学术投稿

牛蛙核糖核酸酶的表达和鉴定及功能检测

张桂红;付勇;刘彦仿;杨守京;赵君

关键词:癌, 肝细胞, 核糖核酸酶, 大肠埃希菌, 比色法
摘要:目的:在大肠埃希菌中高效表达牛蛙核糖核酸酶(rana catesbeiana ribonuclease, RC-RNase),并对其纯化产物进行噻唑蓝(tetrazolium blue, MTT)实验,观察对肝癌细胞的抑制效果.方法:用异丙基硫代-D-半乳糖苷(isopropylthio-D-galactoride, IPTG)诱导原核表达质粒PET32a-RC-RNase在大肠埃希菌E.coli Bl21(DE3)plysS中表达.菌体经超声、离心后,用Ni-NTA Agarose亲和层析法对包涵体进行纯化.采用MTT法检测纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞的杀伤活性.结果:纯化的目的蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel eletrophoresis, SDS-PAGE)蛋白电泳表明,RC-RNase在大肠埃希菌中是以包涵体的形式表达.用MTT法的结果中可以看出,纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞具有一定的抑制效果,其IC50值(半抑制浓度)是22.44 μg/mL.结论:牛蛙核糖核酸酶在大肠埃希菌中得到大量表达,为进一步研究其生物学特性以及功能打下了良好的基础.
中华肿瘤防治杂志相关文献
  • 多西紫杉醇为主方案治疗复治的晚期上消化道癌的临床研究

    目的:观察多西紫杉醇(多西他赛)为主方案治疗晚期上消化道癌的客观疗效和毒副反应.方法:全组31例患者,其中食管癌9例,贲门癌5例,胃癌17例,均为复治患者.应用TP (多西他赛30 mg/m2, 静脉滴入, d1、d8、d15;顺铂20 mg/d, 静脉滴入, d1~d5)或TF方案(多西他赛30 mg/m2, 静脉滴入, d1、d8、d15;5-氟尿嘧啶 500 mg/m2, 静脉滴入, d1~d5),每28 d重复,每例患者接受2个周期以上方可评价疗效.结果:31例患者均可评价疗效和毒副反应,PR 8例,NC 13例,PD 10例,有效率为25.8%(8/31),疾病控制率为67.7%(21/31),中位TTP为4.9个月.主要毒副反应为骨髓抑制和乏力.结论:多西他赛为主方案治疗晚期上消化道癌患者疗效较好,毒副反应可以耐受,值得进一步观察.

    作者:杨柳青;秦叔逵;施毅;钱军;陈映霞;王琳;何泽明 刊期: 2005年第23期

  • 奥沙利铂联合羟基喜树碱和氟尿嘧啶及亚叶酸钙治疗晚期胃癌的临床研究

    目的:观察以奥沙利铂(L-OHP)、羟基喜树碱(HCPT)、氟尿嘧啶(5-FU)及亚叶酸钙(LV)组成的HLOF方案和顺铂(DDP)、HCPT、5-FU及LV组成的HLPF方案治疗晚期胃癌的疗效与安全性.方法:61例患者随机分组,试验组32例给予HLOF方案化疗,L-OHP 130 mg/m2, 静脉滴入2 h, d1;HCPT 6 mg/m2, 静脉滴入,d1~d5;5-FU 500 mg/m2,静脉滴入,d1~d3;LV 100 mg/m2,静脉滴入,d1~d3.对照组29例给予HLPF方案化疗,除用DDP替代L-OHP外余同对照组.DDP用法:30 mg/m2,静脉滴入,d1~d3.以上方案均每21~28 d重复.每例至少完成2个周期化疗方可评价疗效.结果:试验组CR 2例,PR 17例,SD 8例,PD 5例,有效率为59.4%(19/32);对照组PR 12例,SD 11例,PD 6例,有效率为41.4%.两组总有效率差异无统计学意义,P>0.05.不良反应HLOF组食欲下降、恶心、呕吐的发生率较对照组低,P<0.05;神经毒性发生率高于对照组.KPS评分HLOF组升高幅度高于对照,P<0.05.两组疾病无进展时间(time to progress, TTP)及生存期比较,差异均无统计学意义,P>0.05.结论:治疗晚期胃癌,两者均为有效、低毒的化疗方案.在改善生活质量和减轻消化道反应方面,HLOF优于HLPF方案.

    作者:李晶;邬麟;曾毅栋;吴尉;鲁军 刊期: 2005年第23期

  • 十二指肠降部间质瘤并消化道出血一例报告

    1 病例报告患者女,56岁.因上腹痛、腹胀、黑便3 d于2002年4月23日入院.入院时,腹胀、上腹痛、胸闷,大便3~4次/d,量约300 g,黑便.体格检查:体温37.2℃,脉搏78次/min,呼吸18次/min,血压110/70 mmHg.轻度贫血貌,双肺呼吸音粗,无干、湿性啰音.

    作者:张锡春 刊期: 2005年第23期

  • As2O3注射液治疗肝脏恶性肿瘤的临床分析

    肝脏恶性肿瘤的恶性程度高,生长迅速,大多数患者确诊时已属中晚期,无法手术治疗,目前主要的治疗手段是介入治疗+肝动脉碘油栓塞术及药物治疗,但常规药物化疗疗效差,患者生存期短.我们收集原发性肝癌及肝转移癌患者32例,单药亚砷酸(As2O3)治疗后疗效较好.总结报道如下.

    作者:张捷;徐晓辉;时淑珍 刊期: 2005年第23期

  • 无黄疸期胆道扩张在壶腹周围癌诊断中的意义--附18例报告

    壶腹周围癌由于解剖位置特殊,早期很难发现,容易导致临床延误诊断和治疗.将我院共发现治疗的18例早期无黄疸壶腹周围癌患者的临床资料,总结报道如下.

    作者:曹苏生;王守军;刘清徐;袁补全 刊期: 2005年第23期

  • 肺类癌12例临床分析

    为了探讨肺类癌的临床特点、诊疗方法与预后的影响因素,对12例肺类癌病例进行回顾性研究.12例患者中2例伴有类癌综合征,2例术前经纤支镜确诊.术式包括肺叶切除9例,开胸探查1例,全肺切除2例,无手术期死亡和并发症.全组5年生存率为72.65%,类癌5年生存率为84.23%,不典型类癌为66.68%.初步研究结果提示,肺类癌属低度恶性肿瘤;影像学及纤维支气管镜检查对诊断具有重要价值;光镜HE染色常可诊断,但嗜银染色及电镜确定特征性嗜银性神经内分泌颗粒是确诊的可靠标准;治疗应以保守性外科手术切除为主,尽量保留肺功能为手术原则;手术切除后预后良好,远期疗效明显优于肺癌.

    作者:郝明文;张伟;王晓洁;张宏伟;刘艳华 刊期: 2005年第23期

  • 原发性骶前肿瘤147例临床病理分析

    回顾性分析1954~2004年收治的147例原发性骶前肿瘤患者的临床病理资料,结果显示,原发性骶前肿瘤的主要诊断方法包括直肠指诊、B超和CT检查;肿瘤病理类型复杂,147例共涉及不同病理类型30种,其中良、恶性分别为49.7%和50.3%;主要治疗手段为手术治疗,本组病例肿瘤完整切除者77例,部分切除者32例,二次手术者18例;78例骶前恶性肿瘤联合应用放、化疗或免疫治疗,综合治疗的疗效与原发肿瘤的组织学类型、肿瘤体积等因素有关;患者生存期3个月~14年,中位生存期2年,影响预后的主要因素为肿瘤的组织学类型、肿瘤的手术切除率及综合治疗的应用.

    作者:郝权;田菁;章雪莲;王耕辛;李文录 刊期: 2005年第23期

  • MBD4基因的单核苷酸多态与肝细胞肝癌遗传易感性研究

    目的:探索DNA损伤修复基因hMBD4的遗传多态Glu346Lys与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)易感性的关系.方法: 对96例原发性HCC患者和96例对照外周血DNA进行测序分型.结果: 我们发现正常人群Glu/Glu、Glu/Lys、 Lys/Lys基因型频率分别为40.4%、46.8%和12.8%,HCC组为41.7%、48.8%和9.5%.等位基因Lys频率在病例和对照分别为33.9%和36.2%,两组比较差异无统计学意义,P>0.05.结论: DNA修复基因hMBD4的Lys等位基因可能与HCC的遗传易感性无关.

    作者:张昊;郝冰涛;贺福初 刊期: 2005年第23期

  • 牛蛙核糖核酸酶的表达和鉴定及功能检测

    目的:在大肠埃希菌中高效表达牛蛙核糖核酸酶(rana catesbeiana ribonuclease, RC-RNase),并对其纯化产物进行噻唑蓝(tetrazolium blue, MTT)实验,观察对肝癌细胞的抑制效果.方法:用异丙基硫代-D-半乳糖苷(isopropylthio-D-galactoride, IPTG)诱导原核表达质粒PET32a-RC-RNase在大肠埃希菌E.coli Bl21(DE3)plysS中表达.菌体经超声、离心后,用Ni-NTA Agarose亲和层析法对包涵体进行纯化.采用MTT法检测纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞的杀伤活性.结果:纯化的目的蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel eletrophoresis, SDS-PAGE)蛋白电泳表明,RC-RNase在大肠埃希菌中是以包涵体的形式表达.用MTT法的结果中可以看出,纯化的目的蛋白对体外培养的肝癌细胞具有一定的抑制效果,其IC50值(半抑制浓度)是22.44 μg/mL.结论:牛蛙核糖核酸酶在大肠埃希菌中得到大量表达,为进一步研究其生物学特性以及功能打下了良好的基础.

    作者:张桂红;付勇;刘彦仿;杨守京;赵君 刊期: 2005年第23期

  • 卡铂加放射治疗食管癌的前瞻性研究

    目的:探讨卡铂提高食管癌放射治疗疗效的方法.方法:180例食管癌患者根据入选标准随机分组,90例进入卡铂+放射治疗(卡放组),90例进入单纯放射治疗(单放组),卡放组放疗第1、4周同时用卡铂100 mg/d,静脉滴入,每周连用5 d,2个周期总量为1 000 mg,单放组放疗方法同卡放组.单放组60Co-γ射线常规三野照射6周,共60 Gy/ 30次.结果:近期疗效显示,卡放组完全缓解率达52.2%,单放组为36.7%,两者差异有统计学意义,P<0.05;卡放组和单放组5年生存率分别为22.2%和10%,两者差异有统计学意义,P<0.05;10年生存率分别为14.4%和6.7%,两者差异无统计学意义,P>0.05.卡放组毒副反应明显高于单放组,但患者能耐受,两组的主要死亡原因是局部复发.结论:卡铂加放射治疗食管癌可以提高疗效.毒副反应虽然有所增加,但所有患者均可耐受.

    作者:宋祥玉;郝义增;付军;薄珂;李文玉 刊期: 2005年第23期

  • Tsα1诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡和抑制bcl-2基因的表达

    目的:研究胸腺肽α1(Tsα1)在诱导肿瘤细胞凋亡中的作用.方法: 应用MTT比色分析法研究Tsα1对人肝癌SMMC-7721细胞株的细胞毒作用.流式细胞仪检测法分析Tsα1作用后处于G1期SMMC-7721细胞的比率和对凋亡抑制基因-bcl-2蛋白的抑制率.结果: Tsα1(4 000 μg/mL)体外培养24、48和72 h,对SMMC-7721肿瘤细胞抑制率分别是(1.92±0.02)%、(3.27±0.03)%和(7.69±0.03)%, P<0.005;凋亡率分别是(2.5±0.1)%、(18.3±0.2)%和(11.6±0.1)%, P<0.001;bcl-2蛋白的抑制率为(1.35±0.1)%、(2.2±0.01)%和(5.53±0.01)%, P<0.005,并呈现细胞凋亡的形态学改变,具有剂量和时间依赖性.结论: Tsα1可直接抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖,抑制bcl-2基因表达和诱导肿瘤细胞凋亡.

    作者:李晓诗;金逸;杨宗华 刊期: 2005年第23期

  • 颈部淋巴结细针穿刺细胞学检查的临床应用

    目的:探讨颈部淋巴结细针穿刺的临床应用价值.方法:回顾性分析我院2002年3月1日~2005年4月1日931例颈部淋巴结细针穿刺涂片细胞学检查与术后病理切片结果对比的临床资料.结果:931例颈部肿大淋巴结的细针穿刺诊断敏感度(总符合率)为82.5%.细针抽吸诊断良性病变350例(37.6%),恶性病变491例(52.8%),可疑恶性20例(2.1%),诊断不明70例(7.5%).本组细针穿刺良性病变诊断敏感度85.3%,总准确率为91.4%;恶性病变诊断敏感度94.4%,总准确率为96.0%;恶性淋巴瘤诊断敏感度为64%,总准确率为94.7%;转移癌诊断敏感度为92.6%,总准确率95.7%.结论:针吸细胞学检查是一种可靠的、准确率较高的颈部淋巴结病理诊断检查方法,值得临床推广使用.

    作者:张艳霞;伍国号;陈福进;曾宗渊;陈文宽;谭广谋 刊期: 2005年第23期

  • 子宫颈鳞癌HPV16感染对错配修复基因表达的影响

    目的:探讨子宫颈癌发病机制中HPV感染对错配修复(mismatch repair,MMR)基因表达影响的意义.方法: 77例子宫颈鳞癌标本采用免疫组织化学SP法检测HPV16、hMSH2与hMLH1的表达.并分析这些表达与临床病理参数的关系.结果:HPV感染与非感染组子宫颈癌hMLH1的阳性表达率分别为69.0%(29/42)和40.8%(12/28),rs=0.260,P=0.029;hMSH2的阳性表达率分别为64.2%(27/42)和46.4%(13/28),rs=0.177,P=0.143.HPV感染、hMLH1及hMSH2阳性表达率与分化程度、临床分期及淋巴结转移无显著相关.结论: HPV感染组细胞hMSH2与hMLH1蛋白表达上调的现象表明HPV16感染增加子宫颈上皮细胞DNA复制时的碱基错配.因此,这可能是HPV16的致癌机制之一.

    作者:车耀润;张朝;吕申;刘玲;王朝晖 刊期: 2005年第23期

  • 癌症的个体化治疗

    个体化是肿瘤治疗过程中常常被忽视的问题,肿瘤生物学的个体化特征决定了肿瘤治疗的个体化.癌症的个体化特性包括时间个体化、空间个体化、解剖上的个体化、结构的个体化、基因的个体化、功能的个体化和人为的个体化等七个方面.医学模式整体观念的形成、后基因组时代的到来,为肿瘤个体化治疗提供了必要的契机和工具.因此,传统的肿瘤临床治疗手段正在逐渐被以更为准确的以分子标志物辅助诊断为依据,分子信息指导下的更为安全有效的个体化治疗所取代.

    作者:纪小龙 刊期: 2005年第23期

  • 巨和粒防治实体瘤化疗所致血小板减少的临床研究

    为了观察重组人白细胞介素-11(巨和粒,rhIL-11)防治化疗引起的血小板减少的疗效和不良反应,将实体瘤患者47例随机分为AB组和BA组进行自身交叉对照研究.A周期为化疗后24 h开始用rhIL-11 50 μg/kg皮下注射,1次/d,连续用药14 d或PLT经过低点后连续2次≥100×109 L-1,停药.B周期为空白对照.A周期的血小板低值为(107.9±30.2)×109 L-1,B周期的血小板低值为(56.4±30.3) ×109 L-1,P<0.01;缩短血小板<75×109 L-1持续时间,A周期的血小板<75×109 L-1持续时间(1.0±1.9) d,B周期的血小板<75×109 L-1持续时间(3.4±4.2) d,P<0.01.初步研究结果提示,rhIL-11对化疗致血小板降低有明显的防治作用,疗效安全,不良反应轻微,可耐受.

    作者:孙红;马瑾璐;王浩 刊期: 2005年第23期

  • 颅内肿瘤显微外科手术135例分析

    我们采用神经显微外科技术节除颅内肿瘤,取得良好效果,总结报道如下.

    作者:刘晓祥;李桂梅;单凤生 刊期: 2005年第23期

  • 泽菲联合奥沙利铂治疗复发性或难治性非霍奇金淋巴瘤的临床观察

    目的:观察泽菲(盐酸吉西他滨,gemcitabine)联合奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)和地塞米松(DXM)对复发性或难治性进展型非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma, NHL)的疗效和毒副反应.方法: 泽菲1 000 mg/m2,静脉滴入,d1、d8;L-OHP 85 mg/m2,静脉滴入,d1、d8;DXM 40 mg/d,静脉推注,d1~d4.以3~4周为1个化疗周期.20例复发性或难治性进展型非霍奇金淋巴瘤患者,治疗≥3个周期.结果:20例患者中,15例获得缓解,占75.0%.其中完全缓解(CR)7例,部分缓解(PR)8例.7例具有B类症状的患者中,4例症状消失,2例明显改善,1例无改善.化疗毒副反应主要为轻度的胃肠道反应,少数患者出现轻度的骨髓抑制,如白细胞及血小板减少.结论:泽菲联合L-OHP和DXM对复发性或难治性进展型NHL有较好的近期疗效,能明显改善患者症状,且大部分患者可以承受其毒性,是一个值得进一步验证的补救性化疗方案.

    作者:谢家印;王东;向德兵;王阁;杨镇洲 刊期: 2005年第23期

  • 支气管动脉化疗加超分割放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌的临床观察

    目的:探讨支气管动脉灌注(BAI)化疗联合超分割放疗治疗局部晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及不良反应.方法:67例局部晚期NSCLC患者,信封法随机分两组.观察组32例,予泰素、顺铂BAI化疗3~4个疗程后行超分割放疗,总剂量72 Gy;对照组35例,静脉滴入泰素、顺铂化疗3~4个疗程后行常规放疗,总剂量60 Gy.结果:观察组的有效率、1年生存率分别为65.6%(21/32)和68.8%(22/32),对照组分别为51.4%(18/35)和54.3%(19/35),差异无统计学意义,P>0.05.两组中位生存期分别为14和12.5个月.观察组2年生存率、KPS评分增高率、放射性肺损伤发生率分别为31.2%(10/32)、71.9%(23/32)和9.4%(3/32),对照组分别为11.4%(4/35)、40.0%(14/35)和28.6%(10/35),差异均有统计学意义,P<0.05.结论:两组有效率相当,支气管动脉化疗加超分割放疗的远期生存率及生存质量更高,放射性肺损伤发生较低,显示一定的临床优越性.

    作者:苏炳光;张坤强;凌华晃;黄锡梅;蔡茂德;林福幸 刊期: 2005年第23期

  • 心包内全肺及部分左心房切除治疗Ⅲ期肺癌53例

    为了探讨心包内全肺及部分左心房切除治疗Ⅲ期肺癌的疗效和价值, 1988年2月~2001年12月对53例Ⅲ期肺癌行心包内全肺切除32例,合并部分左心房切除治疗17例,剖胸探查或单纯心包开窗4例.手术并发症发生率为17.0%(9/53),死亡2例(3.8%),随访率为96.1%,术后1、3和5年生存率分别为73.6%(39/53)、34.0%(18/53)和20.8%(11/53),其中2例生存超过7年.初步研究结果提示,Ⅲ期肺癌采用扩大切除能提高根治性手术切除率,延长患者生存期,改善生活质量,在临床上有应用价值.

    作者:吴全忠;王茂生;黄健 刊期: 2005年第23期

  • 多西他赛联合顺铂和氟尿嘧啶治疗进展期胃癌48例临床分析

    目的:观察多西他赛(docetaxel)联合顺铂(DDP)和氟尿嘧啶(5-FU)方案(简称DCF方案)对进展期胃癌的近期疗效和毒副反应.方法:对经病理学或细胞学确诊的48例进展期胃癌患者,采用DCF方案化疗:多西他赛40 mg/m2,静脉滴入1 h,d1、d8、d15;DDP 20 mg/m2,静脉滴入,d1~d5;5-FU 750 mg/m2用便携式微量输液泵持续静脉输注,d1~d5; 28 d为1个周期,至少2个周期评价疗效.结果:48例完全缓解(CR)3例,部分缓解(PR)22例,无变化(NC)16例,进展(PD)7例,总有效率(RR)为52.08%.其中初治组有效率为68.18%(15/22),有2例CR;复治组有效率为38.46%(10/26),有1例CR,两组差异有统计学意义,P=0.04.毒副反应主要为骨髓抑制、消化系统反应和脱发.大部分患者为Ⅰ、Ⅱ度反应,耐受良好.骨髓抑制为剂量限制性毒性,其中白细胞减少占64.58%,Ⅲ~Ⅳ度占16.67%.结论:多西他赛联合DDP和5-FU治疗进展期胃癌具有近期疗效好,毒副反应轻,耐受好的特点,且初治者疗效优于复治者,值得进一步研究推广.

    作者:朱陵君;黄普文;卢凯华;张锦英;束永前 刊期: 2005年第23期

中华肿瘤防治杂志

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主管:齐鲁肿瘤杂志;肿瘤防治杂志;当代肿瘤学杂志

主办:国家卫生和计划生育委员会