学术投稿

三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较

颜文杰;孙文逵;李培;苏欣;施毅

关键词:THP-1巨噬细胞, 腺病毒, 慢病毒, 细胞转染
摘要:目的 探讨通过腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法转染THP-1巨噬细胞的佳方法.方法 采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率.结果 腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大.MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81 ±2.50)%,细胞病死率为(5.17±0.44)%;MOI=800,转染效率高,EGFP阳性率可达(86.49 ±6.11)%,细胞病死率为(8.80±0.54)%;MOI升至1200后,EGFP阳性率为(77.88±5.77)%,细胞病死率上升明显(14.50±0.77)%(P<0.05);慢病毒转染效率高及细胞毒性较腺病毒低,但因其病毒产量低,实验消耗病毒量大,因而影响其应用.当MOI=10时,EGFP阳性率仅为(28.09±1.67)%,细胞病死率为(4.74±0.31)%;MOI=60时,转染率高,EGFP阳性率为(91.96±1.66)%,细胞病死率升至(7.25±0.50)%,此时病死率才有统计学意义(P<0.05).脂质体2000对THP-1巨噬细胞毒性较大,细胞死亡率高,转染效率极低,不适合转染.结论 腺病毒与慢病毒转染THP-1巨噬细胞各存在一定优劣,在实验中需酌情选择,脂质体2000不适宜转染THP-1巨噬细胞.
中华肺部疾病(电子版)杂志相关文献
  • 支气管镜代替内科胸腔镜检查在胸腔积液诊断中的价值

    胸腔积液是呼吸系统常见疾病,其病因的诊断和鉴别有时非常困难,以往采用胸腔穿刺抽出积液进行常规、生化,标志物等检查,但其敏感性、特异性较低,多数只能做参考[1].确诊胸膜疾病可靠的方法是对病变部位取活检作病理诊断.经皮闭式胸膜活检对胸腔积液病因诊断具有简单、易行、损伤小的优点,但胸膜活检也具有一定的盲目性,阳性率较低.内科胸腔镜(medical thoracoscopy,或pleuroscopy)是一项侵入性操作技术,主要用于经传统方法不能明确病因的胸腔积液患者的诊治,通过直视胸膜病变并取活检,可提高诊断的阳性率.本研究通过回顾性分析2009年1月至2012年6月来我科就诊采用支气管镜代替内科胸腔镜进行检查取得较为满意的效果,且具有完整临床资料的胸腔积液患者105例,现将其结果及支气管镜活检临床应用报道如下.

    作者:葛楠;廖秀清 刊期: 2015年第01期

  • 以慢性咳嗽为主要表现的支气管相关淋巴组织淋巴瘤1例

    病例资料患者女,42岁.银行职员.主诉发作性咳嗽、胸闷4年,加重1个月于2014年5月13日入院.缘于4年前始,每年4月至6月初,出现阵发性中重度咳嗽,并感轻度胸闷,接触油烟、香水后加重,症状可自行缓解.1个月前上述症状复发并加重,到我院门诊就诊,胸片检查无异常,气道反应性测定结果(±),拟诊“咳嗽变异性哮喘”,试吸入福莫特罗布地奈德(160/4.5 μg),2次/d,并联用孟鲁司特钠片10 mg,口服,1次/晚,上述症状未见明显好转,入我院进一步诊治.病来无发热、咯血、盗汗、胸痛,消瘦、声音嘶哑、饮水呛咳、反酸、暖气、鼻塞、流涕等.精神和食欲一般,睡眠欠佳,体重未见明显变化,大小便正常.

    作者:张齐武;高俊峰;左中 刊期: 2015年第01期

  • 痰分子标志物在肺癌早期诊断中的研究进展

    据中国癌症中心新统计数据表明,我国肺癌每年的新发患者数约60万,死亡人数约20万,其发病率及病死率已跃居恶性肿瘤首位[1-2].肺癌一方面是其发病隐匿,约60%患者就诊时已处于晚期,失去了佳治疗时机,导致总体5年生存率不足20%[3];另一方面是目前尚缺乏有效的肺癌早期筛查及诊断的手段.痰液直接来源于呼吸道,取材简便、无创、可重复性强,因此,研究者们不断尝试将分子生物学的先进技术应用于痰液检查中,以寻求高敏感性、高特异性的分子标志物.现将近年来痰分子标志物在肺癌早期诊断中的研究进展作一综述.

    作者:黄晓珠;包勇 刊期: 2015年第01期

  • 吸烟对肺血管重构的作用机制

    吸烟是呼吸系统等多种疾病共同的致病因素,长期吸烟引起肺血管炎症反应及氧化应激、及其烟雾中尼古丁等有害物质对血管的直接损伤,导致肺血管重构终形成肺动脉高压(pulmonary hypertension,PH),严重影响患者预后,是临床治疗的难点.肺血管重构是PH持续进展的重要病理基础,同时也是PH药物疗效不佳的主要原因之一.

    作者:涂洪波;白莉 刊期: 2015年第01期

  • 实习护生护患沟通课程设计的探讨

    为更好保障实习护生接受更加全面的教育,为其提供优质培训课程,加强护患沟通能力的培养是重要的部分[1].护患沟通指的是护士与患者之间确切无误的信息交流和相互作用的过程,其内容包括与患者的护理、康复相关的信息及双方思想、感情、愿望和要求等多方面,从而建立起的信任与合作关系[2].

    作者:郭忠蓉 刊期: 2015年第01期

  • RRM1蛋白表达与体外药敏实验检测对指导非小细胞肺癌化疗的价值

    非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是目前威胁人类健康与生命大的恶性肿瘤之一.即使可切除的NSCLC患者5年生存率仍令人失望,改善术后NSCLC患者局部控制率及远期生存率一直是临床关注的焦点,个体化化疗是21世纪胸外科临床发展的方向和理想治疗模式[1].本研究采用免疫组织化学检测40例NSCLC患者手术切除的新鲜组织标本中核苷酸还原酶M1亚基(ribonucleotide reductase subunit M1,RRM1)蛋白表达水平,同时进行体外原代培养,MTT药敏试验,检测临床常用非小细胞肺癌一线化疗药物吉西他滨(Gemcitabine)的敏感性,比较分析RRM1表达与吉西他滨耐药的相关性.旨在探讨其在NSCLC个体化治疗中疗效的意义,为敏感药物的选择提供参考.

    作者:黄娟;刘浩;邓冲 刊期: 2015年第01期

  • 三种不同方法转染THP-1巨噬细胞效果比较

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    作者:颜文杰;孙文逵;李培;苏欣;施毅 刊期: 2015年第01期

  • 2例胺碘酮致药物性间质性肺炎随访报告

    病历资料患者1,女性,79岁,退休职工.住院号:176911.因“气促2月余”于2012年5月24日入院.患者2月余前因肩周炎及带状疱疹于外院住院,治疗期间出现气促,活动时明显,伴咳嗽,咳痰,胸闷.随后转入我院心内科治疗,气促无好转,经会诊转入我科.既往有高血压病史8年、冠状动脉粥样硬化性心脏病史6年,口服胺碘酮片0.2 gQd6年,于入院前2个月停用.查体:T 36.5℃,P 75次/min,R 20次/min,BP 150/60 mmHg.神志清楚.口唇无发绀.双肺呼吸音清,双下肺可闻及湿哕音,未闻及哮鸣音.心界向左扩大,心率75次/min,律齐,主动脉瓣听诊区及主动脉瓣第二听诊区可闻及收缩期2/6级杂音.

    作者:刘峰;黄华萍;李羲;施蓉萍;刘畅 刊期: 2015年第01期

  • 支气管镜介入热消融术治疗中央型晚期肺癌的临床观察

    目的 探讨支气管镜介入热消融术治疗中央型晚期肺癌气道狭窄的临床效果及安全性.方法 回顾性分析56例经支气管镜活检病理确诊的合并中心气道狭窄的晚期肺癌患者,在局部麻醉下采用支气管镜介导下联合应用氩气刀和高频电刀治疗;以病变狭窄获得再通、临床症状改善进行即时疗效评价,疗效判断标准:完全有效,患者呼吸困难症状消失,腔内新生物完全清除,气道恢复通畅;部分有效,患者呼吸困难症状改善,腔内新生物大部分被清除,超过50%的狭窄管腔重新开放;轻度有效,患者呼吸困难症状改善,腔内新生物小部分被清除,管腔狭窄改善不足50%,经引流狭窄远端肺部炎症消散;无效,腔内新生物未清除,患者呼吸困难无改善.结果 56例患者共行肿瘤热消融术治疗105次,一般每个患者治疗1~4次,多一例治疗11次.临床评价完全有效8例(14.3%),部分有效27例(48.2%),轻度有效21例(37.5%),即时有效率为100%.术中、术后患者未出现严重并发症.结论 局部麻醉下行支气管镜介入热消融术治疗中央型晚期肺癌疗效佳,并发症少,麻醉风险低,患者耐受好,值得借鉴和临床推广.

    作者:姚汉清;王正东;朱湘平;徐兴祥;许文景;秦艳;凡兰桂 刊期: 2015年第01期

  • 嗜肺军团菌血清型1在肺炎中散发情况的调查

    军团菌(Legionella)是引起军团菌病的病原体.1977年美国费城首次暴发了军团菌肺炎(Legionella pneumonia),军团菌作为散发和流行性肺炎的主要病原体,已经在学界获得了广泛的认同.目前已确认军团菌属有52个种,70个血清型,与人类疾病相关的有24个种,其中嗜肺军团菌(Legionella pneumophila,LP)是引起军团菌病的主要病原菌,已发现其有15个血清型.以嗜肺军团菌血清型1(Legionella pneumophila serotype1,LP1)引发的军团菌肺炎为常见,占80%[1].军团菌肺炎是一种急性呼吸道传染病,临床表现以呼吸道受累为主,常易造成多系统损害.

    作者:史鹏;安东善;王树岐;高君 刊期: 2015年第01期

  • 肺癌化疗后并发右小腿软组织严重感染的临床护理

    临床资料患者男,62岁.因发热,鼻衄,右小腿肿胀,疼痛1d于2014-10-26入院.患者于2013年8月因胸闷、气促,加重半个月,确诊为原发性支气管肺癌,右肺,中-低分化腺癌,T2N2M1Ⅳ期,伴双肺转移、心包、纵隔淋巴结、全身多处骨转移、脑转移、表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor,EGFR)野生型、粒细胞缺乏症、血小板减少、中度贫血、低蛋白血症,并进行了6个疗程的化疗.方案均为:多西他赛D1 120 mg,奈达铂D1 140 mg,唑来磷酸D1 4 mg.入院查体:神志清楚,慢性病容,营养中等.

    作者:马秀英;冯欢;朱丹;罗兰霞 刊期: 2015年第01期

  • 以肺部为主要表现的抗Jo-1抗体综合征1例及文献复习

    目的 探讨抗Jo-1抗体综合征的临床特点,提高对该病的认识及诊治水平.方法 结合1例抗Jo-1抗体综合征患者的临床资料,复习国内外相关文献,归纳该病的流行病学特征、发病机制、临床表现、影像学特点、病理学特征、诊断、治疗及预后等.结果 患者女性,61岁,主要表现为进行性胸闷、气短,无肌肉受累、关节病变及皮损等,血气分析提示Ⅰ型呼吸衰竭,胸部影像学表现为肺间质病变,查抗Jo-1抗体阳性,糖皮质激素治疗效果不佳,但病情进展较为缓慢.结论 抗Jo-1抗体综合征临床上较为罕见,容易误诊.主要表现为肌炎、肺间质病变、多关节炎、发热、雷诺现象、技工手等,肺部病变可为其唯一表现.抗Jo-1抗体阳性.目前尚无标准治疗方案,糖皮质激素对部分合并肺间质病变患者有效,但另一部分患者则需其他免疫抑制剂治疗.肺间质病变影响该病预后.

    作者:邓文静;张秋红;张玉萍;史红阳;明宗娟;李维;杨拴盈 刊期: 2015年第01期

  • 体外受精-胚胎移植术后合并急性粟粒性肺结核3例

    体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer cycle,IVF-ET)术后急性粟粒性肺结核在国内尚无本病的相关的流行病学调查,亦缺少大样本的病例报道.本研究采用文献检索方式系统性回顾国内25年IVF-ET后合并血行播散型肺结核的资料,旨在了解我国该病的临床特点、诊疗及预后等,为临床医师快速准确地诊断本病提供重要线索.

    作者:马苗;苗立云;蔡后荣;罗百灵 刊期: 2015年第01期

  • 非小细胞肺癌分子靶向药物耐药机制的研究进展

    肺癌是目前世界上发病率和病死率高的恶性肿瘤之一,其中80%~85%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)[1].尽管治疗NSCLC靶向药物具有很好的临床疗效,但随着用药时间的延长,耐药随之而来,阻碍了靶向药物的继续应用.耐药分为原发性耐药和继发性耐药,根据RECIST或WHO标准,继CR,PR或SD >6个月之后患者出现疾病进展者称之为获得性耐药[2],现对不同靶点耐药情况分类进行综述:一、表皮生长因子受体(EGFR)为靶点治疗药物的耐药机制表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)(ERBB1或者HER1)属于ERBB家族,目前以EGFR为靶点的治疗药物主要有厄洛替尼(erlotinib)和吉非替尼(gefitinib)(可逆的竞争性抑制EGFR酪氨酸激酶与ATP结合)以及单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab),帕尼单抗(panitumumab)(阻断配体与EGFR细胞外区域结合[3]).

    作者:吕洋;苗立云 刊期: 2015年第01期

  • 胸膜内固定与难治性气胸典型病例分析

    随着CT和胸腔镜等诊断治疗技术的广泛使用,人们对气胸的认识有了长足的进步.慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)晚期并发的自发性气胸已经取代肺结核成为首位原因,特别是难治性气胸仍然是威胁患者健康和生命的世界性难题[1-3].我们经过十余年潜心研究,创立了胸膜内固定,用于治疗COPD晚期并发难治性气胸,取得满意疗效.为将此技术推广应用于无法耐受胸腔镜和开胸手术的众多难治性气胸患者,现结合几例典型病例的诊治经过,对胸膜内固定进行简要的介绍.

    作者:夏前明;刘自军;周鹏程 刊期: 2015年第01期

  • 低氧性肺动脉高压小鼠肺的环状RNA表达谱研究

    目的 采用环状RNA (circRNA)芯片筛选低氧性肺动脉高压(HPH)小鼠肺组织中差异表达的circRNA,分析circRNA表达谱特征,为HPH发生机制提供研究方法.方法 20只健康雄性C57BL/6小鼠(体质量17 ~ 20 g)按数字表法随机分为HPH模型组与常氧组,每组10只.HPH模型组小鼠置于自制常压低氧舱内,舱内氧浓度(10±0.5)%02.每天连续低氧处理8h,连续21d.常氧组小鼠置于常氧环境饲养.通过测定右心室收缩压和右心肥大指数验证HPH小鼠模型复制成功后,处死小鼠,取肺组织,用circRNA芯片检测各组肺组织circRNA表达谱,并进行组间比较与分析,以明确差异表达的circRNAs.结果 与常氧组比较,HPH模型组肺组织中表达显著上调的circRNAs共有23个(P <0.01,P <0.05);表达显著下调的circRNAs共有41个(P<0.01,P<0.05).结论 circRNA芯片可用于筛选HPH差异表达的circRNA,circRNA可能参与HPH调控机制.

    作者:夏世金;邰先桃;李炳;苏晋燕;狄桦;刘露梅;万文斌;胡明冬 刊期: 2015年第01期

  • 类风湿性肺病1例

    类风湿性肺病是指类风湿关节炎引起的呼吸系统的改变,类风湿关节炎患者中约50%发生类风湿性肺病.据文献报道,虽然类风湿关节炎多见于女性,但出现胸膜与肺部病变者男性多于女性,约为2:1[1].近期我科收治了一位类风湿性肺病的男性患者,希望通过对典型病例的分析,根据临床-放射-病理诊断,同时对相关文献资料复习提高对该病的认识,避免误诊.

    作者:王正东;姚汉清;徐兴祥;姜正华 刊期: 2015年第01期

  • 2例复发性多软骨炎累及气道的临床护理

    临床资料2例复发性多软骨炎(relapsing polychondritis,RP)患者均为中年男性,平均年龄42岁,入院前有咳嗽,咳痰,气促症状(时间从6月至1年不等),在院外行肺功能及CT检查考虑:①慢性阻塞性肺疾病;②气管狭窄原因可能性大[1].我院纤支镜下检查示:气管、左右主支气管黏膜明显肿胀,呈纵行皱襞样改变,致管腔变窄,软骨环消失(声门、气管膜部未累及).内镜诊断符合多发性软骨炎表现.2例患者无其他软骨受累的表现(无马鞍鼻、耳廓形态正常,无其他器官受累的临床表现).

    作者:王霞;杨永静;杨丽 刊期: 2015年第01期

  • 血管内皮生长因子评估肺癌支气管动脉灌注化疗栓塞术后近期疗效的价值

    肺癌是一种具有很高发病率和病死率的常见肺部恶性肿瘤,是严重威胁人类健康和生命的疾病之一.近年来其发病率呈逐年上升和年轻化趋势,并且大部分患者确诊时已失去手术机会.对于无法手术的患者,支气管动脉灌注化疗(bronchial artery infusion,BAI)是治疗肺癌行之有效的方法之一[1].研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肺癌的发生发展及转移过程中发挥重要作用,血液中VEGF的变化被认为是对肺癌早期诊断、治疗效果和预后进行评估的重要指标[2].本研究旨在探讨肺癌患者经支气管动脉灌注化疗栓塞术后血清VEGF变化情况,为评估支气管动脉灌注化疗栓塞术后患者病变转归提供依据.

    作者:代文静;孙建;李云辉;蒋梦妮;叶茹燕;李万成 刊期: 2015年第01期

  • 筛选小鼠Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库的构建

    目的 利用酵母单杂交系统筛选与Cltb基因启动子结合的顺式元件,获得调控Cltb基因表达的转录因子,阐明Cltb基因的转录调控机理.方法 首先,构建表达Cltb调控序列的诱饵质粒pBait-AbAi,并将诱饵质粒转入Y1 HGold菌株,构建可稳定表达“诱饵-报告子”的酵母菌株;然后,运用SMARTTM技术构建小鼠肺组织酵母单杂交cDNA AD融合表达文库,并进行cDNA文库的筛选.结果 成功构建了筛选Cltb启动子顺式元件结合蛋白的酵母单杂交文库,该文库的转化效率为:9.35×105CFU/μg.通过对文库的筛选后获得了5个阳性克隆并测序,得到5个可编码结合蛋白的基因,分别是Srrt、hnRNPs A/B 、Irf1、NKx2.5和Zfp953.结论 所构建的酵母单杂交文库符合实验要求,筛选的5个转录因子为研究Cltb基因表达调控奠定了基础.

    作者:吕学军;陆卫忠;张永娟;郭亮;李少莹;李玉英;钱桂生 刊期: 2015年第01期

中华肺部疾病(电子版)杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生健康委员会

主办:中华医学会