戚好文；叶江枫；宋立强；陈卫强；梁军；穆德广
目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法.方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株.mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Western blot法鉴定.以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测.结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5.mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgGl(κ),相对亲和力为1×10-5.Western blot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000.以辛酸-硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好.结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法.
作者：杨敬；丁天兵；任君萍；宋建华；马文煜 刊期： 2005年第03期
目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)在环磷酰胺(CY)处理小鼠胸腺中的表达.方法:将质粒pEGFP-c3和梭华-SofastTM基因转染试剂按一定比例配制成转染液,经腹腔注入3组小鼠(每组15只)进行转染.转染24h后分别注射0.5、1、2mg/只的CY,并设对照组(15只).18h后称小鼠体质量,然后处死动物,无菌取胸腺并称重,用PBS洗出细胞,制成单细胞悬液,于荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果:GFP可在小鼠胸腺中表达,且GFP+细胞数与CY的剂量相关.高剂量的CY处理可导致胸腺明显萎缩、胸腺细胞总数及GFP+细胞数的减少.结论:转染质粒pEGFP-c3并经CY处理的小鼠及正常对照组小鼠的胸腺中均可表达GFP,但CY处理的小鼠胸腺中GFP的表达情况明显低于对照组小鼠.
作者：艾正亚；施用晖；乐国伟；虞泽鹏；王海松 刊期： 2005年第03期
目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性.方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中.以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Western blot检测.采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白.结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白.目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%.表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性.结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖.
作者：安家泽；宋振顺；窦科峰；李开宗；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:确定抗人CD38分子单克隆抗体(mAb)1C6识别的抗原表位所在区域.方法:分别构建缺失人CD38不同表位的重组质粒,用IPTG诱导表达融合蛋白.对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot分析.结果:1C6不能识别缺失第220～241位氨基酸的D4片段,而对其他的缺失突变体均可识别.结论:mAb 1C6抗体识别的抗原表位位于CD38分子胞外段第220～241位氨基酸.
作者：温新宇；胡美茹；黎燕；戚中田；沈倍奋 刊期： 2005年第03期
目的:构建人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异.方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子.将其插入荧光素酶报告载体中,经SacⅠ和Hind Ⅲ酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异.结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表达;而在正常细胞中的表达极低.结论:hTERT基因的启动子具有肿瘤特异性,有可能解决肿瘤基因治疗中的靶向性问题.
作者：韩明鲲；张惠中；成诗银 刊期： 2005年第03期
目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段.方法:将抗人肝癌mAb cFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定.将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达.结果:成功地表达抗人肝癌mAb HAb18的cFab,表达水平为26mg/L.Western blot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性.结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础.
作者：董红霖；邢金良；安家泽；杨向民；姚西英；窦科峰；陈志南 刊期： 2005年第03期
目的:观察在胶原诱导的C57BL/6小鼠类风湿性关节炎(CIA)模型中,基质金属蛋白酶-2、9在耐酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)阳性的单个核及多核细胞中的表达及其在关节软骨损伤中的作用.方法:注射鸡Ⅱ型胶原免疫C57BL/6小鼠建立CIA模型.在CIA小鼠滑膜及滑膜-软骨交界处,用酶组织化学及免疫组化染色分别检测TRAP+细胞的数量及细胞质内MMP的表达与软骨损伤的关系.结果:酶组织化学法检测表明TRAP+单个核及多核细胞增多的数量与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.903,P＜0.01).免疫组化染色显示TRAP+细胞胞质内有MMP-2、9的表达,且表达的增多与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.954,P＜0.01).结论:在CIA小鼠病变关节增生的滑膜组织及浸润到软骨表面的滑膜组织中的TRAP+单个核及多核细胞可表达MMP-2、9,表达的增多与软骨的破坏呈正相关,这些细胞在关节软骨的损伤中起到重要的作用.
作者：赵雯；朱平；王彦宏 刊期： 2005年第03期
用培养的细胞进行免疫组化染色时,可采用两种方法:细胞爬片和石蜡切片.虽然细胞爬片具有方便、快捷等优点,但也受到一定的限制.如抗体的结合部位位于细胞核时,由于细胞膜的障碍、穿透效果不佳;贴壁不牢的细胞在染色振洗过程中可发生脱落.这样不仅可降低检测的敏感性,甚至可出现假阴性的结果.而用细胞石蜡切片则可克服上述缺点,扩大检测的范围.本研究中,我们将培养的肝癌细胞株HepG2分别制作成细胞爬片和石蜡切片,用抗HCV核心蛋白的mAb做免疫组化染色,检测了HCV核心蛋白的表达,并对两种标本片检测的结果进行了比较.
作者：王文勇；邓南生；张志培；赵一岭；马福成 刊期： 2005年第03期
目的:探讨乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)对Jurkat细胞可溶型TNF相关的凋亡诱导配体(solubletumor necrosis factor-related apoptosis-inducing igand,sTRAIL)分泌和膜型TRAIL(membrane bound TRAIL,mTRAIL)表达的调节,以及二者的细胞毒作用.方法:分别采用ELISA及间接免疫荧光染色和流式细胞术分析,检测sTRAIL的分泌和mTRAIL的表达水平;用4h51Cr释放试验检测sTRAIL和mTRAIL对靶细胞Raji的细胞毒作用.结果:PMA刺激24h后jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达均增加,sTRAIL分泌在刺激后48h达峰值,mTRAIL表达峰值在60h.两型TRAIL都具有对Raji细胞的细胞毒作用.结论:PKC活化剂PMA可上调Jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达,两型TRAIL分子都具有杀伤靶细胞的细胞毒作用.
作者：李妍；曹云新；张赟；宋朝君；庄然；方亮；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:构建鸡白细胞介素-2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达.方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒.PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性.然后构建pcDNA-IL-GFP重组表达质粒(即GFP基因与IL-2的一段上游基因融合表达),PCR方法鉴定克隆的正确性.脂质体法转染COS-1细胞,荧光显微镜下观察荧光.结果:正确构建了真核重组表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-GFP.荧光显微镜下可观察到很强的绿色荧光.结论:鸡IL-2克隆和表达成功.为下一步用重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,研制鸡IL-2单克隆抗体奠定了基础.
作者：提金凤；郝贵杰；张艳梅；邵卫星；彭大新；刘秀梵 刊期： 2005年第03期
目的:探讨神经细胞形成的体外微环境,诱导骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)向神经元分化的机制.方法:从SD大鼠骨髓中提取BMSC进行体外培养、扩增,并用免疫组化染色进行鉴定.以绿色荧光染料PKH67标记BMSC后,将BMSC与神经细胞共培养以及用双层培养皿联合培养8d后,用免疫荧光检测BMSC是否分化为神经元.结果:将BMSC与神经细胞共培养后,BMSC出现神经元的形态特点,且有(32.72±2.56)%的神经元表达特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),与BMSC自然分化组(对照组)相比较差异非常显著(P＜0.05);但用双层培养皿联合培养时,只有(4.87±0.79)%的BMSC表达NSE,与对照组相比较差异不显著(P＞0.05),但与BMSC和神经细胞共培养组相比较差异显著(P＜0.05).结论:体外培养时,神经细胞形成的局部微环境可促进BMSC向神经元方向分化,并且细胞间的紧密接触是诱导BMSC向神经元分化的重要条件.
作者：闰彬彬；王莉莉；乔俊峰；鹏海生；曹京艳；李呼伦；金连弘 刊期： 2005年第03期
目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(cOPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制.方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC.A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram.应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Western blot检测I-κB蛋白的含量.结果:(1)A1组PBMC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;I-κB的水平显著低于B组(P＜0.01).(2)与A1组比较,A2组和A3组的PBMC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P＞0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P＜0.01).(3)与A1组比较,A2组NF-κB阳性细胞的百分率及I-κB的水平无显著差异(P＞0.05);而A3组的PBMC中NF-κB阳性细胞的百分率下降(P＜0.05),I-κB蛋白的水平无显著变化(P＞0.05).A4组PBMC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P＜0.01).结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关.非选择性PDE抑制剂茶碱对IL-8基因的表达无明显影响.
作者：杨丹蕾；徐永健；李超乾；张珍祥；倪望 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗人RANTES分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定,为研究RANTES分子的组织分布和功能提供实验手段.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人RANTESmAb.用ELISA法鉴定腹水mAb的效价.用QFastFlow阴离子交换柱纯化mAb.用Western blot鉴定mAb的抗原结合活性.用免疫组化染色法,对RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠移植肠组织中的分布进行鉴定.结果:获得4株分泌抗RANTESmAb的杂交瘤细胞株.间接ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,3株mAb为IgG1亚类(κ),1株为IgG2b(κ).Western blot的结果显示,3株mAb与人RANTES均有良好的结合活性.用3株mAb进行免疫组化染色的结果显示,RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠小肠腺上皮细胞胞质中呈高表达.结论:获得4株能特异性识别天然RANTES分子的mAb.大鼠小肠移植后其肠上皮细胞中可高水平地表达RANTES.
作者：康振华；王为忠；陈冬利；王春艳；朱参胜；杜俊峰；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescence polarization,FP)的抗体检测方法.方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果.分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响.分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析.结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmoL/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1:25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果.与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%.结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景.
作者：张文红；王琰；郭慧芳；白玉杰；阎小君 刊期： 2005年第03期
目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法.方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC-抗小鼠CD3和PE-抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度.以YAC-1细胞为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性.结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%.效靶细胞25:1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P＜0.01).MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个.结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25:1时,NK细胞对YAC-1细胞的杀伤率约为80%.
作者：杨志刚；曾耀英；何贤辉；王通；江逊；唐德燊 刊期： 2005年第03期
目的:探讨内皮素-1(ET-1)作为一种早期放射性肺损伤诊断及病情变化的血清学标志物的可能性.方法:将190只雌性SD大鼠随机分为正常对照组(c组)和实验组,即:放射组(R组)、氟代他汀(Flu)干预组(Flu组)、维甲酸干预组(Ra组)及地塞米松(Dex)干预组(Dex组).实验组大鼠麻醉固定后,用直线加速器全胸照射15Gy1次,剂量率为2Gy/min,距离为1m.从照射后次日开始,Flu组经胃灌服Flu(20mg·kg-1·d-1),Ra组灌服Ra(20mg·kg-1·d-1),Dex组灌服Dex(3.33mg·kg-1·d-1),c及R组均灌服等量的生理盐水.各组分别于照射后5、15、30、60d,将大鼠分批断头或经心内穿刺取血,分离血清;同时切取肺组织,用放射测定法(RIA)分别测定ET-1,层黏连蛋白(LN)及透明质酸(HA)的水平;同时观察肺部的病理变化.结果:与c组相比较,R组大鼠血清ET-1的水平于照射后第5天开始升高(P＜0.05),尔后随着放射性肺损伤的加重逐渐升高,于照射后60d检测达高峰.R组大鼠血清LN的水平于照射后30d开始升高,HA于照射后60d开始升高.R组大鼠血清ET-1水平的升高明显早于其他各组,且同放射性肺损伤的病理变化的程度相关.结论:血清ET-1可作为放射性肺损伤早期诊断及动态监测病情变化的一种标志物.
作者：戚好文；叶江枫；宋立强；陈卫强；梁军；穆德广 刊期： 2005年第03期
目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA.方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养.用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达.结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA.结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用.
作者：杜胜华；刘华锋；唐德燊；陈孝文 刊期： 2005年第03期
第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号.其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个.现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者.
作者：徐竹蔚；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:体外折叠形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,并研究其生物学功能.方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性.将折叠产物通过Sephadex G-75层析柱纯化,经Western blot进行构象鉴定.探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响.结果:折叠产物可与mAb W6/32特异性结合,在Western blot的鉴定中呈阳性反应.可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡.结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性.
作者：杨敬宁；吴雄文；梁智辉；韩军艳；黄亚非；龚非力 刊期： 2005年第03期
目的:对比研究70岁以上老年和30～49岁成年患者体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)心脏手术术后炎性损伤的特点.方法:随机选取我院及第四军医大学西京医院心脏外科在2003-10～2004-10期间,实施CPB心脏手术的患者36例(≥70岁的老年患者和30～49岁成年患者各18例),记录患者的临床资料,并在患者手术诱导后、CPB结束后和手术结束后24h,分别采集血样,用ELISA法测定血浆TNF-α、IL-6和IL-8的含量.结果:老年患者中早期死亡2例(死亡率为11.1%),成年患者均无手术死亡.手术结束24h后,老年患者较之成年患者血浆TNF-α、IL-6和IL-8的含量明显增高(P＜0.01).结论:70岁以上老年患者CPB心脏手术后24h炎性损伤明显比成年患者严重,因此,设法减轻CPB术后的炎性损伤,或许对提高老年患者心脏手术的疗效具有更为重要的意义.
作者：侯晓彬；刘沙；易定华；肖明第 刊期： 2005年第03期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
