姜亚卓；田普训；丁小明；薛武军；丁晨光
目的:人抗菌肽β防御素3(HBD3)除具有杀灭多种病原菌的作用外,还参与机体免疫防御的多个过程,本实验的目的是进一步了解HBD3在人体的生物功能.方法:通过将编码HBD3成熟链的基因与载体pGEX-KG相连,表达出谷胱甘肽S转移酶与HBD3(GST-HBD3)的融合蛋白,制备HBD3的抗体.结果:通过Western blot检测及免疫组化方法证实HBD3抗体的制备成功,显示了HBD3蛋白在食道上皮细胞的表达部位.结论:为进一步了解HBD3在人体的功能及其在疾病状态下的改变奠定了坚实的基础.
作者：司利钢；刘玺诚；王根宇；吕有勇；李文梅；王琳 刊期： 2007年第10期
目的:进行人致肺纤维化因子的原核和真核表达,并利用原核表达蛋白制备兔抗人致肺纤维化因子多克隆抗体.方法:人致肺纤维化因子为同一基因的一组可变剪切产物,将其共有cDNA序列(ChS)插入质粒pQE-30,构建ChS-pQE表达质粒,转化大肠杆菌M15,表达菌株经IPTG诱导,获得大量不可溶的包涵体蛋白.以之为抗原免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体.对该多克隆抗体初步检测证明获得较高滴度和较高特异性的抗体,并用Western blot鉴定这组cDNA连接到pcDNA3.1D载体后在真核细胞的重组表达.结果:原核表达的不可溶性重组蛋白也能成功地制备出多克隆抗体.结论:成功地表达了人致肺纤维化因子,并制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体,人致肺纤维化因子的表达和功能研究提供了一条途径.
作者：陈晓华；蔡国平 刊期： 2007年第10期
目的:制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:人工合成免疫原BSA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选阳性克隆.以间接竞争ELISA法对mAb的敏感性、特异性、亲和力等特性进行检测,并对其效价、亚类、稳定性等特性进行鉴定.结果:获得了1株稳定分泌抗FB1 mAb的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2),其亚类为IgG2b,腹水和上清效价分别为1∶1.28×106和1∶3.2×103,亲和常数为3.13×106 M-1.mAb的间接竞争ELISA法灵敏度为0.09088 mg/L,与FB1的类似物FB2有轻微交叉反应,与污染玉米的另外5种真菌毒素ZEN、AFB1、DON、T-2、OA以及载体蛋白BSA和OVA无交叉反应性,稳定性良好.结论:成功地制备了抗FB1特异性mAb,为开展FB1免疫学检测方法的研究提供了有力的工具.
作者：许金俊；陈飞；秦爱建；陶建平；彭金彪；邵红霞；金文杰 刊期： 2007年第10期
目的:观察肾上腺髓质素(ADM)对转化生长因子β1(TGF-β1)促肺成纤维细胞增殖和胶原合成的影响,探讨ADM在肺血管结构改建和组织损伤修复中可能发挥的作用.方法:采用体外细胞培养方法,培养人胚肺成纤维细胞,免疫组化法鉴定.采用细胞计数、四氮唑盐(MTT)法测定成纤维细胞增殖,3H-脯氨酸掺入法测定成纤维细胞胶原合成与分泌.结果:原代培养人胚肺成纤维细胞,免疫组化染色α-actin阴性,证明本实验所培养的细胞是成纤维细胞.TGF-β1明显促进成纤维细胞增殖和胶原合成.加入TGF-β1,成纤维细胞数和A值分别增加了46.8%和32.03%,胶原合成和分泌增加了54.14%和43.40%(P＜0.01).给予ADM,TGF-β1的促增殖和胶原合成作用受到抑制,加入10-9、10-8、10-7 mol/L ADM,成纤维细胞数和A值分别下降了18.36%和17.7%、31.19%和21.31%、52.83%和40.14%(P＜0.01);胶原合成分别被抑制了16.12%(P＜0.05)、4.52%(P＞0.05)、38.17%(P＜0.01)、16.36%(P＜0.05)、42.30%、26.48%(P＜0.01).结论:ADM可以抑制TGF-β1引起的肺成纤维细胞增殖和胶原合成,提示ADM具有抑制TGF-β1的促血管重塑和纤维化效应.
作者：郝淑玲；于忠和；齐保申；周晓梅 刊期： 2007年第10期
目的:设计并构建针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达载体,观察其对转染细胞中的caspase-8的抑制作用.方法:化学合成用于产生针对caspase-8的发夹状的RNA的寡核苷酸,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入经Hind Ⅲ和Bgl Ⅱ双酶切后的pSUPER真核表达载体.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导,把重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,RT-PCR、间接免疫荧光检测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果.结果:构建了针对人caspase-8基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER-C1和pSUPER-C2,并在人HeLa细胞中有效发挥了对caspase-8基因的干涉作用,而且pSUPER-C1对于caspase-8基因的抑制作用要优于pSUPER-C2.结论:成功地构建了针对人caspase-8基因的siRNA载体,转染HeLa细胞后可抑制caspase-8基因的表达.
作者：赵行宇；张巍；吕士杰；陈默然；沈楠；田晶；任旷 刊期： 2007年第10期
目的:构建藏羚羊大脑皮质组织的cDNA文库并鉴定文库质量.方法:提取藏羚羊大脑皮质组织总RNA,经oligotex试剂盒纯化得到mRNA.利用SMART技术,使用含有Sfi I B酶切位点的oligo(dT)引物和含有Sfi I A酶切位点的SMART Ⅳ寡核苷酸在PowerScript逆转录酶作用下运用mRNA 5'末端的模板转换方法合成cDNA第1链.利用LDPCR扩增cDNA,经Sfi I(Ⅰ A和Ⅰ B)酶切后,通过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离去除＜500 bp的片段,再同经Sfi I酶切的λTrip IEx2载体连接,体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中,进行文库滴度和重组率的测定,然后扩增文库并随机挑取10个噬菌斑行PCR反应鉴定插入片段大小.结果:构建的cDNA文库滴度为1.8×109 pfu/L,重组率＞98%,文库扩增后滴度达8×1012 pfu/L,插入片段长度在750～6000 bp之间,平均长度为4250 bp.结论:文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆藏羚羊大脑皮质组织特异表达基因奠定了基础.
作者：白振忠；曹越；杨应忠；马兰；靳国恩；格日力 刊期： 2007年第10期
目的:构建幽门螺杆菌(Hp)UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株,在大肠杆菌中表达UreB-Omp11融合蛋白,并检测其免疫学活性.方法:用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的ureB和omp11基因并用重叠延伸PCR法获得ureB-omp11融合基因,将融合基因ureB-omp11插入原核表达载体pET30a(+)、pET28a(+)及pMAL-c2X中,筛选出合适的表达系统并进行融合蛋白的表达,采用Western blot对表达产物进行鉴定,并用Amylose亲和层析法纯化融合蛋白,应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析,纯化的融合蛋白辅以免疫佐剂皮下免疫小鼠,Western blot对免疫小鼠血清进行检测.结果:特异PCR法、酶切鉴定并经测序分析后证实融合基因ureB-omp11克隆入表达载体pET30a(+)、pET28a(+)与pMAL-c2X中;重组菌TB1(pMAL-ureB-omp11)经诱导获得了高效表达的MBP-UreB-Omp11融合蛋白,该融合蛋白可以被Hp免疫小鼠血清和Hp阳性患者血清中的相应抗体所识别,纯化后的融合蛋白纯度达90%以上.通过大肠杆菌抗原吸收法纯化免疫小鼠血清后,与纯化的融合蛋白进行杂交,结果显示在Mr 134 000处出现特异杂交带,融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.结论:成功地构建并筛选出了Hp MELHP27融合蛋白UreB-Omp11的重组疫苗候选株TB1(pMAL-ureB-omp11),为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了基础.
作者：赵玉霞；齐建华；章涵；段广才；郗园林 刊期： 2007年第10期
目的:制备抗人CD1d单克隆抗体(mAb)并研究其结合特性.方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术制备鼠源性抗人CD1d mAb.用免疫荧光染色和流式细胞术鉴定其识别位点.结果:获得1株分泌抗CD1d mAb的杂交瘤细胞株.mAb的腹水ELISA效价达10-6,为IgG1亚类,可识别293T细胞转染的CD1d分子的α1结构域.结论:获得1株可特异性识别CD1d α1结构域的mAb,为进一步研究CD1d的结构及功能提供了手段.
作者：刘莹；李德敏；徐小宁；刘雪松；金伯泉 刊期： 2007年第10期
目的:观察人截短型AIF(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1～400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过Western blot检测该基因在转染细胞中的表达通过电镜观察截短型分子对肿瘤细胞的具有促凋亡活性.结果:经酶切鉴定与测序证实,AIF△1-400的真核表达载体构建成功.通过Western blot证实截短型基因在HeLa细胞中表达,电镜观察可见转染细胞骨架的破坏和细胞核固缩等凋亡特征.结论:人截短型AIF(AIF△1-400)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
作者：张巍；张勇；韩涛；孟艳玲；温伟红；薛茜；任君琳；杨安钢 刊期： 2007年第10期
目的:探讨细胞因子(IL-23、IL-2和IL-15)对正常人外周血单个核细胞(PBMC)和CD4+T细胞IL-17产生的诱导作用和调节因素.方法:将正常人PBMC和纯化的CD4+T细胞在不同条件下与IL-23、IL-2和IL-15进行培养,采用ELISA法检测细胞培养液中IL-17和IFN-γ的水平;采用酶联免疫斑点试验(ELISPOT)在单个细胞水平上检测IL-17和IFN-γ产生细胞的频率.结果:IL-23可诱导PBMC产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12受体β1(IL-12Rβ1)mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生.IL-2和IL-15均可诱导IL-17和IFN-γ产生,并与IL-23具有共同诱导作用.IL-12可诱导PBMC产生大量的IFN-γ,但不产生IL-17.进一步研究表明,IL-23、IL-2和IL-15可直接诱导纯化的CD4+T细胞产生IL-17和IFN-γ.结论:IL-23、IL-2和IL-15可直接作用于正常人CD4+T细胞诱导其产生IL-17和IFN-γ;Th2细胞因子和抗IL-12Rβ1 mAb可抑制IL-23诱导的IL-17和IFN-γ产生.为探讨自身免疫性疾病等的发生机制和治疗提供了新的靶点.
作者：范艳莹；吴长有 刊期： 2007年第10期
目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性.方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③将Aβ42与PC12细胞培养,加入健康老人和AD患者的血清后,MTT法观察PC12细胞存活率.结果:AD患者的血清中抗Aβ抗体与成熟老年斑和Aβ42-GST融合蛋白的结合能力较弱;加入AD血清后,PC12细胞的A值较健康老人血清相比下降明显(P＜0.01).结论:AD血清中抗Aβ抗体对淀粉样蛋白可能存在着免疫耐受.
作者：杨志勇；汪华侨；徐杰；谢瑶；袁群芳；姚志彬 刊期： 2007年第10期
目的:检测和分析不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(CD4+ CD25high Treg)水平特点和意义.方法:选取进行期(70例)、稳定期(64例)和消退期(38例)寻常型银屑病患者,知情同意后,取外周抗凝全血,分离单一核细胞,采用流式细胞术检测不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high Treg的水平,并统计分析其特点与意义.结果:进行期、稳定期和消退期寻常型银屑病患者组外周血CD4+ CD25high Treg与CD4+淋巴细胞的百分比分别为(2.86±0.9)%、(3.95±0.6)%和(4.77±0.1)%.稳定期和消退期寻常型银屑病患者组明显高于进行期组(t'=8.312,P＜0.01;t=10.126,P=0.000),而消退期组明显高于稳定期组(t'=4.588,P＜0.01).值得注意的是,消退期寻常型银屑病患者组与正常对照组比较,差异显著,消退期组仍低于正常对照组(t=2.281,P=0.0264).结论:不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high Treg水平存在显著差异,提示CD4+ CD25high Treg与寻常型银屑病发生和病程发展关系密切.本研究为深入研究寻常型银屑病免疫学发病机制做出了初步的尝试与探索.
作者：陈凌；沈柱；伍津津；关宁 刊期： 2007年第10期
目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较.方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况.结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点.LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响.结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力.此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据.
作者：许晓光；王春艳；谢鑫；张圆；韩卫宁；蔡明；石炳毅；金伯泉 刊期： 2007年第10期
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体.方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白.通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性.结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶25 600以上.以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性.结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础.
作者：独军政；常惠芸；高闪电；王光华；王景锋；丛国正；邵军军；林彤；才学鹏；谢庆阁 刊期： 2007年第10期
目的:通过比较未经灌流处理的重肝血浆及处理过的重肝血浆对CYP3A的影响,阐明C3A细胞安定代谢变化的原因,为未来C3A细胞的改造与功能优化奠定基础.方法:制备血浆和培养C3A细胞;实验分为4组:正常胎牛血浆(NFBP)组,正常人血浆(NHP)组,体外灌流慢性重型肝炎患者血浆(HPP)组,体外未灌流慢性重型肝炎患者血浆(CSHP)组.用分光光度法测定红霉素N-脱甲基酶(ERD)活性即CYP4503A的活性,Western blot法测定CYP4503A4的表达.结果:CSHP组ERD活性低于NFBP组(P＜0.05)及NHP组(P＜0.05),HPP组ERD活性也低于NFBP组(P＜0.05)及NHP组(P＜0.05),HPP组ERD活性高于CSHP组(P＜0.05);CSHP组CYP4503A4的表达低于NFBP组(P＜0.05)及NHP组(P＜0.05),HPP组CYP4503A4的表达也低于NFBP组(P＜0.05)及NHP组(P＜0.05),HPP组CYP4503A4的表达高于CSHP组(P＜0.05).结论:经慢性重型肝炎患者血浆培养的C3A细胞,CYP4503A活性及蛋白表达降低.与之相比,经过体外灌流的慢性重型肝炎患者血浆其C3A细胞CYP4503A活性及蛋白表达有所增加,CYP4503A活性增加可能是导致安定代谢变化的原因.
作者：闫丽；陈煜；郑素军；赵军；武志明；段钟平 刊期： 2007年第10期
乳腺癌已成为危害妇女健康的常见恶性肿瘤.乳腺癌的主要治疗手段仍为手术、化疗、放疗及内分泌治疗等.但这些方法对于进展期乳腺癌的疗效并不理想,仍有40%的患者死于肿瘤复发和转移[1].因此,人们渴望新的治疗手段来提高治疗效果,改善生活质量.近年来,随着对免疫学的深入研究,以树突状细胞(dendritic cell,DC)为基础构建的乳腺癌治疗疫苗成为研究的热点.
作者：杨超；刘运江 刊期： 2007年第10期
目的:研究RPS15a在胃腺癌中的表达及意义.方法:免疫组化方法检测RPS15a在100例胃腺癌及癌旁组织中的表达.结果:胃腺癌中RPS15a蛋白阳性率为78.0%(78/100),癌旁组织中RPS15a蛋白阳性率为44.0%(44/100).RPS15a蛋白在胃腺癌组织中表达明显高于癌旁组织(P＜0.05),且与胃腺癌组织浆膜浸润、淋巴结转移有明显相关性(P＜0.05).结论:RPS15a可能在胃腺癌发生、发展中起重要作用.
作者：孟存英；袁东红；王映梅；王燕；张欣；刘杰 刊期： 2007年第10期
目的:比较Wnt/β-catenin信号分子在HepG2和L02细胞中的表达,探讨Wnt/β-catenin信号转导通路在肝癌发生中的作用机制,为肝癌的防治提供新的思路.方法:选取Wnt/β-catenin信号转导通路中上下游关键因子Wnt1、Wnt4、β-catenin、cyclin D1以及c-myc等,应用RT-PCR的方法观察他们在正常肝脏L02细胞和肝癌HepG2细胞中的转录水平.用免疫细胞化学染色方法和Western blot检测研究Wnt/β-catenin信号转导通路中关键的成员β-catenin在上述2个细胞株中的定位和定量表达.结果:在正常的L02肝细胞中,用RT-PCR的方法未检测到Wnt1、Wnt4、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有β-catenin的基因被转录表达.同时用免疫细胞化学染色观察到β-catenin在L02细胞膜处存在表达.而在HepG2肿瘤细胞中,不仅检测到β-catenin的基因转录,同时也检测到Wnt1、cyclin D1以及c-myc的mRNA转录,只有Wnt4未转录.用免疫细胞化学的方法观察β-catenin在肿瘤细胞中的表达明显增强,表现为胞膜着色减弱而胞质甚至是胞核的阳性染色.采用Western blot检测也验证了β-catenin蛋白在肿瘤细胞中的表达水平明显高于正常细胞.结论:Wnt/β-catenin信号转导通路在人的肝癌细胞HepG2中存在异常活性,Wnt1可能是导致信号通路激活的始动因素之一.
作者：王启明；贾连群；周鸿鹰；李云生 刊期： 2007年第10期
目的:构建shRNA的表达载体,检测针对乙型肝炎病毒(HBV)的shRNA的稳定表达质粒对HBV复制和表达的影响.方法:扩增U6启动子构建shRNA表达载体pU6.针对HBV基因组序列设计并化学合成双链核苷酸克隆到pU6载体得到质粒pU6B/HBVi,脂质体介导转染带有HBV基因组的2.2.15细胞,定量PCR和ELISA法检测pU6B/HBVi对HBV复制和表达的影响.结果:成功构建了shRNA的真核表达载体;针对HBV的pU6B/HBVi质粒对HBV的复制和表达有明显的抑制作用.结论:稳定表达shRNA的pU6B/HBVi质粒可以抑制HBV在2.2.15细胞中的复制和表达.
作者：张宏斌；武婕；郑文岭；马文丽；冼江；谢闻悦；李薇；王捷 刊期： 2007年第10期
目的:构建和表达不带Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody[CD3×Pgp]),并测定其生物学活性.方法:利用PCR方法构建不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]原核表达载体,进行原核表达,制备抗抗CD3 scFv亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定.通过间接免疫荧光法和竞争性免疫荧光结合流式细胞术(FCM)检测生物学活性.结果:无Etag的Diabody[CD3×PgP]表达载体经测序证实其序列正确.SDS-PAGE电泳显示2条带,相对分子质量(Mr)分别为25 000和26 000,与预期Mr相符.去除Etag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合阳性率分别为89.87%和83.95%.竞争结合实验中,与K562/A02和Jurkat细胞竞争后结合率分别为50.25%和43.78%.结论:成功构建了不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体、进行原核表达及纯化.不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]能特异性结合CD3和PgP靶抗原,Etag标记去除后其生物学活性没有降低.
作者：刘娟妮；高瀛岱；王金宏；邵晓枫；范冬梅；纪庆；熊冬生；杨纯正 刊期： 2007年第10期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
