学术投稿

重组 GST-β-GT 融合蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定

郭庆栋;李慎涛;张玉祥;贾弘褆

关键词:GST-β-GT融合蛋白, 核表达载体, 蛋白纯化
摘要:目的:构建噬菌体β‐GT蛋白的原核重组体系,诱导表达、纯化GST‐β‐GT 融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β‐GT基因;经T‐A克隆,获得β‐GT基因片段,经酶切连接,构建原核表达载体pGEX‐6P‐1‐β‐GT ;经测序鉴定序列正确后,将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。利用IPTG诱导,经10% SDS‐PAGE鉴定目的蛋白表达后,采用GST柱纯化目的蛋白;通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β‐GT基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出GST‐β‐GT融合蛋白;通过GST柱纯化后获得了GST‐β‐GT融合蛋白,纯度达95%;通过酶切和qPCR验证,此GST‐β‐GT融合蛋白具有T4‐β‐GT酶的活性。结论。原核表达GST‐β‐GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。
贵州医药杂志相关文献
  • 儿童后纵隔节细胞神经母细胞瘤1例报告

    节细胞神经母细胞瘤(ganglioneuroblastoma , GNB)是一种罕见的起源于神经嵴交感神经原细胞的恶性肿瘤,我科在2011年3月收治1例并确诊,现报告如下。

    作者:王涛;胡晓;林鹏;肖家荣;刘文;张舰 刊期: 2015年第05期

  • 重组 GST-β-GT 融合蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定

    目的:构建噬菌体β‐GT蛋白的原核重组体系,诱导表达、纯化GST‐β‐GT 融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β‐GT基因;经T‐A克隆,获得β‐GT基因片段,经酶切连接,构建原核表达载体pGEX‐6P‐1‐β‐GT ;经测序鉴定序列正确后,将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。利用IPTG诱导,经10% SDS‐PAGE鉴定目的蛋白表达后,采用GST柱纯化目的蛋白;通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β‐GT基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出GST‐β‐GT融合蛋白;通过GST柱纯化后获得了GST‐β‐GT融合蛋白,纯度达95%;通过酶切和qPCR验证,此GST‐β‐GT融合蛋白具有T4‐β‐GT酶的活性。结论。原核表达GST‐β‐GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。

    作者:郭庆栋;李慎涛;张玉祥;贾弘褆 刊期: 2015年第05期

  • 血小板聚集率与创伤性出血量的相关性研究

    阿司匹林是临床常用的抗血小板药物之一,常用剂量为75~325 m g ,其主要作用是抑制血小板聚集。血小板聚集率作为临床常用的抗血小板治疗疗效检测的重要指标[1]。有报道[2]称持续服用阿司匹林可能增加患者的术中或术后出血量,也有报道[3]称持续服用阿司匹林并未明显增加患者的出血量。因此,术前是否停用抗血小板药物存在争议。本文通过给予家兔服用阿司匹林,观察连续用药及用药7d后停药7d,家兔血小板聚集率、血小板计数、出血时间、凝血时间及创伤性出血量之间的变化情况,分析不停药是否增加出血风险及血小板聚集率与创伤性出血量的相关性,进而分析血小板聚集率能否作为术前停药的参考指标。

    作者:陈旋;陈惠;曾祥刚 刊期: 2015年第05期

  • 125I 放射性粒子组织间内放疗治疗涎腺恶性肿瘤的应用进展

    涎腺恶性肿瘤是头颈部常见的恶性肿瘤,发生率约占上皮源性肿瘤的7%左右[1],其生物学特点为生长速度较为缓慢,早期自觉症状不明显,颈淋巴结转移较少见,但局部浸润性较强,且易发生远处转移。目前涎腺恶性肿瘤的治疗方法主要以手术治疗为主,术后辅以放疗等其他治疗。传统外放疗放射区域大,周围正常组织对放射线耐受量低,患者常有皮肤破溃感染、唾液腺及口腔反应、吞咽和张口困难及颌骨骨髓炎等副作用,且化疗对头颈部腺源性肿瘤相对不敏感;而125 I放射性粒子组织内植入近距离放射治疗是一种新兴的微创疗法,属于放射治疗的一种,具有疗效显著、安全有效、易防护、创伤小、并发症少等优点,在临床工作中已应用。本文将125 I放射性粒子内放疗在涎腺恶性肿瘤的治疗中的应用情况进行综述。

    作者:万丞丞(综述);罗洪(审校) 刊期: 2015年第05期

  • 全身麻醉意识消失与大脑不同区域的关系探讨

    全身麻醉是由全身麻醉药可逆地改变行为和生理状态--意识消失、遗忘、镇痛以及肌肉松弛,同时伴随自主神经系统、心血管系统、呼吸系统和体温调节系统的变化[1]。全身麻醉药物导致意识消失的过程需要大脑不同区域共同参与,研究显示全身麻醉药的重要靶点γ‐氨基丁酸A型(γ‐aminobutyric acid type A ,GABAA)受体和N‐甲基天冬氨酸(N‐methyl‐Daspartate ,NMDA)受体广泛分布于皮层、丘脑、脑干和纹状体[2];脑功能成像研究发现麻醉药导致的意识消失与深睡眠之间有一定的相似性[3],毁损或失活睡眠‐觉醒相关核团,如蓝斑,桥脑脚被盖核和结节乳头状核,可增强全身麻醉的效能[4]。探寻全身麻醉意识消失机制需对中枢神经系统进行深入研究,即探讨全麻药物在特定神经环路的作用以及全身麻醉意识消失与睡眠‐觉醒环路的关系。

    作者:钱坤(综述);喻田;刘兴奎(审校) 刊期: 2015年第05期

  • NSE及S-100蛋白检测在判断新生儿脑损伤预后中的价值

    目的:探讨N S E及S‐100蛋白浓度对于判断新生儿脑损伤预后的意义。方法回顾我院收治的61名脑损伤新生儿,并随机抽取我院出生的80名健康新生儿为对照组,收集两组新生儿出生第1天静脉血3 m L送检,检测N S E及S‐100蛋白浓度。结果在发生脑损伤的新生儿中,静脉血N S E及S‐100蛋白平均浓度的测量值分别为(3.210±1.415)μg/L、(17.889±4.657) ng/L ,明显高于健康对照组的(0.454±0.082)μg/L 及(5.168±2.392) ng/L ,同时NBNA评分低于健康对照组;在发生脑损伤的患儿中,预后良好组两种蛋白平均浓度分别为(2.976±1.236)μg/L、(14.363±4.419) ng/L。结论在脑损伤新生儿中,血清NSE及S‐100蛋白水平均升高,且升高程度有助于判断患儿的预后。

    作者:李俊敏 刊期: 2015年第05期

  • 蛋白质组学在口腔疾病研究中的应用

    蛋白质组一词早由澳大利亚学者Wilkins等[1]首次提出,是蛋白质和基因组两词的合并,意指“一种细胞、组织乃至一种生物的基因组所表达的全套蛋白质”,鉴定和分析蛋白质组的科学即为蛋白质组学[2]。蛋白质组学除了分离和识别蛋白质,它还利用蛋白质的表达水平以及翻译后的修饰(如磷酸化、羟基化、糖基化、乙酰化)相互之间的作用分析蛋白质的功能。与基因组不同,蛋白质组是动态的,一方面从整体上揭示生物体或细胞的蛋白质活动,另一方面也从机体或细胞的蛋白质水平发现和研究生命活动的生理和病理现象,更具整体性和可调节性。

    作者:肖茜文;管晓燕(综述);刘建国(审校) 刊期: 2015年第05期

  • Vitapex 糊剂作为永久根管充填剂在老年患者根管治疗中的疗效分析

    目的:观察使用VITAPEX糊剂作为永久性根管充填材料在老年人根管治疗中的临床疗效。方法选择符合老年人根管治疗原则患牙随机分为两组,实验组单独采用Vitapex糊剂进行根管充填,对照组采用热牙胶加根充糊剂进行常规根管充填,比较术后一周和两周的疼痛反应;1年后复查,观察对比两组治疗情况。结果术后实验组和对照组的疼痛发生率相近,差异无统计学意义( P>0.05);实验组及对照组治疗有效率分别为93.62%和96.81%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Vitapex糊剂可作为永久充填材料用于老年人根管充填在临床使用。

    作者:李灵;陈俊宏;张琳;罗佳;杨琴;邓蔓菁 刊期: 2015年第05期

  • DWI 在肝脏占位性病变中的临床应用价值

    目的:评价磁共振弥散加权成像(DWI)在肝脏占位性病变鉴别诊断中的价值。方法回顾性分析我院2014年4月至2015年1月临床发现的124例肝脏占位患者的临床资料,并对所有患者行DWI检查及对ADC值进行测量和计算。结果肝细胞癌与肝血管瘤的ADC分别为[(1.32±0.15)×10-3 mm2/s VS (1.79±0.28)×10-3 mm2/s , t=7.882,P<0.05];肝细胞癌与肝囊肿的ADC分别为[0.32±0.15)×10-3 mm2/s VS (3.42±0.58)×10-3 mm2/s ,t=18.796,P<0.05];肝细胞癌与肝转移瘤的 ADC 分别为[(1.32±0.15)×10-3 mm2/s VS (1.38±017)×10-3 mm2/s ,t=1.725,P=0.088]:肝细胞癌与肝转移瘤的瘤/肝ADC值分别为[(1.08±0.13)×10-3 mm2/s VS (0.52±0.17)×10-3 mm2/s ,t=17.217,P=0.000]。结论对肝脏占位性病变性DWI检查并对ADC值进行分析,能够显著提高M RI对占位性病变良恶性诊断的准确性,为临床鉴别肝脏占位性病变提供了一种新的诊断办法。

    作者:王锋 刊期: 2015年第05期

  • 龈沟液中细胞因子在牙周炎中的临床意义

    龈沟液(gingival crevicular fluid ,GCF)是龈沟内上皮和结合上皮从牙龈结缔组织渗入到龈沟内的液体。牙周炎是一种侵犯牙周支持组织的炎症性破坏性疾病,临床上其严重程度的评价多采用牙周探诊深度、牙龈指数、X线检查等指标,但这些指标反映的都是牙周病的病变结果,而不是活动期的客观指标,因此如何准确地评价牙周病成为了当下学者们所关心与研究的问题。研究发现,龈沟液中成分及其量的变化与牙周病的发生、发展变化有密切的关系,能够反映牙周炎症过程中宿主对病原因子的自然反应状况[1]。龈沟液中有65种以上的成分可以作为初步检测牙周病进展的标记物[2],之中以细胞因子的研究具代表性。

    作者:周塑(综述);周瑛(审校) 刊期: 2015年第05期

  • 慢性阻塞性肺疾病合并支气管舒张试验阳性的临床研究

    目的:对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并支气管舒张试验阳性患者的主要辅助检查进行分析,为该病的诊治提供临床资料。方法2013年4-12月选取60例COPD患者为研究对象,其中支气管舒张试验阳性者30例为研究组,阴性者30例为对照组。分析两组药前及药后1 s用力呼气容积占预计值百分比(FEV 1% pred)、1 s用力呼气容积与用力肺活量的比值(FEV 1/FVC)、二氧化碳分压(PaCO2)、氧分压(PaO2)及血常规等相关结果的差异。结果研究组药前FEV 1% pred、FEV1/FVC%较对照组降低;但药后该指标较对照组升高,差异均有统计学意义(P<0.05);血常规检查示:嗜酸性粒细胞计数较对照组升高,差异亦有统计学意义(P<0.01);而血气分析指标 PaO2、PaCO2以及外周血血红蛋白计数与对照组比较,差异均无统计学意义( P>0.05)。结论嗜酸粒细胞浸润可能是COPD出现气道高反应性的重要原因;该类患者气道阻塞程度在未有效治疗前可能较无气道高反应性的患者更重;但在支气管扩张剂治疗后其阻塞程度明显改善,易于逆转,因此应该进一步加强治疗。

    作者:李世川;张湘燕;廖强;张程 刊期: 2015年第05期

  • T2DM 合并肺结核患者维生素D与 T 细胞亚群的相关性分析

    目的:探讨2型糖尿病(T2DM)合并肺结核患者血清25(OH)D水平与T细胞免疫功能的相关性。方法选择2014年5月至2014年10月我院肺结核患者102例为实验组,其中2型糖尿病合并肺结核患者(A组)52例,单纯肺结核患者(B组)50例;以健康献血者50例为对照组(C组)。测定三组的血清25(O H )D、T 细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平,分析25(O H )D与CD4+/CD8+的相关性。结果25(O H )D、CD3+、CD4+在三组间及三组内两两相比均有统计学差异( P<0.05)。CD4+/CD8+在三组间及C组与A、B组相比有统计学差异(P<0.05)。三组25(OH)D与CD4+/CD8+均呈正相关(P<0.05)。结论25(OH)D缺乏的肺结核患者,尤其是2型糖尿病合并肺结核患者T细胞免疫功能受损,为此类患者补充维生素D可能使其获益。

    作者:魏兰;贾新转;冯军鹏;彭海军;段小亮;秦学博;李玉琢 刊期: 2015年第05期

  • 外周 T 细胞淋巴瘤合并弥漫大 B 细胞淋巴瘤伴骨髓双重浸润1例报告

    不同组织类型的淋巴瘤可以同时或先后发生在相同或不同的解剖学部位。在不同部位同时发生组织学相异的淋巴瘤是少见的[1]。而同时出现 T 细胞和B细胞淋巴瘤的则更为罕见。现报告1例外周T细胞淋巴瘤合并弥漫大B细胞淋巴瘤并伴有骨髓双重浸润的案例。

    作者:张卉;吴莉;王季石 刊期: 2015年第05期

  • 预防使用氟康唑对头孢哌酮引起的大鼠肠道真菌增殖和易位的影响

    目的:探讨预防性使用氟康唑不同的时间对肠道真菌增殖及易位的影响。方法 Wistar大鼠30只、雌雄不限,随机分为三组,每组大鼠每天均按体质量比例使用头孢哌酮舒巴坦钠直至取实验动物标本,每组动物均在第7天始分别加用生理盐水或氟康唑行腹腔注射,生理盐水使用3d(A组),氟康唑使用3d(B组),氟康唑使用5d (C组)后各组取血液、肠系膜、胰腺、肺组织及肠内容物行真菌培养,同时检测血浆1‐3‐β‐D葡聚糖水平。结果与A组比较,B组和C组肠道真菌数量明显减少(P<0.05)、血浆1‐3‐β‐D葡聚糖水平相应明显下降(P<0.05);与B组比较,C组肠道真菌数量显著减少(P<0.05)、血浆1‐3‐β‐D葡聚糖水平也明显下降(P<0.05),与A组、B组比较, C组真菌易位至肠外组织器官总数均明显减少(P<0.05)。肠道真菌增殖分别与血浆1‐3‐β‐D葡聚糖水平和真菌易位至肠外组织器官总数呈正相关( r=0.943和0.923),真菌易位至肠外组织器官总数与血浆1‐3‐β‐D葡聚糖水平呈正相关( r=0.998)。结论预防性使用氟康唑可以明显减少肠道真菌增殖及易位,预防用药5天比较合适,血浆1‐3‐β‐D葡聚糖检测有助于深部真菌感染早期诊断。

    作者:张帅民;罗湘蓉;石承先 刊期: 2015年第05期

  • 经尿道前列腺电切术后19例护理体会

    手术治疗是解决前列腺增生尿路梗阻的有效的方法,但前列腺增生大多为老年男性,抵抗力差,术后易发生并发症,合理的护理措施和手术方案有机地结合能使患者达到良好的治疗效果[1]。我科2013年4月10日至2014年10月共收治前列腺增生患者19例,现报告如下。

    作者:刘开琴 刊期: 2015年第05期

  • 动态监测血清降钙素原水平对评价呼吸机相关性肺炎患者临床预后的意义

    目的:探讨动态监测血清降钙素原水平对评价呼吸机相关性肺炎患者临床预后的研究。方法连续性收录2012年11月至2013年11月于我院住院并确诊V A P的50例患者,动态分析V A P确诊后第1,3,7天 PC T水平变化,利用受试者工作特征曲线综合分析 PCT 水平对VAP患者的评价价值。利用约登指数分析佳切点PCT数值。结果降钙素原动态分析示VAP恶化组患者在VAP确诊后第1、3、7天水平均高于VAP好转组[(3.2±2.5)ng/mL、(4.4±2.9)ng/mL、(2.9±1.8)ng/mL VS.(0.4±0.1)ng/mL、(0.3±0.1)ng/mL、(0.1±0.1)],(P<0.05)。ROC曲线分析示 PCT 在 VAP确诊后第1、3、7天具有较高与预后评价价值(AUC=0.78、0.82、0.85),(P<0.05)。结论动态PCT水平变化是VAP患者预后的潜在评价因子。

    作者:马立作 刊期: 2015年第05期

  • 彩色多普勒超声在2型糖尿病患者下肢动脉病变评估中的价值

    目的:探讨彩色多普勒超声在2型糖尿病患者下肢动脉病变的临床价值。方法回顾性分析于武汉市第八医院超声科行下肢动脉彩色多普勒超声检查的患者及健康体检者的临床资料,根据筛查结果分为+ ASO+DM 组,+ASO -DM组及-ASO -DM组。结果+ ASO+DM 组足背动脉 R与Q和+ ASO -DM 组差异显著,P均<0.05;+ASO+DM组足背动脉R、VMB及Q和-ASO -DM组差异显著,P均<0.01。结论超声诊断糖尿病下肢动脉硬化性疾病有较高的准确性、安全无创为及时发现病变及早干预提供重要指导作用。

    作者:林丽晴 刊期: 2015年第05期

  • 术后服用小剂量米非司酮治疗子宫内膜异位症34例疗效分析

    目的:探讨术后服用小剂量米非司酮治疗子宫内膜异位症的效果,为临床提供参考。方法将68例子宫内膜异位症的患者随机分为对照组和治疗组,对照组服用达那唑胶囊,治疗组给予小剂量米非司酮,考察的临床治疗效果等。结果经治疗后,治疗组58.8%较对照组35.5%差异有统计学意义( P<0.05);治疗组黄体生成素(LH)、睾酮(T)、孕酮(P)水平较对照组改善程度大差异有统计学意义(P<0.05)。结论术后服用小剂量米非司酮用于治疗子宫内膜异位症,可显著改善患者生理指标,减少不良反应的发生率,提高临床治疗的疗效。

    作者:郑疆;陆莹 刊期: 2015年第05期

  • 重症胰腺炎营养支持方式的选择与韦尼克脑病发生关系的观察体会

    韦尼克脑病[1‐2]是因硫胺素(Vit‐B1)缺乏所致的一种中枢神经系统症状综合征,在胰腺炎患者特别是重症患者,因其病程时间长,长期禁饮食,可导致韦尼克脑病的发生。本文通过回顾我科2014年1-7月期间45例住院时间超过30 d的重症急性胰腺炎患者在肠内或肠外营养治疗下与韦尼克脑病发生情况的临床对比观察,可见肠内营养支持下韦尼克脑病的发生率较肠外营养低,为本病治疗过程中营养支持方式的选择提供临床经验。

    作者:龚毅;柳扬;侯炬 刊期: 2015年第05期

  • 利培酮治疗老年精神分裂症28例疗效分析

    目的:探讨采用利培酮治疗老年精神分裂症的临床效果,为临床提供参考。方法选取56例老年精神分裂症患者,随机分为对照组和治疗组,对照组给予奥氮平片进行治疗,治疗组给予利培酮片进行治疗,两组均连续治疗8周,比较两组患者临床效果、PANSS评分及不良反应等。结果经治疗后,对照组总有效率为82.1%,治疗组总有效率为85.7%,治疗组总有效率较对照组无显著性差异(χ2=0.046,P<0.05);两组患者治疗前、后其阳性症状、阴性症状、一般症状的PANSS评分显著变小,有显著性差异(P<0.05),但治疗8周后,两组PANSS评分无显著性差异(P>0.05);对照组体质量增加的发生率明显高于治疗组,具有显著性差异(P<0.05);而治疗组椎体外系反应的发生率明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。结论利培酮改善老年精神分症患者的精神状况,提高临床治疗效果。

    作者:翁德会 刊期: 2015年第05期

贵州医药杂志

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主管:贵州省医药卫生学会办公室

主办:贵州省医药卫生学会办公室