侯晓彬；刘沙；易定华；肖明第
目的:研究识别不同PTA1/CD226分子结构域的mAb与刺激血小板活化的关系.方法:采用识别不同结构域的抗PTA1/CD226的mAb(FMU1-7),应用免疫荧光染色、流式细胞术和血小板凝集试验,研究识别不同结构域mAb对血小板的活化作用.结果:识别CD226第1个结构域的3株mAb(FMU1、2和3)可以与血小板结合,并可刺激血小板发生凝集,而识别CD226第2个结构域的mAb FMU6、FMU7以及识别两个结构域之间序列的FMU4和FMU5既不能与皿小板表面天然的CD226分子结合,也不能刺激血小板活化.结论:抗PTA1/CD226mAb刺激血小板活化与抗体识别的结构域有关.
作者：菅金龙；张新海；贾卫；李琦；曹云新；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法.方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC-抗小鼠CD3和PE-抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度.以YAC-1细胞为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性.结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%.效靶细胞25:1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P＜0.01).MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个.结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25:1时,NK细胞对YAC-1细胞的杀伤率约为80%.
作者：杨志刚；曾耀英；何贤辉；王通；江逊；唐德燊 刊期： 2005年第03期
全套抗体库为制备抗任意抗原的人源抗体提供了来源,且具有重要的基础研究和应用价值.因此,构建高质量的抗体库一直是抗体工程研究的热点.全合成抗体库技术以其可控性、可操作性强,组成成分明确,设计灵活并能满足高通量筛选的要求等特点,得以迅速发展和广泛应用[1].随着对抗体结构和功能认识的深人,人们越来越多地利用蛋白质工程手段进行优化设计,来提高抗体库中抗体分子的表达能力和稳定性,通过提高抗体库中功能性抗体的比例,从而有效地提高抗体库的质量.
作者：王尚资；尹长城；林正红；王祥斌；刘晶；管华诗；黄华樑 刊期： 2005年第03期
第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号.其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个.现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者.
作者：徐竹蔚；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:研究Nestin、CK19、胰岛素、胰高血糖素及生长抑素在胚胎胰腺发育中的表达,探讨胰岛细胞分化发育的机制.方法:采用免疫组化SABC法及免疫组化双染法(LAB-SA),对30例6～14wk人胚胎胰腺中,Nestin、CK19、胰岛素,胰高血糖素及生长抑素阳性的细胞进行定位.结果:(1)胚胎胰腺发育中Nestin阳性细胞存在于胰腺的间质,数量极少;CK19在胰腺导管上皮分化中持续表达,呈强阳性;(2)7wk胰腺导管上皮开始分化出胰岛细胞,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素表达阳性,三者的表达并无时段差异性;随着胎龄的增加,阳性细胞数增加,14wk时胰岛逐渐形成,表达达到高峰.结论:胚胎胰腺的发育中,胰腺间质存在胰腺干细胞;胚胎早期胰腺导管上皮细胞开始分化并分泌胰岛素,其自分泌的激素可能参与调节胰岛细胞的迁移和胰岛的形成.
作者：杨开明；李爱冬；羊惠君；梅妍；周鸿鹰 刊期： 2005年第03期
目的:对比研究70岁以上老年和30～49岁成年患者体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)心脏手术术后炎性损伤的特点.方法:随机选取我院及第四军医大学西京医院心脏外科在2003-10～2004-10期间,实施CPB心脏手术的患者36例(≥70岁的老年患者和30～49岁成年患者各18例),记录患者的临床资料,并在患者手术诱导后、CPB结束后和手术结束后24h,分别采集血样,用ELISA法测定血浆TNF-α、IL-6和IL-8的含量.结果:老年患者中早期死亡2例(死亡率为11.1%),成年患者均无手术死亡.手术结束24h后,老年患者较之成年患者血浆TNF-α、IL-6和IL-8的含量明显增高(P＜0.01).结论:70岁以上老年患者CPB心脏手术后24h炎性损伤明显比成年患者严重,因此,设法减轻CPB术后的炎性损伤,或许对提高老年患者心脏手术的疗效具有更为重要的意义.
作者：侯晓彬；刘沙；易定华；肖明第 刊期： 2005年第03期
目的:在大肠杆菌中表达ESP30蛋白,并制备兔抗ESP30抗体.方法:从嗜水气单胞菌基因组中扩增ESP30基因序列,并克隆入非融合表达载体pDH2中,在温度诱导下,表达目的蛋白,以表达的ESP30作为免疫原免疫家兔制备抗ESP30抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Westernblot法鉴定.结果:在大肠杆菌中高效表达相对分子质量(Mr)约为66000的ESP30蛋白.ELISA法检测抗血清的效价可达到1:128000,Western blot分析抗血清可与原核表达的ESP30蛋白特异结合.结论:成功地制备兔抗ESP30的抗血清,为进一步研究ESP30蛋白的结构和功能奠定了基础.
作者：张莹莹；李福洋；张文红；张健；黄勇；刘新平；药立波 刊期： 2005年第03期
目的:研究短发夹RNA(shRNAs)对人端粒酶催化亚基(hTERT)表达的影响.方法:将编码针对hTERT的shRNA的寡聚核苷酸克隆入哺乳细胞shRNA表达载体pUC18U6形成pUC18U6ht,然后以脂质体法转染人HepG2细胞.被pUC18U6和表达抗绿色荧光蛋白shRNA的pUC18U6GFPsir转染的HepG2细胞作为对照.转染细胞的hTERTmRNA以实时定量RT-PCR定量测定.结果:与对照相比,shRNA可使hTERTmRNA的水平降低49%(P＜0.05).结论:shRNAs抑制了hTERT的表达.
作者：郭颖；宋天保；吴静；赵艳；李歧佩 刊期： 2005年第03期
目的:探讨内皮素-1(ET-1)作为一种早期放射性肺损伤诊断及病情变化的血清学标志物的可能性.方法:将190只雌性SD大鼠随机分为正常对照组(c组)和实验组,即:放射组(R组)、氟代他汀(Flu)干预组(Flu组)、维甲酸干预组(Ra组)及地塞米松(Dex)干预组(Dex组).实验组大鼠麻醉固定后,用直线加速器全胸照射15Gy1次,剂量率为2Gy/min,距离为1m.从照射后次日开始,Flu组经胃灌服Flu(20mg·kg-1·d-1),Ra组灌服Ra(20mg·kg-1·d-1),Dex组灌服Dex(3.33mg·kg-1·d-1),c及R组均灌服等量的生理盐水.各组分别于照射后5、15、30、60d,将大鼠分批断头或经心内穿刺取血,分离血清;同时切取肺组织,用放射测定法(RIA)分别测定ET-1,层黏连蛋白(LN)及透明质酸(HA)的水平;同时观察肺部的病理变化.结果:与c组相比较,R组大鼠血清ET-1的水平于照射后第5天开始升高(P＜0.05),尔后随着放射性肺损伤的加重逐渐升高,于照射后60d检测达高峰.R组大鼠血清LN的水平于照射后30d开始升高,HA于照射后60d开始升高.R组大鼠血清ET-1水平的升高明显早于其他各组,且同放射性肺损伤的病理变化的程度相关.结论:血清ET-1可作为放射性肺损伤早期诊断及动态监测病情变化的一种标志物.
作者：戚好文；叶江枫；宋立强；陈卫强；梁军；穆德广 刊期： 2005年第03期
目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清.方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因.在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白.以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清.用ELISA和Western blot鉴定抗血清的特异性.结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因.序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致.在E.coli DH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白.ELISA和Western blot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白.抗血清的高滴度达1:128000.结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础.
作者：王亚蓉；魏经国；孙强；马克军；张孝勇；张艳霞；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗结肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体(mAb)并对其进行初步的鉴定及功能研究.方法:将结肠癌细胞系或磨碎的结肠癌组织免疫小鼠,按常规方法进行细胞融合,采用活细胞周围花环形成的方法进行阳性克隆的筛选.用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析及酶免疫组织化学的方法进行初步鉴定,并用抗体介导的补体依赖的细胞毒试验(CDC)进行初步的功能研究.结果:获得了2株分泌抗结肠肿瘤相关抗原mAb杂交瘤细胞株3A12和6A8.流式细胞仪检测,2株杂交瘤分泌的抗体均能在结肠癌细胞系中均为阳性.普通石蜡切片及组织芯片的免疫酶组织化学染色结果,显示2株mAb均在结肠肿瘤组织中有较高的阳性率.2株mAb分别与靶细胞及补体作用后,对于靶细胞的杀伤率分别为98.1%和42.4%.结论:成功地制备了2株识别结肠癌细胞表面抗原的mAb,在结肠癌的诊断和治疗中可能具有潜在的应用价值.
作者：黄海燕；朱勇；刘雪松；蓝天；宋朝君；王鑫；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗人RANTES分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定,为研究RANTES分子的组织分布和功能提供实验手段.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人RANTESmAb.用ELISA法鉴定腹水mAb的效价.用QFastFlow阴离子交换柱纯化mAb.用Western blot鉴定mAb的抗原结合活性.用免疫组化染色法,对RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠移植肠组织中的分布进行鉴定.结果:获得4株分泌抗RANTESmAb的杂交瘤细胞株.间接ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,3株mAb为IgG1亚类(κ),1株为IgG2b(κ).Western blot的结果显示,3株mAb与人RANTES均有良好的结合活性.用3株mAb进行免疫组化染色的结果显示,RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠小肠腺上皮细胞胞质中呈高表达.结论:获得4株能特异性识别天然RANTES分子的mAb.大鼠小肠移植后其肠上皮细胞中可高水平地表达RANTES.
作者：康振华；王为忠；陈冬利；王春艳；朱参胜；杜俊峰；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:观察在胶原诱导的C57BL/6小鼠类风湿性关节炎(CIA)模型中,基质金属蛋白酶-2、9在耐酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)阳性的单个核及多核细胞中的表达及其在关节软骨损伤中的作用.方法:注射鸡Ⅱ型胶原免疫C57BL/6小鼠建立CIA模型.在CIA小鼠滑膜及滑膜-软骨交界处,用酶组织化学及免疫组化染色分别检测TRAP+细胞的数量及细胞质内MMP的表达与软骨损伤的关系.结果:酶组织化学法检测表明TRAP+单个核及多核细胞增多的数量与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.903,P＜0.01).免疫组化染色显示TRAP+细胞胞质内有MMP-2、9的表达,且表达的增多与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.954,P＜0.01).结论:在CIA小鼠病变关节增生的滑膜组织及浸润到软骨表面的滑膜组织中的TRAP+单个核及多核细胞可表达MMP-2、9,表达的增多与软骨的破坏呈正相关,这些细胞在关节软骨的损伤中起到重要的作用.
作者：赵雯；朱平；王彦宏 刊期： 2005年第03期
目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.GST-IL-24融合蛋白能够抑制THP-1细胞的生长.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在E.coli BL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL-24的功能奠定了基础.
作者：瞿少刚；陈明；章晓联 刊期： 2005年第03期
目的:观察接种以膜蛋白形式表达屋尘螨抗原Derp2基因的重组BCG(rBCG),对BALB/c小鼠Th细胞免疫应答的影响.方法:以生理盐水为对照,分别将rBCG和BCG经腹腔注射接种于6～8wk龄和新生BALB/c小鼠,用ELISA法测定小鼠血清、脾脏T细胞培养上清(STLCS)中IL-4、IFN-γ水平,用双色荧光标记-流式细胞仪法测定脾脏细胞Th细胞亚群.结果:接种rBCG和BCG后,成年和新生小鼠血清和STLCS中IL-4水平较对照组显著降低、IFN-γ水平显著升高;无论成年鼠还是新生鼠,在CD4+的脾脏细胞中,IFN-γ+细胞的比例明显升高,而IL4+细胞比例明显降低;此外,在两个年龄组小鼠,接种rBCG者脾细胞均产生了较BCG组更高水平的IFN-γ;同时,用rBCG免疫的两组小鼠脾脏CD4+IFN-γ+的细胞比例也明显高于BCG免疫各组.结论:无论rBCG还是BCG通过腹腔注射免疫,均可诱导不同年龄BALB/c小鼠产生Th1免疫应答;表达在rBCG细胞壁上的Der p2被当成BCG的成分,为机体免疫系统所识别,抗原再次接触进一步刺激了Der p2特异性的Th1应答.这些结果表明,胞壁型抗原重组BCG可作为有效的疫苗,特异性地调节Th1/Th2平衡.
作者：史皆然；张新海；师长宏；曹云新；吴昌归；李元；范雄林；戚好文 刊期： 2005年第03期
目的:探讨神经细胞形成的体外微环境,诱导骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)向神经元分化的机制.方法:从SD大鼠骨髓中提取BMSC进行体外培养、扩增,并用免疫组化染色进行鉴定.以绿色荧光染料PKH67标记BMSC后,将BMSC与神经细胞共培养以及用双层培养皿联合培养8d后,用免疫荧光检测BMSC是否分化为神经元.结果:将BMSC与神经细胞共培养后,BMSC出现神经元的形态特点,且有(32.72±2.56)%的神经元表达特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),与BMSC自然分化组(对照组)相比较差异非常显著(P＜0.05);但用双层培养皿联合培养时,只有(4.87±0.79)%的BMSC表达NSE,与对照组相比较差异不显著(P＞0.05),但与BMSC和神经细胞共培养组相比较差异显著(P＜0.05).结论:体外培养时,神经细胞形成的局部微环境可促进BMSC向神经元方向分化,并且细胞间的紧密接触是诱导BMSC向神经元分化的重要条件.
作者：闰彬彬；王莉莉；乔俊峰；鹏海生；曹京艳；李呼伦；金连弘 刊期： 2005年第03期
目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础.方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Western blot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性.结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Western blot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测.结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础.
作者：董轲；陈苏民；纪宗玲；郑玉；陈南春 刊期： 2005年第03期
目的:构建鸡白细胞介素-2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达.方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒.PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性.然后构建pcDNA-IL-GFP重组表达质粒(即GFP基因与IL-2的一段上游基因融合表达),PCR方法鉴定克隆的正确性.脂质体法转染COS-1细胞,荧光显微镜下观察荧光.结果:正确构建了真核重组表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-GFP.荧光显微镜下可观察到很强的绿色荧光.结论:鸡IL-2克隆和表达成功.为下一步用重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,研制鸡IL-2单克隆抗体奠定了基础.
作者：提金凤；郝贵杰；张艳梅；邵卫星；彭大新；刘秀梵 刊期： 2005年第03期
目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义.方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型.用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT-PCR检测CTGF mRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量.结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P＜0.01).CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P＜0.001).结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标.
作者：张雷；卢惠苹；赖国祥 刊期： 2005年第03期
目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA.方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养.用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达.结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA.结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用.
作者：杜胜华；刘华锋；唐德燊；陈孝文 刊期： 2005年第03期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
