能力明显降低.结论将外源性PTEN基因导入SHG-44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一.
作者：刘先珍；章翔；费舟；郭衍；荆俊杰；李侠；王煊 刊期： 2001年第06期
动物源性全抗体应用于人体往往会引起人抗动物抗体反应及过敏反应[1],将其小型化可显著降低这些不良免疫反应.目前,主要依赖基因工程技术来实现动物源性抗体的小型化,其中近10年来发展和逐渐成熟起来的噬菌体呈现技术是抗体小型化的佳方式[2,3].单抗(mAb)MG7是我所研制的一种特异性较高的鼠抗人胃癌的mAb,其针对的抗原在临床病例中的阳性率达90%,因此将其用于胃癌的靶向治疗具有一定的临床前景[4].为降低MG7全抗体用于体内研究时出现的强抗原性,我们以MG7杂交瘤为材料,利用噬菌体呈现技术,制备并筛选了mAb MG7ScFv,为进一步加强该mAb的应用研究奠定了基础.
作者：喻召才；丁杰；樊代明；张学庸 刊期： 2001年第06期
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能.结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组.疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用.结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子.
作者：马安伦；葛海良；王树军；张冬青；余奇文；徐红；林其德 刊期： 2001年第06期
随着噬菌体展示技术的发展,抗体库的构建方案日趋成熟,使人们可以从人源噬菌体抗体库中淘选到全人源化的基因工程抗体[1].为抗病毒、抗肿瘤以及自身免疫性疾病等的治疗,开辟了新的途径[2].
作者：张志超；胡学军；张红梅；安利佳；袁晓东 刊期： 2001年第06期
目的观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞周期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义.方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导人SMMC7721细胞中.细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP-PCR-ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721/pBBS212-hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达.结果与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高.结论转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,伴发1P21与P16表达水平的升高.本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据.
作者：张传山；王文亮；马福成；胡沛臻；赵一岭；刘利；张衍国 刊期： 2001年第06期
目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
作者：马骊；王小宁；张智清；曾革非；周小明；陈爱君 刊期： 2001年第06期
目的研究肥大细胞(MC)在IgA肾病患者肾间质中的分布及与间质纤维化的关系.方法采用甲苯胺蓝特殊染色法及MC特异酶(即类胰蛋白酶,tryptase)免疫组化染色法,对12例IgA肾病患者肾活检标本中的MC进行了观察.结果(1)肾脏皮、髓质均可见到MC,多见于纤维化区域、血管周围、萎缩或扩张小管周围及肾小球周围.(2)系膜细胞的增殖程度与MC数无关,而随着IgA肾病患者MC的数增加,间质纤维化加重,差异显著(P＜0.025).结论IgA肾病患者的肾间质中存在MC,并与肾间质的纤维化有关.
作者：左巍；赵红；刘亚革；张晓晨；左伟 刊期： 2001年第06期
男性不育症的原因非常复杂.近年已证明,免疫因素是其中的重要原因之一.精子有较强的抗原性,能刺激自身、同种生殖道局部产生特异性抗体.现已揭示,抗精子抗体(antisperm antibody,ASAb)是不育的重要免疫因素[1,2].为进一步探讨免疫不育的机制,我们检测了150例ASAb阳性男性不育患者精浆中的一氧化氮(mtric oxide,NO)含量.
作者：杨麦贵；郑善銮；钟丽辉；皇海；徐焰；于文彬；樊新；刘田；张竹映 刊期： 2001年第06期
目的探讨CHO-HB2细胞株表达抗HBsAg人IgG的影响因素.方法观察CHO-HB2细胞表达抗体的稳定性,不同培养基以及添加剂的效用,细胞接种密度和培养持续时间的选择,金属离子Zn2+诱导表达的作用,以及滚瓶的培养效果.结果CHO-HB2细胞的亚克隆株F4经液氮冻存半年多复苏后,在无氨甲喋呤(MTX)的培养基中连续传代第2个月,抗体表达量开始下降,5个月时接近用(MTX)施加选择压力前的基础水平.在培养基中添加多种氨基酸和维生素,并加入适量的Zn2+诱导金属硫蛋白启动子,可使表达量明显增加.滚瓶培养可进一步增加抗体的表达量,在无蛋白的无血清培养基中的表达量,从6.2mg/L提高到28mg/L.结论应及时用MTX对细胞株进行再加压筛选,以保持细胞稳定表达抗体的能力.通过优化培养条件,使用完全无蛋白的无血清培养基,可收到较好的效果,且有利于表达抗体的纯化.
作者：陈晓穗；王欲晓；朱迎春；张海荣；王琰 刊期： 2001年第06期
成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)是一类多功能的分子,现已发现其有多种同源结构形式,形成了一个生长因子的家族.酸性FGF(acidic FGF,aFGF),也称为FGF-1,是FGF家族中的主要成员,其结构与功能方面的研究受到广泛的关注[1,2].本室曾制备了抗人aFGF(haFGF)的单克隆抗体(mAb),并建立了检测haFGF的双抗体夹心测定方法[3,4].在此基础上,我们采用噬菌体多肽展示技术,筛选出抗haFGF mAb的抗原表位,为haFGF的免疫分析方法的进一步改进,以及对FGF结构与功能深入研究提供一些信息.
作者：王芳；刘宝英；张杰；薛沿宁 刊期： 2001年第06期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
