张文红；王琰；郭慧芳；白玉杰；阎小君
目的:探讨神经细胞形成的体外微环境,诱导骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)向神经元分化的机制.方法:从SD大鼠骨髓中提取BMSC进行体外培养、扩增,并用免疫组化染色进行鉴定.以绿色荧光染料PKH67标记BMSC后,将BMSC与神经细胞共培养以及用双层培养皿联合培养8d后,用免疫荧光检测BMSC是否分化为神经元.结果:将BMSC与神经细胞共培养后,BMSC出现神经元的形态特点,且有(32.72±2.56)%的神经元表达特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),与BMSC自然分化组(对照组)相比较差异非常显著(P＜0.05);但用双层培养皿联合培养时,只有(4.87±0.79)%的BMSC表达NSE,与对照组相比较差异不显著(P＞0.05),但与BMSC和神经细胞共培养组相比较差异显著(P＜0.05).结论:体外培养时,神经细胞形成的局部微环境可促进BMSC向神经元方向分化,并且细胞间的紧密接触是诱导BMSC向神经元分化的重要条件.
作者：闰彬彬；王莉莉；乔俊峰；鹏海生；曹京艳；李呼伦；金连弘 刊期： 2005年第03期
目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA.方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养.用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达.结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA.结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用.
作者：杜胜华；刘华锋；唐德燊；陈孝文 刊期： 2005年第03期
目的:确定抗人CD38分子单克隆抗体(mAb)1C6识别的抗原表位所在区域.方法:分别构建缺失人CD38不同表位的重组质粒,用IPTG诱导表达融合蛋白.对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot分析.结果:1C6不能识别缺失第220～241位氨基酸的D4片段,而对其他的缺失突变体均可识别.结论:mAb 1C6抗体识别的抗原表位位于CD38分子胞外段第220～241位氨基酸.
作者：温新宇；胡美茹；黎燕；戚中田；沈倍奋 刊期： 2005年第03期
目的:探讨内皮素-1(ET-1)作为一种早期放射性肺损伤诊断及病情变化的血清学标志物的可能性.方法:将190只雌性SD大鼠随机分为正常对照组(c组)和实验组,即:放射组(R组)、氟代他汀(Flu)干预组(Flu组)、维甲酸干预组(Ra组)及地塞米松(Dex)干预组(Dex组).实验组大鼠麻醉固定后,用直线加速器全胸照射15Gy1次,剂量率为2Gy/min,距离为1m.从照射后次日开始,Flu组经胃灌服Flu(20mg·kg-1·d-1),Ra组灌服Ra(20mg·kg-1·d-1),Dex组灌服Dex(3.33mg·kg-1·d-1),c及R组均灌服等量的生理盐水.各组分别于照射后5、15、30、60d,将大鼠分批断头或经心内穿刺取血,分离血清;同时切取肺组织,用放射测定法(RIA)分别测定ET-1,层黏连蛋白(LN)及透明质酸(HA)的水平;同时观察肺部的病理变化.结果:与c组相比较,R组大鼠血清ET-1的水平于照射后第5天开始升高(P＜0.05),尔后随着放射性肺损伤的加重逐渐升高,于照射后60d检测达高峰.R组大鼠血清LN的水平于照射后30d开始升高,HA于照射后60d开始升高.R组大鼠血清ET-1水平的升高明显早于其他各组,且同放射性肺损伤的病理变化的程度相关.结论:血清ET-1可作为放射性肺损伤早期诊断及动态监测病情变化的一种标志物.
作者：戚好文；叶江枫；宋立强；陈卫强；梁军；穆德广 刊期： 2005年第03期
目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清.方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因.在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白.以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清.用ELISA和Western blot鉴定抗血清的特异性.结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因.序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致.在E.coli DH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白.ELISA和Western blot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白.抗血清的高滴度达1:128000.结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础.
作者：王亚蓉；魏经国；孙强；马克军；张孝勇；张艳霞；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL-600中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用.方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区.将其克隆人大肠杆菌表达载体中.经过温度诱导获得restin表达蛋白.利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清.以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布.结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000.将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Western blot检测其效价为1:800.间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内.结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件.
作者：路凡；杨辉；王孝功；蒲勤；李毅；赵文明；赵忠良 刊期： 2005年第03期
目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescence polarization,FP)的抗体检测方法.方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果.分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响.分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析.结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmoL/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1:25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果.与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%.结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景.
作者：张文红；王琰；郭慧芳；白玉杰；阎小君 刊期： 2005年第03期
目的:在大肠杆菌中表达ESP30蛋白,并制备兔抗ESP30抗体.方法:从嗜水气单胞菌基因组中扩增ESP30基因序列,并克隆入非融合表达载体pDH2中,在温度诱导下,表达目的蛋白,以表达的ESP30作为免疫原免疫家兔制备抗ESP30抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Westernblot法鉴定.结果:在大肠杆菌中高效表达相对分子质量(Mr)约为66000的ESP30蛋白.ELISA法检测抗血清的效价可达到1:128000,Western blot分析抗血清可与原核表达的ESP30蛋白特异结合.结论:成功地制备兔抗ESP30的抗血清,为进一步研究ESP30蛋白的结构和功能奠定了基础.
作者：张莹莹；李福洋；张文红；张健；黄勇；刘新平；药立波 刊期： 2005年第03期
目的:建立小鼠NK细胞的分离及培养扩增的方法.方法:用两步黏附分离法和磁珠活化的细胞分选(MACS)法,从小鼠脾脏的单个核细胞(MNC)中分离NK细胞,计数所得细胞的总数,并用FITC-抗小鼠CD3和PE-抗小鼠NK1.1单克隆荧光抗体染色后,用流式细胞仪(FACS)检测NK细胞的纯度.以YAC-1细胞为靶细胞,用MTT比色法检测NK细胞的杀伤活性.结果:将两步黏附分离法分离的2×107个脾MNC培养5、10、15、20d,计数细胞的总数并检测CD3-NK1.1+细胞百分率,分别为0.5×107、1.4×107、2.6×107、3.0×107和18.36%、43.44%、55.68%、60.03%.效靶细胞25:1时,NK细胞的杀伤率分别为54.38%、66.54%、79.38%和83.86%,明显高于脾MNC(41.93%)(P＜0.01).MACS法纯化前后细胞的总数和CD3-NK1.1+细胞的百分率,分别为1.0×108、1.5×106和2.54%、93.60%;但纯化后的细胞在体外培养20d时,只扩增到1.9×106个.结论:用两步黏附分离法分离的小鼠NK细胞,培养2～3wk可获得大量的NK细胞,纯度可达55%～60%;在效靶细胞为25:1时,NK细胞对YAC-1细胞的杀伤率约为80%.
作者：杨志刚；曾耀英；何贤辉；王通；江逊；唐德燊 刊期： 2005年第03期
目的:构建含有FRT序列的CHO/dhfr-工程细胞株,并在此细胞株中用定点整合系统表达抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体.方法:首先克隆FRT序列与HBsAg的融合基因FRT-HBsAg,然后将FRT-HBsAg亚克隆到pCI-neo的MCS中,构建表达载体pCI-FRT-HBsAg.以此载体转染CHO/dhfr-细胞,用1g/L的G418筛选抗性克隆.检测抗性克隆HBsAg的表达,筛选表达量高的克隆作为宿主细胞株,命名为CHO/dhfr-FRT+.将表达质粒pA-FRT HFLF和pOG44以1:9的质量比混合,取2μg转染CHO/dhfr-FRT+.转染48h后,换选择培养基(撤掉H、T)用96孔板进行克隆化,2wk后对长成的单克隆进行检测.筛选正确整合到CHO/dhfr-FRT+细胞中FRT位点的克隆,并不断提高MTX的浓度,进一步筛选表达量更高的克隆.在MTX的浓度为2×10-7mol/L时,获得稳定表达细胞株,其后的表达量为5mg/L.对此细胞株扩大培养后,收集上清并纯化,以纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE及Western blot和抗原结合活性的检测.结果:构建了高转录活性位点整合FRT序列的CHO/dhfr-细胞株,并在此细胞株中表达抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,表达量为5mg/L.结论:构建了含有FRT序列的CHO/dhfr-工程细胞株,并在此细胞株中用定点整合系统表达抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,为用此系统表达抗体分子和其他蛋白分子奠定了基础.
作者：李建民；陈薇；贾秀杰；安小平；李冰；樊英茹；童贻刚 刊期： 2005年第03期
目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.GST-IL-24融合蛋白能够抑制THP-1细胞的生长.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在E.coli BL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL-24的功能奠定了基础.
作者：瞿少刚；陈明；章晓联 刊期： 2005年第03期
目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义.方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型.用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT-PCR检测CTGF mRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量.结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P＜0.01).CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P＜0.001).结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标.
作者：张雷；卢惠苹；赖国祥 刊期： 2005年第03期
用培养的细胞进行免疫组化染色时,可采用两种方法:细胞爬片和石蜡切片.虽然细胞爬片具有方便、快捷等优点,但也受到一定的限制.如抗体的结合部位位于细胞核时,由于细胞膜的障碍、穿透效果不佳;贴壁不牢的细胞在染色振洗过程中可发生脱落.这样不仅可降低检测的敏感性,甚至可出现假阴性的结果.而用细胞石蜡切片则可克服上述缺点,扩大检测的范围.本研究中,我们将培养的肝癌细胞株HepG2分别制作成细胞爬片和石蜡切片,用抗HCV核心蛋白的mAb做免疫组化染色,检测了HCV核心蛋白的表达,并对两种标本片检测的结果进行了比较.
作者：王文勇；邓南生；张志培；赵一岭；马福成 刊期： 2005年第03期
目的:建立甲基苯基四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠,检测血浆IL-6和IL-1的水平,并探讨其与脑不对称的关系.方法:利用区分行为不对称的伸爪取食试验,将C57BL/6J小鼠区分为反映脑不对称的左利小鼠和右利小鼠.给小鼠腹腔注射MPTP25mg/kg,每日1次,连续5日,建立小鼠帕金森病模型,对照组注射等体积的生理盐水.后1次注射MPTP后1、3、14d杀鼠取血,采用ELISA检测各时间点小鼠血浆IL-6和IL-1的水平.结果:正常对照组血浆IL-6水平很低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后14d,血浆IL-6的水平显著升高(P＜0.01).而且第14天右利小鼠血浆IL-6的水平高于左利小鼠IL-6水平(P＜0.05).正常对照组小鼠血浆IL-1的水平也较低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后3d,血浆IL-1的水平显著升高(P＜0.05),而且左利小鼠的水平明显高于右利小鼠(P＜0.01).结论:IL-6和IL-1可能参与了MPTP诱导的C57BL/6J小鼠帕金森病的发生发展,并与脑不对称有关.
作者：申延琴；李康生；P.J.Neveu 刊期： 2005年第03期
目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定.方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株.用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性.结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株.该mAb与已知的c-erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应.用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性.结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb.
作者：宋淑霞；李妙颖；侯志宏；刘福英；吕占军 刊期： 2005年第03期
第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号.其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个.现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者.
作者：徐竹蔚；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗结肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体(mAb)并对其进行初步的鉴定及功能研究.方法:将结肠癌细胞系或磨碎的结肠癌组织免疫小鼠,按常规方法进行细胞融合,采用活细胞周围花环形成的方法进行阳性克隆的筛选.用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析及酶免疫组织化学的方法进行初步鉴定,并用抗体介导的补体依赖的细胞毒试验(CDC)进行初步的功能研究.结果:获得了2株分泌抗结肠肿瘤相关抗原mAb杂交瘤细胞株3A12和6A8.流式细胞仪检测,2株杂交瘤分泌的抗体均能在结肠癌细胞系中均为阳性.普通石蜡切片及组织芯片的免疫酶组织化学染色结果,显示2株mAb均在结肠肿瘤组织中有较高的阳性率.2株mAb分别与靶细胞及补体作用后,对于靶细胞的杀伤率分别为98.1%和42.4%.结论:成功地制备了2株识别结肠癌细胞表面抗原的mAb,在结肠癌的诊断和治疗中可能具有潜在的应用价值.
作者：黄海燕；朱勇；刘雪松；蓝天；宋朝君；王鑫；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗人RANTES分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定,为研究RANTES分子的组织分布和功能提供实验手段.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人RANTESmAb.用ELISA法鉴定腹水mAb的效价.用QFastFlow阴离子交换柱纯化mAb.用Western blot鉴定mAb的抗原结合活性.用免疫组化染色法,对RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠移植肠组织中的分布进行鉴定.结果:获得4株分泌抗RANTESmAb的杂交瘤细胞株.间接ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,3株mAb为IgG1亚类(κ),1株为IgG2b(κ).Western blot的结果显示,3株mAb与人RANTES均有良好的结合活性.用3株mAb进行免疫组化染色的结果显示,RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠小肠腺上皮细胞胞质中呈高表达.结论:获得4株能特异性识别天然RANTES分子的mAb.大鼠小肠移植后其肠上皮细胞中可高水平地表达RANTES.
作者：康振华；王为忠；陈冬利；王春艳；朱参胜；杜俊峰；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:研究Nestin、CK19、胰岛素、胰高血糖素及生长抑素在胚胎胰腺发育中的表达,探讨胰岛细胞分化发育的机制.方法:采用免疫组化SABC法及免疫组化双染法(LAB-SA),对30例6～14wk人胚胎胰腺中,Nestin、CK19、胰岛素,胰高血糖素及生长抑素阳性的细胞进行定位.结果:(1)胚胎胰腺发育中Nestin阳性细胞存在于胰腺的间质,数量极少;CK19在胰腺导管上皮分化中持续表达,呈强阳性;(2)7wk胰腺导管上皮开始分化出胰岛细胞,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素表达阳性,三者的表达并无时段差异性;随着胎龄的增加,阳性细胞数增加,14wk时胰岛逐渐形成,表达达到高峰.结论:胚胎胰腺的发育中,胰腺间质存在胰腺干细胞;胚胎早期胰腺导管上皮细胞开始分化并分泌胰岛素,其自分泌的激素可能参与调节胰岛细胞的迁移和胰岛的形成.
作者：杨开明；李爱冬；羊惠君；梅妍；周鸿鹰 刊期： 2005年第03期
目的:体外折叠形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,并研究其生物学功能.方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性.将折叠产物通过Sephadex G-75层析柱纯化,经Western blot进行构象鉴定.探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响.结果:折叠产物可与mAb W6/32特异性结合,在Western blot的鉴定中呈阳性反应.可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡.结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性.
作者：杨敬宁；吴雄文；梁智辉；韩军艳；黄亚非；龚非力 刊期： 2005年第03期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
