学术投稿

小鼠纹状体中神经递质相关基因表达的节律性波动

丁晖;蔡彦宁;王玲玲;柴玉鑫;张燕莉;陈彪

关键词:纹状体, 神经肽, 昼夜节律, 基因表达
摘要:目的 探讨纹状体神经肽强啡肽(dynorphin,DYN)、脑啡肽1(enkephalin l,ENKl)、P物质(substance P,SP)、胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)和多巴胺受体l和2(dopamine receptor 1 and 2,D1 r和D2r)是否受分子时钟机制的调控,它们的节律变化是否与时钟基因有关.方法 分别对刚出生(产后3 d)、断奶前(产后14 d)和成年(产后60 d)小鼠纹状体中上述基因24小时的mRNA用实时定量RT-PCR的检测方法观察其节律变化.结果 产后3 d小鼠纹状体内没有观察到相关基因的节律性变化;产后14 d时,纹状体内D2r、DYN和ENK1基因随时间呈现节律变化,出生后60 d时,纹状体内除D1r外,所有基因表达均随时间昼夜波动.结论 小鼠纹状体中神经递质相关基因的昼夜表达变化规律是在出生后逐渐形成的.
首都医科大学学报杂志相关文献
  • 窦神经压力感受器聚类分析

    目的 探讨应用Spike2软件从颈动脉窦压力感受器多重纤维放电记录中提取单纤维放电信息的可能性和具体方法.方法 对离体条件下同步记录的家兔颈动脉窦压力和窦神经少纤维放电数据,应用Spike2软件的聚类分析功能对所有动作电位进行分类.结果 ①分析过程中,设定模板参数必须紧密结合压力感受器的自身特点;②对于具有较高信噪比的、简单(含2-3个单位)或稍复杂的窦神经放电(含5个单位),应用spike 2进行分析可获得可靠的单位放电结果;③对于包含更多单位的压力感受器放电,应用Spike 2分析时,对所得结果需持审慎的态度.结论 Spike 2软件适用于窦神经压力感受器少纤维(<5个单位)放电的聚类分析;正确分析结果取决于原始记录良好的信噪比和对模版参数有针对性的设置.

    作者:赵海燕;魏华;刘萍;刘廷会;王伟;黄海霞;钮伟真 刊期: 2009年第05期

  • 七氟烷与丙泊酚在支撑喉镜术麻醉中应用的比较

    目的 比较七氟烷和丙泊酚分别复合瑞芬太尼靶控输注行静吸复合麻醉和全静脉麻醉用于支撑喉镜术的效果.方法 ASA Ⅰ-Ⅱ级择期行支撑喉镜下声带息肉切除术患者40例,用随机数字表分为丙泊酚组(P组)和七氟烷组(S组),每组20例.麻醉诱导:静脉注射咪唑安定1.0~1.5 mg,瑞芬太尼4μg/L血浆靶控输注,P组丙泊酚3 mg/L血浆靶控输注,S组静脉注射丙泊酚1.5~2.0 mg/kg,2组均用琥珀胆碱1.5~2.0 mg/kg静脉注射后行气管插管控制呼吸.麻醉维持:S组吸入2%~4%七氟烷,使呼气末七氟烷浓度达到1MAC,同时靶控输注瑞芬太尼;P组仍为血浆靶控输注瑞芬太尼和丙泊酚.2组均静脉滴注琥珀胆碱,吸人65%氧化亚氮.随手术进程调整麻醉深度.记录患者不同时间点的平均动脉压(MAP)及心率(HR),记录苏醒时间、拔管时间及不良反应发生率.结果 2组患者的HR在诱导后1 min(T1)较术前(T0)明显降低(P<0.05)、MAP在诱导后1 min (T1)及插管后1 min(T2)较术前(T0)明显降低(P<0.05);P组患者在诱导后1 min(T1)、插管后1 min(T2)及术毕(T7)的HR明显低于S组(P<0.05);S组苏醒时间、拔管时间明显短于P组(P<0.05).结论 2种麻醉方法均可用于支撑喉镜术,应用七氟烷麻醉的患者诱导时血流动力学更加平稳、苏醒更快.

    作者:李丽;杨文婧;李天佐 刊期: 2009年第05期

  • 实验性糖尿病大鼠坐骨神经损伤后神经再生微环境变化

    目的 观察实验性糖尿病大鼠在坐骨神经挤压伤后神经生长相关蛋白的表达水平;探讨神经元分子微环境变化对神经再生修复的重要意义.方法 制作实验性糖尿病大鼠模型,在此基础上制作双侧坐骨神经挤压伤模型.观察神经挤压损伤后7、14、21和28 d大鼠背根神经节TUNEL标记阳性细胞百分比变化;利用免疫组化和蛋白印迹技术(Western-blot),观察神经生长相关蛋白(GAP-43)和神经生长因子受体(trk A)表达水平变化.结果 实验性糖尿病大鼠坐骨神经损伤后,所有时程背根神经节细胞均有较多的TUNEL标记细胞,但以14~21 d显著;各时程背根神经节细胞GAP-43和trk A蛋白均有一定水平的表达,但其表达水平低于非糖尿病组.结论 实验性糖尿病大鼠坐骨神经背根神经节存在凋亡应激,其神经再生相关基因表达体系不完整,对神经损伤的再生修复能力下降.

    作者:张在强;曹世俭;王拥军 刊期: 2009年第05期

  • 帕金森病患者血清对α-突触核蛋白寡聚体形成的促进作用

    目的 研究帕金森病(PD)患者血清对外源性α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)寡聚体形成的影响,初步分析血清促进α-Syn寡聚体形成的机制.方法 将重组人α-Syn加入PD患者和对照组血清中,37℃振荡孵育,用免疫印迹方法鉴定α-Syn寡聚体的形成情况,用ELISA分析α-Syn寡聚体的形成量.结果 α-Syn在血清中振荡孵育后主要形成二聚体和十四聚体.与对照组血清相比较,PD患者血清具有促进α-Syn寡聚体形成的作用.在血清中加入还原性谷胱甘肽可明显减弱PD患者血清促进α-Syn寡聚体形成的作用.结论 PD患者血清促进α-Syn寡聚体的形成,其机制可能与α-Syn的氧化修饰有关.

    作者:李雁;殷娟娟;李昕;吴燕川;刘光伟;李尧华;于顺 刊期: 2009年第05期

  • HIV/AIDS患者免疫重建炎性综合征研究进展

    免疫重建炎性综合征发生于艾滋病患者应用高效抗反转录病毒疗法后的免疫重建过程中,本文分别对其概念、发病机制、诊断、临床表现和治疗等方面进行了综述.综合文献资料认为在病人的诊治上重要的一点是提高对免疫重建炎性综合征的诊断和鉴别,以免延误病情.免疫重建的特征之一是恢复了针对机会性感染致病原的免疫反应,因此除非有可能威胁患者生命或导致高致残率外,都应继续应用高效抗反转录病毒疗法.

    作者:吴巍;黄世敬;王阶 刊期: 2009年第05期

  • 激素干预哮喘模型大鼠证候学评价的实验研究

    目的 探讨地塞米松对哮喘模型大鼠治疗的不同阶段(撤停前、撤停中、撤停后)的阴虚与阳虚证证候属性.方法 建立大鼠慢性哮喘模型,腹腔注射地塞米松模拟激素干预过程,观察哮喘大鼠在激素干预不同阶段的症状表现,包括体质量、腋温、爪温、爪r值、尾r值.结果 激素干预组于激素撤停前阶段首先表现为阴虚证,在阴虚证的基础上又出现阳虚证的表现;撤停中及撤停后阶段基本符合阳虚证的辩证特点.结论 激素干预哮喘模型在激素应用的不同阶段具有不同的证候特点.

    作者:刘仁慧;赵晖;穆阳;王培;杨婧;张翼;刘苏;王秀娟 刊期: 2009年第05期

  • α-突触核蛋白促进大鼠原代培养神经元突起生长

    目的 研究人α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)对神经元突起牛长的作用.方法 原代培养新生大鼠大脑皮质神经元,细胞外添加α-Syn蛋白,测定不同时间神经元突起的长度;观察添加不同浓度的α-Syn蛋白后神经元突起的生长情况.结果 α-Syn处理组神经元突起的平均长度在培养1 h、2 h和4 h时均明显大于对照组,α-Syn的这一作用可被其特异性单克隆抗体阻断;向培养基中添加不同浓度的α-Syn后,神经元突起的长度随α-Syn浓度的增加而增加.结论 α-Syn具有促进神经元突起生长的作用,并且呈明显的量-效关系.

    作者:刘光伟;王鹏;李尧华;李昕;何欣;于顺 刊期: 2009年第05期

  • 共聚物-1致敏T淋巴细胞保护MPTP帕金森病模型小鼠黑质多巴胺能神经元

    目的 明确C57BL/6J小鼠MPTP模型保护黑质多巴胺(dopamine,DA)神经元的共聚物-1(Copolymer-1,Cop-1)致敏淋巴细胞的类型.方法 将80只雄性C57BL/6J小鼠分为Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、Cop-1/BSA致敏T淋巴细胞移植组、去T淋巴细胞Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组、MPTP模型组和正常对照组,每组10只.C57BL/6J小鼠1 d内接受4次MPTP(18 mg·kg-1)腹膜腔注射,每次注射间隔2 h,正常对照组动物仅接受等量的0.9%氯化钠注射液注射.MPTP末次注射后,除MPTP模型组和正常对照组动物外,其他组动物立即分别接受不同的Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植.细胞移植7 d后处死动物,取脑.酪氨酸羟化酶免疫组化及体视学方法定量分析黑质DA神经元数.结果 黑质DA神经元定量分析显示,MPTP注射使模型对照组黑质DA神经元减少到正常对照组的37.68%,BSA致敏淋巴细胞移植组(38.15%)、BSA致敏T淋巴细胞移植组(41.44%)和去T淋巴细胞的Cop-1/BSA致敏淋巴细胞移植组结果(Cop-1:40.06%,BSA:34.81%)和模型对照组类似.而Cop-1致敏淋巴细胞移植和Cop-1致敏T淋巴细胞移植组黑质DA神经无数为正常对照组的74.38%和84.64%,DA神经元数明显高于模型对照组、BSA致敏淋巴细胞移植组和去除T淋巴细胞的BSA/Cop-1致敏淋巴细胞移植组(P<0.01).结论 在MPTPC57BL/6J小鼠模型,Cop-1致敏T淋巴细胞叮有效对抗MPTP毒性,保护黑质DA神经元.

    作者:徐胜利;宣琪;周明 刊期: 2009年第05期

  • 低强度脉冲超声对雪旺细胞增生及NT-3基因表达的影响

    目的 研究培养的雪旺细胞在低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)直接作用下,对细胞增生、NT-3及脑源性神经生长因子(BDNF)mRNA表达的影响.方法 取新生1-3 d Wistar大鼠坐骨神经,经过酶消化分离雪旺细胞,培养在6孔板上.每天给予超声频率1 MHz及声强(SATA)0.1W/cm25 min连续刺激,持续14 d.对照组除不给予超卢刺激外,其他条件与实验组相同.采用5-溴-2-脱氧尿嘧啶实验(BrdU摄人实验)检测细胞增生率的变化,免疫组化及RT-PCR实验检测细胞因子的变化.结果 免疫组化结果显示,分离的雪旺细胞标记物S-100鉴定98%以上阳性.BrdU摄入实验发现受超声刺激的细胞在培养第4,7,10,14天细胞增生率较对照组增高,其中前3个时间点差异具有统计学意义.在刺激第14天,实验组NT-3mRNA水平较对照组有显著上调,NT-3/β-actin比值分别为0.56±0.13和0.41±0.09(n=6,P<0.05).而BDNF水平实验组较对照组显著下调,BDNF/β-actin比值分别是0.51±0.05和0.60± 0.08(n=6,P<0.05).免疫细胞化学证实2组雪旺细胞NT-3及BDNF均有超过98%的阳性率,但表达强度不同.结论 给予低强度脉冲超卢刺激可促进培养的雪旺细胞增生及神经生长因子表达的改变,本研究为低强度脉冲超声的应用提供了,理论依据.

    作者:李家谋;张华;林欣;万虹;田宝鹏 刊期: 2009年第05期

  • 视交叉上核脑片与NIH/3T3成纤维细胞共培养模型的建立

    目的 建立视交叉上核(suprachiasmatic nucleus,SCN)脑片与NIH/3T3成纤维细胞共培养的分子时钟诱导模型.方法 选用7日龄SD大鼠,分离SCN脑片或皮层脑片,分别与NIH/3T3细胞共培养,分为SCN共培养组和对照组皮质共培养组,6 d后连续24 h每间隔6 h收集NIH/3T3细胞,抽提细胞总RNA,实时定量RT-PCR检测时钟基因Per1mRNA水平.结果 SCN共培养组Per1的表达均表现明显的节律性(P=0.001),对照组大脑皮质共培养组Per1基因表达均无明显节律性变化.结论 成功建立SCN脑片与NIH3T3细胞共培养模型并诱导细胞内分子时钟的节律性表达,为研究SEN调控外周组织细胞生物节律提供有力工具.

    作者:左晓虹;蔡彦宁;李宁;于顺;张燕莉;陈彪 刊期: 2009年第05期

  • 小鼠纹状体中神经递质相关基因表达的节律性波动

    目的 探讨纹状体神经肽强啡肽(dynorphin,DYN)、脑啡肽1(enkephalin l,ENKl)、P物质(substance P,SP)、胆囊收缩素(cholecystokinin,CCK)和多巴胺受体l和2(dopamine receptor 1 and 2,D1 r和D2r)是否受分子时钟机制的调控,它们的节律变化是否与时钟基因有关.方法 分别对刚出生(产后3 d)、断奶前(产后14 d)和成年(产后60 d)小鼠纹状体中上述基因24小时的mRNA用实时定量RT-PCR的检测方法观察其节律变化.结果 产后3 d小鼠纹状体内没有观察到相关基因的节律性变化;产后14 d时,纹状体内D2r、DYN和ENK1基因随时间呈现节律变化,出生后60 d时,纹状体内除D1r外,所有基因表达均随时间昼夜波动.结论 小鼠纹状体中神经递质相关基因的昼夜表达变化规律是在出生后逐渐形成的.

    作者:丁晖;蔡彦宁;王玲玲;柴玉鑫;张燕莉;陈彪 刊期: 2009年第05期

  • 卡氏肺孢子虫肺炎动物模型建立的现状

    卡氏肺孢子虫性肺炎(pneumocystiscariniipneumo-nia,PCP)是免疫功能受损患者严重的和常见的致死性条件感染性寄生虫病,已成为AIDS病患者的特征性疾病[1].PCP肺炎患者病情严重,缺乏相应的临床体征,如不及时治疗,其病死率高达20%~60%.

    作者:谷俊朝;刘建;俞巍 刊期: 2009年第05期

  • Alu-LTR PCR检测整合型HIV-1实验方法的优化

    目的 对AJu-LTR PCR检测整合型HIV-1的实验方法进行优化.方法 收集20例HIV-1感染患者及10例健康对照者的抗凝血标本,纯化CD4+T细胞并提取DNA,根据整合型HIV-1 DNA的特点设计引物,首轮PCR 5'端引物来自于人类保守的Alu序列,3'端引物来自于HIV-1 L11R U5区序列,扩增片段包含了整合位点上游的人类基因组DNA序列和整合的HIV-1 LTR的序列.第二轮引物针对HIV-1 LTR U3区的序列.在首轮PCR基础上,PCR产物稀释后进行第二轮PCR.结果 经过优化的Alu-LYR PCR,20例HIV病人全部检测到整合的HIV-1.结论 经优化后,Ah-LTR PCR检测整合型HIV-1的实验方法的灵敏度明显提高.

    作者:李娟;焦艳梅;画伟;张彤;吴昊;高艳青 刊期: 2009年第05期

  • 20例HIV/AIDS患者耐药结果分析

    目的 对高效抗逆转录病毒治疗(highly active antiretroviral therapy,HAART)失败的HIV/AIDS患者,进行回顾性基因型耐药检测,了解HAART过程中HIV-1耐药位点的产生,分析基因型耐药检测在HAART过程中的必要性及指导意义.方法 采用Versant HIV-1 RNA 3.0检测病毒载鼍;采用TriTEST CD4 FITC/CD8 PE/CD3 PerCP Reagent检测CD4+T淋巴细胞计数;采用Tmgene HIV-1 Genotyping Kit和OpenGene DNA系统进行基因型耐药检测;用Blast等分子生物学软件进行HIV-1亚型分析.结果 20例患者中,17例保存有治疗前的血浆标本,其中1例在治疗前即存在非核苷类逆转录酶抑制剂(non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)耐药相关突变.20例患者均进行了治疗后耐药检测,其中3例未检出耐药相关突变.其他17例检出耐药相关突变,其中13例出现NNRTIs耐药相关突变;突变位点主要为K103N、Y188L、Y181C、V106M和G190A;11例显示有核苷类逆转录酶抑制剂(nucleoside/nucleotide reverse transcriptase inhibitors,NRTIs)耐药相关突变,突变位点主要为M184V、T/215Y/F、D67N、K70R以及K219E/Q;3例出现蛋白酶抑制剂(protease inhibitors,PIs)耐药相关突变,其中主突变为M46I/L、V82WA,而次级突变中以M36I、L63P出现的频率高.20例患者中B亚型9例(45%,9/20),CRF01_AE重组亚利5例(25%,5/20),CRF07_BC重组亚型5例(25%,5/20),CRF06_CPX1重组亚型1例(5%,1/20).结论 对治疗失败的患者进行基因型耐药检测可以帮助医生判断HAART失败的原因,并指导治疗方案的优化;亚型分析显示HIV-1病毒亚型的流行与感染途径之间存在明显的联系.

    作者:魏飞力;吴昊;张彤;李庆;刘志英;王蕊;焦艳梅;陈德喜 刊期: 2009年第05期

  • 脑源性神经营养因子在脑室注射脂多糖大鼠黑质多巴胺能神经元变性中的作用

    目的 观察脑室内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对大鼠黑质多巴胺能神经元的长时程毒性作用,探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在黑质多巴胺能神经元慢性变性过程中的作用.方法 健康雄性SD大鼠48只,采用抽签法将大鼠随机分为LPS实验组和0.9%氯化钠注射液(NS)对照组,经大鼠右侧脑室一次性注射LPS 20;μL(1.25 g/L)或0.9%氯化钠注射液20μL.给药后2周、4周、12周、24周用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色观察黑质多巴胺能神经元的变化,免疫组化及酶联免疫吸附实验(enzyme immunoassay system,ELISA)检测黑质纹状体系统BDNF表达的变化.结果 ①TH免疫组织化学染色结果显示,大鼠黑质多巴胺能神经元数目在LPS给药后期减少,24周时LPS实验组大鼠黑质TH阳性神经元数量为NS对照组的75.4%(P<0.01);②BDNF免疫组化结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质部位BDNF阳性细胞的表达较NS对照组高,而到12周和24周时其表达比NS对照组明显下降.ELISA检测结果显示,LPS实验组大鼠4周时黑质纹状体内BDNF表达是NS对照组的186.3%(P<0.01),而12周和24周时分别是NS对照组的42.3%(P<0.01)和61.0%(P<0.05).结论 脑室内注射LPS可导致大鼠黑质多巴胺能神经元变性,这一病变过程呈慢性迟发性.该模型大鼠黑质TH阳性神经元变性丢失前即出现黑质纹状体系统BDNF表达减少,提示BDNF表达减少可能是黑质多巴胺能神经元变性丢失的原因之一.

    作者:赵咏梅;吕风月;徐群渊 刊期: 2009年第05期

  • α-突触核蛋白在大鼠脊髓的表达

    目的 研究α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)在正常大鼠脊髓中的表达.方法 利用2种抗α-Syn单抗3D5和2E3进行免疫组化染色,观察α-Syn在脊髓的表达和分布;用免疫荧光双标方法观察α-Syn与神经肽Y(NPY)共存的情况.用Luxolfast blue染色鉴别有髓与无髓神经纤维.结果 α-Syn主要存在于脊髓灰质神经元核及灰质无髓神经纤维中.富含α-Syn的神经纤维主要分布在脊髓灰质的第Ⅰ、Ⅱ层,而α-Syn核阳性神经元主要分布在第Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ层;后根第Ⅰ、Ⅱ层一小部分α-Syn阳性纤维与NPY共存;前角细胞核呈α-Syn阳性神经元胞质中存在NPY,而其他部位的α-Syn核阳性神经元胞质中无NPY.结论 α-Syn存在于大鼠脊髓灰质的神经元核及无髓神经纤维中,部分阳性神经纤维和神经元胞体呈NPY免疫阳性反应.

    作者:殷娟娟;Giorgio Vivaqua;李昕;刘光伟;李尧华;于顺 刊期: 2009年第05期

  • 帕金森病患者血清低分子量蛋白质差异表达分析

    目的 探讨帕金森病(Parkinson's disease,PD)患者区别于正常人的血清蛋白质差异表达.方法 选择原发性PD患者35例和正常人35例,用弱阳离子交换(weak cationic exchange,WCX)磁珠捕获血清蛋白质组分,用MALDI-TOF-MS(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometer)检测各样品的蛋白质质谱,统计学筛选差异表达分子,监督神经网络算法建立区分模型,盲法验证.结果 在PD组和对照组之间筛杏到8个差异分子(非参数检验Z值范围为-4.458~-3.059,P<0.05).以监督神经网络算法建市区分模型,其判断正确率为81.4%.对25例新样本的盲法验证结果显示,模型的正确率为76.0%.结论 PD患者血清蛋白质的表达谱有别于正常人.蛋白质组学数据结合生物信息学方法可能有助于PD的诊断.

    作者:李尧华;叶懿文;李昕;于顺;杨慧;陈彪 刊期: 2009年第05期

  • 开拓进取任重道远

    [编者按]胡大一,主任医师、教授、博士生导师,卫生部健康教育首席专家,教育部重点学科心血管内科负责人,国家突出贡献专家、享受政府特殊津贴.现任北京大学人民医院心脏中心主任、心血管病研究所所长、首都医科大学心血管病研究所所长、复旦大学公共卫生学院临床流行病学研究中心主任.

    作者: 刊期: 2009年第05期

  • 北京市部分男男同性恋人群中HIV-1分子流行病学研究

    目的 了解北京市部分男男同性恋(men who have sex with men,MSM)人群HIV-1的分子流行情况,监测该地区人群HIV毒株的新流行情况.方法 提取17例男男同性恋者HIV-1抗体阳性样本全血基因组DNA,直接进行巢式PCR扩增HIVenv基因C2-V5区及gag基因P17-P24区,对PCR产物进行核苷酸序列测定和分析,确定基因亚型.结果 17例患者中,共存在CRF01-AE、B亚型和CRF07-BC 3种亚型,其中CRF01-AE 9例(52.94%),B亚型5例(29.41%),CRF07-BC 3例(17.65%).结论 小样本量的流行病学调查显示,北京地区部分男男同性恋人群中主要存在CRF01-AE、B和CRF07-BC 3种亚型;CRF01-AE已取代B亚型而成为北京市MSM人群中HIV主要流行亚型,CRF07-BC重组亚型在北京市MSM人群中增长迅速.

    作者:刘志英;李海英;张彤;黄晓婕;魏飞力;徐萌;焦艳梅;徐小宁;陈德喜;吴昊 刊期: 2009年第05期

  • 帕金森病的发病机制与早期诊断

    帕金森病是常见的与衰老有关的神经系统变性疾病,临床上以静止振震颤、运动迟缓、僵直、姿势不稳定为主要症状,其主要病理变化为黑质多巴胺能神经元的大量丢失,在尚存活的神经元中存在嗜酸性细胞内包涵体--Lewy body.

    作者:首都医科大学宣武医院神经生物学研究室 刊期: 2009年第05期

首都医科大学学报杂志

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