学术投稿

携带SV40T/HSV-tk基因永生化正常成人肝细胞的构建

姚文芳;崔忻;田磊;高宇红;洪权;薛毅珑

关键词:永生化, 正常成人肝细胞, 逆转录病毒, 自杀基因
摘要:目的 构建永生化正常成人肝细胞为生物型人工肝提供安全有效的人肝细胞源.方法 转染包装细胞,获得逆转录病毒;将该病毒感染正常成人肝细胞HL-7702;更昔洛韦毒性实验检测转染后肝细胞内HSV-tk基因;RT-PCR法检测转染后细胞内SV40T的mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色检测转染后细胞内SV40T基因的蛋白表达.结果 更昔洛韦检测转染后的肝细胞存活良好,而转染前的肝细胞死亡.RT-PCR法显示转染后的肝细胞内存在SV40T mRNA;Western Blot 法和免疫荧光染色法显示转染后肝细胞内存在SV40T蛋白.结论 转染后的正常成人肝细胞中含有SV40T和HSV-tk基因,并表达相关蛋白.
解放军医学院学报杂志相关文献
  • 手术前后血清胱抑素C与C-反应蛋白的相关性研究

    目的 研究手术前后胱抑素C(CysC)与C-反应蛋白(CRP)的相关性.方法 对34例择期手术患者分别在术前、术后第3天和术后第7天采集静脉血,分析血清胱抑素C与C-反应蛋白的相关性.结果 手术前后血清CysC与CRP均无明显相关(P>0.05),术后CRP水平和术前相比差异均有统计学意义(P<0.01),血清CysC水平和术前相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论 手术前后CysC与CRP均无明显相关,手术后CRP水平大幅升高对血清CysC水平无显著影响.

    作者:胡俊;高艳红;董振南;田亚平 刊期: 2011年第11期

  • 原发性肝癌晚期应用盐酸哌替啶致呼吸抑制1例

    癌痛治疗在世界范围内日趋受到重视,而盐酸哌替啶为阿片受体激动剂,是目前常用的人工合成强效镇痛药,适用于各种剧痛.对癌症晚期伴癌痛、经各种止痛治疗效果差及剧烈爆发痛的病人,常间断给予哌替啶止痛治疗.2010年9月我科收治1例原发肝癌晚期伴癌痛,应用哌替啶止痛治疗致呼吸抑制,抢救成功,报告如下.

    作者:赵丽娟;张雪花 刊期: 2011年第11期

  • 肝细胞生长因子对肺动脉高压的治疗作用

    肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH)是一种进行性发展的疾病,严重危害患者健康和生命.近发现肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有促进血管内皮细胞增殖、促进血管新生功能,还可有效抑制肺间质重构,明显改善血流动力学和临床症状.特此综述肝细胞生长因子对肺动脉高压的治疗作用.

    作者:郭娜 刊期: 2011年第11期

  • 预防性皮肤护理减轻西妥昔单抗所致痤疮样皮疹

    目的 研究预防性皮肤护理能否减轻西妥昔单抗所致皮疹.方法 我科2009年1月-2010年12月收治的应用西妥昔单抗的96例晚期肿瘤患者随机分为2组,对照组给予常规护理,干预组给予预防性皮肤护理,比较两组皮疹严重程度.结果 干预组较对照组皮疹程度轻(Ⅲ级毒性6.67%vs 22.22%,P<0.05)、发生时间晚((16.09±5.04)d vs (10.13±2.97)d,P<0.05),差异有统计学意义;但发生率(76.67%vs 83.33%,P>0.05)、持续时间((34.35±3.19)d vs(36.47±4.52)d,P>0.05)差异无统计学意义.结论 预防性皮肤护理可减轻西妥昔单抗所致皮疹.

    作者:林琳;邹忠霞;陈志杰;李金艳;孙自梅 刊期: 2011年第11期

  • D-二聚体在急性胸痛中的诊治价值

    目的 研究D-二聚体对急性胸痛病人的诊治价值.方法 选择103例急性胸痛病人,采用快速ELISA法检测血浆D-二聚体,同时检测血浆肌钙蛋白T、CK-MB,检查心电图.分析D-二聚体在不同病因急性胸痛患者中的阳性率.结果 D-二聚体>500μg/L者45例(43.7%),其中肺栓塞9例,急性心肌梗死17例,不稳定型心绞痛6例,主动脉夹层3例,肺炎1例.D-二聚体的阳性率在肺栓塞患者中100%,心肌梗死中33.3%,不稳定型心绞痛中23%,主动脉夹层中23.1%,肺炎或胸膜炎中25%.结论 血浆D-二聚体检测可用于疑似肺栓塞者在接受PACT前进行快速筛选.

    作者:吴树全;沈有录 刊期: 2011年第11期

  • 携带SV40T/HSV-tk基因永生化正常成人肝细胞的构建

    目的 构建永生化正常成人肝细胞为生物型人工肝提供安全有效的人肝细胞源.方法 转染包装细胞,获得逆转录病毒;将该病毒感染正常成人肝细胞HL-7702;更昔洛韦毒性实验检测转染后肝细胞内HSV-tk基因;RT-PCR法检测转染后细胞内SV40T的mRNA;Western Blot法和免疫荧光染色检测转染后细胞内SV40T基因的蛋白表达.结果 更昔洛韦检测转染后的肝细胞存活良好,而转染前的肝细胞死亡.RT-PCR法显示转染后的肝细胞内存在SV40T mRNA;Western Blot 法和免疫荧光染色法显示转染后肝细胞内存在SV40T蛋白.结论 转染后的正常成人肝细胞中含有SV40T和HSV-tk基因,并表达相关蛋白.

    作者:姚文芳;崔忻;田磊;高宇红;洪权;薛毅珑 刊期: 2011年第11期

  • 急性区域性隐匿性外层视网膜病变Ⅰ型1例报告

    1病例资料患者女性,16岁,朝鲜族.因左眼突发颢侧视物不清1.5月于2011年2月12日入院.起病前4个月内曾间断发热,伴头疼,期间曾罹患急性气管炎,抗炎对症治疗后痊愈.1.5月前突然出现左眼颞侧视物模糊,无眼部不适症状,并逐渐出现夜间视物不清.自幼体质差,反复感冒、发热,较少参加体育锻炼及课外活动.

    作者:贾亮;黄厚斌;魏世辉 刊期: 2011年第11期

  • 重组人生长激素对严重烫伤大鼠早期心肌组织MPO活性的影响

    目的 观察重组人生长激素(rhGH)对严重烫伤大鼠早期心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性的影响.方法 SPF级SD大鼠60只,雄性,随机分为对照组(B组,n=30),治疗组(R组,n=30).复制30%TBSAⅢ°烫伤模型,伤后B组按Parkland公式补液,R组在B组补液基础上于伤后6h始予rhGH 3U/(kg·d)皮下注射,两组均于烫伤后各时相点:0、12、24、48、96h检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量和心肌组织MPO活性.结果 B组伤后不同时相点cTnI含量及MPO活性显著升高(P<0.01),伤后12h升高为显著.心肌MPO活性升高与cTnI水平存在显著正相关(r=0.969,P<0.01).R组相应时相点cTnI含量及MPO活性与B组趋势一致,但较B组显著升高(P<0.05或0.01);病理切片显示:R组较B组炎细胞浸润、心肌损伤均有所加重.结论 严重烫伤后早期大鼠存在局灶性心肌炎,早期应用rhGH加重了烫伤后大鼠心肌损伤.

    作者:朱国玲;门秀丽;樊学东;刘朝永;邱方 刊期: 2011年第11期

  • 52例食管癌术后局部复发三维适形放射治疗分析

    目的 探讨食管癌术后局部复发三维适形放射治疗的疗效.方法 回顾性分析52例食管癌术后局部复发患者的资料,吻合口复发12例,合并纵隔淋巴结转移35例,同时合并锁骨上淋巴结转移5例.复发中位数10.5个月.采用三维适形放射治疗,剂量55-66Gy.结果 治疗有效率73.1%,1、2年生存率分别为51.9%和25%,症状缓解率88.6%.结论 食管癌术后局部复发三维适形放射治疗疗效肯定,可延长部分病人生存时间.

    作者:刘天星;景丽;吕星晨;李杰 刊期: 2011年第11期

  • 斑点追踪显像技术对2型糖尿病患者左室收缩功能的研究

    目的 应用超声二维斑点追踪技术(STI)评价2型糖尿病患者左心室收缩功能.方法 2型糖尿病36例,左心室射血分数≥50%:正常对照41例.分别测量左心室长轴各水平纵向应变(GLs)和短轴各水平径向应变(GRs)和圆周应变(GCs),通过左室短轴二尖瓣和心尖水平计算扭转角度峰值(LVtw).结果 与对照组比较,糖尿病组左心室基底段、中间段、心尖段平均纵向峰值应变及左心室整体纵向应变显著减低(P<0.01),左心室短轴各水平平均径向应变减低,但差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病组各水平圆周应变及左心室整体圆周应变减低(P<0.05),各水平旋转角度及左心室扭转角度增大(P<0.05);两组GLs、GRs、GCs及LVtw与LVEF显著相关,对照组GLs、GCs为LVEF的独立预测因子,回归方程为LVEF=29.81-1.5GLs-0.91GCs(P<0.01);糖尿病组GLs为LVEF的独立预测因子,回归方程为LVEF=31.83-2.72GLs(P<0.01).结论 超声斑点追踪成像技术能够评价2型糖尿病早期左心室局部和整体收缩功能异常.

    作者:李碧;孙志丹;刘彩杰;郭玲玲 刊期: 2011年第11期

  • 1例套管下气管肉芽形成发生呼吸困难的护理观察

    临床工作中因瘢痕体质致气管内肉芽组织形成导致气管狭窄者不多见.我科收治一例因瘢痕体质气管切开后肉芽增生致气道狭窄出现呼吸困难患者,报告如下.1病历资料患者男性,77岁,为慢性阻塞性肺气肿、支气管扩张、肺部感染患者,既往有心衰、糖尿病病史.

    作者:邢丹 刊期: 2011年第11期

  • 两种方法固定气管套管对套管移动及受压皮肤情况的比较

    目的 观察橡胶止血带固定气管切开套管与棉布寸带外裹自行缝制纱布固定带固定气管切开套管对套管移动及受压皮肤的情况.方法 将20例ICU气管切开患者随机分为两组,一组使用橡胶止血带(止血带组),一组使用棉布寸带外裹自行缝制纱布固定带(纱布组).7-10d更换1次,连续观察3个月,比较两组颈部皮肤损害情况及气管切开套管的移动率.结果 两组气管套管移动率无明显差异(P>0.05),气管切开局部皮肤损害程度止血带组较纱布组低(P<0.05).结论 橡胶止血带组较纱布组可以减轻受压皮肤的损害,减少气管切开并发症的发生.

    作者:金国萍;王志燕 刊期: 2011年第11期

  • 不同氨基酸对小鼠血糖影响的研究

    目的 观察不同氨基酸对昆明(KM)小鼠餐后血糖水平的影响.方法 将KM小鼠按空腹血糖随机分为对照组和不同氨基酸组,每组15只;氨基酸组给予氨基酸(2g/kg)和葡萄糖(2g/kg)混合液灌胃,对照组仅给予葡萄糖(2g/kg)灌胃,测定灌胃后0.5h、1h、2h的血糖水平.结果 1)摄入D-亮氨酸或L-亮氨酸后0.5h、1h、2h血糖和血糖曲线下面积(AUC)明显低于对照组;与D-亮氨酸组相比,摄入L-亮氨酸后0.5h、1h和2h血糖及AUC降低,并具有显著性差异;摄入D-苯丙氨酸或L-苯丙氨酸后0.Sh血糖和AUC明显低于对照组;与D-苯丙氨酸组相比,摄入L-苯丙氨酸后0.5h血糖水平有所降低,但无统计学差异.2)摄入苯丙氨酸0.5h血糖和AUC明显低于对照组(P<0.01);摄入缬氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、赖氨酸后0.5h、1h血糖和AUC明显低于对照组(P<0.01);摄入亮氨酸、色氨酸后0.5h、1h、2h血糖和AUC明显低于对照组(P<0.01).3)摄入谷氨酰胺和丝氨酸后0.5h血糖水平显著低于对照组;摄入甘氨酸、精氨酸、丙氨酸、半胱氨酸、脯氨酸后0.5h、1h血糖和AUC显著低于对照组(P<0.01),而摄入天冬氨酸、酪氨酸、谷氨酸、组氨酸及天冬酰胺组0.5h血糖水平与其对照组相比无显著性差异(P>0.05).结论 氨基酸可明显降低KM小鼠餐后血糖水平,其中亮氨酸降糖作用较强.

    作者:王觐;薛长勇;张月红;刘英华;张永;徐庆;杨雪艳 刊期: 2011年第11期

  • 盐酸氨溴索对成年大鼠高氧肺损伤的影响

    目的 研究盐酸氨溴索对成年大鼠高氧肺损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠48只,随机分为6组每组8只.对照组(0h组)吸入空气,其余5组氧舱内吸入100%浓度O2,根据吸氧时间不同分为24h组、48h组、72h组、96h组、盐酸氨溴索(ABX)组(吸氧96h);ABX组予ABX 30mg/kg腹腔内注射1次/d.到达实验终点后颈动脉采血行动脉血气分析,测定血清及支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子水平,肺组织酶活性和Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 随高氧暴露时间延长,大鼠氧合指数呈逐渐下降趋势,96h达到低值.血清及BALF中TNF-α、IL-1 β水平逐渐增高,48h达到高峰,此后开始下降,IL-6在72h达高峰.肺组织Bax蛋白表达逐渐增多,Bcl-2表达逐渐下降.ABX干预组同96h组相比氧合指数增加(P<0.01),血清及BALF中TNF-α、IL-1β和IL-6水平下降(P<0.01),肺组织中Bax蛋白表达显著下降(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著增高(P<0.01).结论 盐酸氨溴索通过抗炎、抗氧化及抗凋亡作用能够减轻成年大鼠高氧肺损伤.

    作者:刘庆辉;孙宝君;安莉;刘岩;俞森洋 刊期: 2011年第11期

  • 血清GP73作为原发性肝癌肿瘤标志物的来源探究

    目的 探究血清GP73作为原发性肝癌的肿瘤标志物的可行性.方法 采用SYBR Green qPCR法对103例原发性肝癌(PHC)、13例肝硬化、49例肝炎和50例健康人群外周血单核细胞GP73 mRNA的相对表达量进行检测,同时检测分析8份正常肝组织和8份肝癌组织的GP73 mRNA相对表达水平.对7例病理确诊为PHC的肝组织和1例正常肝组织、1例肝硬化肝组织中GP73的表达进行免疫组化分析.采用ELISA法检测血清GP73水平和利用电化学发光法血清中AFP水平.结果外周血有核细胞GP73 mRNA含量四组间差异无统计学意义(F=3.013,P=0.055).肝癌组织GP73mRNA表达量(12.64)显著高于正常肝组织(1.00).GP73免疫组化结果显示,正常肝组织中GP73少量在肝实质细胞胆小管处表达.肝硬化组织中GP73在肝细胞胞浆中弱阳性表达,但在肝细胞胞浆的两侧靠近胆小管位置呈颗粒状浓集;胆管柱状上皮也呈强阳性着色.PHC患者肝组织GP73在肿瘤细胞胞浆呈强阳性着色,且在胆管上皮细胞靠近腔缘一侧呈深棕色颗粒状分布.肝癌组中血清GP73水平显著高于肝炎组及健康对照组(x 2=62.541,P=0.000).通过ROC曲线确定诊断肝癌的GP73临界值为113.2μg/L,和AFP的临界值为13.3μg/L时,GP73和AFP单项检测的敏感度分别为68.0%和56.3%,特异度分别为94.8%和91.8%.结论 PHC患者血清高表达的GP73可能是在癌变的肝细胞胞浆中合成随后分泌入血.血清GP73在诊断PHC时阳性检出率显著高于AFP,且ROC曲线提示灵敏度和特异度均优于AFP.

    作者:徐少珊;石玉玲;张亚松;孙朝晖;李林海;张伟;陈晓东;陈炳旭 刊期: 2011年第11期

  • 动脉鞘管处采血检测激活全血凝固时间的可行性研究

    目的 探讨神经介入治疗后动脉鞘管处抽血检测激活全血凝固时间(ACT)的可行性.方法 选取我科行介入治疗后未拔除动脉鞘管的患者37例,分别从动脉鞘管和肘正中静脉处抽血0.1ml行快速ACT检测,并对两组数值进行统计学分析.结果 两组数值差异显著(P<0.01),静脉组(120.21±11.963)s,动脉组(124.86±12.669)s,二者之间呈直线相关.结论 动脉鞘管处抽动脉血快速检测ACT值可作为拔管依据.

    作者:夏义容;史凤霞;葛爱莉 刊期: 2011年第11期

  • 癌痛宣教对减轻患者疼痛治疗顾虑的作用

    目的 评价癌痛宣教对减轻治疗顾虑的作用.方法 调查江西省人民医院100例癌痛病人疼痛顾虑情况,比较疼痛宣教前后的顾虑、疼痛评分、治疗满意度和依从性,初步分析癌痛顾虑的影响因素.结果 癌痛患者平均顾虑分值2.3±0.37,顾虑程度与年龄、疼痛评分和家属顾虑明显相关.宣教前后总顾虑分值和与镇痛药物相关的顾虑分值均明显下降,治疗满意度明显升高,但疼痛评分和治疗依从性无明显变化.结论 癌痛患者对止痛治疗的顾虑普遍存在,疼痛宣教能减轻患者对止痛药物的顾虑,提高治疗满意度.

    作者:姚伟荣;孟晓晖;万会平;汤志谋;张锡泉;喻燕敏 刊期: 2011年第11期

  • 外源hTERT基因对人肝细胞增殖及CYP45019A1表达的影响

    目的 探讨外源hTERT基因对体外培养的人肝细胞增殖及细胞色素P450 19A1(CYP450 19A1)表达的影响.方法 将携带有hTERT片段的重组逆转录病毒载体pLNCX2-hTERT转染至体外培养的人肝细胞;四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法观察hTERT表达对细胞增殖的影响;通过采用Western blot法检测CYP450 19A1的表达情况.结果 成功将带有hTERT逆转录病毒载体pLNCX2-hTERT转染至人肝细胞,转染后的肝细胞组较未转染组增殖明显,转染前后肝细胞在55kU处均可见有CYP450 19A1蛋白表达.结论 外源hTERT基因可促进肝细胞增殖;转染组与未转染组肝细胞均可表达CYP450 19A1.

    作者:王开利;迟淑萍;孙杰;邢汉前;刘俊威;赵鸿;赵军 刊期: 2011年第11期

  • 山莨菪碱对心肺复苏大鼠及心肌超微结构的影响

    目的 观察山莨菪碱(anisodamine,Ani)对心脏停搏大鼠心肺复苏的成功率和心肌超微结构的影响.方法 采用电击致大鼠心脏停搏模型,将实验动物随机分为3组,每组15只.心脏停搏后4min行呼吸机辅助呼吸、胸外心脏按压,4min后静脉给药,0.9%氯化钠注射液对照组不用复苏药物;肾上腺素(Epi)组静脉注射肾上腺素200μg/kg;Ani组静脉注射肾上腺素200μg/kg并Ani 10mg/kg.观察自主循环恢复率、复苏成功率和心肌组织结构.结果 Ani组大鼠自主循环恢复率和复苏成功率(95%,80%)>Epi组(75%,46.7%》对照组(60%,26.7%).Ani组光镜和电镜下心肌组织的损伤均较肾上腺素组和对照组轻,肾上腺素组重.结论 复苏早期给予山莨菪碱干预可能会减轻肾上腺素的部分不良反应,减轻心肌损伤,提高复苏成功率.

    作者:贾立静;陈威;沈洪;计达;赵秀梅;刘秀华;胡白河 刊期: 2011年第11期

  • 胃癌细胞中miRNA-204过表达的作用

    目的 观察过表达miR-204对胃癌细胞生长、凋亡的影响.方法 实时荧光定量PCR检测胃癌细胞系中miR-204的表达,将其转染入胃癌细胞系,采用MTS及流式细胞术测定肿瘤细胞的生长、凋亡状况.结果 miR-204在不同胃癌细胞系中均是低表达,与组织中情况一致;过表达miR-204,未出现胃癌细胞生长减慢、凋亡增加的情况.结论 过表达miR-204对胃癌细胞系的生长、凋亡无明显影响.

    作者:张文辉;桂俊豪;王昌正;常青;吴本俨 刊期: 2011年第11期

解放军医学院学报杂志

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主管:解放军总医院-解放军医学院

主办:解放军总医院-解放军医学院