陈凌；沈柱；伍津津；关宁
目的:探讨去黏附化对抗死亡受体5(DR5)抗体诱导的食管癌鳞癌EC9706细胞系凋亡的影响及作用机制.方法:用EDTA消化对蓝菌素A预处理或未处理的贴壁生长的食管癌细胞,制备悬浮细胞;利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达及人抗DR5功能抗体诱导的细胞凋亡;利用免疫荧光技术观察食管癌EC9706细胞DR5表达分布.结果:悬浮食管癌细胞对抗DR5的功能性抗体诱导的细胞凋亡的敏感性明显高于铺展者;未经蓝菌素A预处理制备的悬浮食管癌细胞的表面DR5表达明显高于经蓝菌素A处理制备的悬浮者.在铺展的食管癌EC9706细胞,DR5分布于细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,在细胞核没有DR5分布,但在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达明显增强.结论:去黏附化增强食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导细胞凋亡的敏感性,该作用是通过去黏附化增强DR5向细胞表面转运实现的,DR5的膜转运与高尔基体有关.该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义.
作者：刘广超；马远方；都景芳；张军；李淑莲；白慧玲 刊期： 2007年第10期
目的:探讨经MACS系统在体外获得大量高纯度未成熟树突状细胞(imDC)的方法,并对其细胞表面标志、形态和功能进行鉴定.方法:对健康C57小鼠的骨髓通过MACS系统分离、纯化CD117+造血干细胞(HSC);使用SCF+IL-3行体外扩增,并采用GM-CSF+IL-4+IL-10诱导其定向分化为imDC;进而在倒置显微镜、扫描电镜以及透射电镜下观察其形态、功能,采用流式细胞计数法检测、鉴定其表面标志物的表达.结果:SCF+IL-3可以分别在3、5、7 d时体外扩增HSC达10.34±1.43倍、22.65±2.71倍、54.39±3.08倍;小鼠HSC可被成功诱导分化为imDC,且具有吞噬功能,表面树突呈毛刺状、较为短小,imDC并表达CD11c+、I-A/I-Elow、CD40-、CD80-、CD86-.结论:本方法可稳定、有效地获得大量高纯度的mDC.
作者：姜亚卓；田普训；丁小明；薛武军；丁晨光 刊期： 2007年第10期
目的:构建2种HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物四聚体,并初步用该2种四聚体检测针对不同抗原肽特异性的细胞毒性T细胞(CTL).方法:原核高效表达HLA-A*2402-BSP和β2m蛋白后,分别与乙型肝炎病毒抗原肽Po1756-764和Core117-125在体外复性折叠成可溶性的HLA-A*2402抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体,分别将复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成2种HBV抗原肽四聚体.后进行流式细胞术检测.结果:Dot-ELISA和ELISA检测显示获得了2种具有天然构象的生物素化的HBV抗原肽-HLA-A*2402复合物单体.结论:构建的2种四聚体可以检测乙型肝炎感染者体内特异性的CTL.
作者：杨新星；郝友华；宋娜；陈玲；刘贽；杨东亮 刊期： 2007年第10期
目的:利用原核细胞表达牛口蹄疫病毒受体通用亚基整联蛋白αv的配体结合域(LBD)片段,分离纯化目的蛋白后制备兔多克隆抗体.方法:以含有牛整联蛋白全长cDNA的质粒为模板PCR扩增得到位于αv成熟肽氨基端的LBD基因片段,经酶切消化处理后,与同样酶切处理的原核表达载体pPRoEXTMHTb相连,构建原核表达质粒pPRo/αvLBD,测序确认读码框正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3),以IPTG诱导表达αvLBD蛋白.通过SDS-PAGE鉴定后提取包涵体,以电泳分离纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体.通过ELISA和Western blot鉴定血清效价和特异性.结果:成功构建了pPRo/αvLBD原核表达载体,实现了重组αvLBD蛋白在大肠杆菌中的高效表达,SDS-PAGE显示其Mr约为40000,主要以包涵体形式存在于菌体中.制备的兔多克隆抗体效价达1∶25 600以上.以Western blot检测,该血清可与目的蛋白发生特异性反应,证明其具有良好的免疫原性.结论:实现了牛口蹄疫病毒受体通用亚基αvLBD的高效表达和高效价多克隆抗体的制备,为深入研究整联蛋白αv在口蹄疫病毒致病过程中的作用奠定基础.
作者：独军政；常惠芸；高闪电；王光华；王景锋；丛国正；邵军军；林彤；才学鹏；谢庆阁 刊期： 2007年第10期
目的:观察心肌缺血/再灌注损伤前后基因差异表达,探讨缺血/再灌注后心肌细胞损伤的分子生物学机制.方法:提取大鼠缺血/再灌注前后心肌组织mRNA并纯化,用Affymetrix RAT 230A基因表达谱芯片,对表达差异基因进行检测.结果:按差异显著阳性标准,从14000个基因中筛选出缺血/再灌注后差异表达基因179条,其中123条表达上调,56条表达下调,包括原癌基因、细胞周期、信号转导、细胞外基质、细胞骨架蛋白、转录因子、DNA损伤修复基因、凋亡相关蛋白及核糖体蛋白等相关编码基因.结论:用cDNA表达谱芯片分析心肌缺血/再灌注后基因表达,能快速筛选出再灌注损伤相关基因,为临床上更有效地预防缺血/再灌注损伤提供根据.
作者：刘艳霞；顾云；吴永涛；辛毅；罗毅；黄益民 刊期： 2007年第10期
目的:进行人致肺纤维化因子的原核和真核表达,并利用原核表达蛋白制备兔抗人致肺纤维化因子多克隆抗体.方法:人致肺纤维化因子为同一基因的一组可变剪切产物,将其共有cDNA序列(ChS)插入质粒pQE-30,构建ChS-pQE表达质粒,转化大肠杆菌M15,表达菌株经IPTG诱导,获得大量不可溶的包涵体蛋白.以之为抗原免疫新西兰大白兔,制备出多克隆抗体.对该多克隆抗体初步检测证明获得较高滴度和较高特异性的抗体,并用Western blot鉴定这组cDNA连接到pcDNA3.1D载体后在真核细胞的重组表达.结果:原核表达的不可溶性重组蛋白也能成功地制备出多克隆抗体.结论:成功地表达了人致肺纤维化因子,并制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体,人致肺纤维化因子的表达和功能研究提供了一条途径.
作者：陈晓华；蔡国平 刊期： 2007年第10期
目的:观察去除白细胞成分的血液输注在预防免疫性发热输血反应中的作用.方法:取保存期分别为7 d、14 d及21 d的红细胞悬液60个U(单位/袋),在无菌条件下,用白细胞过滤器去除血液中的白细胞,取过滤前后的血液标本,检测WBC、RBC、Hb、血浆中的pH值、钾钠离子及游离Hb;选择血液病和肿瘤患者800例,随机分为观察组和对照组各400例,观察组输注去除白细胞的血液,对照组输注未去除白细胞的血液,观察两组的输血反应的发生率.结果:白细胞过滤器对白细胞的去除率为99%,红细胞的回收率为92%,过滤后的血液各项生化指标无明显变化.观察组免疫性发热输血反应的发生率为1.25%,对照组为8.75%.结论:白细胞过滤器具有较高的WBC去除率,对RBC的生物学性质影响较小,输注去除白细胞成分的血液可使免疫性发热输血反应的发生率明显降低.
作者：杨世明；杜润家；张勇萍；田榆；费红毅 刊期： 2007年第10期
目的:设计并构建针对人caspase-8基因mRNA的siRNA表达载体,观察其对转染细胞中的caspase-8的抑制作用.方法:化学合成用于产生针对caspase-8的发夹状的RNA的寡核苷酸,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入经Hind Ⅲ和Bgl Ⅱ双酶切后的pSUPER真核表达载体.对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定.通过脂质体介导,把重组质粒瞬时转染入HeLa细胞,RT-PCR、间接免疫荧光检测其对mRNA和蛋白表达的干涉效果.结果:构建了针对人caspase-8基因的RNA干涉真核表达载体pSUPER-C1和pSUPER-C2,并在人HeLa细胞中有效发挥了对caspase-8基因的干涉作用,而且pSUPER-C1对于caspase-8基因的抑制作用要优于pSUPER-C2.结论:成功地构建了针对人caspase-8基因的siRNA载体,转染HeLa细胞后可抑制caspase-8基因的表达.
作者：赵行宇；张巍；吕士杰；陈默然；沈楠；田晶；任旷 刊期： 2007年第10期
目的:研究脂多糖(LPS)对星形胶质细胞(AC)生长的影响及其可能的机制.方法:在原代培养的AC中加入不同浓度的LPS作用不同时间,观察AC生长的情况,以及NF-κB通路抑制剂SN50对AC生长的影响.同时以不同浓度的LPS作用24 h后,观察随后8 d AC生长的变化.结果:在LPS作用不同时间中,只有作用24 h后,低剂量的LPS可使AC的生长加快,高剂量的LPS则可抑制AC生长.以LPS作用AC 24 h后,短期内LPS可促进AC的生长,长期则抑制AC生长,且呈剂量依赖性.NF-κB通路抑制剂可阻断LPS对AC生长的影响.结论:低剂量的LPS短期内可促进AC生长,高剂量时则抑制AC生长,而炎症对AC的长期影响是对细胞的生长增殖起抑制作用.其可能的分子机制可能与NF-κB通路激活有关.
作者：李学忠；周媛；刘春风；白龙梅 刊期： 2007年第10期
目的:研究阿尔茨海默病(AD)血清中抗Aβ抗体与淀粉样蛋白结合的特性.方法:以AD患者和健康老人的血清作一抗,①用组织淀粉样斑块免疫反应(TAPIR)观察与Tg2576鼠脑内老年斑结合能力;②Western blot检测与Aβ42-GST融合蛋白的结合能力;③将Aβ42与PC12细胞培养,加入健康老人和AD患者的血清后,MTT法观察PC12细胞存活率.结果:AD患者的血清中抗Aβ抗体与成熟老年斑和Aβ42-GST融合蛋白的结合能力较弱;加入AD血清后,PC12细胞的A值较健康老人血清相比下降明显(P＜0.01).结论:AD血清中抗Aβ抗体对淀粉样蛋白可能存在着免疫耐受.
作者：杨志勇；汪华侨；徐杰；谢瑶；袁群芳；姚志彬 刊期： 2007年第10期
目的:制备抗伏马菌素B1(Fumonisin B1,FB1)单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:人工合成免疫原BSA-FB1,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞融合技术制备抗FB1的mAb,通过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选阳性克隆.以间接竞争ELISA法对mAb的敏感性、特异性、亲和力等特性进行检测,并对其效价、亚类、稳定性等特性进行鉴定.结果:获得了1株稳定分泌抗FB1 mAb的杂交瘤细胞(命名为5H12-C6-C2),其亚类为IgG2b,腹水和上清效价分别为1∶1.28×106和1∶3.2×103,亲和常数为3.13×106 M-1.mAb的间接竞争ELISA法灵敏度为0.09088 mg/L,与FB1的类似物FB2有轻微交叉反应,与污染玉米的另外5种真菌毒素ZEN、AFB1、DON、T-2、OA以及载体蛋白BSA和OVA无交叉反应性,稳定性良好.结论:成功地制备了抗FB1特异性mAb,为开展FB1免疫学检测方法的研究提供了有力的工具.
作者：许金俊；陈飞；秦爱建；陶建平；彭金彪；邵红霞；金文杰 刊期： 2007年第10期
随着工业的高速发展,空气污染越来越严重,过敏性疾病的患病率在全球范围内均呈逐年增加的趋势,据估计40%以上的世界人口处于特异性超敏性状态.世界卫生组织(WHO)已将变态(过敏)反应病列为全球重点防治的疾病,世界发达国家和地区已投入了大量的人力及财力进行了深入的研究,变态反应性疾病的防治研究已引起人们极大关注[1].
作者：宋晓妮；董文其 刊期： 2007年第10期
目的:人抗菌肽β防御素3(HBD3)除具有杀灭多种病原菌的作用外,还参与机体免疫防御的多个过程,本实验的目的是进一步了解HBD3在人体的生物功能.方法:通过将编码HBD3成熟链的基因与载体pGEX-KG相连,表达出谷胱甘肽S转移酶与HBD3(GST-HBD3)的融合蛋白,制备HBD3的抗体.结果:通过Western blot检测及免疫组化方法证实HBD3抗体的制备成功,显示了HBD3蛋白在食道上皮细胞的表达部位.结论:为进一步了解HBD3在人体的功能及其在疾病状态下的改变奠定了坚实的基础.
作者：司利钢；刘玺诚；王根宇；吕有勇；李文梅；王琳 刊期： 2007年第10期
目的:以原核表达的结核分枝杆菌Rv2450蛋白在小鼠体内诱导体液和细胞免疫应答.方法:采用皮下包埋的方法,以预先转移到硝酸纤维素膜上的原核表达的Rv2450蛋白免疫小鼠(10只)3次,每次间隔2周.用间接ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体的滴度.末次免疫完成后4周,处死3只免疫小鼠并分离脾淋巴细胞,体外经PPD(2 μg/孔)刺激后,用MTT比色法检测免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖指数.用ELISA法检测脾淋巴细胞悬液中IFN-γ、IL-10及IL-12的水平.结果:Rv2450蛋白免疫小鼠血清特异性抗体的滴度为1∶3 200,淋巴细胞增殖指数为3.76±0.19.免疫小鼠脾淋巴细胞培养液中IFN-y、IL-10及IL-12的含量,分别为(1 740±19)ng/L、(678±15)ng/L、(469±13)ng/L,均高于各组的生理盐水对照组(P＜0.05).结论:Rv2450有可能作为新型结核疫苗的候选组分.
作者：薛莹；柏银兰；高辉；王丽梅；徐志凯 刊期： 2007年第10期
目的:检测和分析不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high调节性T细胞(CD4+ CD25high Treg)水平特点和意义.方法:选取进行期(70例)、稳定期(64例)和消退期(38例)寻常型银屑病患者,知情同意后,取外周抗凝全血,分离单一核细胞,采用流式细胞术检测不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high Treg的水平,并统计分析其特点与意义.结果:进行期、稳定期和消退期寻常型银屑病患者组外周血CD4+ CD25high Treg与CD4+淋巴细胞的百分比分别为(2.86±0.9)%、(3.95±0.6)%和(4.77±0.1)%.稳定期和消退期寻常型银屑病患者组明显高于进行期组(t'=8.312,P＜0.01;t=10.126,P=0.000),而消退期组明显高于稳定期组(t'=4.588,P＜0.01).值得注意的是,消退期寻常型银屑病患者组与正常对照组比较,差异显著,消退期组仍低于正常对照组(t=2.281,P=0.0264).结论:不同病程寻常型银屑病患者外周血CD4+ CD25high Treg水平存在显著差异,提示CD4+ CD25high Treg与寻常型银屑病发生和病程发展关系密切.本研究为深入研究寻常型银屑病免疫学发病机制做出了初步的尝试与探索.
作者：陈凌；沈柱；伍津津；关宁 刊期： 2007年第10期
目的:构建靶向Hax-1基因的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体pGenesil-Hax-1,并探讨siRNA靶向抑制Hax-1基因表达的作用.方法:根据shRNA设计的原则,在Hax-1全长序列中选取含19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pGenesil-1中,获得可靶向抑制Hax-1基因的重组shRNA表达载体.采用LipofectamineTM2000转染试剂将pGenesil-Hax-1导入HeLa细胞中;分别采用RT-PCR以及Western blot从mRNA和蛋白水平上检测干扰效果.结果:半定量PCR及Western blot结果表明,siRNA可使Hax-1 mRNA的转录水平得到显著抑制(P＜0.01),Hax-1蛋白的表达较对照组减少约70%.结论:靶向Hax-1基因的重组shRNA表达载体pGenesil-Hax-1介导的siRNA可显著抑制Hax-1基因在人宫颈癌HeLa细胞中的表达.
作者：翟志芳；郝飞；姜友昭；钟白玉；阎衡；钟华 刊期： 2007年第10期
目的:观察人截短型AIF(AIF△1-400)对HeLa细胞的促凋亡作用.方法:在AIF△1-120基因克隆成功的基础上进一步改造,构建截去AIF基因线粒体定位信号、FAD结合结构域和NADH结合结构域(1～400位氨基酸)编码序列的AIF△1-400基因,将其克隆入pcDNA3真核表达载体,用脂质体法转染HeLa细胞,通过Western blot检测该基因在转染细胞中的表达通过电镜观察截短型分子对肿瘤细胞的具有促凋亡活性.结果:经酶切鉴定与测序证实,AIF△1-400的真核表达载体构建成功.通过Western blot证实截短型基因在HeLa细胞中表达,电镜观察可见转染细胞骨架的破坏和细胞核固缩等凋亡特征.结论:人截短型AIF(AIF△1-400)基因的表达可诱导HeLa细胞凋亡.
作者：张巍；张勇；韩涛；孟艳玲；温伟红；薛茜；任君琳；杨安钢 刊期： 2007年第10期
目的:构建和表达不带Etag标记的抗CD3/抗Pgp微型双功能抗体(Diabody[CD3×Pgp]),并测定其生物学活性.方法:利用PCR方法构建不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]原核表达载体,进行原核表达,制备抗抗CD3 scFv亲和层析柱进行纯化,SDS-PAGE鉴定.通过间接免疫荧光法和竞争性免疫荧光结合流式细胞术(FCM)检测生物学活性.结果:无Etag的Diabody[CD3×PgP]表达载体经测序证实其序列正确.SDS-PAGE电泳显示2条带,相对分子质量(Mr)分别为25 000和26 000,与预期Mr相符.去除Etag的Diabody[CD3×Pgp]与K562/A02和Jurkat细胞结合阳性率分别为89.87%和83.95%.竞争结合实验中,与K562/A02和Jurkat细胞竞争后结合率分别为50.25%和43.78%.结论:成功构建了不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]表达载体、进行原核表达及纯化.不带Etag的Diabody[CD3×Pgp]能特异性结合CD3和PgP靶抗原,Etag标记去除后其生物学活性没有降低.
作者：刘娟妮；高瀛岱；王金宏；邵晓枫；范冬梅；纪庆；熊冬生；杨纯正 刊期： 2007年第10期
目的:构建幽门螺杆菌(Hp)UreB-Omp11融合蛋白的重组疫苗候选株,在大肠杆菌中表达UreB-Omp11融合蛋白,并检测其免疫学活性.方法:用PCR方法扩增郑州分离Hp菌株MEL-HP27的ureB和omp11基因并用重叠延伸PCR法获得ureB-omp11融合基因,将融合基因ureB-omp11插入原核表达载体pET30a(+)、pET28a(+)及pMAL-c2X中,筛选出合适的表达系统并进行融合蛋白的表达,采用Western blot对表达产物进行鉴定,并用Amylose亲和层析法纯化融合蛋白,应用SDS-PAGE方法对纯化产物进行分析,纯化的融合蛋白辅以免疫佐剂皮下免疫小鼠,Western blot对免疫小鼠血清进行检测.结果:特异PCR法、酶切鉴定并经测序分析后证实融合基因ureB-omp11克隆入表达载体pET30a(+)、pET28a(+)与pMAL-c2X中;重组菌TB1(pMAL-ureB-omp11)经诱导获得了高效表达的MBP-UreB-Omp11融合蛋白,该融合蛋白可以被Hp免疫小鼠血清和Hp阳性患者血清中的相应抗体所识别,纯化后的融合蛋白纯度达90%以上.通过大肠杆菌抗原吸收法纯化免疫小鼠血清后,与纯化的融合蛋白进行杂交,结果显示在Mr 134 000处出现特异杂交带,融合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.结论:成功地构建并筛选出了Hp MELHP27融合蛋白UreB-Omp11的重组疫苗候选株TB1(pMAL-ureB-omp11),为Hp蛋白质疫苗和核酸疫苗的研制奠定了基础.
作者：赵玉霞；齐建华；章涵；段广才；郗园林 刊期： 2007年第10期
Foxp3是Forkhead/winged helix家族的新成员,定位于X染色体上,通过forkhead结构域与DNA特定位点结合,调节目的基因的活化与表达.其编码产物为scurfin蛋白,可能是CD4+CD25+调节性T细胞(简称CD4+ CD25+ Treg)特异性标志,对CD4+ CD25+ Treg的增殖分化及功能发挥起重要作用.CD4+ CD25+ Treg同时表达CD4和CD25,介导机体特异性免疫耐受,抑制机体自身免疫性疾病、肿瘤、病毒感染及器官移植免疫等.Foxp3基因突变或缺失可引起风湿、类风湿、系统性红斑狼疮、X-相关综合征等疾病;Foxp3基因过表达可诱导机体对肿瘤、病毒及器官移植等产生免疫耐受.Foxp3表达上调,可维持免疫耐受、抑制排斥反应和自身免疫性疾病;Foxp3表达下调,降低机体免疫耐受,可治疗肿瘤、器官移植及慢性病毒感染.
作者：王健；丁小霞 刊期： 2007年第10期
细胞与分子免疫学杂志
主管:中国免疫学会；第四军医大学
主办：陕西省免疫学会,中国免疫学会
