吴军；王晓怀；王捷；杨太成；赖晃文；郑文岭
目的: 研究编码结核分枝杆菌分泌蛋白Ag85B的基因疫苗pTB30m和pTB30s对免疫动物的保护作用.方法: 以基因疫苗pTB30m和pTB30s肌注免疫BALB/c小鼠. 免疫完成6 wk后, 用5×105 CFU的MTB H37Rv毒株经小鼠尾静脉攻击感染. 同时用尼龙毛柱分离基因免疫BALB/c小鼠的T细胞, 并以5×106 T细胞/只小鼠过继免疫正常BALB/c小鼠, 立即用105 CFU 的MTB 毒株经小鼠尾静脉攻击感染.4 wk后分别计数脾脏中的细菌负荷.结果: 与生理盐水对照组相比较, pTB30m及pTB30s质粒免疫组BALB/c小鼠脾脏中的细菌负荷均减少, 分别为0.645(log10CFU, P<0.01)和0.839(log10CFU, P<0.001); 而空质粒对照组小鼠脾脏中的细菌负荷减少较少.经质粒pTB30m和pTB30s免疫的BALB/c小鼠的T细胞, 过继免疫的正常BALB/c小鼠, 对攻击感染的MTB H37Rv毒株在脾脏中的增殖具有部分抑制作用.结论: pTB30s免疫的BALB/c小鼠, 对MTB H37Rv毒株攻击的保护作用优于pTB30m质粒免疫, 有望进一步用于结核病的防治研究.
作者：范雄林；徐志凯；李元；李别虎；薛莹；柏银兰；白光春；贾向志 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)诱导的耐受性是否参与免疫赦免部位的应答反应.方法: 以LEW大鼠作为受体, F344大鼠作为供体, 进行角膜移植.将受体鼠随机分成5组, 即在手术前7 d及移植后7 d, 以球旁途径分别注射30 μg/kg、60 μg/kg、90 μg/kg和120 μg/kg的SEB组和注射生理盐水的阴性对照组.阳性对照组分别为移植后注射糖皮质激素(GC)、FK506、环孢素A(CsA)和白介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)组.镜下观察移植后30 d内角膜的浑浊、水肿和新生血管, 用抗排斥反应指数记录移植片存活天数.采用NK1.1-PE荧光抗体进行组织染色, 观察移植后不同时间受体鼠角膜片的炎症细胞浸润和受体鼠眼局部NK细胞的变化.结果: 注射120 μg/kg SEB的大鼠移植片比生理盐水对照组的存活天数延长了22 d.与FK506、CsA、IL-1ra和GC组相比也明显延长.120 μg SEB/kg受体鼠的移植片排斥反应指数为3.42±2.18, 明显低于对照组6.58±3.15(P＜0.01).其中水肿指数和新生血管指数明显降低.组织染色结果显示, SEB注射后NK细胞数量增加.结论: 注射SEB能降低大鼠角膜移植的排斥反应, 提示SEB诱导的耐受性参与了免疫赦免部位的应答反应.
作者：何庆华；潘志强；张文华；接英；武宇影；彭虹；徐亮；陈钰 刊期： 2003年第01期
目的: 克隆小鼠的p27Kip1基因, 并以此为探针分析p27Kip1在外周血B细胞中的表达, 以及其在抗原受体和CD40介导的抑制和促进增殖信号中的作用.方法: 从培养的B细胞中提取总RNA, 用RT-PCR扩增并克隆p27Kip1基因.用流式细胞仪检测B细胞凋亡.用Northern blot观察p27Kip1mRNA的表达水平.结果: 成功地克隆了小鼠的p27Kip1基因.发现抗原受体交联在引起外周血B细胞凋亡之前, 出现p27Kip1表达上调, 若同时激活CD40则使p27Kip1表达降低, B细胞也免于凋亡.用针对p27Kip1的反义寡核苷酸处理, 可阻断抗原受体交联引起的外周血B细胞凋亡.结论: p27Kip1可能在抗原受体信号介导的B细胞凋亡和CD40信号介导的B细胞生存中发挥一定的作用.
作者：王骊丽；韩骅 刊期： 2003年第01期
目的: 通过同源重组构建CTLA4Ig腺病毒载体, 研究其生物学活性, 并用于基因治疗诱导心脏移植耐受.方法: 通过基因重组技术, 将CTLA4Ig基因克隆至腺病毒穿梭质粒pCA13中. 然后将该质粒与腺病毒辅助质粒同源重组, 经过293细胞包装, 构建CTLA4Ig腺病毒载体.用RT-PCR、SDS-PAGE及Western blot等技术, 检测包装的病毒感染293细胞后CTLA4Ig蛋白的表达及分泌, 通过体外实验, 观察病毒感染的293细胞上清对混合淋巴细胞反应( MLR)的抑制作用.通过大鼠体内实验, 检测用CTLA4Ig腺病毒载体基因治疗后, CTLA4Ig在体内的表达.结果: CTLA4Ig腺病毒载体构建成功.体外实验证实, CTLA4Ig腺病毒感染的293细胞上清液, 能够抑制异基因脾细胞的单向MLR.体内实验表明, 经过静脉途径给予受体大鼠CTLA4Ig腺病毒载体, 能够诱导移植耐受, 延长心脏移植物的存活.结论: 构建的CTLA4Ig腺病毒载体, 体外感染293细胞能够分泌CTLA4Ig蛋白.该蛋白可抑制T细胞的活化, CTLA4Ig腺病毒载体可用于体内基因治疗诱导移植耐受.
作者：张庆殷；金永柱；张海滨；谢蜀生 刊期： 2003年第01期
目的: 研究新型的特异性类胰蛋白酶抑制剂双苯甲脒, 对肥大细胞稳定性的影响.方法: 扁桃体组织经酶消化后, 将细胞成分用全HEPES缓冲盐溶液(HBSS)重新悬浮.肥大细胞激发和抑制剂作用的试验在试管中37℃条件下完成.类胰蛋白酶水平用ELISA法测定.结果: 同时加入扁桃体细胞悬液中的双苯甲脒, 可以剂量依赖的方式抑制抗IgE诱导的类胰蛋白酶释放.仅1 mg/L(1.54 μmol/L)的双苯甲脒, 即可抑制肥大细胞释放类胰蛋白酶达52%, 10 mg/L则能抑制76%的释放.将预培养时间延长30 min, 对双苯甲脒的抑制作用无明显影响.在培养到45 min时, 双苯甲脒可抑制高达47%的基础类胰蛋白酶释放.与细胞培养15 min后, 抗IgE抗体(1 g/L)或钙离子导入剂(CI, 1 μmol/L)引起的类胰蛋白酶释放的量, 分别为基础分泌量的3.2和2.6倍.但是, 当细胞与全HBSS预培养超过10 min后, 肥大细胞对抗IgE抗体或CI的反应性明显降低.结论: 双苯甲脒能够抑制人类扁桃体肥大细胞的IgE依赖性类胰蛋白酶释放.因此, 有望开发成为一种新型的肥大细胞稳定剂.
作者：谢华；何韶衡 刊期： 2003年第01期
目的: 研究通痹灵(TBL)总碱对活化的小鼠T淋巴细胞表达CD69的影响及其可能的免疫调控机制.方法: 培养小鼠淋巴细胞, 加入不同浓度的TBL总碱预孵1h后, 再加佛波醇酯(PDB)或刀豆蛋白(ConA), 24 h后, 用流式细胞术检测T淋巴细胞CD69的表达率.结果: 不同质量浓度的TBL总碱对PDB或ConA激活的T淋巴细胞表达CD69, 均有明显的下调作用(对ConA激活的T淋巴细胞的作用要强于PDB激活的T淋巴细胞), 呈明显的量效关系.结论: TBL总碱可明显抑制活化的小鼠T淋巴细胞CD69的表达, 为其用于类风湿性关节炎的治疗提供了实验依据.
作者：陈纪藩；陈光星；李晓娟；全世明；曾耀英；胡英杰；黄可儿；刘晓玲 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨一氧化氮(NO)对香烟烟雾提取物(CSE)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)中核因子κB(NF-κB)活化的影响及机制. 方法: 将大鼠AM与不同浓度的NO前体左旋精氨酸(L-Arg)或iNOS特异性抑制剂N6-(1-亚氨乙基)赖氨酸(L-NIL)及CSE共同培养, 用免疫细胞化学染色法检测NF-κB, 用Western blot检测I-κB蛋白含量, 用Griess法测定培养上清液中NO的水平.结果: CSE可使NF-κB活化细胞的百分率增加, I-κB的水平下降.加入CSE和低浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著高于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平显著低于只加入CSE的AM.加入CSE和高浓度L-Arg培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM, 而I-κB的水平无显著变化.加入CSE和不同浓度的L-NIL培养的AM, NF-κB活化细胞的百分率显著低于只加入CSE的AM; 而I-κB的水平则显著高于只加入CSE的AM, 并呈浓度依赖(P<0.01).结论: 内源性NO对香烟烟雾所致NF-κB的活化具有双向调控作用.
作者：杨丹蕾；徐永健；张珍祥；李超乾 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨基因工程疫苗Hp重组尿素酶B亚单位(rUreB)鼻腔接种的免疫效果.方法: 以rUreB不同剂量或加不同佐剂滴鼻免疫BALB/c小鼠.末次免疫7 d后, 收集血清及胃黏膜、小肠黏膜、鼻黏膜及气管黏膜冲洗液, 用ELISA法检测抗rUreB特异性抗体.结果: rUreB鼻腔免疫后各实验组血清特异性IgG及各黏膜冲洗液中特异性IgA的水平均明显增高, 与对照组相比较差异显著(P<0.01).20 μg剂量组与10 μg剂量组相比较, 仅血清特异性IgG水平增高, 其它黏膜特异性IgA的水平未见增高.大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的佐剂效果较霍乱毒素B亚单位(CTB)强, 卡泊波可增强鼻腔接种疫苗在胃黏膜洗液中的抗体应答水平.结论: CTB、LTB、卡泊波均可作为rUreB鼻腔黏膜接种的佐剂.Hp rUreB鼻黏膜接种, 不仅可诱导血清特异性抗体反应, 而且能引起多个黏膜部位的免疫应答, 是一种方便、有效、廉价的免疫途径.
作者：高志刚；邹全明；郭刚；郭桐生；曾韦锟；解庆华 刊期： 2003年第01期
目的: 构建蛋白质转导结构域(protein transduction domain, PTD)TAT和乙肝病毒靶向核糖核酸酶(targeted ribonuclease, TR)融合蛋白的原核表达载体, 并在大肠杆菌中表达. 方法: 将已构建的乙肝病毒靶向核糖核酸酶基因、乙肝病毒核心蛋白(HBV core protein, HBVc)基因、人嗜酸性粒细胞来源的神经毒素(human eosinophil derived neurotoxin, hEDN)基因, 克隆入含PTD TAT的pTAT原核表达载体, 在大肠杆菌BL21(DE3)LysS 内, 以IPTG诱导融合蛋白表达.表达产物用SDS-PAGE及Western blot分析鉴定.结果: 成功地构建了乙肝病毒靶向核糖核酸酶及其两个对照的融合蛋白原核表达载体, 并在IPTG诱导下获得特异性表达. 结论: Tat-乙肝病毒靶向核糖核酸酶融合蛋白的构建, 为体内应用靶向核酸酶治疗乙型肝炎奠定了基础.
作者：丁劲；刘军；薛采芳；李英辉；宫卫东 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨人卵巢癌细胞中HLA分子及其相关基因的表达与IFN-γ诱导HLA分子表达的相互关系. 方法: 采用Western blot、免疫组化和流式细胞术, 检测卵巢癌细胞中HLA分子表达, 以RT-PCR技术, 分析卵巢癌细胞TAP、LMP和MHC II类分子反式激活蛋白(CIITA)基因表达. 结果: 被检测的11株卵巢癌细胞中, HLA-I 类分子异常的表达率达为45%.而HLA-I类分子表达的异常与TAP1、TAP2、LMP2和LMP7 4种基因表达的异常有关.卵巢癌细胞或其他肿瘤细胞HLA-II类分子的表达与CIITA基因的表达一致.组成性或诱导性表达CIITA基因的肿瘤细胞, 经IFN-γ作用后, 其HLA-I、-II类分子的表达增强; 而诱导后仍不表达CIITA基因的肿瘤细胞, 其HLA分子的表达无增强作用. 结论: 卵巢癌细胞中TAP和LMP基因表达的缺陷, 是引起HLA-I类分子表达异常的重要因素, 提示CIITA基因参与了调控肿瘤细胞HLA-I、-II类分子的表达.
作者：葛海良；张笑人；王颖；马安伦；张惠珍；王树军；周光炎 刊期： 2003年第01期
目的: 降低鼠源性抗血小板单克隆抗体SZ-2的免疫原性, 为其进一步研究、应用奠定基础.方法: 用Trizol试剂从SZ-2杂交瘤细胞抽提RNA, 应用RT-PCR技术, 扩增出SZ-2重链、轻链可变区基因, 克隆入载体pUCm-T, 测序分析.应用基因重组技术, 将SZ-2轻、重链可变区基因与人免疫球蛋白γ1重链CH1和κ轻链恒区基因进行拼接, 构建人-鼠嵌合Fab片段基因表达质粒pSW1-2 Fab/Hu, 并导入大肠杆菌XL1-blue诱导表达.以ELISA、Western blot和瑞斯托霉素诱导血小板聚集抑制试验, 对表达产物进行检测、验证.结果: 克隆的基因序列符合小鼠轻、重链可变区基因的特征; 表达质粒pSW1-2 Fab/Hu拼接正确; 在大肠肝菌中的表达量约为180 μg/L; 表达产物具有与血小板GPIb结合的特性并可抑制瑞斯托霉素诱导血小板聚集.结论: 成功地克隆了SZ-2可变区基因; 并表达了可溶性人-鼠嵌合Fab基因工程抗体.
作者：戴克胜；祝怀平；江淼；阮长耿 刊期： 2003年第01期
目的: 观察人截短型AIF基因的表达对HeLa细胞的促凋亡作用.方法: 用RT-PCR法分段克隆全长人AIF基因.经改造截去其N-端线粒体定位信号及部分Spacer区域(1～120位氨基酸)的编码序列, 从而获得人截短型AIF(AIF△1-120)基因.将其克隆入pIRES2-EGFP绿色荧光蛋白(EGFP)共表达载体, 用脂质体法转染HeLa细胞, 通过荧光显微镜观察、免疫组织化学检测、间接免疫荧光检测、电镜观察等方法, 检测目的基因在转染细胞中的表达, 以及对转染细胞的形态及生长状况的影响.结果: 成功地构建了人截短型AIF(AIF△1-120)基因的真核表达载体.转染HeLa细胞后, 可检测到人截短型AIF分子的表达.随着转染后时间的延长, 可观察到表达人截短型AIF分子的HeLa细胞呈现典型的凋亡特征.结论: 人截短型AIF基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
作者：于翠娟；孟艳玲；赵晶；王智；王成济；杨安钢 刊期： 2003年第01期
目的: 分析丙肝患者血清中抗HCV抗体的抗原表位.方法: 制备Protein A亲和层析柱, 从丙肝患者血清中纯化、制备抗HCV多克隆抗体; 并以此为筛选配基, 对噬菌体表面展示的随机15肽库进行亲和筛选.结果: 三轮筛选的投入产出比逐轮升高至3.3×10-3, 假阳性率逐轮降低至0.2%, 提示具有良好的富集效果.对从第3轮挑选出的16个克隆进行结合试验, 发现9个克隆只与HCV抗体有较强的结合力而不与正常人血清起反应.测序表明, 8个克隆的外源肽含有核心序列WPWS.用阳性噬菌体克隆检测20例丙肝患者血清, 有程度不等的阳性反应.结论: 用多克隆抗体从噬菌体随机肽库中, 筛选到有一定功能的模拟表位.
作者：柯屾；朱继萍；温新宇；赵平；施明；贺永怀；姚志建；沈倍奋 刊期： 2003年第01期
目的: 检测热灭活或紫外线(UV)灭活的EB病毒(EBV)刺激培养的人脐带血B细胞产生IgG 和IgM的效应.方法: 常规分离人脐带血单个核细胞(UBMC), 以L-亮氨酸甲酯去除法, 去除单核细胞、NK细胞和细胞毒性T细胞, 以2-氨乙基硫脲溴化物(AET)处理绵羊红细胞(SRBC)的花环形成分离法, 去除T细胞以获得纯化的B细胞.分别用UV和热灭活的EBV刺激培养的B细胞后, 用夹心ELISA法检测培养上清中IgG和IgM的产生.结果: 以UV灭活的EBV刺激培养B细胞后18 d起, IgG和IgM的产生具有意义(P<0.05); 而热灭活的EBV刺激后, 各时间点均无显著差异(P>0.05).结论: UV灭活EBV具有诱导IgG和IgM产生的作用, 但有明显的时效性, 提示EBV诱导IgG和IgM 产生, 可能是通过病毒的蛋白成分实现的, 为进一步验证EBV功能蛋白诱导天然自身抗体(NAA)产生中的作用奠定了基础.
作者：张衍国；付萌；刘玉峰；高天文；潘蕾；王琳 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用及其作用机制.方法: 将PD98059加入慢性髓细胞白血病细胞系K562细胞中, 通过细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性的变化, 观察PD98059对慢性髓细胞白血病信号转导的作用.结果: PD98059可明显抑制K562细胞活力、DNA合成、集落形成和MAPK活性(与对照组比较, P<0.05), 其抑制作用具有浓度依赖性.结论: PD98059可通过阻断Ras-MAPK信号通路而发挥其抑制作用.Ras-MAPK通路极有可能成为 CML治疗的新靶点.
作者：尚振川；孙秉中；陈志南；王晶；冯琦；王玮；王莎；张涛 刊期： 2003年第01期
目的: 探讨钙离子载体(calcium ionophore, CI)对外周血单核细胞来源的树突状细胞(DC)的影响.方法: 分离健康献血者外周血单核细胞, 分别加入重组人粒/单集落刺激因子(rhGM-CSF) 100 μg/L、rhGM-CSF 100 μg/L+CI 10 μg/L及rhGM-CSF+CI 各100 μg/L.体外培养40 h后, 于光镜及电镜下观察细胞的形态、流式细胞仪检测细胞的表面标志, MTT比色法检测上述分子对自体T细胞的刺激增殖作用.结果: 外周血单核细胞在GM-CSF+CI 各100 μg/L的条件下培养40 h, 就可看到典型的DC形态, 其表面CD14分子表达减少, HLA-DR、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高, 且具有明显刺激自体T细胞增殖的能力.结论: CI有显著加速GM-CSF诱导的外周血单核细胞向DC转化的作用.
作者：吴军；王晓怀；王捷；杨太成；赖晃文；郑文岭 刊期： 2003年第01期
鼠源性单克隆抗体(mAb)应用于人体治疗首先需对其进行基因工程化改造.目前, 常用的克隆mAb可变区基因的方法, 是利用抗体可变区内骨架区(FR)序列的保守性, 设计一组通用引物, 采用RT-PCR法扩增可变区基因[1,2].但由于引物的简并性, 克隆过程中将不可避免地改变抗体可变区两侧(FR1、FR4)的氨基酸序列, 这些改变可能导致基因工程抗体亲和力降低[3].我们对传统方法进行了改进, 采用5′-RACE(rapid amplification of cDNA end, RACE)克隆的策略, 获得了抗人CD16 mAb轻链可变区(VL)基因的真实序列.
作者：解志刚；郭宁；冯健男；施明；孙瑛勋；于鸣；沈倍奋 刊期： 2003年第01期
目的: 获得具有生物学活性的细胞间黏附分子-1(ICAM-1)模拟肽.方法: 以噬菌体扩增及PEG沉淀法, 大量制备展示十二肽P1、P2的噬菌体.采用ELISA、竞争抑制试验及免疫组化染色法, 分别鉴定P1、P2模拟ICAM-1分子的结合特性及生物学活性.结果: 噬菌体展示肽P1、P2能与抗ICAM-1单克隆抗体(mAb)15.2特异性结合.该结合作用可被ICAM-1分子竞争性抑制, P1、P2能模拟ICAM-1分子与LFA-1结合的功能.结论: 噬菌体展示的短肽P1、P2具有天然ICAM-1的生物学活性.
作者：郝文波；徐伟文；陈白虹；王萍；董文其；李明 刊期： 2003年第01期
目的: 研究新城疫病毒(NDV)对肿瘤细胞的作用.方法: 采用空斑试验观察NDV对鸡胚成纤维细胞(CEF)的作用, 通过细胞抑制试验、琼脂糖凝胶电泳、TUNEL染色、细胞骨架染色及细胞唾液酸含量测定等,观察NDV对肿瘤细胞的影响.结果: NDV对CEF、HeLa及Hep-2等肿瘤细胞可产生明显的病变, 而对人的羊膜细胞(Wish细胞)无明显影响; 对Hela细胞和Hep-2细胞能产生明显的生长抑制作用, 但无量效依赖关系. NDV还可导致以凋亡为主的细胞死亡, 引起Hela细胞和Hep-2细胞的细胞骨架发生改变, 以及去除肿瘤细胞表面唾液酸的作用.结论: NDV能选择性地作用于人肿瘤细胞, 抑制肿瘤细胞的生长, 导致肿瘤细胞发生凋亡, 有望成为一种有效的抗肿瘤生物制剂.
作者：薛立娟；金宁一；龚伟；王宏伟；孙大辉；罗琴芳；葛涛；李萍 刊期： 2003年第01期
目的: 用生物工程技术制备人源性抗-HBs Fab.方法: 将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBs Fab基因克隆入pBAD/g ⅢA载体, 进而转化Top10大肠杆菌.对重组质粒菌发酵表达后, 利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白.对所得包涵体依次变性、溶解、纯化后, 利用透析进行复性.用Western blot检测Fab蛋白的特异性, Dot blot测定其生物学活性.结果: 经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白, 有较好的生物学活性, 并且总量达到80 mg/L.对所获包涵体进行透析复性后, 也可得到少量有活性的蛋白, 但比例很小.结论: 用pBAD/g ⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBs Fab片段, 发酵培养后, 经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白, 为人源抗-HBs Fab片段的大量制备提供了有效手段.
作者：安峰；陈玉川；陆慧琦；韩焕兴 刊期： 2003年第01期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
