高晓康；王禾
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能.结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组.疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用.结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子.
作者：马安伦；葛海良；王树军；张冬青；余奇文；徐红；林其德 刊期： 2001年第06期
目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb).方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT-PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮吸附一洗脱一扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性.结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆.对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人Ig Vn基因.结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HV mAb奠定了基础.
作者：许国双；王汉民；陈威；杨为松；白雪帆 刊期： 2001年第06期
目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.
作者：于鸣；黎燕；贺永怀；孙瑛勋；沈倍奋 刊期： 2001年第06期
目的探讨白细胞介素10(IL-10)的表达和调控,在角质形成细胞诱导免疫抑制作用中的意义.方法从体外建立的混合表皮淋巴细胞培养体系(MELC)中,分离贴壁的角质形成细胞,并分析IL-10的表达来源.我们将抗IL-10单抗引入培养体系中,观察其对角质形成细胞所诱导的免疫抑制的影响.结果在混合培养体系中,IL-10主要来源于角质形成细胞.抗IL-10单抗可有效地阻断角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应.结论IL-10的表达在角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应中可能起重要作用.
作者：周洪；沈佰华；李宁丽；郑泽铣；周光炎 刊期： 2001年第06期
era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为E.coli RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且在真核生物(如蠕虫、小鼠和人)的组织中都发现有与细菌era高度同源的基因存在[2-4].人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人ERA蛋白与大肠杆菌ERA蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%.人era基因的功能尚不清楚.我们拟采用酵母双杂交技术,克隆了人era结合蛋白基因,研究了人era与其结合蛋白的相互作用,以便对其功能的研究提供依据.
作者：程轶梦；吴元明；陈苏民；陈南春；纪宗玲 刊期： 2001年第06期
随着噬菌体展示技术的发展,抗体库的构建方案日趋成熟,使人们可以从人源噬菌体抗体库中淘选到全人源化的基因工程抗体[1].为抗病毒、抗肿瘤以及自身免疫性疾病等的治疗,开辟了新的途径[2].
作者：张志超；胡学军；张红梅；安利佳；袁晓东 刊期： 2001年第06期
目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
作者：马骊；王小宁；张智清；曾革非；周小明；陈爱君 刊期： 2001年第06期
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
作者：季洪赞；缪东培；段苏友；杨继红；李琳；胡拥军；商玮；邱龄龄；胡兰萍 刊期： 2001年第06期
目的探讨细胞因子和抗Pgp单抗(mAb)对K562/ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用.方法利用K562细胞的耐阿霉素细胞株K562/ADM,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞术,分别检测mAb MRK-16及rhGM-CSF、rhM-CSF或TNF-α对其PgP表达的影响.结果将TNF-α(100 kU/L)、rhGM-CSF(10μg/L)或rhM-CSF(10μg/L)分别单独与K562/ADM细胞孵育48 h,Pgp表达细胞的阳性率分别为72.19%、80.04%和70.30%,与未经任何作用的K562/ADM细胞PgP表达的阳性率(77.02%)相比较,无明显差异(P＞0.05).mAb MRK-16(10 mg/L)以及mAb MRK-16分别与TNF-α或rhGM-CSF共同作用于K562/ADM细胞后,PgP表达的阳性率分别为67.49%、67.14%和70.56%,与K562/ADM细胞的表达率(77.02%)相比较,PgP的表达率虽有降低,但差别不明显(P＞0.05);只有rhM-GSF与mAb MRK-16共同作用(Pgp表达的阳性率为64.29%),可明显抑制K562/ADM细胞上Pgp的表达(P＜0.05).结论rhM-CSF加mAb MRk-16联合应用,具有逆转K562/ADM细胞MDR的作用.
作者：肖东杰；孙善会；张红；申红；刘宗印 刊期： 2001年第06期
动物源性全抗体应用于人体往往会引起人抗动物抗体反应及过敏反应[1],将其小型化可显著降低这些不良免疫反应.目前,主要依赖基因工程技术来实现动物源性抗体的小型化,其中近10年来发展和逐渐成熟起来的噬菌体呈现技术是抗体小型化的佳方式[2,3].单抗(mAb)MG7是我所研制的一种特异性较高的鼠抗人胃癌的mAb,其针对的抗原在临床病例中的阳性率达90%,因此将其用于胃癌的靶向治疗具有一定的临床前景[4].为降低MG7全抗体用于体内研究时出现的强抗原性,我们以MG7杂交瘤为材料,利用噬菌体呈现技术,制备并筛选了mAb MG7ScFv,为进一步加强该mAb的应用研究奠定了基础.
作者：喻召才；丁杰；樊代明；张学庸 刊期： 2001年第06期
目的研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG-¨凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG-44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养.以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达.采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG-44胶质瘤细胞的凋亡.观察导人人PTEN基因对SHG-44细胞裸鼠致瘤能力的影响.结果获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG-44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达.透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现.流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰(12.9%).细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的梯状条带.转染空载体及未转染的SHG-44细胞未见明显的凋亡表现.转染PTEN基因后,SHG-44细胞对裸鼠致瘤能力明显降低.结论将外源性PTEN基因导入SHG-44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一.
作者：刘先珍；章翔；费舟；郭衍；荆俊杰；李侠；王煊 刊期： 2001年第06期
目的探讨内皮素(ET)及降钙素基因相关肽(CGRP)在类风湿性关节炎(RA)发生、发展过程中的作用.方法采用放射免疫分析法,对30例RA患者及20例正常对照组血浆中ET及CGRP的水平进行检测.结果RA患者血浆中ET的水平及ET/CGRP的比值明显升高,CGRP水平明显降低,与正常对照组相比较差异显著(P＜0.01).进一步分析表明,活动期RA患者及关节x线改变为Ⅲ～Ⅳ期的RA患者,血浆ET的水平及ET/CGRP的比值明显高于稳定期及关节改变为Ⅰ～Ⅱ期的RA患者;而血浆CGRP的水平明显低于后者(P＜0.01).结论RA患者体内存在明显地ET及CGRP的平衡失调,且与RA患者的病情严重程度密切相关,提示ET及CGRP参与了RA的发病过程.
作者：石晓彤；王晓非；蒋莉；赵丽娟 刊期： 2001年第06期
目的观察反义端粒酶RNA对SMMC7721细胞周期的影响,检测P16和P21的表达,探讨端粒酶与细胞周期调控间的关系及反义端粒酶RNA在肝癌基因治疗中的意义.方法经脂质体介导,将反义端粒酶RNA真核表达载体pBBS212-hTR导人SMMC7721细胞中.细胞克隆转移扩大培养后,采用流式细胞仪、TRAP-PCR-ELISA及免疫组化技术,结合图像分析,在检测SMMC7721/pBBS212-hTR细胞端粒酶活性的同时,检测P16和P21的表达.结果与对照组相比较,反义端粒酶RNA在抑制SMMC7721细胞端粒酶活性的同时,P16和P21蛋白的表达水平显著增高.结论转染反义端粒酶RNA在封闭细胞端粒酶活性表达的同时,伴发1P21与P16表达水平的升高.本实验研究为探讨肝癌发病机制及治疗提供了一定的依据.
作者：张传山；王文亮；马福成；胡沛臻；赵一岭；刘利；张衍国 刊期： 2001年第06期
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是一种针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体,1982年,Bavies等在少数非典型血管炎患者中发现.目前认为ANCA与某些疾病,尤其是自身免疫性病相关,并将其作为诊断系统性血管炎等相关疾病的血清学标志物.其主要检测方法为免疫荧光染色. 应用间接免疫荧光法(IIF)可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA两类.C-ANCA的靶抗原主要为蛋白酶3(PR-3)相对分子质量(Mr)为29000,P-ANCA针对的靶抗原主要为髓过氧化物酶(MPO)Mr为120000.抗PR-3自身抗体与韦格氏肉芽肿密切相关,抗MPO自身抗体与原发性局部坏死性肾小球肾炎密切相关.除PR-3和MPO以外粒细胞胞浆内碱性磷酸酶也可能是ANCA的靶抗原之一.随着ANCA及靶抗原研究的进展,检测ANCA的方法也逐步完善.
作者：靳淑玲；王北宁 刊期： 2001年第06期
目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中Fas、FasL与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系.方法以非毒性甲状腺肿(NTG)的标本为对照,采用TUNEL及免疫组织化学双标记法,分别检测16例HT患者甲状腺标本中细胞凋亡水平及PCNA、Fas、FasL的表达及分布.结果凋亡率(AR)在NTG组为(0.9±0.64)%,HT组为(33.92±14.69)%;增殖率(PR)分别为(4.23±2.36)%和(8.45±3.61)%.AR、PR在HT组均显著高于NTG组(P＜0.01).HT中部分甲状腺滤泡细胞PCNA与Fas、FasL共表达;浸润淋巴细胞PCNA高表达,Fas/FasL弱或无表达.结论HT中甲状腺滤泡细胞凋亡与增殖活动均活跃,凋亡水平增高更为显著;浸润淋巴细胞增殖活跃,凋亡少见.其凋亡和增殖的失平衡可能是HT病理改变的主要机制之一.
作者：宋民喜；张雅萍；姬秋和；马福成；杨守京 刊期： 2001年第06期
酒精对人体心、肝和脑等器官的损害已众所周知，其降低人体红细胞的变形性（RCD）也有报道，但其对人体红细胞免疫功能的影响，尚未见报道。为此，我们观察了山东省利津县长期大量饮酒者红细胞免疫功能的状态。
作者：杨文东；王光红；安振国；綦映柳；陈明 刊期： 2001年第06期
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)是一种血管内皮细胞特异的有丝分裂原,对血管的通透性也起重要作用.许多研究表明,肿瘤组织中VEGF的高表达和肿瘤的增殖、转移密切相关[1],但有关VEGF表达的调控机制仍未被彻底阐明,近一些实验表明,头颈部肿瘤、胃癌等肿瘤组织p53基因的突变与肿瘤细胞VEGF的表达有一定的相关性
作者：孟冬娅；薛文成；胡晓芳；胡华；王一楠；罗军 刊期： 2001年第06期
甘露糖结合凝集素(mannose-bindinglectin,MBL)是哺乳动物C型凝集素超家族的成员,在机体抗感染免疫反应中处于第一线[1].MBL能特异性地识别多种病原微生物表面的多糖结构,进而激活补体系统和调理吞噬杀灭病原[2,3].同时,它也参与多种免疫性疾病的发生[4].目前,有关其与疾病的关系,以及其在疾病治疗和预防中作用的研究正方兴未艾,因而获取有活性的MBL蛋白,并制备其特异性抗体,已成为这些研究必不可少的工具.
作者：金振晓；胡军；胡巧侠；刘维永；陈南春；陈苏民；纪宗玲 刊期： 2001年第06期
目的通过计算机同源模建,寻找丙型肝炎高变区中保护性多肽抗原表位.方法用计算机同源模建预测多肽的抗原性,然后用淋巴细胞转化试验验证其抗原性.结果同源模建与实验结果相一致.结论同源模建是一种高效寻找具有保护性的抗原多肽的经济快速的方法.
作者：苏琴；郑宇；林芳；赵军；李伯安；李静；高蓉；程云 刊期： 2001年第06期
粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统,主要表现在以下几个方面:(1)MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层(弥散淋巴组织),或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织(mucosalassociated lymphoid tissues,MALT),包括:肠相关淋巴组织(GALT)、支气管相关淋巴组织(BALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)等.机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统.(2)MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白,即分泌型IgA(secretory IgA,sIgA)和sIgM.
作者：李国平；杨恬 刊期： 2001年第06期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
