刘志国；杨静华；安华章；吴汉平；王海燕；韩者艺；樊代明
目的探讨细胞因子和抗Pgp单抗(mAb)对K562/ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用.方法利用K562细胞的耐阿霉素细胞株K562/ADM,采用免疫细胞化学染色法和流式细胞术,分别检测mAb MRK-16及rhGM-CSF、rhM-CSF或TNF-α对其PgP表达的影响.结果将TNF-α(100 kU/L)、rhGM-CSF(10μg/L)或rhM-CSF(10μg/L)分别单独与K562/ADM细胞孵育48 h,Pgp表达细胞的阳性率分别为72.19%、80.04%和70.30%,与未经任何作用的K562/ADM细胞PgP表达的阳性率(77.02%)相比较,无明显差异(P＞0.05).mAb MRK-16(10 mg/L)以及mAb MRK-16分别与TNF-α或rhGM-CSF共同作用于K562/ADM细胞后,PgP表达的阳性率分别为67.49%、67.14%和70.56%,与K562/ADM细胞的表达率(77.02%)相比较,PgP的表达率虽有降低,但差别不明显(P＞0.05);只有rhM-GSF与mAb MRK-16共同作用(Pgp表达的阳性率为64.29%),可明显抑制K562/ADM细胞上Pgp的表达(P＜0.05).结论rhM-CSF加mAb MRk-16联合应用,具有逆转K562/ADM细胞MDR的作用.
作者：肖东杰；孙善会；张红；申红；刘宗印 刊期： 2001年第06期
目的获得一组抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸单克隆抗体(mAb),用于研究IL-6介导的信号转导.方法按照CD130分子胞内N752-G766区的氨基酸序列,化学合成Y759磷酸化的15肽作为抗原,应用细胞融合法制备一组抗CD130磷酸化酪氨酸的mAb,并用ELISA、Western blot、免疫沉淀和免疫组化染色等技术,对这组mAb的性质和功能进行探讨.结果(1)通过细胞融合获得了4株稳定分泌抗CD130胞内Y759磷酸化mAb的杂交瘤细胞株(MIY1、MIY2、MIY3和MIY4),这组mAb仅对合成肽N752-G766产生特异性反应.(2)Western blot分析表明,这组mAb识别的靶分子的相对分子质量(Mt)为13×104～14×104的.用此组mAb免疫沉淀的Mr为13×104～14×104蛋白,可被抗CD130 mAb所识别;同时用抗CD130mAb免疫沉淀的13×104～14×104分子也可被这组mAb所识别;(3)进一步研究证实,这组mAb可识别由IL-6诱导的细胞内酪氨酸磷酸化的蛋白分子.结论成功地研制了抗人CD130胞内磷酸化酪氨酸的mAb.
作者：于鸣；黎燕；贺永怀；孙瑛勋；沈倍奋 刊期： 2001年第06期
随着神经生物学的飞速进展,神经细胞原代培养成为神经药理、病理生理及活性物质等方面研究的一个很好模型.为此,观察和分析神经元体外特性(神经元存活、突起生长以及神经元形态变化等)的一些指标也相继出现.由于分散的单一细胞培养能够比较理想地反映在体情况,现多选用这一方法进行体外调控和观察.但是培养中细胞脱落和细胞重聚现象又给结果分析造成一定困难,影响了实验结果的客观性.因此,需选择合适的细胞外基质来解决这些问题.常用的细胞外基质有胶原和多聚赖氨酸.胶原Ⅳ(collagenⅣ)是一种细胞支持物,它是细胞外基质的主要成分,可直接或间接参与细胞的附着[1];多聚赖氨酸(PLL)可通过改善培养皿的电荷状况及吸附培养液成分,促进细胞贴壁[2,3].然而两种方法各有利弊,本实验在常规的技术方法基础上,联合应用两种基质,旨在探索更适于分散单一神经元生长和存活的新方法.
作者：王春婷；杨浩；许汉鹏；孟晋宏；游思维；鞠躬 刊期： 2001年第06期
男性不育症的原因非常复杂.近年已证明,免疫因素是其中的重要原因之一.精子有较强的抗原性,能刺激自身、同种生殖道局部产生特异性抗体.现已揭示,抗精子抗体(antisperm antibody,ASAb)是不育的重要免疫因素[1,2].为进一步探讨免疫不育的机制,我们检测了150例ASAb阳性男性不育患者精浆中的一氧化氮(mtric oxide,NO)含量.
作者：杨麦贵；郑善銮；钟丽辉；皇海；徐焰；于文彬；樊新；刘田；张竹映 刊期： 2001年第06期
era基因是细菌生存繁殖所必需的重要基因,与细胞周期和细胞分裂有关.era基因首先在大肠杆菌被发现,由于其编码的氨基酸序列与人及酵母的BAS蛋白有部分相似之处,故命名为E.coli RAS-like(era)基因[1].era基因不仅广泛存在于原核生物中,而且在真核生物(如蠕虫、小鼠和人)的组织中都发现有与细菌era高度同源的基因存在[2-4].人era基因的全长cDNA于1998年被克隆,与原核era基因具有很高的同源性.人ERA蛋白与大肠杆菌ERA蛋白的氨基酸序列有30%相同,两者的相似性为53%.人era基因的功能尚不清楚.我们拟采用酵母双杂交技术,克隆了人era结合蛋白基因,研究了人era与其结合蛋白的相互作用,以便对其功能的研究提供依据.
作者：程轶梦；吴元明；陈苏民；陈南春；纪宗玲 刊期： 2001年第06期
目的通过计算机同源模建,寻找丙型肝炎高变区中保护性多肽抗原表位.方法用计算机同源模建预测多肽的抗原性,然后用淋巴细胞转化试验验证其抗原性.结果同源模建与实验结果相一致.结论同源模建是一种高效寻找具有保护性的抗原多肽的经济快速的方法.
作者：苏琴；郑宇；林芳；赵军；李伯安；李静；高蓉；程云 刊期： 2001年第06期
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth fac-tor,VEGF)是一种血管内皮细胞特异的有丝分裂原,对血管的通透性也起重要作用.许多研究表明,肿瘤组织中VEGF的高表达和肿瘤的增殖、转移密切相关[1],但有关VEGF表达的调控机制仍未被彻底阐明,近一些实验表明,头颈部肿瘤、胃癌等肿瘤组织p53基因的突变与肿瘤细胞VEGF的表达有一定的相关性
作者：孟冬娅；薛文成；胡晓芳；胡华；王一楠；罗军 刊期： 2001年第06期
随着人类基因组计划的完成,蛋白质的功能研究将成为后基因组时代的主要任务[1].任何蛋白质功能的发挥,离不开与其他蛋白质之间的相互作用.随着分子生物学方法的发展,出现了以基因文库为基础的蛋白探测、噬菌体呈现等技术,但这些方法反映的都只是蛋白的体外相互作用.酵母双杂交系统是一种新的直接在真核细胞内检测蛋白相互作用的新方法,灵敏度高[2,3].双杂交系统是基于一些转录激活因子(如酵母的Gal4蛋白和细菌的Lex4蛋白),往往由两个在结构上可以分开、功能上相互独立的结构域构成,这两个结构域在同一细胞内只要空间上靠近,就可以激活下游报道基因的表达[4].第三代酵母双杂交载体系统由pGBKT7和pGADT7组成,编码诱饵蛋白的基因一般融合到质粒pGBKT7中,表达文库一般构建在质粒pGADT7中.
作者：吴元明；陈苏民；陈南春；程轶梦；纪宗玲；杨力军 刊期： 2001年第06期
目的观察免疫抑制剂对纯红细胞再生障碍(PRCA)、重型再生障碍性贫血(SAA)与非重型再生障碍性贫血(NSAA)的治疗作用.方法采用小剂量环孢素A(3～5 mg/kg.d)治疗7例PRCA、4例SAA及4例NSAA,动态监测环孢素A的血药浓度.从外周血象的变化,来判断环孢素A的临床疗效.结果环孢素A治疗3个月后,除1例SAA外,其余14例患者的血红蛋白水平均有较大程度的提高.随着治疗时间的延长,7例SAA与NSAA的白细胞数、中性粒细胞绝对数及血小板数也呈逐渐上升趋势.结论环孢素A治疗PRCA、SAA及部分NSAA的近期效果良好.
作者：陈协群；白庆咸；朱华锋；杨岚；乔庆大；朱步海 刊期： 2001年第06期
核因子κB(NF-κB)是近年发现的一种重要转录因子,参与多种炎症细胞因子及免疫基因表达的转录、调节.一般情况下,NF-κB与抑制蛋白IκB结合呈非活性状态,受刺激激活后与其抑制蛋白IκB解离,进入核内,参与细胞因子、粘附分子、生长因子和急性期蛋白等因子的转录调控,在疾病的调节,尤其是炎症疾病的启动中起重要作用.本文就其在眼科方面的研究进展作一综述.
作者：田艳明；惠延年 刊期： 2001年第06期
目的探讨内皮素(ET)及降钙素基因相关肽(CGRP)在类风湿性关节炎(RA)发生、发展过程中的作用.方法采用放射免疫分析法,对30例RA患者及20例正常对照组血浆中ET及CGRP的水平进行检测.结果RA患者血浆中ET的水平及ET/CGRP的比值明显升高,CGRP水平明显降低,与正常对照组相比较差异显著(P＜0.01).进一步分析表明,活动期RA患者及关节x线改变为Ⅲ～Ⅳ期的RA患者,血浆ET的水平及ET/CGRP的比值明显高于稳定期及关节改变为Ⅰ～Ⅱ期的RA患者;而血浆CGRP的水平明显低于后者(P＜0.01).结论RA患者体内存在明显地ET及CGRP的平衡失调,且与RA患者的病情严重程度密切相关,提示ET及CGRP参与了RA的发病过程.
作者：石晓彤；王晓非；蒋莉；赵丽娟 刊期： 2001年第06期
目的建立一套新的同时纯化和复性工艺,用于基因重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的纯化.方法采用高效疏水作用色谱,直接从表达rhTNF-α的大肠杆菌裂解液中纯化rhTNF-α,并采用稀释法和透析法对上述样品进行复性研究.结果高效疏水作用色谱在纯化rhTNF-α的同时,可获得高复性效率.同时,也使原来需要几步才能完成的操作,在疏水作用色谱上一次完成,大大简化了操作步骤.用SDS-PAGE和考马斯亮兰染色,对纯化的rhT-NF-α进行分析和鉴定,其一步纯化的纯度达到95%以上,活性回收率分别较稀释法和透析法高2倍和3.5倍.结论建立的纯化及同时复性的新工艺,具有简单、快速和纯度高的优点.
作者：郭立安；黄亚渝；耿信笃 刊期： 2001年第06期
成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)是一类多功能的分子,现已发现其有多种同源结构形式,形成了一个生长因子的家族.酸性FGF(acidic FGF,aFGF),也称为FGF-1,是FGF家族中的主要成员,其结构与功能方面的研究受到广泛的关注[1,2].本室曾制备了抗人aFGF(haFGF)的单克隆抗体(mAb),并建立了检测haFGF的双抗体夹心测定方法[3,4].在此基础上,我们采用噬菌体多肽展示技术,筛选出抗haFGF mAb的抗原表位,为haFGF的免疫分析方法的进一步改进,以及对FGF结构与功能深入研究提供一些信息.
作者：王芳；刘宝英；张杰；薛沿宁 刊期： 2001年第06期
CRG-2属于趋化因子家嗾中的CXC亚族,人源类似物称为IP-10,其受体CXCR3主要分布于激活的T细胞[1].趋化因子是一类在炎性因子刺激下表达的小分子分泌蛋白,参与淋巴细胞的定向迁移、渗出与激活,在伤口愈合及炎症中有重要作用[2].初认为,趋化因子主要对不同的淋巴细胞亚群有作用,随后发现其也参与其它的生理及病理过程,如趋化因子受体可作为HIV感染的辅助受体参与艾滋病的发病,以及血管生成的调节等[3].为探讨趋化因子作为候选分子在肿瘤抑制疗法中的应用,我们选择了对T细胞有特异性趋化作用的鼠CRG-2分子,构建真核表达载体,转染了Lewis肺癌细胞系.
作者：刘志国；杨静华；安华章；吴汉平；王海燕；韩者艺；樊代明 刊期： 2001年第06期
目的利用在大肠杆菌中表达的人骨形成蛋白-2(hBMP-2)成熟肽,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.方法将含有hBMP-2成熟肽基因的表达载体pDH2m,转化大肠杆菌,热诱导表达hBMP-2成熟肽,经纯化、复性后,再用其免疫兔子,制备兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.并以Western-blot和免疫组化方法对抗血清进行鉴定.结果Western-blot结果显示在对应于hBMP-2成熟肽位置有阳性条带,免疫组化结果显示人软骨细胞胞浆阳性着色.结论hBMP-2成熟肽在大肠杆菌中获得高表达,并成功制备了兔抗hBMP-2成熟肽抗血清.
作者：张斌；蒲勤；李毅；陈南春；陈苏民 刊期： 2001年第06期
HLA-DQβ链第57位的非门冬氨酸(NA)或门冬氨酸(A)与l型糖尿病的易感性有关.国内外已有广泛报道,这些基因紧密连锁,使各单倍型由亲代完整传递到子代[1].现已明确,糖尿病(DM)家族成员发生糖尿病者远高于非DM家族成员,特别是DM患者一级亲属,在发生DM前有明显的β细胞功能减退[2].糖耐量低减(IGT)是糖尿病的前期表现,本研究通过对IGT患者的HLA-DQβ链第57位NA或A,以及β细胞功能变化的研究,进一步认识成人缓慢进展型l型糖尿病(Slowly pro-gressive IDDM,SPIDDM)家系一级亲属的IGT在糖尿病病程中的地位,这将有助于开展对糖尿病的预防研究[3].
作者：季洪赞；缪东培；段苏友；杨继红；李琳；胡拥军；商玮；邱龄龄；胡兰萍 刊期： 2001年第06期
粘膜免疫系统(mucosal immune system,MIS)是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统,主要表现在以下几个方面:(1)MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层(弥散淋巴组织),或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织(mucosalassociated lymphoid tissues,MALT),包括:肠相关淋巴组织(GALT)、支气管相关淋巴组织(BALT)和鼻相关淋巴组织(NALT)等.机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统.(2)MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白,即分泌型IgA(secretory IgA,sIgA)和sIgM.
作者：李国平；杨恬 刊期： 2001年第06期
目的探讨白细胞介素10(IL-10)的表达和调控,在角质形成细胞诱导免疫抑制作用中的意义.方法从体外建立的混合表皮淋巴细胞培养体系(MELC)中,分离贴壁的角质形成细胞,并分析IL-10的表达来源.我们将抗IL-10单抗引入培养体系中,观察其对角质形成细胞所诱导的免疫抑制的影响.结果在混合培养体系中,IL-10主要来源于角质形成细胞.抗IL-10单抗可有效地阻断角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应.结论IL-10的表达在角质形成细胞所诱导的免疫抑制效应中可能起重要作用.
作者：周洪；沈佰华；李宁丽；郑泽铣；周光炎 刊期： 2001年第06期
酒精对人体心、肝和脑等器官的损害已众所周知，其降低人体红细胞的变形性（RCD）也有报道，但其对人体红细胞免疫功能的影响，尚未见报道。为此，我们观察了山东省利津县长期大量饮酒者红细胞免疫功能的状态。
作者：杨文东；王光红；安振国；綦映柳；陈明 刊期： 2001年第06期
目的研究外源性PTEN基因对人脑胶质瘤细胞系SHG-¨凋亡的影响,探讨PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制.方法以携有人PTEN基因的真核表达载体体外转染SHG-44细胞,筛选阳性转染的细胞克隆并扩增培养.以原位杂交和免疫组化染色法检测PTEN基因的表达.采用透射电镜、流式细胞仪和核DNA琼脂糖凝胶电泳,检测转染PTEN基因后SHG-44胶质瘤细胞的凋亡.观察导人人PTEN基因对SHG-44细胞裸鼠致瘤能力的影响.结果获得PTEN基因稳定转染的胶质瘤细胞SHG-44,并检测到PTEN基因和蛋白的表达.透射电镜下可见转染PTEN基因后细胞核染色质浓缩边集、胞浆浓缩、核碎裂及凋亡小体形成等典型的凋亡表现.流式细胞仪显示,细胞周期从G1期到S期发生抑制,并在G1期峰前出现1个明显的凋亡峰(12.9%).细胞核DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的梯状条带.转染空载体及未转染的SHG-44细胞未见明显的凋亡表现.转染PTEN基因后,SHG-44细胞对裸鼠致瘤能力明显降低.结论将外源性PTEN基因导入SHG-44肿瘤细胞后,可诱导细胞凋亡,这可能是PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的重要机制之一.
作者：刘先珍；章翔；费舟；郭衍；荆俊杰；李侠；王煊 刊期： 2001年第06期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
