王丽芳;张宇;邓晖
作者: 刊期: 2016年第09期
目的:探讨慢性乙型肝炎病毒(CHB)患者外周血NKG2A+NK 细胞与调节性T 细胞(Treg)的关系及临床意义。方法:收集46例CHB 患者和17例健康对照者外周血,采用实时荧光定量PCR 法检测血清HBV DNA;采用流式细胞术检测NKG2A+NK 细胞及Treg 的比例。结果:将CHB 患者分为Low HBV DNA 组(300~104 U/ml)及High HBV DNA 组(105~108 U/ml)。我们发现High HBV DNA 组ALT 明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。High HBV DNA 组CD56dim NK 细胞及NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例均分别明显高于Low HBV DNA 组(P<0.05)。且High HBV DNA 组Treg 明显高于Low HBVDNA 组和对照组(P<0.05)。此外,NKG2A+CD56dim NK 细胞的比例与High HBV DNA 载量及Treg 水平均呈正相关性(r =0.59,P<0.05;r =0.53,P<0.05)。结论:CHB 患者的NKG2A+CD56dim NK 细胞的水平与HBV 的免疫逃逸及疾病的进展相关。
作者:郑美娟;秦义组;张敏;张振华;徐元宏 刊期: 2016年第09期
目的:分析胃蛋白酶Ⅰ( PGⅠ)、胃蛋白酶Ⅱ( PGⅡ)、胃泌素-17( G-17)和幽门螺杆菌( Hp IgG)抗体筛查对慢性萎缩性胃炎和胃癌的诊断价值。方法:以2014年5月-2015年5月胃部不适来我院就诊的90例患者为研究对象,根据病理诊断结果分为正常对照组(包括慢性非萎缩性胃炎)、慢性萎缩性胃炎组和胃癌组,每组各30例,比较三组患者PGⅠ、PGⅡ、G-17水平及Hp IgG抗体阳性检出率。结果:胃癌组患者的PGⅠ、PGⅡ水平低于对照组和慢性萎缩性胃炎组,且慢性萎缩性胃炎组患者上述指标低于对照组;胃癌组G-17水平高于慢性萎缩性胃炎组和对照组,而慢性萎缩性胃炎组和对照组无明显差异;三组间Hp IgG抗体阳性率有明显差别,胃癌组显著高于对照组和慢性萎缩性胃炎组;Hp感染患者的PGⅠ和PGⅡ水平低于未感染Hp者,而G-17水平高于未感染Hp者;胃癌患者的PGⅠ、PGⅡ水平与年龄、病理分期和转移显著负相关,与分化程度显著正相关,而G-17水平及Hp IgG抗体阳性率与年龄、病理分期和转移显著正相关,而与分化程度显著负相关。结论:PGⅠ、PGⅡ和Hp IgG抗体筛查对慢性萎缩性胃炎和胃癌均有很好的诊断价值,而对胃癌的诊断价值更好,G-17对胃癌的诊断价值远远好于慢性萎缩性胃炎;且PGⅠ、PGⅡ、G-17水平及Hp IgG抗体阳性检出率与胃癌患者的临床病理特征密切相关。
作者:魏华;张蕾蕾;李艳;索智敏 刊期: 2016年第09期
目的:探讨类风湿关节炎心肺功能变化进行研究,并分析类风湿关节炎心肺功能变化与氧化应激及外周血淋巴细胞衰减因子的相关性。方法:以130例住院类风湿关节炎患者为病例组研究对象,50例健康体检为正常对照。分别检测两组入选对象心功能参数EF%、SV%、FS%、E、A、E/A;肺功能参数FVC、FEV1、MVV、PEF;B、T 淋巴细胞衰减因子表达频率及相关活化水平;酶联免疫吸附法检测外周血细胞因子( IL-17、TNF-α、IL-4、IL-35)及氧化应激指标( MDA、ROS、SOD、TAOC)。结果:病例组研究对象心功能各项指标明显低于正常对照组。病例组130例患者中,有103例心功能指标异常,占病例组研究对象的79.23%,而E/A异常率高。病例组与正常对照组相比,LADd增厚,A峰升高,EF、E 峰、E/A降低,相比差异有统计学意义( P<0.05);与正常对照组相比,病例组肺功能各项参数明显降低;病例组130例患者中,有88例肺功能指标异常,占病例组研究对象的67.69%。而其中PEF异常率高。病例组肺功能各项指标明显低于对照组,相比差异有统计学意义( P<0.05);相关分析显示心功能指标EF与CD24+细胞和CD19+CD24+细胞的相关系数分别为-0.353及-0.457,具有负相关性,与ROS的相关系数为0.459,具有正相关性。心功能指标FS 与CD24+细胞、CD19+CD24+细胞的相关系数为-0.395和-0.421,具有负相关性;A峰与CD19+cell的相关系数为0.423,具有正相关性,E/A与BTLA的相关系数为0.393,具有明显的正相关性;SV与MDA、SOD呈正相关;肺功能的各项参数均与Hs-CRP及ESR呈明显的负相关;肺功能参数FVC 与BTLA及CD19+CD24+的相关系数0.513和0.596,具有明显正相关性,与CD24+BTLA+、TNF-α的相关系数为-0.451和-0.351,呈明显负相关性;参数FEV1与CD19+CD24+、TAOC、IL-4的相关系数分别为0.535、0.466及0.519,呈明显正相关性,与CD24+BTLA+、MDA的相关系数为-0.461和-0.358,呈明显负相关性;PEF 与SOD、TAOC、IL-4、IL-35的相关系数分别为0.547、0.482、0.643及0.452,呈明显正相关性,与MDA、ROS、IL-17的相关系数为-0.451、-0.423及-0.417,呈明显负相关性( P<0.05)。结论:RA氧化应激失衡及细胞免疫失调贯穿于心肺功能损伤的整个过程,因此,在临床上治疗RA患者关节症状的同时,要探讨如何恢复机体氧化还原稳态,以上调BTLA水平,活化B、T细胞,从而抑制免疫炎症反应,降低心肺功能损伤。
作者:陈晓青;杨友华;杨荣;刘宇炜;周国勇;邱文洪 刊期: 2016年第09期
目的:构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体,研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法:从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列,制备转录双发夹RNA的前体DNA,并克隆至慢病毒穿梭质粒,构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体,测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒,经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度,流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞,流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况;将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养,分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果:成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体;获得了滴度达(3~5)×108 TU/ml的浓缩重组慢病毒,重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞,该细胞表面B7-1分子表达受到抑制,刺激T细胞增殖的能力显著下降(P<0.05)。结论:构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体,该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达,抑制B7-1/CD28信号诱导的T细胞增殖效应。
作者:孔永;沈立军;王婧;朱莹;蔡磊;邱玉华;黄莉 刊期: 2016年第09期
目的:探索鼠伤寒沙门菌cya( adenylate cyclase,cya)基因的功能及其缺失株减毒的初步机制。方法:对鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株的耐酸碱能力、耐盐性、运动性、生物被膜成分、对上皮细胞黏附、侵袭以及细胞毒性等生物学特性进行检测。结果:cya缺失株的耐酸碱性、耐盐性以及运动能力较亲本菌株有明显降低;生物被膜成分测定结果显示cya缺失株不表达纤维素和菌毛;同时与亲本菌株相比cya缺失株对上皮细胞的黏附和侵袭能力发生了显著的降低,且对细胞毒性的影响弱于亲本菌株。结论:上述结果表明cya基因功能与细菌的运动能力、细胞膜的渗透能力、生物被膜的形成及毒力密切相关,从而为鼠伤寒沙门菌cya基因功能及其缺失株减毒机制的进一步研究提供了理论参考,这也必将有助于研发以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗。
作者:刘莎莎;贾艳艳;张春杰;陈松彪;廖成水;杨亚东;王二鑫;程相朝 刊期: 2016年第09期
目的:探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法:采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果:慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV感染患者Vδ2 T细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV感染病人Vδ2 T细胞处于活化状态,CD107a表达高于对照组。结论:Vδ2 T细胞亚群参与慢性HCV感染所致肝损伤。
作者:殷文伟;张琼方;邵建营;童师雯 刊期: 2016年第09期
目的:研究广西人群miR-146a C>G (rs2910164)、miR-149 T>C(rs2292832)等位基因及基因型频率分布,分析其与不同民族种族间的差异性。方法:采用单碱基延伸技术和DNA测序技术对303例广西人群中miR-146a C>G和miR-149 T>C基因单核苷酸多态性( SNP)位点进行分型检测,并与人类基因组计划( Hapmap)数据库中公布的非洲人、欧洲人、日本人和中国北京人群的SNP分型数据比较。结果:miR-146a C>G、miR-149 T>C等位基因和基因型频率在广西男女人群之间分布均无差异性(P均>0.05)。广西人群miR-146a C>G和miR-149 T>C基因型及等位基因频率与非洲人、欧洲人、中国北京人比较有统计学意义(P均<0.05)。结论:广西人群miR-146a C>G和miR-149 T>C存在基因多态性,与其他种族人群比较有差异性,这种差异性对人类遗传病的研究可能会起到重要作用。
作者:罗宏成;王春芳;雷茗;韦颖;谭昙;韦叶生 刊期: 2016年第09期
目的:分析ITP患者和健康对照组Treg细胞中miRNA的表达谱的差异,探讨ITP的发病机制。方法:抽取ITP患者组和健康对照组外周静脉血,应用流式细胞仪分选Treg细胞,提取每组患者Treg细胞中的RNA,采用Solexa深度测序法对其miRNA表达谱进行分析。对比ITP组和正常对照组芯片结果,找出差异表达的miRNA,并对其进行富集性分析,找寻异常信号通路。结果:我们筛查到ITP患者组Treg细胞中存在多个miRNA表达异常,其中有显著差异者为miR-1976, miR-548ae-5p、miR-5096-p3、miR-548am-5p、PC-3p-63471、PC-3p-96627。通过富集性分析发现ErbB和TGF-β两个异常信号通路。结论:ITP患者外周血Treg细胞内miRNA表达谱存在差异表达,这些差异表达的miRNA可能影响了Treg细胞发挥正常的免疫调节功能,是ITP发生的机制之一。
作者:曾艳;韩红;陈慧 刊期: 2016年第09期
微小RNA ( microRNA,miRNA)是一类非编码小分子RNA,稳定存在于人体各种体液中,通过转录后的水平精细调控基因时序性表达,参与细胞的分化、增殖和凋亡等过程。近年来体液中的miRNA作为一种新型的疾病诊断指标已有大量的研究报道,并显示出良好的应用前景[1,2]。 miR-155作为miRNA的重要成员之一,广泛参与T细胞的活化、增殖、分化过程。成熟的miR-155主要参与机体适应性免疫应答及免疫耐受,在自身免疫性疾病、感染及肿瘤等病理过程中存在异常表达[3-5]。所以,研究miR-155在T细胞分化中的作用及其具体机制具有极其重要的意义,能够为自身免疫性疾病、感染、肿瘤等的治疗提供新的方案。 T细胞在胸腺中发育成熟,当机体受到外界抗原刺激时,T细胞可以通过向Th1、Th2、Th17、Treg、Tfh细胞等不同方向分化,来调节人体免疫,参与机体免疫应答。包括 miR-155在内的多种miRNA都可以调节T细胞的分化,影响各分化类型T细胞的功能及其相关细胞因子的分泌,进而参与人体多种病理生理过程。本文围绕miR-155在各类T细胞分化过程中的作用及其具体机制进行了综述。
作者:戴萌;杨治芳 刊期: 2016年第09期
目的:探讨HLA-DQB1等位基因多态性及相应位点下Th1/Th2细胞相关因子IL-2、IL-4及IL-10对广西瑶族原发性肝癌家族聚集性的影响,为寻找广西瑶族原发性肝癌的遗传易感基因或拮抗基因提供线索。方法:在广西肝癌高发区选取民族为瑶族的肝癌高发家族成员、无癌家族成员各40例作为研究对象(采用相同性别、年龄±5岁配对方法),采集研究对象外周血并提取全血DNA,应用PCR-SSP的方法对HLA-DQB1等位基因进行检测,应用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10的水平。结果:(1)广西瑶族肝癌高发家族组的HLA-DQB1*02/09等位基因表达频率高于无癌家族组,两组比较差异明显,具有统计学意义(P<0.05);而两组间的HLA-DQB1*04/05/06/07/08等位基因表达频率无显著性差异(P>0.05)。(2)HLA-DQB1各等位基因在乙型肝炎病毒感染组( HBsAg阳性组)及非乙型肝炎病毒感染组( HBsAg阴性组)间的分布频率比较无显著性差异(P值均>0.05)。(3)广西瑶族肝癌高发家族成员组中Th2细胞相关因子IL-4、IL-10平均表达水平高于无癌家族成员组,差异具有统计学意义(P<0.05),而两组间的IL-2浓度无显著性差异(P>0.05)。(4)两组中HLA-DQB1*02阳性成员的IL-10平均表达水平高于HLA-DQB1*02阴性成员,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)两组中HLA-DQB1*09阳性成员的IL-4平均表达水平高于HLA-DQB1*09阴性成员,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)HLA-DQB1*02/09等位基因可能是广西瑶族居民原发性肝癌发生的易感基因。(2) HLA-DQB1各等位基因与广西瑶族居民的HBV感染可能无显著相关性。(3)IL-4、IL-10表达水平失衡可能是广西瑶族肝癌家族聚集性的危险因素。(4)IL-10表达水平失衡可能与HLA-DQB1*02等位基因的携带有关,而IL-4表达水平失衡可能与HLA-DQB1*09等位基因的携带有关,它们之间共同作用可能与广西瑶族肝癌家族聚集性的发生有相关性。
作者:卢庭婷;梁惠萍;李致忠;黄兰;吴继周;陈婉玲 刊期: 2016年第09期
CRISPR ( Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)首次在K12大肠杆菌的碱性磷酸酶基因位点附近发现,后统一称为规律成簇间隔短回文重复序列,是在大多数细菌、古细菌中广泛存在的一类独特的 DNA 规律性重复序列[1]。 Cas ( CRISPR-associated)基因是位于CRISPR区域临近处的蛋白质编码基因,而且相对保守。 Cas基因可与CRISPR转录出的RNA结合并形成核糖核蛋白复合物,在原核生物中发挥获得性免疫功能,使宿主获得抵抗噬菌体、质粒等外来DNA入侵的免疫能力。 CRISPR/Cas技术是由RNA指导Cas核酸酶对靶向DNA进行特定修饰,能够共定位RNA、DNA和蛋白,因而拥有巨大的改造潜力。此外,也在研究人类疾病致病机理和治疗手段中起到了关键作用。近,有研究对21种癌症类型开展大规模分析,并将与癌症有关的已知基因目录扩增了25%[2],还有许多重要的癌基因有待进一步发现。而癌症小鼠模型可对癌基因组进行深入研究,因此,CRISPR/Cas9以其高效、准确的对特定基因进行敲除或修饰,已成为目前具有临床与应用前景的基因编辑技术之一。
作者:刘玉颖;杨文涛;杨桂连;王春凤 刊期: 2016年第09期
目的:为了探索白细胞介素-13(Interleukin-13,IL-13)在乳腺癌发展中的作用机制,我们研究了IL-13对与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞表达SDF-1(Stromal cell derived factor 1)和EGF(Epidermal growth factor)的影响。方法:采用体外和荷瘤裸鼠体内人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株CCC-ESF-1(ESF)共培养的方法,用定量PCR(RT-qPCR)方法、流式细胞术和Western blot 方法检测在IL-13作用下体外共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达,细胞增殖实验Cellcounting kit-8(CCK-8)观察IL-13对体外共培养的乳腺癌细胞增殖的影响;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察在IL-13作用下荷瘤裸鼠体内与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达,检测IL-13对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果:IL-13上调体外与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达,并促进共培养的乳腺癌细胞的增殖;IL-13上调荷瘤裸鼠乳腺癌组织成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达,并促进荷瘤裸鼠肿瘤生长。结论:IL-13上调与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达,IL-13对乳腺癌促进作用的分子机制涉及乳腺癌基质成纤维细胞的SDF-1和EGF。
作者:石小玉;陈少芬;古华平;卢慧;李文林 刊期: 2016年第09期
成功的妊娠依赖于母体对胎儿的免疫耐受。近年来研究证实:Tim-3/Gal-9信号通路通过抑制Th1细胞的活性、Th17细胞的分化和功能以及促进Th2细胞的功能,调节T细胞亚群平衡和诱导外周免疫耐受。 Tim-3/Gal-9信号通路在母胎界面和妊娠中的功能已经在人和动物模型中有较多报道。本文将从Tim-3/Gal-9信号通路调节T细胞平衡这一生物学功能着手,阐明其在母胎免疫耐受的诱导和维持以及妊娠相关疾病中的作用和机制,并探索潜在的治疗价值。
作者:何泽现;赵富玺 刊期: 2016年第09期
目的:探讨核因子-κB( Nuclear factor kappa B,NF-κB)介导的促凋亡蛋白Bak( Bcl-2 associated K protein gene, Bak)及TNF-α的表达在溃疡性结肠炎( Ulcerative colitis,UC)发病中的作用机制。方法:选购80只清洁级SD大鼠,分为模型组和对照组。 UC大鼠模型制造采用“三硝基苯磺酸+乙醇”方法,模型制造成功后观察、评估结肠黏膜的大体形态及组织学变化。用免疫组织化学及RT-PCR法检测模型组与对照组中的NF-κB、Bak、TNF-α的表达水平,并分析相互之间关系。结果:UC大鼠模型制造成功率为97%。模型组固有层和黏膜层内炎性细胞浸润较对照组明显增多( P<0.01);NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达水平模型组较对照组明显升高(P<0.01);Bak蛋白在模型组的炎细胞中表达明显低于对照组(P<0.01),而在结肠黏膜上皮细胞中的水平与对照组无明显差异( P>0.05)。 NF-κB、TNF-α蛋白阳性细胞百分数及mRNA水平随模型组的组织学等级升高而增强,而Bak蛋白阳性细胞百分数是减弱的( P<0.05);且模型组中NF-κB与Bak蛋白的表达水平呈负相关( r=-0.793,P<0.01),NF-κB与TNF-α蛋白表达成正相关(r=0.892,P<0.01)。结论:NF-κB介导的促凋亡蛋白Bak的表达参与了UC的发生、发展。
作者:陈晓;王启之;郦忆文;马文静;于东红 刊期: 2016年第09期
目的:研究小鼠皮肤移植模型中趋化因子CCL20和CCL22联合调节性T细胞对移植皮肤存活时间的影响。方法:将皮肤移植小鼠分为四组,每组3只小鼠,分别为Treg组、Treg+CCL20组、Treg+CCL22组与对照组。其中Treg细胞经同种异体皮肤抗原诱导。以C57BL/6小鼠为同种异体供体,BALB/c小鼠为受体行皮肤移植手术。进行皮肤移植后立即于异体皮下注射Treg细胞2×105个细胞/鼠,体积为200μl。以后每日于异体皮下注射趋化因子CCL20或CCL22,共连续注射10 d,观察并记录皮肤的存活情况。 Treg细胞定植实验:首先利用磁珠分选方法分离皮肤抗原诱导Treg细胞,并利用锝99标记分离到的Treg细胞;皮下注射3 h后,处死小鼠,用GC-2016γ放射免疫计数器检测各脏器及移植皮肤的放射性活度。结果:①经Treg进行干预的小鼠,其异体皮肤存活时间均显著长于手术对照组( P<0.05),而且同种异体抗原诱导Treg在趋化因子CCL20或CCL22存在下异体皮肤存活时间显著高于单纯使用Treg组和对照组( P<0.001)。②注射皮肤抗原诱导的Treg细胞后,自体和异体皮肤移植组Treg细胞主要分布在自体和异体皮肤,分别占注射Treg组细胞的60%和98%;加趋化因子CCL20组和CCL22组的Treg主要分布在肝脏。结论:趋化因子CCL20和CCL22能够协同促进经皮肤抗原诱导的Treg细胞延长异体皮肤的存活时间,这种作用效果可能与趋化因子CCL20和CCL22趋化Treg细胞向肝脏大量定植相关。
作者:李伟;宋云;叶艾竹;安宇;骆姝琳;刘水和;袁军 刊期: 2016年第09期
目的:探讨黑骨藤在急性痛风性关节炎中的治疗效果。方法:健康雄性SD大鼠60只,随机等分为空白对照组(NC组)、模型组(M组)、秋水仙碱组(C组)、黑骨藤高剂量组(HD组)、黑骨藤中剂量组(MD组)和黑骨藤低剂量组(LD组)。除空白对照组外,其余大鼠均采用尿酸钠制备大鼠痛风性关节炎模型,用秋水仙碱(阳性对照)和不同剂量的黑骨藤灌胃给药治疗。治疗3、5、7 d后观察各组大鼠关节肿胀情况。治疗7 d后处死大鼠,取踝关节组织进行病理学检查,应用ELISA检测各组大鼠外周血中IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α的表达。结果:黑骨藤干预组大鼠踝关节肿胀程度明显低于模型组,且治疗7 d后黑骨藤高剂量组疗效显著高于低剂量组(P<0.05);与模型组相比,黑骨藤治疗组均有较少的炎细胞浸润,且黑骨藤高剂量组趋于正常对照组;黑骨藤干预组炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8及TNF-α水平显著低于模型组,呈剂量依赖性。结论:黑骨藤在大鼠急性痛风性关节炎中具有很好的治疗效果,且呈剂量依赖性,其机制可能与黑骨藤降低急性痛风性关节炎大鼠血清炎症因子表达有关。
作者:党荣敏;刘元忠;谢洪书;姚文琴;余跃生 刊期: 2016年第09期
作为生命科学领域的前沿学科和一门重要的交叉学科,医学免疫学在所有医学类院校的基础医学课程体系中占据着重要位置,在基础医学与临床医学教学间起着桥梁作用。近年来科学技术的飞速发展,带动了医学免疫学学科本身的迅猛发展,加之我国目前的医学教育模式正在积极推进改革,医学免疫学作为基础医学教育中的支柱学科,如何使之顺应医学教学改革的新方向,如何使医学生摆脱免疫学单一学科的晦涩难懂及学科本身抽象枯燥的难题,使学生在掌握医学免疫学理论的基础上,全面系统了解疾病发生发展过程中的免疫调控规律,同时提高授课内容的丰富性及趣味性,是目前免疫学教学改革的重点。
作者:郭张燕;陈丽华;温伟红;杨琨;刘侃;杨安钢 刊期: 2016年第09期
目的:构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3(SEC3)过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法:聚合酶链反应(PCR)扩增SEC3基因片段;用AgeI 酶切线性化GV365慢病毒载体,通过连接反应构建GV365-SEC3载体,运用PCR方法鉴定阳性克隆载体;转染293T 细胞包装慢病毒,观察细胞荧光及Western blot 检测慢病毒载体表达,HIV-1 p24 ELISA 法测定慢病毒载体滴度。结果:获得目的基因,并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体,通过PCR 及DNA 测序鉴定,证明GV365-SEC3质粒构建正确;转染293T 细胞后可观察到大量荧光细胞,经蛋白电泳得到29 kD 大小的蛋白条带,与目的基因蛋白相符合,ELISA 检测病毒载体滴度为5×108 TU/ml。结论:成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体,为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。
作者:谢益欣;王敏;李先平;杨敏;李碰玲;张婷婷;宋欢;董智慧;唐爱国 刊期: 2016年第09期
目的:分析Δ42PD1胞外区的免疫原性。方法:将Δ42PD1胞外区编码基因分为6个片段,分别用PCR的方法进行扩增,并克隆至酵母表面展示质粒pCTCON2。分别将重组酵母表达质粒转化酵母细胞,涂布SDCAA平板,挑取单细胞克隆于SGCAA培养基中诱导目的基因的表达。通过肌肉注射Δ42PD1真核表达质粒加局部电穿孔的方法免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗人Δ42PD1免疫血清。用流式细胞术的方法分析免疫血清与酵母表面展示的Δ42PD1多肽片段的结合。结果:PCR扩增的Δ42PD1的6个片段的编码序列全长均110 bp,核酸序列分析显示克隆的目的基因与GenBank中已经登记的PD1基因序列100%同源;流式细胞术的结果发现酵母表面展示的Δ42PD1的F3和F2片段可与Δ42PD1的免疫血清发生明显结合。结论:Δ42PD1的F3和F2片段是该分子的免疫优势区域,为制备Δ42PD1的单克隆抗体及表位筛选奠定了基础。
作者:程林;王子乔;徐六妹;唐娴;周泱;王辉 刊期: 2016年第09期