路凡；杨辉；王孝功；蒲勤；李毅；赵文明；赵忠良
目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清.方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因.在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白.以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清.用ELISA和Western blot鉴定抗血清的特异性.结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因.序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致.在E.coli DH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白.ELISA和Western blot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白.抗血清的高滴度达1:128000.结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础.
作者：王亚蓉；魏经国；孙强；马克军；张孝勇；张艳霞；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:确定抗人CD38分子单克隆抗体(mAb)1C6识别的抗原表位所在区域.方法:分别构建缺失人CD38不同表位的重组质粒,用IPTG诱导表达融合蛋白.对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Western blot分析.结果:1C6不能识别缺失第220～241位氨基酸的D4片段,而对其他的缺失突变体均可识别.结论:mAb 1C6抗体识别的抗原表位位于CD38分子胞外段第220～241位氨基酸.
作者：温新宇；胡美茹；黎燕；戚中田；沈倍奋 刊期： 2005年第03期
B淋巴细胞刺激物(B lymphocyte stimulator,BLyS,也称为BAFF、TALL-1、THANK及zTNF4)是1999年发现的TNF超家族中的新成员,与该超家族中的多数成员一样也表达于淋巴组织中,对免疫系统的发育和调节具有重要作用.BLyS作为B细胞的共刺激物,不仅参与了体液免疫的调控,如果强烈刺激B细胞增殖、分化并分泌大量免疫球蛋白[1-3];在T细胞介导的免疫应答中可能也发挥着重要作用[4].因此,BLyS的异常表达导致免疫功能紊乱,引起一些相关的免疫性疾病.
作者：石晓娟；毛伟平；张双全；姜平；赵洁明 刊期： 2005年第03期
目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA.方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养.用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达.结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA.结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用.
作者：杜胜华；刘华锋；唐德燊；陈孝文 刊期： 2005年第03期
目的:建立甲基苯基四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠,检测血浆IL-6和IL-1的水平,并探讨其与脑不对称的关系.方法:利用区分行为不对称的伸爪取食试验,将C57BL/6J小鼠区分为反映脑不对称的左利小鼠和右利小鼠.给小鼠腹腔注射MPTP25mg/kg,每日1次,连续5日,建立小鼠帕金森病模型,对照组注射等体积的生理盐水.后1次注射MPTP后1、3、14d杀鼠取血,采用ELISA检测各时间点小鼠血浆IL-6和IL-1的水平.结果:正常对照组血浆IL-6水平很低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后14d,血浆IL-6的水平显著升高(P＜0.01).而且第14天右利小鼠血浆IL-6的水平高于左利小鼠IL-6水平(P＜0.05).正常对照组小鼠血浆IL-1的水平也较低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后3d,血浆IL-1的水平显著升高(P＜0.05),而且左利小鼠的水平明显高于右利小鼠(P＜0.01).结论:IL-6和IL-1可能参与了MPTP诱导的C57BL/6J小鼠帕金森病的发生发展,并与脑不对称有关.
作者：申延琴；李康生；P.J.Neveu 刊期： 2005年第03期
目的:构建人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的核心启动子调控的荧光素酶报告载体,检测其在肿瘤细胞及正常细胞中表达的差异.方法:提取人HeLa细胞的基因组,利用PCR技术克隆hTERT基因的核心启动子.将其插入荧光素酶报告载体中,经SacⅠ和Hind Ⅲ酶切和PCR鉴定后,转染肿瘤细胞及正常细胞,观察两种细胞中荧光素酶基因表达的差异.结果:hTERT基因的启动子调控的表达载体在肿瘤细胞中呈高效表达;而在正常细胞中的表达极低.结论:hTERT基因的启动子具有肿瘤特异性,有可能解决肿瘤基因治疗中的靶向性问题.
作者：韩明鲲；张惠中；成诗银 刊期： 2005年第03期
目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG-IL-24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.GST-IL-24融合蛋白能够抑制THP-1细胞的生长.结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL-24,并在E.coli BL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL-24的功能奠定了基础.
作者：瞿少刚；陈明；章晓联 刊期： 2005年第03期
目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础.方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Western blot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性.结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Western blot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测.结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础.
作者：董轲；陈苏民；纪宗玲；郑玉；陈南春 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗人RANTES分子单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定,为研究RANTES分子的组织分布和功能提供实验手段.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,制备小鼠源性抗人RANTESmAb.用ELISA法鉴定腹水mAb的效价.用QFastFlow阴离子交换柱纯化mAb.用Western blot鉴定mAb的抗原结合活性.用免疫组化染色法,对RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠移植肠组织中的分布进行鉴定.结果:获得4株分泌抗RANTESmAb的杂交瘤细胞株.间接ELISA法测定腹水mAb的效价均达1×10-6,3株mAb为IgG1亚类(κ),1株为IgG2b(κ).Western blot的结果显示,3株mAb与人RANTES均有良好的结合活性.用3株mAb进行免疫组化染色的结果显示,RANTES分子在进行小肠移植术的大鼠小肠腺上皮细胞胞质中呈高表达.结论:获得4株能特异性识别天然RANTES分子的mAb.大鼠小肠移植后其肠上皮细胞中可高水平地表达RANTES.
作者：康振华；王为忠；陈冬利；王春艳；朱参胜；杜俊峰；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:构建鸡白细胞介素-2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达.方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒.PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性.然后构建pcDNA-IL-GFP重组表达质粒(即GFP基因与IL-2的一段上游基因融合表达),PCR方法鉴定克隆的正确性.脂质体法转染COS-1细胞,荧光显微镜下观察荧光.结果:正确构建了真核重组表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-GFP.荧光显微镜下可观察到很强的绿色荧光.结论:鸡IL-2克隆和表达成功.为下一步用重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,研制鸡IL-2单克隆抗体奠定了基础.
作者：提金凤；郝贵杰；张艳梅；邵卫星；彭大新；刘秀梵 刊期： 2005年第03期
目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体.方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exo DNA的全长序列.将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌.通过温敏诱导表达3种Red蛋白(Bet、Exo和Gam),用PACTE薄层扫描检测目的蛋白含量.用3种Red蛋白分别免疫家兔制备抗血清,并以Western blot鉴定抗体的效价和特异性.结果:大肠杆菌中表达的Bet、Exo和Gam蛋白,分别占菌体总蛋白量的40.3%、49.2%和73.4%.3种抗血清的效价约为1:2000.Western blot分析显示抗血清具有较好的特异性.结论:成功地获得Bet、Exo和Gam3种蛋白,并分别制备了相应的抗血清.使用这3种抗血清,检测了3种蛋白在真核细胞中的表达和定位,为研究Red蛋白的同源重组奠定了基础.
作者：张晓楠；陈苏民；罗二平；黄勇；柴玉波；李云峰；陈南春 刊期： 2005年第03期
目的:探讨内皮素-1(ET-1)作为一种早期放射性肺损伤诊断及病情变化的血清学标志物的可能性.方法:将190只雌性SD大鼠随机分为正常对照组(c组)和实验组,即:放射组(R组)、氟代他汀(Flu)干预组(Flu组)、维甲酸干预组(Ra组)及地塞米松(Dex)干预组(Dex组).实验组大鼠麻醉固定后,用直线加速器全胸照射15Gy1次,剂量率为2Gy/min,距离为1m.从照射后次日开始,Flu组经胃灌服Flu(20mg·kg-1·d-1),Ra组灌服Ra(20mg·kg-1·d-1),Dex组灌服Dex(3.33mg·kg-1·d-1),c及R组均灌服等量的生理盐水.各组分别于照射后5、15、30、60d,将大鼠分批断头或经心内穿刺取血,分离血清;同时切取肺组织,用放射测定法(RIA)分别测定ET-1,层黏连蛋白(LN)及透明质酸(HA)的水平;同时观察肺部的病理变化.结果:与c组相比较,R组大鼠血清ET-1的水平于照射后第5天开始升高(P＜0.05),尔后随着放射性肺损伤的加重逐渐升高,于照射后60d检测达高峰.R组大鼠血清LN的水平于照射后30d开始升高,HA于照射后60d开始升高.R组大鼠血清ET-1水平的升高明显早于其他各组,且同放射性肺损伤的病理变化的程度相关.结论:血清ET-1可作为放射性肺损伤早期诊断及动态监测病情变化的一种标志物.
作者：戚好文；叶江枫；宋立强；陈卫强；梁军；穆德广 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗结肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体(mAb)并对其进行初步的鉴定及功能研究.方法:将结肠癌细胞系或磨碎的结肠癌组织免疫小鼠,按常规方法进行细胞融合,采用活细胞周围花环形成的方法进行阳性克隆的筛选.用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析及酶免疫组织化学的方法进行初步鉴定,并用抗体介导的补体依赖的细胞毒试验(CDC)进行初步的功能研究.结果:获得了2株分泌抗结肠肿瘤相关抗原mAb杂交瘤细胞株3A12和6A8.流式细胞仪检测,2株杂交瘤分泌的抗体均能在结肠癌细胞系中均为阳性.普通石蜡切片及组织芯片的免疫酶组织化学染色结果,显示2株mAb均在结肠肿瘤组织中有较高的阳性率.2株mAb分别与靶细胞及补体作用后,对于靶细胞的杀伤率分别为98.1%和42.4%.结论:成功地制备了2株识别结肠癌细胞表面抗原的mAb,在结肠癌的诊断和治疗中可能具有潜在的应用价值.
作者：黄海燕；朱勇；刘雪松；蓝天；宋朝君；王鑫；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定.方法:应用GoldKey软件分析人β-Netrin C末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽.然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化.对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Western blot进行鉴定.同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性.另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Western blot鉴定其特异性.结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-NetrinmAb的杂交瘤细胞.免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原.另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白.结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb.
作者：余利红；高艳；王利红；韩洪彦；孙志贤；张成岗 刊期： 2005年第03期
目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白及其mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中的表达的差异.方法:应用Western blot检测10例妊高征和10例年龄匹配的正常妊娠的胎盘组织中HIF-1α蛋白表达的水平;应用实时定量PCR,检测两种组织中HIF-1αmRNA表达的水平.结果:与正常妊娠胎盘组织相比较,妊高征胎盘组织中HIF-1α蛋白和mRNA的表达水平明显增加(P＜0.05).结论:HIF-1α在妊高征胎盘组织中表达增高,可能与妊高征的病因及病理生理有关.
作者：吴维光；姚元庆；李东红；于月成；范小斌；张伟 刊期： 2005年第03期
目的:应用单表位合成肽抗原,建立一种新的基于荧光偏振技术(fluorescence polarization,FP)的抗体检测方法.方法:用幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B(UreB)的单表位合成分支肽抗原免疫小鼠,以ELISA法分析免疫的效果.分析FITC标记的合成肽抗原在不同浓度时的FP值,用FP技术分析抗原表位的抗原性以及不同稀释比例的血清样品对FP检测的影响.分别应用FPIA法和ELISA法,对126例样品进行Hp感染检测,对FPIA的检测数据进行受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)分析.结果:UreB的单表位抗原肽具有较强的抗原性和免疫原性;1.0nmoL/L的FITC标记肽可用于FPIA检测,血清样品做1:25稀释时可明显区分阳性和阴性检测结果.与ELISA方法检测的结果相比较,用基于UreB单表位合成肽抗原的FPIA法检测Hp感染的灵敏度为85.7%,特异度为98%.结论:应用UreB单表位合成肽抗原,可对抗UreB的抗体进行快速FPIA检测,用此法检测抗体在疾病的临床诊断中具有广阔的应用前景.
作者：张文红；王琰；郭慧芳；白玉杰；阎小君 刊期： 2005年第03期
第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号.其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个.现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者.
作者：徐竹蔚；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:观察在胶原诱导的C57BL/6小鼠类风湿性关节炎(CIA)模型中,基质金属蛋白酶-2、9在耐酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)阳性的单个核及多核细胞中的表达及其在关节软骨损伤中的作用.方法:注射鸡Ⅱ型胶原免疫C57BL/6小鼠建立CIA模型.在CIA小鼠滑膜及滑膜-软骨交界处,用酶组织化学及免疫组化染色分别检测TRAP+细胞的数量及细胞质内MMP的表达与软骨损伤的关系.结果:酶组织化学法检测表明TRAP+单个核及多核细胞增多的数量与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.903,P＜0.01).免疫组化染色显示TRAP+细胞胞质内有MMP-2、9的表达,且表达的增多与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.954,P＜0.01).结论:在CIA小鼠病变关节增生的滑膜组织及浸润到软骨表面的滑膜组织中的TRAP+单个核及多核细胞可表达MMP-2、9,表达的增多与软骨的破坏呈正相关,这些细胞在关节软骨的损伤中起到重要的作用.
作者：赵雯；朱平；王彦宏 刊期： 2005年第03期
目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性.方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a(+)中.以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Western blot检测.采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白.结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白.目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%.表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性.结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖.
作者：安家泽；宋振顺；窦科峰；李开宗；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)在环磷酰胺(CY)处理小鼠胸腺中的表达.方法:将质粒pEGFP-c3和梭华-SofastTM基因转染试剂按一定比例配制成转染液,经腹腔注入3组小鼠(每组15只)进行转染.转染24h后分别注射0.5、1、2mg/只的CY,并设对照组(15只).18h后称小鼠体质量,然后处死动物,无菌取胸腺并称重,用PBS洗出细胞,制成单细胞悬液,于荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果:GFP可在小鼠胸腺中表达,且GFP+细胞数与CY的剂量相关.高剂量的CY处理可导致胸腺明显萎缩、胸腺细胞总数及GFP+细胞数的减少.结论:转染质粒pEGFP-c3并经CY处理的小鼠及正常对照组小鼠的胸腺中均可表达GFP,但CY处理的小鼠胸腺中GFP的表达情况明显低于对照组小鼠.
作者：艾正亚；施用晖；乐国伟；虞泽鹏；王海松 刊期： 2005年第03期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
