吴维光；姚元庆；李东红；于月成；范小斌；张伟
目的:制备高效价的鼠源性抗人μ链单克隆抗体(mAb),并建立可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法.方法:以人IgM全分子免疫BALB/c小鼠,按常规方法进行细胞融合,用间接ELISA法筛选及克隆化,建立可稳定分泌抗μ链mAb的杂交瘤细胞株.mAb的特性(效价、Ig亚类、特异性及相对亲和力)采用ELISA及Western blot法鉴定.以纯化的mAb包被建立ELISA捕捉法,并用于可疑乙脑患者标本中特异性IgM抗体的检测.结果:筛选到1株可稳定分泌抗人μ链mAb的细胞株2E5.mAb腹水的ELISA效价为1×10-6,Ig亚类(型)为IgGl(κ),相对亲和力为1×10-5.Western blot结果显示mAb2E5仅与IgM的μ链结合,Mr为75000.以辛酸-硫酸铵法纯化的mAb2E5包被,建立了ELISA捕捉法,用于30份乙脑患者血清IgM的检测,敏感性及特异性良好.结论:成功地制备1株抗人μ链mAb2E5,建立了可用于感染性疾病早期血清学诊断的ELISA捕捉法.
作者：杨敬；丁天兵；任君萍；宋建华；马文煜 刊期： 2005年第03期
目的:观察接种以膜蛋白形式表达屋尘螨抗原Derp2基因的重组BCG(rBCG),对BALB/c小鼠Th细胞免疫应答的影响.方法:以生理盐水为对照,分别将rBCG和BCG经腹腔注射接种于6～8wk龄和新生BALB/c小鼠,用ELISA法测定小鼠血清、脾脏T细胞培养上清(STLCS)中IL-4、IFN-γ水平,用双色荧光标记-流式细胞仪法测定脾脏细胞Th细胞亚群.结果:接种rBCG和BCG后,成年和新生小鼠血清和STLCS中IL-4水平较对照组显著降低、IFN-γ水平显著升高;无论成年鼠还是新生鼠,在CD4+的脾脏细胞中,IFN-γ+细胞的比例明显升高,而IL4+细胞比例明显降低;此外,在两个年龄组小鼠,接种rBCG者脾细胞均产生了较BCG组更高水平的IFN-γ;同时,用rBCG免疫的两组小鼠脾脏CD4+IFN-γ+的细胞比例也明显高于BCG免疫各组.结论:无论rBCG还是BCG通过腹腔注射免疫,均可诱导不同年龄BALB/c小鼠产生Th1免疫应答;表达在rBCG细胞壁上的Der p2被当成BCG的成分,为机体免疫系统所识别,抗原再次接触进一步刺激了Der p2特异性的Th1应答.这些结果表明,胞壁型抗原重组BCG可作为有效的疫苗,特异性地调节Th1/Th2平衡.
作者：史皆然；张新海；师长宏；曹云新；吴昌归；李元；范雄林；戚好文 刊期： 2005年第03期
目的:探讨神经细胞形成的体外微环境,诱导骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)向神经元分化的机制.方法:从SD大鼠骨髓中提取BMSC进行体外培养、扩增,并用免疫组化染色进行鉴定.以绿色荧光染料PKH67标记BMSC后,将BMSC与神经细胞共培养以及用双层培养皿联合培养8d后,用免疫荧光检测BMSC是否分化为神经元.结果:将BMSC与神经细胞共培养后,BMSC出现神经元的形态特点,且有(32.72±2.56)%的神经元表达特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE),与BMSC自然分化组(对照组)相比较差异非常显著(P＜0.05);但用双层培养皿联合培养时,只有(4.87±0.79)%的BMSC表达NSE,与对照组相比较差异不显著(P＞0.05),但与BMSC和神经细胞共培养组相比较差异显著(P＜0.05).结论:体外培养时,神经细胞形成的局部微环境可促进BMSC向神经元方向分化,并且细胞间的紧密接触是诱导BMSC向神经元分化的重要条件.
作者：闰彬彬；王莉莉；乔俊峰；鹏海生；曹京艳；李呼伦；金连弘 刊期： 2005年第03期
目的:从维甲酸诱导的白血病细胞系HL-600中,克隆编码219个氨基酸的新基因restin,构建原核表达载体、制备抗血清并进行初步应用.方法:采用PCR技术,以维甲酸诱导的白血病细胞的cDNA为模板,扩增出restin的编码区.将其克隆人大肠杆菌表达载体中.经过温度诱导获得restin表达蛋白.利用SDS-PAGE纯化的目的蛋白免疫新西兰大白兔,制备该蛋白的抗血清.以该抗体做间接免疫荧光,初步观察restin在COS-7细胞内的表达分布.结果:大肠杆菌中表达的restin蛋白的Mr为26000.将其初步纯化后免疫新西兰白兔制备的抗血清,用Western blot检测其效价为1:800.间接免疫荧光显示,restin蛋白主要分布在细胞核内.结论:成功地制备抗restin的抗体,为进一步研究restin蛋白在组织中的表达、细胞内亚定位以及信号转导通路提供了前提条件.
作者：路凡；杨辉；王孝功；蒲勤；李毅；赵文明；赵忠良 刊期： 2005年第03期
目的:观察重组人白细胞介素-2(rhIL-2)与阿霉素长循环热敏脂质体(ALTSL)联合靶向治疗荷H22瘤小鼠的协同作用,并探讨其抑瘤作用的机制.方法:以荷H22瘤小鼠的瘤重为指标,评价药物的抑瘤活性.以荷H22瘤小鼠的存活天数计算生命延长率.以乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性.以MTT比色法检测淋巴细胞的转化率.以流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡及p53、Fas、FasL和caspase-3的表达.用RT-PCR法测定IL-2mRNA及IL-12mRNA的表达.镜下观察荷H22瘤小鼠肿瘤、心、肝及肾脏组织的病理变化.结果:rhIL-2+ALTSL的抑瘤率显著高于单用ALTSL,分别为73.5%和67.0%;ALTSL和rhIL-2+ALTSL均可显著延长荷瘤小鼠的存活时间(P＜0.05～P＜0.01)与对照组和游离阿霉素(FADM)组相比较,ALTSL组NK细胞的杀伤活性显著增加,rhIL-2+ALTSL组NK细胞的杀伤活性更高.与FADM组比较,rhIL-2+ALTSL组淋巴细胞的转化率明显提高(P＜0.01).应用ALTSL组和rhIL-2+ALTSL组均可增强脾细胞中IL-2mRNA和IL-12mRNA的表达,但后者的增强作用高于前者.病理切片检查显示,热敏脂质体配合肿瘤局部加热,使肿瘤细胞凝固坏死,联合应用rhIL-2肿瘤组织溶解,细胞破碎,可见大量的淋巴细胞浸润.结论:ALTSL能提高ADM的抑瘤效果,降低ADM心肺的毒性.rhIL-2+ALTSL可诱导肿瘤细胞凋亡,激活并增强T细胞和NK细胞的杀伤活性,发挥协同作用.
作者：董兰凤；梅和珊；宋淑霞；吕占军 刊期： 2005年第03期
第8届国际人类白细胞分化抗原专题讨论会(HLDA8)从上届CD247后共命名了92个新的编号.其中正式CD编号68个,CDw编号6个,还预留了CD18个.现将CD和CDw共76种分子及其单克隆抗体(mAb)或代号,主要表达细胞和分组,相对分子质量(Mr),以及主要的生物学功能整理成表(表1),以飨读者.
作者：徐竹蔚；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗神经细胞突起生长诱向因子(β-Netrin)的多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),并对其特异性进行鉴定.方法:应用GoldKey软件分析人β-Netrin C末端结构域氨基酸的序列(共114个氨基酸),确定抗原表位并人工合成多肽.然后采用碳化二亚胺法,将合成肽与载体蛋白-牛血清白蛋白(BSA)偶联作为抗原,免疫BALB/c小鼠.取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次进行HAT选择培养,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞并克隆化.对分泌的mAb的效价、Ig亚类(型)及特异性,分别用间接ELISA和Western blot进行鉴定.同时,通过免疫细胞化学染色鉴定抗体的特异性.另外,以偶联的分子免疫新西兰白兔,制备抗β-Netrin的pAb,用Western blot鉴定其特异性.结果:以确定的此16个氨基酸的序列NH2-FRGKRT-LYPESWTDRG-COOH作为抗原表位,以人工合成多肽与BSA偶联作为免疫原,获得3株可稳定分泌特异性抗β-NetrinmAb的杂交瘤细胞.免疫细胞化学染色结果表明,这3株抗体均能特异性地识别细胞中的抗原.另外,制备了高效价的抗β-Netrin的pAb,并能特异性地识别原核表达的β-Netrin蛋白.结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功地制备出抗β-Netrin的pAb和mAb.
作者：余利红；高艳；王利红；韩洪彦；孙志贤；张成岗 刊期： 2005年第03期
目的:探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白及其mRNA在妊高征和正常妊娠胎盘组织中的表达的差异.方法:应用Western blot检测10例妊高征和10例年龄匹配的正常妊娠的胎盘组织中HIF-1α蛋白表达的水平;应用实时定量PCR,检测两种组织中HIF-1αmRNA表达的水平.结果:与正常妊娠胎盘组织相比较,妊高征胎盘组织中HIF-1α蛋白和mRNA的表达水平明显增加(P＜0.05).结论:HIF-1α在妊高征胎盘组织中表达增高,可能与妊高征的病因及病理生理有关.
作者：吴维光；姚元庆；李东红；于月成；范小斌；张伟 刊期： 2005年第03期
目的:研究Nestin、CK19、胰岛素、胰高血糖素及生长抑素在胚胎胰腺发育中的表达,探讨胰岛细胞分化发育的机制.方法:采用免疫组化SABC法及免疫组化双染法(LAB-SA),对30例6～14wk人胚胎胰腺中,Nestin、CK19、胰岛素,胰高血糖素及生长抑素阳性的细胞进行定位.结果:(1)胚胎胰腺发育中Nestin阳性细胞存在于胰腺的间质,数量极少;CK19在胰腺导管上皮分化中持续表达,呈强阳性;(2)7wk胰腺导管上皮开始分化出胰岛细胞,胰岛素、胰高血糖素及生长抑素表达阳性,三者的表达并无时段差异性;随着胎龄的增加,阳性细胞数增加,14wk时胰岛逐渐形成,表达达到高峰.结论:胚胎胰腺的发育中,胰腺间质存在胰腺干细胞;胚胎早期胰腺导管上皮细胞开始分化并分泌胰岛素,其自分泌的激素可能参与调节胰岛细胞的迁移和胰岛的形成.
作者：杨开明；李爱冬；羊惠君；梅妍；周鸿鹰 刊期： 2005年第03期
目的:检测结缔组织生长因子(CTGF)在小鼠肺内的表达,并探讨其在肺纤维化中的意义.方法:通过向气管内滴入博莱霉素建立小鼠肺纤维化模型.用免疫组化染色方法检测不同时期肺组织中CTGF蛋白的表达;用RT-PCR检测CTGF mRNA的表达;用酸水解法测定肺羟脯氨酸的含量.结果:在正常小鼠肺组织中,CTGF蛋白和其mRNA几乎不表达;而在模型组的肺组织中表达明显升高(P＜0.01).CTGF蛋白表达于支气管/细支气管上皮细胞、肺泡Ⅱ型上皮细胞和肺成纤维细胞,表达量与肺组织中羟脯氨酸的含量呈显著的正相关(r=0.92,P＜0.001).结论:CTGF与肺纤维化的形成关系密切,CTGF检测可作为评价肺纤维化发生、发展的一种灵敏的指标.
作者：张雷；卢惠苹；赖国祥 刊期： 2005年第03期
目的:探讨绿色荧光蛋白(GFP)在环磷酰胺(CY)处理小鼠胸腺中的表达.方法:将质粒pEGFP-c3和梭华-SofastTM基因转染试剂按一定比例配制成转染液,经腹腔注入3组小鼠(每组15只)进行转染.转染24h后分别注射0.5、1、2mg/只的CY,并设对照组(15只).18h后称小鼠体质量,然后处死动物,无菌取胸腺并称重,用PBS洗出细胞,制成单细胞悬液,于荧光显微镜下观察GFP的表达情况.结果:GFP可在小鼠胸腺中表达,且GFP+细胞数与CY的剂量相关.高剂量的CY处理可导致胸腺明显萎缩、胸腺细胞总数及GFP+细胞数的减少.结论:转染质粒pEGFP-c3并经CY处理的小鼠及正常对照组小鼠的胸腺中均可表达GFP,但CY处理的小鼠胸腺中GFP的表达情况明显低于对照组小鼠.
作者：艾正亚；施用晖；乐国伟；虞泽鹏；王海松 刊期： 2005年第03期
目的:在大肠杆菌中表达ESP30蛋白,并制备兔抗ESP30抗体.方法:从嗜水气单胞菌基因组中扩增ESP30基因序列,并克隆入非融合表达载体pDH2中,在温度诱导下,表达目的蛋白,以表达的ESP30作为免疫原免疫家兔制备抗ESP30抗血清,抗体效价及特异性分别用ELISA和Westernblot法鉴定.结果:在大肠杆菌中高效表达相对分子质量(Mr)约为66000的ESP30蛋白.ELISA法检测抗血清的效价可达到1:128000,Western blot分析抗血清可与原核表达的ESP30蛋白特异结合.结论:成功地制备兔抗ESP30的抗血清,为进一步研究ESP30蛋白的结构和功能奠定了基础.
作者：张莹莹；李福洋；张文红；张健；黄勇；刘新平；药立波 刊期： 2005年第03期
目的:体外折叠形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,并研究其生物学功能.方法:以原核表达的可溶性HLA-G1的重链及轻链β2m,与人工合成的抗原九肽体外进行共折叠复性.将折叠产物通过Sephadex G-75层析柱纯化,经Western blot进行构象鉴定.探讨可溶性HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响,对混合淋巴细胞培养中T细胞增殖的影响,以及对活化T细胞凋亡的影响.结果:折叠产物可与mAb W6/32特异性结合,在Western blot的鉴定中呈阳性反应.可溶性HLA-G1可有效地抑制NK细胞的细胞毒作用,抑制混合淋巴细胞培养中T细胞的增殖,促进活化T细胞发生凋亡.结论:体外折叠成功地形成可溶性HLA-G1-抗原肽复合物,该复合物具有抑制NK细胞和T细胞的活性.
作者：杨敬宁；吴雄文；梁智辉；韩军艳；黄亚非；龚非力 刊期： 2005年第03期
目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(cOPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制.方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC.A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram.应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Western blot检测I-κB蛋白的含量.结果:(1)A1组PBMC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;I-κB的水平显著低于B组(P＜0.01).(2)与A1组比较,A2组和A3组的PBMC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P＞0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P＜0.01).(3)与A1组比较,A2组NF-κB阳性细胞的百分率及I-κB的水平无显著差异(P＞0.05);而A3组的PBMC中NF-κB阳性细胞的百分率下降(P＜0.05),I-κB蛋白的水平无显著变化(P＞0.05).A4组PBMC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P＜0.01).结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关.非选择性PDE抑制剂茶碱对IL-8基因的表达无明显影响.
作者：杨丹蕾；徐永健；李超乾；张珍祥；倪望 刊期： 2005年第03期
目的:制备抗结肠肿瘤相关抗原的单克隆抗体(mAb)并对其进行初步的鉴定及功能研究.方法:将结肠癌细胞系或磨碎的结肠癌组织免疫小鼠,按常规方法进行细胞融合,采用活细胞周围花环形成的方法进行阳性克隆的筛选.用间接免疫荧光染色和流式细胞术分析及酶免疫组织化学的方法进行初步鉴定,并用抗体介导的补体依赖的细胞毒试验(CDC)进行初步的功能研究.结果:获得了2株分泌抗结肠肿瘤相关抗原mAb杂交瘤细胞株3A12和6A8.流式细胞仪检测,2株杂交瘤分泌的抗体均能在结肠癌细胞系中均为阳性.普通石蜡切片及组织芯片的免疫酶组织化学染色结果,显示2株mAb均在结肠肿瘤组织中有较高的阳性率.2株mAb分别与靶细胞及补体作用后,对于靶细胞的杀伤率分别为98.1%和42.4%.结论:成功地制备了2株识别结肠癌细胞表面抗原的mAb,在结肠癌的诊断和治疗中可能具有潜在的应用价值.
作者：黄海燕；朱勇；刘雪松；蓝天；宋朝君；王鑫；金伯泉 刊期： 2005年第03期
目的:用小鼠制备抗兔BK通道β亚基的抗血清.方法:采用RT-PCR扩增编码兔BK通道β亚基胞内段的基因.在大肠杆菌中表达GST-β亚基融合蛋白.以从PAGE凝胶上切下的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗血清.用ELISA和Western blot鉴定抗血清的特异性.结果:用RT-PCR扩增出约300bp的兔BK通道基因.序列分析显示,扩增的序列与已发布的新西兰大白兔骨骼肌BK通道的序列完全一致.在E.coli DH5α成功地表达Mr约为37000GST-β亚基融合蛋白.ELISA和Western blot检测证明,针对GST-β亚基融合蛋白的抗血清,不仅可特异性地识别GST-β,也可识别源于兔组织的β蛋白.抗血清的高滴度达1:128000.结论:克隆了编码兔BK通道β亚基胞内段的基因,并成功地获得可特异性识别新西兰大白兔BK通道β亚基的高滴度抗血清,为BK通道的进一步研究提供了物质基础.
作者：王亚蓉；魏经国；孙强；马克军；张孝勇；张艳霞；韩骅 刊期： 2005年第03期
目的:建立甲基苯基四氢吡啶(MPTP)诱导的帕金森病模型小鼠,检测血浆IL-6和IL-1的水平,并探讨其与脑不对称的关系.方法:利用区分行为不对称的伸爪取食试验,将C57BL/6J小鼠区分为反映脑不对称的左利小鼠和右利小鼠.给小鼠腹腔注射MPTP25mg/kg,每日1次,连续5日,建立小鼠帕金森病模型,对照组注射等体积的生理盐水.后1次注射MPTP后1、3、14d杀鼠取血,采用ELISA检测各时间点小鼠血浆IL-6和IL-1的水平.结果:正常对照组血浆IL-6水平很低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后14d,血浆IL-6的水平显著升高(P＜0.01).而且第14天右利小鼠血浆IL-6的水平高于左利小鼠IL-6水平(P＜0.05).正常对照组小鼠血浆IL-1的水平也较低,而模型组小鼠在末次注射MPTP后3d,血浆IL-1的水平显著升高(P＜0.05),而且左利小鼠的水平明显高于右利小鼠(P＜0.01).结论:IL-6和IL-1可能参与了MPTP诱导的C57BL/6J小鼠帕金森病的发生发展,并与脑不对称有关.
作者：申延琴；李康生；P.J.Neveu 刊期： 2005年第03期
目的:检测培养的大鼠原代肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)是否表达IL-18Rα和IL-18RβmRNA.方法:以肾小管节段贴块法进行原代RTECs的培养.用免疫细胞化学染色法鉴定细胞的类型,用RT-PCR检测RTECs中IL-18RαmRNA及IL-18RβmRNA的表达.结果:免疫细胞化学染色法证实,原代培养的细胞均为RTECs,并表达IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA.结论:在RTECs中有IL-18RαmRNA和IL-18RβmRNA的表达,为探讨IL-18R在肾间质纤维化中提供了实验依据的作用.
作者：杜胜华；刘华锋；唐德燊；陈孝文 刊期： 2005年第03期
目的:构建鸡白细胞介素-2(IL-2)真核重组表达质粒,体外鉴定其能否表达.方法:将鸡IL-2cDNA(RT-PCR法获得),克隆入真核高效表达质粒pcDNA3.1(+)中,构建pcDNA-IL-2重组表达质粒.PCR和双酶切的方法鉴定克隆的正确性.然后构建pcDNA-IL-GFP重组表达质粒(即GFP基因与IL-2的一段上游基因融合表达),PCR方法鉴定克隆的正确性.脂质体法转染COS-1细胞,荧光显微镜下观察荧光.结果:正确构建了真核重组表达质粒pcDNA-IL-2和pcDNA-IL-GFP.荧光显微镜下可观察到很强的绿色荧光.结论:鸡IL-2克隆和表达成功.为下一步用重组质粒pcDNA-IL-2免疫BALB/c小鼠,研制鸡IL-2单克隆抗体奠定了基础.
作者：提金凤；郝贵杰；张艳梅；邵卫星；彭大新；刘秀梵 刊期： 2005年第03期
目的:对不同剪接形式的小鼠era基因(mera)进行克隆、原核表达,并进行纯化,检测抗人Era蛋白抗体对于两种剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后鼠Era蛋白的研究奠定基础.方法:采用两种剪接形式era基因的MBP融合表达载体(pMAL-meraW,pMAL-meraS),在大肠杆菌中进行表达,对其进行纯化,并应用Western blot鉴定了抗人Era蛋白抗体的特异性.结果:原核表达的MBP-mEraW、MBP-mEraS融合蛋白经过薄层扫描后发现其分别占菌体总蛋白的17%、19%;纯化后的融合蛋白纯度为67%和61%;用抗人Era蛋白抗体进行Western blot发现抗体特异性较好,适合两种剪接形式的鼠Era蛋白的检测.结论:利用原核系统高效表达了不同剪切形式的鼠era基因,并检测了兔抗人Era蛋白抗体对不同剪接形式鼠Era蛋白的特异性,为以后对鼠era基因的研究奠定了基础.
作者：董轲；陈苏民；纪宗玲；郑玉；陈南春 刊期： 2005年第03期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
