李伟；宋云；叶艾竹；安宇；骆姝琳；刘水和；袁军
目的：研究小鼠皮肤移植模型中趋化因子CCL20和CCL22联合调节性T细胞对移植皮肤存活时间的影响。方法：将皮肤移植小鼠分为四组，每组3只小鼠，分别为Treg组、Treg＋CCL20组、Treg＋CCL22组与对照组。其中Treg细胞经同种异体皮肤抗原诱导。以C57BL／6小鼠为同种异体供体，BALB／c小鼠为受体行皮肤移植手术。进行皮肤移植后立即于异体皮下注射Treg细胞2×105个细胞／鼠，体积为200μl。以后每日于异体皮下注射趋化因子CCL20或CCL22，共连续注射10 d，观察并记录皮肤的存活情况。 Treg细胞定植实验：首先利用磁珠分选方法分离皮肤抗原诱导Treg细胞，并利用锝99标记分离到的Treg细胞；皮下注射3 h后，处死小鼠，用GC-2016γ放射免疫计数器检测各脏器及移植皮肤的放射性活度。结果：①经Treg进行干预的小鼠，其异体皮肤存活时间均显著长于手术对照组（ P＜0.05），而且同种异体抗原诱导Treg在趋化因子CCL20或CCL22存在下异体皮肤存活时间显著高于单纯使用Treg组和对照组（ P＜0.001）。②注射皮肤抗原诱导的Treg细胞后，自体和异体皮肤移植组Treg细胞主要分布在自体和异体皮肤，分别占注射Treg组细胞的60％和98％；加趋化因子CCL20组和CCL22组的Treg主要分布在肝脏。结论：趋化因子CCL20和CCL22能够协同促进经皮肤抗原诱导的Treg细胞延长异体皮肤的存活时间，这种作用效果可能与趋化因子CCL20和CCL22趋化Treg细胞向肝脏大量定植相关。
作者：李伟；宋云；叶艾竹；安宇；骆姝琳；刘水和；袁军 刊期： 2016年第09期
成功的妊娠依赖于母体对胎儿的免疫耐受。近年来研究证实：Tim-3／Gal-9信号通路通过抑制Th1细胞的活性、Th17细胞的分化和功能以及促进Th2细胞的功能，调节T细胞亚群平衡和诱导外周免疫耐受。 Tim-3／Gal-9信号通路在母胎界面和妊娠中的功能已经在人和动物模型中有较多报道。本文将从Tim-3／Gal-9信号通路调节T细胞平衡这一生物学功能着手，阐明其在母胎免疫耐受的诱导和维持以及妊娠相关疾病中的作用和机制，并探索潜在的治疗价值。
作者：何泽现；赵富玺 刊期： 2016年第09期
目的：构建介导小鼠B7-1基因RNAi的慢病毒载体，研究其对L929细胞表面B7-1分子表达的沉默效应。方法：从小鼠B7-1基因编码区选择3段RNA干扰靶序列，制备转录双发夹RNA的前体DNA，并克隆至慢病毒穿梭质粒，构建B7-1的RNAi慢病毒穿梭载体，测序鉴定。将重组质粒及辅助质粒共转染293T细胞产生慢病毒，经超速离心获得浓缩慢病毒颗粒。通过测定293T细胞GFP表达水平确定病毒滴度，流式细胞术检测感染效率以及对细胞表面B7-1的干扰效率。病毒感染细胞经嘌呤霉素筛选及克隆培养获得小鼠B7-1基因RNAi慢病毒稳定感染的L929细胞，流式细胞术分析细胞中GFP及B7-1分子表达的状况；将感染细胞与分离的小鼠脾脏T细胞混合培养，分析B7-1稳定沉默细胞刺激T细胞增殖的能力。结果：成功了构建小鼠B7-1基因RNA干扰的重组慢病毒载体；获得了滴度达（3～5）×108 TU／ml的浓缩重组慢病毒，重组慢病毒可有效感染L929细胞介导GFP表达以及沉默其表面的B7-1。经筛选获得慢病毒稳定感染的L929细胞，该细胞表面B7-1分子表达受到抑制，刺激T细胞增殖的能力显著下降（P＜0.05）。结论：构建了能够高效感染及沉默小鼠B7-1分子的RNAi慢病毒载体，该载体可稳定沉默L929细胞表面B7-1分子表达，抑制B7-1／CD28信号诱导的T细胞增殖效应。
作者：孔永；沈立军；王婧；朱莹；蔡磊；邱玉华；黄莉 刊期： 2016年第09期
目的：探讨HLA-DQB1等位基因多态性及相应位点下Th1／Th2细胞相关因子IL-2、IL-4及IL-10对广西瑶族原发性肝癌家族聚集性的影响，为寻找广西瑶族原发性肝癌的遗传易感基因或拮抗基因提供线索。方法：在广西肝癌高发区选取民族为瑶族的肝癌高发家族成员、无癌家族成员各40例作为研究对象（采用相同性别、年龄±5岁配对方法），采集研究对象外周血并提取全血DNA，应用PCR-SSP的方法对HLA-DQB1等位基因进行检测，应用ELISA法检测IL-2、IL-4、IL-10的水平。结果：（1）广西瑶族肝癌高发家族组的HLA-DQB1*02／09等位基因表达频率高于无癌家族组，两组比较差异明显，具有统计学意义（P＜0.05）；而两组间的HLA-DQB1*04／05／06／07／08等位基因表达频率无显著性差异（P＞0.05）。（2）HLA-DQB1各等位基因在乙型肝炎病毒感染组（ HBsAg阳性组）及非乙型肝炎病毒感染组（ HBsAg阴性组）间的分布频率比较无显著性差异（P值均＞0.05）。（3）广西瑶族肝癌高发家族成员组中Th2细胞相关因子IL-4、IL-10平均表达水平高于无癌家族成员组，差异具有统计学意义（P＜0.05），而两组间的IL-2浓度无显著性差异（P＞0.05）。（4）两组中HLA-DQB1*02阳性成员的IL-10平均表达水平高于HLA-DQB1*02阴性成员，差异具有统计学意义（P＜0.05）。（5）两组中HLA-DQB1*09阳性成员的IL-4平均表达水平高于HLA-DQB1*09阴性成员，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：（1）HLA-DQB1*02／09等位基因可能是广西瑶族居民原发性肝癌发生的易感基因。（2） HLA-DQB1各等位基因与广西瑶族居民的HBV感染可能无显著相关性。（3）IL-4、IL-10表达水平失衡可能是广西瑶族肝癌家族聚集性的危险因素。（4）IL-10表达水平失衡可能与HLA-DQB1*02等位基因的携带有关，而IL-4表达水平失衡可能与HLA-DQB1*09等位基因的携带有关，它们之间共同作用可能与广西瑶族肝癌家族聚集性的发生有相关性。
作者：卢庭婷；梁惠萍；李致忠；黄兰；吴继周；陈婉玲 刊期： 2016年第09期
CRISPR （ Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）首次在K12大肠杆菌的碱性磷酸酶基因位点附近发现，后统一称为规律成簇间隔短回文重复序列，是在大多数细菌、古细菌中广泛存在的一类独特的 DNA 规律性重复序列［1］。 Cas （ CRISPR-associated）基因是位于CRISPR区域临近处的蛋白质编码基因，而且相对保守。 Cas基因可与CRISPR转录出的RNA结合并形成核糖核蛋白复合物，在原核生物中发挥获得性免疫功能，使宿主获得抵抗噬菌体、质粒等外来DNA入侵的免疫能力。 CRISPR／Cas技术是由RNA指导Cas核酸酶对靶向DNA进行特定修饰，能够共定位RNA、DNA和蛋白，因而拥有巨大的改造潜力。此外，也在研究人类疾病致病机理和治疗手段中起到了关键作用。近，有研究对21种癌症类型开展大规模分析，并将与癌症有关的已知基因目录扩增了25％［2］，还有许多重要的癌基因有待进一步发现。而癌症小鼠模型可对癌基因组进行深入研究，因此，CRISPR／Cas9以其高效、准确的对特定基因进行敲除或修饰，已成为目前具有临床与应用前景的基因编辑技术之一。
作者：刘玉颖；杨文涛；杨桂连；王春凤 刊期： 2016年第09期
作者： 刊期： 2016年第09期
目的：探讨γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞在慢性HCV感染中的作用。方法：采用流式细胞术检测人外周血γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例变化。结果：慢性HCV感染病人外周血中γδT细胞及其亚群Vδ1和Vδ2 T细胞比例与健康对照者相比无显著差异。相关性分析显示HCV感染患者Vδ2 T细胞数目与肝脏损伤成正相关而与病毒滴度不相关。慢性HCV感染病人Vδ2 T细胞处于活化状态，CD107a表达高于对照组。结论：Vδ2 T细胞亚群参与慢性HCV感染所致肝损伤。
作者：殷文伟；张琼方；邵建营；童师雯 刊期： 2016年第09期
目的：探索鼠伤寒沙门菌cya（ adenylate cyclase，cya）基因的功能及其缺失株减毒的初步机制。方法：对鼠伤寒沙门菌SL1344株cya基因缺失株的耐酸碱能力、耐盐性、运动性、生物被膜成分、对上皮细胞黏附、侵袭以及细胞毒性等生物学特性进行检测。结果：cya缺失株的耐酸碱性、耐盐性以及运动能力较亲本菌株有明显降低；生物被膜成分测定结果显示cya缺失株不表达纤维素和菌毛；同时与亲本菌株相比cya缺失株对上皮细胞的黏附和侵袭能力发生了显著的降低，且对细胞毒性的影响弱于亲本菌株。结论：上述结果表明cya基因功能与细菌的运动能力、细胞膜的渗透能力、生物被膜的形成及毒力密切相关，从而为鼠伤寒沙门菌cya基因功能及其缺失株减毒机制的进一步研究提供了理论参考，这也必将有助于研发以减毒鼠伤寒沙门菌为载体的口服疫苗。
作者：刘莎莎；贾艳艳；张春杰；陈松彪；廖成水；杨亚东；王二鑫；程相朝 刊期： 2016年第09期
目的：运用生物信息学相关软件，预测欧洲女贞花粉主要过敏原Ligv1的理化性质和结构，为Ligv1重组表达系统的选择和过敏原性改造提供参考。方法：查询文献获得Ligv1的氨基酸序列，运用生物信息学软件分析其理化性质（ProtParam）、信号肽（SignalP 4.1 Server）、跨膜区（TMHMM Server v.2.0）、二级结构（GOR4）、MHCⅡ类抗原表位（NetMHCⅡ2.2 Server）、B 细胞抗原表位（ProteanTM 5.01）以及系统发生树（MEGA 6）。结果：Ligv1在大肠杆菌中稳定性较好，不存在信号肽与跨膜区；二级结构中无规则卷曲占大多数；Ligv1潜在MHCⅡ类抗原表位为30～44区域；B 细胞抗原表位既具有连续的氨基酸序列，也具有不连续的氨基酸序列；Ligv1与欧洲白蜡以及木犀榄的同源蛋白进化距离近。结论：大肠杆菌是适合重组Ligv1的表达系统，Ligv1抗原表位分析为低过敏原性改造提供参考。
作者：曹淑芬；李文；何颖；邹泽红；李林梅；艾云灿 刊期： 2016年第09期
JAK／STAT （ Janus kinase／Signal transducer and activator of transcription）信号通路目前已成为研究细胞膜到细胞核信号传递中的经典信号途径，同时也解释了大量细胞因子和激素是如何发挥其相关功能的。解析JAK／STAT信号通路同样有助于细胞间通讯和细胞外基因表达控制的研究。目前针对JAK／STAT信号通路的特异性临床治疗已取得一定成就。在本综述中，简要探讨了JAK／STAT信号转导在细胞、分子以及基因水平上的现有理论和观点，尤其强调了JAK／STAT信号转导在人类疾病方面的研究进展，同时总结在该领域研究过程中获得的经验和教训，进而展望了JAK／STAT信号通路未来的研究方向以及面临的困难和挑战。
作者：潘志鹏；伦永志 刊期： 2016年第09期
目的：分析ITP患者和健康对照组Treg细胞中miRNA的表达谱的差异，探讨ITP的发病机制。方法：抽取ITP患者组和健康对照组外周静脉血，应用流式细胞仪分选Treg细胞，提取每组患者Treg细胞中的RNA，采用Solexa深度测序法对其miRNA表达谱进行分析。对比ITP组和正常对照组芯片结果，找出差异表达的miRNA，并对其进行富集性分析，找寻异常信号通路。结果：我们筛查到ITP患者组Treg细胞中存在多个miRNA表达异常，其中有显著差异者为miR-1976， miR-548ae-5p、miR-5096-p3、miR-548am-5p、PC-3p-63471、PC-3p-96627。通过富集性分析发现ErbB和TGF-β两个异常信号通路。结论：ITP患者外周血Treg细胞内miRNA表达谱存在差异表达，这些差异表达的miRNA可能影响了Treg细胞发挥正常的免疫调节功能，是ITP发生的机制之一。
作者：曾艳；韩红；陈慧 刊期： 2016年第09期
目的：探讨核因子-κB（ Nuclear factor kappa B，NF-κB）介导的促凋亡蛋白Bak（ Bcl-2 associated K protein gene， Bak）及TNF-α的表达在溃疡性结肠炎（ Ulcerative colitis，UC）发病中的作用机制。方法：选购80只清洁级SD大鼠，分为模型组和对照组。 UC大鼠模型制造采用“三硝基苯磺酸＋乙醇”方法，模型制造成功后观察、评估结肠黏膜的大体形态及组织学变化。用免疫组织化学及RT-PCR法检测模型组与对照组中的NF-κB、Bak、TNF-α的表达水平，并分析相互之间关系。结果：UC大鼠模型制造成功率为97％。模型组固有层和黏膜层内炎性细胞浸润较对照组明显增多（ P＜0.01）；NF-κB、TNF-α蛋白及mRNA表达水平模型组较对照组明显升高（P＜0.01）；Bak蛋白在模型组的炎细胞中表达明显低于对照组（P＜0.01），而在结肠黏膜上皮细胞中的水平与对照组无明显差异（ P＞0.05）。 NF-κB、TNF-α蛋白阳性细胞百分数及mRNA水平随模型组的组织学等级升高而增强，而Bak蛋白阳性细胞百分数是减弱的（ P＜0.05）；且模型组中NF-κB与Bak蛋白的表达水平呈负相关（ r＝－0.793，P＜0.01），NF-κB与TNF-α蛋白表达成正相关（r＝0.892，P＜0.01）。结论：NF-κB介导的促凋亡蛋白Bak的表达参与了UC的发生、发展。
作者：陈晓；王启之；郦忆文；马文静；于东红 刊期： 2016年第09期
目的：研究伊马替尼（IM）诱导正常人原代CD3＋ T 细胞凋亡的分子机制。方法：0～100 nmol／L 的IM 作用原代T 细胞24 h 后，应用流式细胞术检测细胞凋亡情况；应用实时荧光定量PCR 技术检测Caspase-3、Caspase-8、A20和NF-κB基因表达变化；应用Western blot 技术检测A20和NF-κB 蛋白表达变化。结果：IM 具有明显促T 细胞凋亡能力，其凋亡分子Caspase-3和A20基因表达水平均上调，而NF-κB 的基因和蛋白水平均下调。结论：IM 通过上调A20的表达诱导了T 细胞的凋亡。
作者：陈小华；邱华云；施珊珊；吴莎；林晨；李扬秋 刊期： 2016年第09期
自身免疫性疾病是机体对自身抗原发生免疫反应产生特异性抗体或致敏淋巴细胞并导致自身组织器官损害的一类疾病，其病因和发病机制尚不清楚且目前尚无根治性药物。国内外学者一直致力于探究自身免疫性疾病的发病机理并积极寻求新的治疗靶点。肥大细胞（ Mast cells，MCs）曾被视为人体的“哨兵”，在人体对外界的防御和过敏反应中发挥着重要作用。近年的研究发现， MCs与自身免疫性疾病的发生发展密切相关［1］。研究表明活化的MCs可通过其释放的生物活性物质直接或间接地参与自身免疫性疾病的病理过程，并有望成为自身免疫性疾病的治疗新靶点［2-4］。
作者：柳丽；周晓鹰 刊期： 2016年第09期
目的：探讨戴氏绿僵菌多糖对糖尿病模型小鼠血糖和免疫功能的影响。方法：采用连续多次小剂量腹腔注射链脲佐菌素（ STZ）建立Ⅰ型糖尿病模型，观察模型小鼠体重变化，检测空腹血清葡萄糖，免疫器官（脾脏、胸腺）指数，腹腔巨噬细胞吞噬能力，脾淋巴细胞增殖及血清中免疫球蛋白IgG、补体C3、C4的含量等。结果：戴氏绿僵菌多糖能够改善模型小鼠体重；降低模型小鼠血糖含量，中、高剂量的多糖均能显著提高模型小鼠T、B淋巴细胞的增殖能力（ P＜0.01）；高剂量能显著提高模型小鼠脾脏指数和血清中IgG、C3、C4的含量（P＜0.01）；中、高剂量能显著提高模型小鼠胸腺指数及腹腔巨噬细胞吞噬能力（ P＜0.01）。结论：戴氏绿僵菌多糖可增强STZ诱导的Ⅰ型糖尿病模型小鼠的免疫功能和降低Ⅰ型糖尿病模型小鼠血糖含量。
作者：肖代敏；吕纯莉；肖建辉；曹喻；张志敏；刘民 刊期： 2016年第09期
目的：研究高效抗逆转录病毒治疗（ Highly active antiretroviral therapy，HAART）后NKT样细胞衰老和体外增殖情况。方法：选取未接受HAART治疗、接受HAART治疗的HIV感染者以及健康人的外周血细胞，利用流式细胞仪检测接受HAARRT治疗前后的HIV感染者NKT样细胞CD57的表达情况以及体外增殖能力。结果：HIV感染者在HAART治疗前NKT样细胞的百分数显著低于健康对照组（P＜0.01），HAART治疗后恢复（P＜0.05）；HAART治疗前NKT样细胞CD57的表达明显高于健康对照组（P＜0.01），HAART治疗后恢复（P＜0.05）；HAART治疗前NKT样细胞体外增殖能力明显低于健康对照组，HAART治疗后有所恢复。结论：经过HAART治疗后，HIV感染者NKT样细胞的数量、CD57表达以及体外增殖能力有所恢复。
作者：赵雪；刘婷婷；张子宁；傅雅静；姜拥军 刊期： 2016年第09期
目的：为了探索白细胞介素-13（Interleukin-13，IL-13）在乳腺癌发展中的作用机制，我们研究了IL-13对与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞表达SDF-1（Stromal cell derived factor 1）和EGF（Epidermal growth factor）的影响。方法：采用体外和荷瘤裸鼠体内人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株CCC-ESF-1（ESF）共培养的方法，用定量PCR（RT-qPCR）方法、流式细胞术和Western blot 方法检测在IL-13作用下体外共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达，细胞增殖实验Cellcounting kit-8（CCK-8）观察IL-13对体外共培养的乳腺癌细胞增殖的影响；免疫荧光激光共聚焦显微镜观察在IL-13作用下荷瘤裸鼠体内与乳腺癌细胞共生长的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达，检测IL-13对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果：IL-13上调体外与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达，并促进共培养的乳腺癌细胞的增殖；IL-13上调荷瘤裸鼠乳腺癌组织成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达，并促进荷瘤裸鼠肿瘤生长。结论：IL-13上调与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞SDF-1和EGF 的表达，IL-13对乳腺癌促进作用的分子机制涉及乳腺癌基质成纤维细胞的SDF-1和EGF。
作者：石小玉；陈少芬；古华平；卢慧；李文林 刊期： 2016年第09期
膜性肾病是成人肾病综合征的主要病理表现之一，特征性的病理学改变是肾小球毛细血管袢上皮侧出现大量免疫复合物沉积。典型临床表现为大量蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症和水肿等。膜性肾病按照病因可分为特发性膜性肾病（ Idiopathic membranous nephropathy， IMN ）和继发性膜性肾病（ Secondary membranous nephropathy，SMN）。 IMN的发病机制尚不明确，目前认为与环境因素、遗传因素及机体自身免疫系统密切相关；SMN常继发于其他疾病如恶性肿瘤、细菌性或病毒性感染、系统性自身免疫性疾病和药物毒性等。 IMN的自然病程表现不一，约有1／3的患者不经任何治疗，可以自发缓解，而其余的患者则可发展至终末期肾脏病，或是持续大量的蛋白尿。
作者：程桂雪；刘建华；秦晓松 刊期： 2016年第09期
目的：构建金黄色葡萄球菌肠毒素C3（SEC3）过表达慢病毒载体并体外检测其表达目的基因。方法：聚合酶链反应（PCR）扩增SEC3基因片段；用AgeI 酶切线性化GV365慢病毒载体，通过连接反应构建GV365-SEC3载体，运用PCR方法鉴定阳性克隆载体；转染293T 细胞包装慢病毒，观察细胞荧光及Western blot 检测慢病毒载体表达，HIV-1 p24 ELISA 法测定慢病毒载体滴度。结果：获得目的基因，并成功构建GV365-SEC3慢病毒载体，通过PCR 及DNA 测序鉴定，证明GV365-SEC3质粒构建正确；转染293T 细胞后可观察到大量荧光细胞，经蛋白电泳得到29 kD 大小的蛋白条带，与目的基因蛋白相符合，ELISA 检测病毒载体滴度为5×108 TU／ml。结论：成功构建GV365-SEC3过表达慢病毒载体，为后期研究其体内外对抗肿瘤的作用与机制奠定基础。
作者：谢益欣；王敏；李先平；杨敏；李碰玲；张婷婷；宋欢；董智慧；唐爱国 刊期： 2016年第09期
目的：观察锯叶棕提取物对大鼠体内胶质瘤的作用及其对免疫系统的影响。方法：制作SD大鼠皮下胶质瘤模型，加空白对照组共为4组，即空白对照组（n＝10）、荷瘤组（n＝10）、低剂量SR治疗组（n＝10）、高剂量SR治疗组（n＝10）。大鼠造模后饲养1周开始给予锯叶棕提取物及安慰剂，低剂量组50 mg／kg、隔日灌胃一次，高剂量组300 mg／kg、隔日灌胃1次，其他组给予相同剂量的蒸馏水灌胃。喂养大鼠4周后，处死大鼠后测瘤重、计算抑瘤率，TUNEL染色法检测肿瘤细胞凋亡，巨噬细胞吞噬鸡红细胞活性检测方法检测脾巨噬细胞活性，流式细胞仪检测CD4阳性淋巴细胞。结果：①用药组与荷瘤组比较，瘤重明显减少（ F＝62.678，P＝0.000）；高剂量组与低剂量组比较，抑瘤率明显提高。②荷瘤组肿瘤细胞凋亡明显偏少，用药组肿瘤细胞凋亡明显增加，且SR高剂量组细胞凋亡多（F＝1.287，P＝0.000）。③荷瘤组与空白组比较，脾巨噬细胞活性明显下降，用药后脾巨噬细胞活性提高，与剂量呈正相关（F＝141.205，P＝0.000；F＝126.903，P＝0.000）。④荷瘤组与空白组比较，CD4阳性淋巴细胞百分率减少，用药后CD4阳性淋巴细胞百分率增加，与剂量呈正相关（F＝207.294，P＝0.000）。结论：锯叶棕提取物能调节机体免疫功能，从而杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡，药物浓度越大、其作用越明显。
作者：沈京莲；张红岩；车玉琴；朱杰；彭沈君 刊期： 2016年第09期
中国免疫学杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国免疫学会,吉林省医学期刊社
