肖东杰；孙善会；张红；申红；刘宗印
目的构建人抗汉坦病毒(HV)抗体重链可变区(VH)基因噬菌体表面展示文库,筛选人源性抗HV单克隆抗体(mAb).方法从HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,用RT-PCR扩增VH基因,与噬菌粒pHEN1连接,构建VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮吸附一洗脱一扩增的亲和筛选后,用ELISA鉴定抗HV噬菌体抗体的活性.结果HV吸附筛选的特异性人外周血B淋巴细胞中,成功扩增出VH基因,并构建了VH基因噬菌体表面展示文库.经3轮亲和筛选,获得24个具有与HV结合活性的重组噬菌粒克隆.对其中一个克隆的VH基因(VH-D10)的序列分析表明,该基因的全长为363bp,编码121个氨基酸,与EMBL和GenBank中所有已知免疫球蛋白(Ig)基因进行同源性比较,其同源序列均为人Ig Vn基因.结论成功地构建了人抗HV抗体VH基因噬菌体表面展示文库,并筛选到有HV结合活性的重组噬菌体克隆,为制备人源性抗HV mAb奠定了基础.
作者：许国双；王汉民；陈威；杨为松；白雪帆 刊期： 2001年第06期
目的探讨CHO-HB2细胞株表达抗HBsAg人IgG的影响因素.方法观察CHO-HB2细胞表达抗体的稳定性,不同培养基以及添加剂的效用,细胞接种密度和培养持续时间的选择,金属离子Zn2+诱导表达的作用,以及滚瓶的培养效果.结果CHO-HB2细胞的亚克隆株F4经液氮冻存半年多复苏后,在无氨甲喋呤(MTX)的培养基中连续传代第2个月,抗体表达量开始下降,5个月时接近用(MTX)施加选择压力前的基础水平.在培养基中添加多种氨基酸和维生素,并加入适量的Zn2+诱导金属硫蛋白启动子,可使表达量明显增加.滚瓶培养可进一步增加抗体的表达量,在无蛋白的无血清培养基中的表达量,从6.2mg/L提高到28mg/L.结论应及时用MTX对细胞株进行再加压筛选,以保持细胞稳定表达抗体的能力.通过优化培养条件,使用完全无蛋白的无血清培养基,可收到较好的效果,且有利于表达抗体的纯化.
作者：陈晓穗；王欲晓；朱迎春；张海荣；王琰 刊期： 2001年第06期
CRG-2属于趋化因子家嗾中的CXC亚族,人源类似物称为IP-10,其受体CXCR3主要分布于激活的T细胞[1].趋化因子是一类在炎性因子刺激下表达的小分子分泌蛋白,参与淋巴细胞的定向迁移、渗出与激活,在伤口愈合及炎症中有重要作用[2].初认为,趋化因子主要对不同的淋巴细胞亚群有作用,随后发现其也参与其它的生理及病理过程,如趋化因子受体可作为HIV感染的辅助受体参与艾滋病的发病,以及血管生成的调节等[3].为探讨趋化因子作为候选分子在肿瘤抑制疗法中的应用,我们选择了对T细胞有特异性趋化作用的鼠CRG-2分子,构建真核表达载体,转染了Lewis肺癌细胞系.
作者：刘志国；杨静华；安华章；吴汉平；王海燕；韩者艺；樊代明 刊期： 2001年第06期
成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)是一类多功能的分子,现已发现其有多种同源结构形式,形成了一个生长因子的家族.酸性FGF(acidic FGF,aFGF),也称为FGF-1,是FGF家族中的主要成员,其结构与功能方面的研究受到广泛的关注[1,2].本室曾制备了抗人aFGF(haFGF)的单克隆抗体(mAb),并建立了检测haFGF的双抗体夹心测定方法[3,4].在此基础上,我们采用噬菌体多肽展示技术,筛选出抗haFGF mAb的抗原表位,为haFGF的免疫分析方法的进一步改进,以及对FGF结构与功能深入研究提供一些信息.
作者：王芳；刘宝英；张杰；薛沿宁 刊期： 2001年第06期
动物源性全抗体应用于人体往往会引起人抗动物抗体反应及过敏反应[1],将其小型化可显著降低这些不良免疫反应.目前,主要依赖基因工程技术来实现动物源性抗体的小型化,其中近10年来发展和逐渐成熟起来的噬菌体呈现技术是抗体小型化的佳方式[2,3].单抗(mAb)MG7是我所研制的一种特异性较高的鼠抗人胃癌的mAb,其针对的抗原在临床病例中的阳性率达90%,因此将其用于胃癌的靶向治疗具有一定的临床前景[4].为降低MG7全抗体用于体内研究时出现的强抗原性,我们以MG7杂交瘤为材料,利用噬菌体呈现技术,制备并筛选了mAb MG7ScFv,为进一步加强该mAb的应用研究奠定了基础.
作者：喻召才；丁杰；樊代明；张学庸 刊期： 2001年第06期
目的探讨白细胞介素10(IL-10)的表达和调控,在角质形成细胞诱导免疫抑制作用中的意义.方法从体外建立的混合表皮淋巴细胞培养体系(MELC)中,分离贴壁的角质形成细胞,并分析IL-10的表达来源.我们将抗IL-10单抗引入培养体系中,观察其对角质形成细胞所诱导的免疫抑制的影响.结果在混合培养体系中,IL-10主要来源于角质形成细胞.抗IL-10单抗可有效地阻断角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应.结论IL-10的表达在角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应中可能起重要作用.
作者：周洪；沈佰华；李宁丽；郑泽铣；周光炎 刊期： 2001年第06期
目的寻找肝癌细胞表达的肿瘤抗原肽.方法应用0.2mol/Lph3.0柠檬酸缓冲液酸洗肝癌细胞系HHCC,经Sephadex G-25过滤及反向高效液相色谱分离纯化,获得可与HLA-Ⅰ类分子结合的不同组分短肽.将其与抗原加工缺陷的HLA-A2+T2细胞反应,进行肿瘤细胞特异性表位测定,同时进行CTL杀伤鉴定.结果获得4个可与HLA-A2结合的组分,其中2个可以激发较强的CTL杀伤反应.结论肝癌细胞系HHCC中存在能够激发CTL特异性反应的肿瘤抗原肽,并证实上述寻找肿瘤抗原肽的技术路线具有可行性.
作者：郭爱林；隋延仿；叶菁；曲萍；张晓楠；张延凤；李增山 刊期： 2001年第06期
目的探讨细胞因子和抗Pgp单抗(mAb)对K562/ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用.方法利用K562细胞的耐阿霉素细胞株K562/ADM,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞术,分别检测mAb MRK-16及rhGM-CSF、rhM-CSF或TNF-α对其PgP表达的影响.结果将TNF-α(100 kU/L)、rhGM-CSF(10μg/L)或rhM-CSF(10μg/L)分别单独与K562/ADM细胞孵育48 h,Pgp表达细胞的阳性率分别为72.19%、80.04%和70.30%,与未经任何作用的K562/ADM细胞PgP表达的阳性率(77.02%)相比较,无明显差异(P＞0.05).mAb MRK-16(10 mg/L)以及mAb MRK-16分别与TNF-α或rhGM-CSF共同作用于K562/ADM细胞后,PgP表达的阳性率分别为67.49%、67.14%和70.56%,与K562/ADM细胞的表达率(77.02%)相比较,PgP的表达率虽有降低,但差别不明显(P＞0.05);只有rhM-GSF与mAb MRK-16共同作用(Pgp表达的阳性率为64.29%),可明显抑制K562/ADM细胞上Pgp的表达(P＜0.05).结论rhM-CSF加mAb MRk-16联合应用,具有逆转K562/ADM细胞MDR的作用.
作者：肖东杰；孙善会；张红；申红；刘宗印 刊期： 2001年第06期
粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统,主要表现在以下几个方面:(1)MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层(弥散淋巴组织),或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织(mucosalassociated lymphoid tissues,MALT),包括:肠相关淋巴组织(GALT)、支气管相关淋巴组织(BALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)等.机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统.(2)MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白,即分泌型IgA(secretory IgA,sIgA)和sIgM.
作者：李国平；杨恬 刊期： 2001年第06期
多肽抗原需要与适当载体形成复合物才能诱导有效的免疫应答,但载体效应又难以避免.目前所用佐剂和连接方式很多,包括:将多肽抗原与BSA、KLH和HSP等蛋白偶联;以多抗原肽(MAP)连接方式提高多肽的拷贝数和相对分子质量(Mr);与一些毒素偶联;与树突状细胞(DC)共孵育;以QS-21或Quil A为佐剂;与其它多肽或MHC分子偶联形成复合物;以含CpG基序的寡核苷酸为佐剂;以HIV-1病毒M型的Tat(第53～68)、O-型的Tat(第9～20)和功能结构域Tat(第21～40)等多肽为佐剂;以LT(R192G)制作的粘膜免疫佐剂等.此外,还在构建脂肽和免疫刺激复合物(ISC0M)等方面做了大量的探索,取得了一些成果,但效果却各说不一.特别是人用佐剂还有不少问题,制作T细胞疫苗或CTL疫苗的佐剂还需要做更多的工作.
作者：吕凤林；何凤慈 刊期： 2001年第06期
随着神经生物学的飞速进展,神经细胞原代培养成为神经药理、病理生理及活性物质等方面研究的一个很好模型.为此,观察和分析神经元体外特性(神经元存活、突起生长以及神经元形态变化等)的一些指标也相继出现.由于分散的单一细胞培养能够比较理想地反映在体情况,现多选用这一方法进行体外调控和观察.但是培养中细胞脱落和细胞重聚现象又给结果分析造成一定困难,影响了实验结果的客观性.因此,需选择合适的细胞外基质来解决这些问题.常用的细胞外基质有胶原和多聚赖氨酸.胶原Ⅳ(collagenⅣ)是一种细胞支持物,它是细胞外基质的主要成分,可直接或间接参与细胞的附着[1];多聚赖氨酸(PLL)可通过改善培养皿的电荷状况及吸附培养液成分,促进细胞贴壁[2,3].然而两种方法各有利弊,本实验在常规的技术方法基础上,联合应用两种基质,旨在探索更适于分散单一神经元生长和存活的新方法.
作者：王春婷；杨浩；许汉鹏；孟晋宏；游思维；鞠躬 刊期： 2001年第06期
IL-1是一种单核因子,主要由活化的单核一巨噬细胞产生,IL-1可作用于机体的各个系统,如参与免疫调节,介导炎症反应和影响组织代谢.IL-4是一种由TH2细胞产生的具有多种生物学活性的细胞因子,IL-4可抑制单核一巨噬细胞分泌IL-1和TNF-α,而且促进IL-1受体拮抗剂的表达.我们对慢性乙肝、肝硬化患者血清中IL-1β、IL-4水平进行了检测,旨在探讨IL-1β和IL-4在肝炎发病过程中的作用.
作者：王茸；金国娴；李正求；解放军第 刊期： 2001年第06期
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
作者：季洪赞；缪东培；段苏友；杨继红；李琳；胡拥军；商玮；邱龄龄；胡兰萍 刊期： 2001年第06期
目的分析子宫内膜异位症患者中γδ+T细胞和天然杀伤细胞(NK)功能的变化,以及探讨患者腹腔液对正常人γδ+T细胞和自然杀伤细胞(NK)功能的影响.方法采用免疫荧光细胞检测及细胞毒活性检测法,分析22例子宫内膜异位症患者外周血、腹腔液中γδ+T细胞及NK细胞的表型与功能.结果子宫内膜异位症(疾病组)患者外周血、腹腔液中CD56+细胞与正常对照组相比较无明显差异,而疾病组腹腔液中γδ+T细胞的百分率高于其外周血和正常对照组.疾病组腹腔液中的γδ+T细胞及NK细胞的功能低于外周血及正常对照组.疾病组的腹腔液对正常人外周血γδ+T细胞及NK细胞的功能具有负调节作用.结论子宫内膜异位症患者的γδ+T细胞及NK细胞的功能低下,处于被抑制状态,提示患者的腹腔液中,可能存在γδ+T细胞及NK细胞的功能抑制因子.
作者：马安伦；葛海良；王树军；张冬青；余奇文；徐红；林其德 刊期： 2001年第06期
目的应用酵母双杂交系统筛选人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外小配体结合域.方法采用PCR技术,从人胎盘cDNA文库扩增出4个截短的Flt-1 cDNA,分别含胞外第2、1-2、2-3和1-3个loop,构建酵母双杂交系统融合表达质粒,并将pGBT9/hVEGF165与pGAD424/Flt-ls两两配对转化酵母菌SFY526.采用滤纸法和液体培养法对阳性克隆进行β-半乳糖苷酶活性分析.结果Flt-1胞外loop2-3与loop1-3的配体结合能力相差不大,loop1-2的结合力较弱,单独第2个loop无配体结合能力.结论利用酵母双杂交系统,筛选出了Flt-1胞外小配体结合域-2-3loop,这对研制分子量更小、安全性更高的可溶性Flt-1片段,开发其在肿瘤、糖尿病性视网膜病变等血管生成相关疾病基因治疗中的应用具有重要的指导意义.
作者：马骊；王小宁；张智清；曾革非；周小明；陈爱君 刊期： 2001年第06期
目的获得高纯度的重组单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(gB)胞浆区蛋白并制备其特异性抗体.方法从感染HSV-1的BHK细胞中,提取总RNA,用RT-PCR特异性扩增HSV-1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆入表达载体pGEX4T-1中,进行融合表达.以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗体,进行Western b1ot鉴定.结果用IPTG诱导后,表达出相对分子质量(Mr)约42 000的融合蛋白.用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备的抗体滴度为1:400.结论获得重组HSV-1 gB胞浆区蛋白及其特异性抗体,为后续功能研究奠定了基础.
作者：李英辉；刘军；薛采芳；甄荣芬；李旬；王宪锋；刘忠湘；万磊 刊期： 2001年第06期
目的探讨桥本甲状腺炎(HT)中Fas、FasL与增殖细胞核抗原(PCNA)的关系.方法以非毒性甲状腺肿(NTG)的标本为对照,采用TUNEL及免疫组织化学双标记法,分别检测16例HT患者甲状腺标本中细胞凋亡水平及PCNA、Fas、FasL的表达及分布.结果凋亡率(AR)在NTG组为(0.9±0.64)%,HT组为(33.92±14.69)%;增殖率(PR)分别为(4.23±2.36)%和(8.45±3.61)%.AR、PR在HT组均显著高于NTG组(P＜0.01).HT中部分甲状腺滤泡细胞PCNA与Fas、FasL共表达;浸润淋巴细胞PCNA高表达,Fas/FasL弱或无表达.结论HT中甲状腺滤泡细胞凋亡与增殖活动均活跃,凋亡水平增高更为显著;浸润淋巴细胞增殖活跃,凋亡少见.其凋亡和增殖的失平衡可能是HT病理改变的主要机制之一.
作者：宋民喜；张雅萍；姬秋和；马福成；杨守京 刊期： 2001年第06期
抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是一种针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体,1982年,Bavies等在少数非典型血管炎患者中发现.目前认为ANCA与某些疾病,尤其是自身免疫性病相关,并将其作为诊断系统性血管炎等相关疾病的血清学标志物.其主要检测方法为免疫荧光染色. 应用间接免疫荧光法(IIF)可将ANCA分为C-ANCA和P-ANCA两类.C-ANCA的靶抗原主要为蛋白酶3(PR-3)相对分子质量(Mr)为29000,P-ANCA针对的靶抗原主要为髓过氧化物酶(MPO)Mr为120000.抗PR-3自身抗体与韦格氏肉芽肿密切相关,抗MPO自身抗体与原发性局部坏死性肾小球肾炎密切相关.除PR-3和MPO以外粒细胞胞浆内碱性磷酸酶也可能是ANCA的靶抗原之一.随着ANCA及靶抗原研究的进展,检测ANCA的方法也逐步完善.
作者：靳淑玲；王北宁 刊期： 2001年第06期
核因子κB(NF-κB)是近年发现的一种重要转录因子,参与多种炎症细胞因子及免疫基因表达的转录、调节.一般情况下,NF-κB与抑制蛋白IκB结合呈非活性状态,受刺激激活后与其抑制蛋白IκB解离,进入核内,参与细胞因子、粘附分子、生长因子和急性期蛋白等因子的转录调控,在疾病的调节,尤其是炎症疾病的启动中起重要作用.本文就其在眼科方面的研究进展作一综述.
作者：田艳明；惠延年 刊期： 2001年第06期
目的研究新型凋亡因子-TRAIL基因在肿瘤基因治疗中的作用.方法用RT-PCR法,从Balb/e小鼠脾脏的总RNA中扩增出编码凋亡诱导功能区的TRAIL cDNA片段,并克隆入pUC-T载体中.经DNA测序鉴定正确后,亚克隆入真核表达载体pSEC-hy-gromycin的免疫球蛋白κ链信号肽编码区的下游,形成含有κ链信号肽与TRAIL凋亡诱导功能区的融合基因,构建可分泌表达TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL.该重组载体经阳离子脂质体转染入小鼠前胃癌细胞株MFC615中,以台盼蓝拒染法和Hoechst3258荧光染色法,观察重组TRAIL对肿瘤细胞的凋亡效应.结果TRAIL的cDNA克隆成功,构建了可高效分泌表达可溶性TRAIL的重组真核表达载体pSEC/TRAIL,该产物能显著促进MFC615肿瘤细胞凋亡.结论重组真核表达载体pSEC/TRAIL的成功构建,为研究肿瘤的基因治疗提供了理想的工具.
作者：居中华；苗怡；戴冰冰；钱关祥；陈诗书 刊期： 2001年第06期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
