学术投稿

茎环分子探针液相快速检测结核分枝杆菌katG315codon突变

陈庆海;张波;罗阳;匡红;钟敏;府伟灵

关键词:耐异烟肼katG基因, 315密码子点突变, 茎环分子探针, 荧光分光光度计
摘要:目的 应用茎环分子探针检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG315codon点突变,运用荧光分光光度计直接观测液相中探针与katG315codon扩增产物杂交后的荧光信号,并与测序结果比较以验证该检测方法.方法 运用软件:Beacon designer设计katG基因包含315codon的茎环分子探针,建立其扩增体系及分子信标芯片检测方法;对扩增产物测序并作比较.结果 通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组315codon突变检出率为44%,茎环分子探针检测方法与测序法符合率97.5%.结论 茎环分子探针技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术;荧光分光光度计液相荧光检测方法与测序法符合率较好.
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    作者:郑姬;府伟灵;蒋天伦 刊期: 2009年第14期

  • 茎环分子探针液相快速检测结核分枝杆菌katG315codon突变

    目的 应用茎环分子探针检测结核分枝杆菌耐异烟肼katG315codon点突变,运用荧光分光光度计直接观测液相中探针与katG315codon扩增产物杂交后的荧光信号,并与测序结果比较以验证该检测方法.方法 运用软件:Beacon designer设计katG基因包含315codon的茎环分子探针,建立其扩增体系及分子信标芯片检测方法;对扩增产物测序并作比较.结果 通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组315codon突变检出率为44%,茎环分子探针检测方法与测序法符合率97.5%.结论 茎环分子探针技术是一种具有高灵敏核酸点突变检测技术;荧光分光光度计液相荧光检测方法与测序法符合率较好.

    作者:陈庆海;张波;罗阳;匡红;钟敏;府伟灵 刊期: 2009年第14期

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    目的 了解血培养中常见病原菌分布及耐药趋势,为临床正确选用抗菌药物提供依据.方法 采用回顾性分析医院2年间血培养标本并进行统计分析;对BacT/Alert3D全自动快速血液细菌培养系统的血培养标本4028例标本进行检测,分离所得菌株置于VITEK-2全自动微生物分析/药敏系统进行鉴定和药敏试验,药敏结果用WHONET 5.3软件进行分析.结果 从4028例血培养标本中分离出病原菌435株,阳性率为10.8%;其中革兰阴性菌195株,占44.8%,主要以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、洋葱伯克霍尔德菌,鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌为主;革兰阳性菌217株,占49.9%,主要以表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、金黄色葡萄球菌为主,真菌23株,占5.3%,以白色假丝酵母菌为主;其中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的菌株分别为43.9%和48.8%,金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌耐甲氧西林分别为35.3%、72.9%,未发现耐万古霉素葡萄球菌.结论 血培养检出菌种类复杂,耐药率高,实验室应根据CLSI规范,提高细菌培养检出率,及时为临床提供药敏监测结果,临床医师应根据药敏监测结果合理使用抗菌药物,减少医院感染和多药耐药菌株的出现.

    作者:黎敏;王浚霁;陈伟;臧婉;陈鸣 刊期: 2009年第14期

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    作者:徐清华;陈伟;王云霞;罗阳;丁毅;施建峰;曹亮;陈鸣;府伟灵 刊期: 2009年第14期

  • 利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠h1-calponin的RNA干扰载体

    目的 利用pSOS-HUS系统构建针对小鼠碱性调宁蛋白(h1-calponin)的RNA干扰载体并对其干扰效率进行验证.方法 利用在线软件设计三段针对小鼠h1-calponin cDNA的寡核苷酸(A、B、C)片段,经退火成为双链后分别装入pSOS-HUS载体,得到载体调宁蛋白-PS-A/B/C,再将h1-calponin cDNA插入该载体和GFP一起融合表达,得到调宁蛋白RNAi-A/B/C 3个载体;对上述载体经酶切和测序鉴定后,转染至HEK293T细胞株,通过倒置荧光显微镜观察GFP荧光强度来判断上述载体的干扰效果.结果 经酶切和测序证明针对小鼠h1-ealponin的3个RNA干扰载体构建成功,荧光显微镜下观察显示,和空载体pSOS-HUS(未插入RNA干扰片段)相比,A组的荧光强度减弱明显,B的基本不变,C的荧光强度稍有减弱.结论 成功构建了针对h1-calponin的RNA干扰载体.

    作者:孙启获;苏楠;陈锚锚;金旻;赵玲;陈林 刊期: 2009年第14期

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    检验科工作人员直接接触患者的血液和体液,在高危环境下长时间的工作,必须做好自身的防护.1 血液性感染的因素1.1 传染源与传播途径主要是含有HBV、HCV、HIV、梅毒,以及其他感染性疾病的血液、体液、分泌物、排泄物等污染的针头及医疗器械,经破损的皮肤及黏膜直接接触传播.1.2 感染危险因素我国是乙型肝炎高发区,而我院是一所综合性医院,患者多数来自农村,是血液性疾病职业暴露的高度易感者.

    作者:胡冬梅 刊期: 2009年第14期

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    目的 设计结核分枝杆菌耐乙胺丁醇embB330codon位点分子信标,运用荧光显微镜观测分子DNA探针与embB330codon扩增产物杂交后的荧光信号,比较该位点突变株与标准株.方法 运用软件Beacon designer设计embB基因包含330codon的分子信标,应用荧光显微镜检测embB330codon扩增片段与探针杂交后荧光信号,比较扩增产物测序结果.结果 通过荧光显微镜观测到结核标准株及embB330codon突变株PCR产物与探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;33株耐乙胺丁醇组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐乙胺丁醇组embB330codon突变检出率为3%,测序法突变检出率为3%.结论 分子信标技术可以有效检测embB330codon单碱基靶点突变,应用荧光显微镜观测荧光杂交信号非常灵敏.

    作者:陈庆海;刘星;黄君富;罗阳;匡红;府伟灵 刊期: 2009年第14期

  • 门诊注射室护患纠纷的原因分析与防范

    我们对我院门诊注射室从2004-2007年发生的护患纠纷进行分析,从中吸取教训,不断改进,使护患纠纷明显减少,获得患者好评.

    作者:李茜;郝花;朱慧兰 刊期: 2009年第14期

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    作者:张华;黄圣文;罗振元 刊期: 2009年第14期

  • 手足口病医院感染的控制与管理

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  • 漏声表面波生物传感器检测系统构建时靶序列浓度的影响

    目的 探讨新型的漏声表面波(LSAW)传感器检测系统构建时,人乳头状瘤病毒(HPV)靶序列浓度对其杂交效应和反应时间的影响.方法 LSAW传感器表面先固定上1.0 μmol/L的肽核酸(PNA)探针,观察终浓度为1 pg/L~1 mg/L的HPV靶序列DNA与探针进行杂交所引起的相位变化及反应所需时间,并对相位下降值与靶序列浓度做线性回归,确定其线性范围.结果 随着靶序列浓度从1 pg/L增加到1 mg/L,杂交反应引起的相位下降值呈先增加后趋于缓和的趋势,以100μg/L为分界线,而杂交平衡时间并没有显现出一定的变化趋势;在1 pg/L~100μg/L的HPV靶序列浓度范围内,相位变化与靶序列浓度的线性回归方程为△P=2.3392 1gC+14.584,相关系数r2=0.9622.结论 随着靶序列浓度的升高,杂交反应引起的相位下降值呈典型饱和曲线趋势,靶序列浓度的线性检测范围为:1 pg/L~100μg/L.

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