学术投稿

甲型流感病毒M2e与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

牟旭鹏;韦安慧;申茉函;孔宁;颜炜群

关键词:甲型流感病毒, M2e, 血清白蛋白, 毕赤酵母
摘要:目的 将甲型流感病毒M2蛋白胞外区(M2e)基因与人血清白蛋白(HSA)基因融合,以构建高效分泌表达的毕赤酵母菌株.方法 通过RT-PCR扩增HSA基因,构建pPICZα-HSA质粒,将人工合成的M2e序列与pPICZα-HSA质粒分别经BstBI 和KpnI 酶切消化后连接,构建真核表达载体pPICZα-HSA/M2e,线性化后电转化毕赤酵母X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性阳性的克隆,SDS-PAGE和Western印迹法筛选高表达HSA/M2e菌株.结果 经RT-PCR法克隆的HSA基因序列与GenBank登录的cDNA序列一致,构建的pPICZα-HSA/M2e真核表达载体,经电转化获得Zeocin抗性阳性的克隆.SDS-PAGE和Western印迹分析证实了甲醇诱导的培养基上清中含有HSA/M2e,分子量约为68 kD.结论 成功构建了分泌表达重组HSA/M2e融合蛋白的毕赤酵母菌株,为进一步研究其生物学活性奠定了基础.
中国老年学杂志相关文献
  • 卒中预警评估系统的临床应用

    据报道血浆溶血磷脂酸(LPA)及与LPA极性相似的磷脂(AP)检测对卒中发生有重要的预警作用~([1,2]).我科2004年从北京医科大学引进LPA和AP检测以及卒中预警评估软件,预测可能发生缺血性脑血管病的危险程度,并给予干预,从而起到早预防、早治疗、降低发病率的作用.

    作者:金锋;袁淑霞 刊期: 2010年第05期

  • 非小细胞肺癌中磷酸化蛋白激酶B及血管内皮生长因子蛋白的表达

    目的 观察磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)、血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,并通过研究癌组织中P-AKT与血管生成的关系,初步探讨P-AKT在肺癌发生发展及转移中的机制,为肺癌的早期诊断提供可供参考的新方法.方法 用免疫组化S-P法对61例NSCLC及20例肺良性瘤样病变周围正常组织中P-AKT、VEGF的表达进行检测,观察肺癌及正常组织中P-AKT、VEGF的表达及与临床病理各因素相互关系,分析NSCLC中P-AKT、VEGF之间的相关性.结果 NSCLC中P-AKT蛋白阳性表达44.3%(27/61),明显高于正常组织0%(0/20)(χ~2=13.28,P<0.05),其蛋白表达与肿瘤分化程度明显相关.VEGF在NSCLC及正常组织中的阳性表达率分别为61.6%(37/61)和25%(5/20),二者差异显著(χ~2=5.70,P<0.05),VEGF的表达与TNM分期、组织类型、淋巴结转移明显相关.P-AKT与VEGF的表达明显相关.结论 NSCLC中P-AKT的表达明显增高,其过表达与VEGF相关,P-AKT对肺癌血管生成的调节可能与上调VEGF有关.

    作者:李侠;王玲;高锡刚;高娟;李淑岷 刊期: 2010年第05期

  • 老年不典型胸痛患者平板负荷试验的临床诊断价值

    胸痛是老年患者一种常见症状,其中一部分表现为不典型的胸痛,临床上往往对其病因难以确定.为探讨其与冠心病的关系,本文对96例老年胸痛患者行活动平板负荷试验及选择性冠状动脉造影检查,并进行临床回顾性分析.

    作者:梁渝萍;李杜生 刊期: 2010年第05期

  • 老年颅内动脉瘤的外科治疗体会

    随着显微外科手术的广泛应用,动脉瘤颈夹闭仍然是治疗颅内动脉瘤的有效方法.本文回顾性分析我科2007年7月至2009年7月应用显微手术治疗老年颅内动脉瘤26例治疗体会.

    作者:马金良;朱晓波 刊期: 2010年第05期

  • 高龄老年急性心肌梗死患者尿激酶减量溶栓临床评价

    目的 观察高龄(≥75岁)急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者尿激酶减量溶栓治疗的疗效和安全性.方法 在82名高龄急性STEMI患者中随机选取39例作为尿激酶减量溶栓组,给予标准剂量75%的尿激酶溶栓治疗,其余43例作为高龄对照组仅给予保守治疗.同时选取低龄(<75岁)急性STEMI患者45例,作为低龄溶栓组,给予标准剂量尿激酶溶栓,临床特征(除年龄外)与高龄溶栓组无统计学差异.分别观察三组血管再通率,心源性死亡等心脏主要不良事件发生率及出血反应.结果 高龄溶栓组临床血管再通率(56.4%)高于高龄对照组(14%),心源性死亡有下降趋势,但无显著性差异,出血风险无显著增加,6个月内心脏主要不良事件显著性降低.上述指标与低龄溶栓组相比,均无显著性差异.结论 高龄急性STEMI患者尿激酶减量溶栓治疗安全、有效.

    作者:赵竹;尹承华;张丽;刘同宝 刊期: 2010年第05期

  • Survivin-siRNA真核重组质粒的构建和鉴定及其对前列腺癌DU145细胞的影响

    目的 应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响.方法 构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染 DU145细胞株,通过半定量 RT-PCR和Western印迹检测survivin mRNA转录水平和蛋白表达的变化.结果 成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒;两种重组质粒shRNA-sur1和-sur2均能明显抑制内源性survivin基因表达,其抑制率分别为72%±8%和77%±5%;两种质粒均能明显抑制survivin蛋白的表达,其抑制率分别为75%±8%和80%±6%.结论 重组质粒shRNA-sur1和-sur2均可明显抑制DU145细胞内源survivin 蛋白表达和mRNA转录,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础.

    作者:刘艳波;葛贺;卢丽莉;赵雪俭 刊期: 2010年第05期

  • 氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究

    目的 在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上,通过体内实验及相关形态学研究,分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用.方法 制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型,随机分为对照组和实验组,实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1 w后,每天灌胃给予10 mg/kg体重MMC,连续5 d,对照组给予相同体积的生理盐水.全部裸鼠于肿瘤接种后14 d处死.结果 大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组,病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低,并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡的形态学改变.透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变,实验组瘤体汞含量明显高于对照组.结论 MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用,其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的,相关分子机制有待进一步深入研究.

    作者:柳影;陈儇;毕晓颖;李志超;袁长吉 刊期: 2010年第05期

  • 肾小球滤过率估测值评判老年高血压及2型糖尿病并发终末期肾病患者血红蛋白浓度的变化

    目的 探讨用肾小球滤过率估测值(eGFR)评判的老年高血压及2型糖尿病并发终末期肾病 (ESRD)患者血红蛋白(Hb)浓度改变.方法 收集高血压及2型糖尿病并发慢性肾病且≥60岁患者230例,将eGFR<15 ml·min~(-1)·1.73 m~(-2)(7.80±3.14 ml·min~(-1)·1.73 m~(-2))者归为ESRD组,eGFR≥15 ml·min~(-1)·1.73 m~(-2)( 29.76±12.90 ml·min~(-1)·1.73 m~(-2))者归为非ESRD组,回顾性比较两组间Hb浓度.结果 较非ESRD组[Hb(100.8 ± 23.0)g/L],ESRD组Hb浓度[(74.4 ± 22.5)g/L]显著降低(P<0.05),且在ESRD与非ESRD组中eGFR均与Hb浓度显著正相关(P<0.05).结论 eGFR评判的老年高血压及2型糖尿病并发ESRD患者Hb浓度显著降低,且eGFR与Hb浓度具有显著正相关性.

    作者:巩玲俊;李刚;牟杨;朱炳豹 刊期: 2010年第05期

  • 老年人生活质量、孤独感与主观幸福感现状及相互关系

    目的 研究漳州市城乡老年人的生活质量、孤独感和主观幸福感的现状及其相互关系.方法 采用生活质量、孤独感、主观幸福感量表分别施测于城乡老年人.结果 漳州市城乡老年人的生活质量、孤独感和主观幸福感在性别、年龄上不存在显著差异;城乡比较发现,农村老年人主观幸福感、生活质量显著低于城市老年人,在孤独感方面显著高于城市老年人;老年人的主观幸福感与生活质量各因素存在显著正相关;孤独感与主观幸福感、生活质量各因素间存在显著负相关.结论 城乡差异对老年人生存质量、孤独感和主观幸福感有重要影响;老年人主观幸福感对老年人生活质量有正向预测作用,老年人孤独感对老年人生活质量有负向预测作用.

    作者:王希华;周华发 刊期: 2010年第05期

  • Ahmed青光眼阀植入术治疗老年难治性青光眼的疗效观察

    目的 探讨Ahmed青光眼阀植入术治疗老年难治性青光眼的疗效.方法 对本院收治的难治性老年青光眼患者30例31 只眼,行Ahmed 青光眼阀植入术,并对其手术前后的眼压、视力、术后并发症等进行分析.结果 Ahmed青光眼阀植入术后有效降低了青光眼患者的眼压(P<0.01),明显减少了新生血管性青光眼患者的虹膜新生血管;术中部分结扎引流管可减少术后低眼压、浅前房的发生率;术中使用异体巩膜可减少术后引流管暴露.结论 (1) Ahmed 青光眼阀植入术是一种操作简便、痛苦少、创伤小、有效可行的治疗难治性青光眼的方法.(2) Ahmed 青光眼阀植入术后并发症影响手术成功率,术后早期应密切随访,及时处理并发症.

    作者:王霁雪;郑雅娟;王静;张文松 刊期: 2010年第05期

  • MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及相关性分析

    目的 研究基质金属蛋白酶(MMP)-2、-9在胃癌组织中的表达及相关性.方法 采用免疫组化法观察60例胃癌及20例胃正常黏膜石蜡标本中MMP-2、-9蛋白的表达情况.结果 MMP-2在胃癌组织中的表达率为75%,MMP-9在胃癌组织中的表达率为68.3%,均显著高于周围正常组织(P<0.05).MMP-2和-9的表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及肿瘤临床分期相关(P<0.05).且MMP-2的表达与MMP-9的表达呈正相关(P<0.05).结论 MMP-2和-9在胃癌组织中显著高表达,与胃癌的浸润转移相关,其异常表达可能共同参与胃癌的发生、发展过程,检测MMP-2、-9可作为反映胃癌病理学特点的参考指标.

    作者:陈进;郭子健;王卫理 刊期: 2010年第05期

  • 天津蓟县农村老年人尿失禁患病情况及对生活质量的影响

    目的 了解农村老年人尿失禁(UI)患病情况及其对生活质量的影响,为制定防治策略提供科学依据.方法 采用整群抽样的方法抽取天津市蓟县所辖的两个乡(镇)卫生院≥60岁的743名老年人,按统一设计的调查问卷,以面对面询问的方式进行入户调查,分析农村老年人UI患病情况及对生活质量的影响.结果 天津蓟县农村老年人UI患病率33.38%,随年龄增长UI患病率呈升高趋势(χ_(for trend)~2=2.19,P=0.029),女性患病率高于男性(43.15% vs.22.75%,χ~2=34.70,P<0.000 1).UI患病持续年限的中位数为5年,患病<5年者多,占46.77%.167名老年女性患者中,155人(92.81%)初次出现症状是在绝经后.248名老年UI患者中,29.84%(74名)认为对从事家务劳动有影响,24.60%(61名)认为对参加户外活动有影响,45.16%(112名)需经常更换内裤,6.05%(15名)因UI故意减少饮水量,8.88%(22名)不愿去没有公共卫生间的场所.因UI而感到情绪低落、焦虑不安和难堪的患者分别占23.39%(58/248)、18.55%(46/248)和31.05%(77/248).结论 天津蓟县农村老年人UI患病率较高,对患者日常生活的各个方面及心理健康均有影响,应引起卫生行政部门及广大医务工作者的重视.

    作者:石婧;刘雪荣;夏丛旺;刘东富;乌正赉;于普林 刊期: 2010年第05期

  • 气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞bcl-2及bax相关凋亡因子的表达

    目的 观察气虚血瘀证大鼠血管平滑肌细胞的凋亡及bcl-2、bax相关凋亡因子的表达.方法 采用饥饿、疲劳、寒冷、惊吓等综合因素方法复制气虚血瘀证大鼠模型,观察大鼠胸主动脉血管内膜形态学,检测血管平滑肌细胞的凋亡指数及bcl-2、bax蛋白的表达.结果 气虚血瘀大鼠血管内膜明显增殖,血管平滑肌细胞bcl-2蛋白表达增高(96.15±0.02 vs 21.13±0.05);bax蛋白表达降低(1.05±0.12 vs 68.06±0.06);bcl-2/bax增高(2.92±0.67 vs 0.01±0.01)(P<0.05).结论 气虚血瘀证大鼠存在血管平滑肌细胞增殖和凋亡严重失调等病理生理基础.

    作者:荣晓凤;李荣亨;王维 刊期: 2010年第05期

  • 齐墩果酸对顺铂耐药胃癌SGC-7901细胞增殖及细胞凋亡的影响

    目的 探讨齐墩果酸(OA)对顺铂耐药胃癌 SGC-7901(SGC-7901/CDDP)细胞增殖及细胞凋亡的影响.方法 体外诱导建立人胃癌顺铂耐药细胞株 SGC-7901 /CDDP,MTT 比色法检测OA对 SGC-7901/CDDP 细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳检测基因组 DNA 的降解;蛋白质免疫印迹检测凋亡相关蛋白酶的激活.结果 MTT实验证明OA对SGC-7901/CDDP 细胞的生长有抑制作用,100 μmol/L OA作用72 h对SGC-7901/CDDP细胞的抑制率达62%,并表现为时间和剂量依赖性;琼脂糖凝胶电泳实验证明100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后基因组DNA被降解,可见较典型的DNA梯形带;蛋白质免疫印迹分析表明,100 μmol/L的OA处理SGC-7901/CDDP细胞48 h后,细胞内凋亡相关的蛋白酶caspase-3被激活.结论 OA在体外能够诱导SGC-7901/CDDP细胞凋亡,诱导凋亡的途径可能是线粒体途径.

    作者:李鸿梅;王敬春;齐占朋;周丽;兴桂华;刘吉成 刊期: 2010年第05期

  • 六味地黄丸治疗老年复发性口疮的疗效观察

    目的 探讨六味地黄丸对老年复发性口疮(ROU)的疗效.方法 采用六味地黄丸治疗老年ROU(阴虚火旺型),并对患者治疗前后T淋巴细胞亚群的变化及临床疗效进行观察,并与常规治疗组和健康者进行比较.结果 两组患者治疗前CD3、CD4、CD4/CD8比率均显著低于健康(P<0.01),CD8均明显高于健康组(P<0.01);两组间相比无明显差异(P>0.05).观察组治疗后CD3、CD4、CD4/CD8比率均明显高于治疗前(P<0.01),与健康组相比无明显差异(P>0.05),观察组治疗前后CD8无明显变化(P>0.05).对照组治疗前后CD3、CD4、CD8、CD4/CD8无明显差异(P>0.05).两组治疗后总有效率存在显著性差异(P<0.01).治疗后观察组患者主要症状和体征均有明显改善,与治疗前相比具有明显差异(P<0.01).治疗后对照组患者:平均溃疡与疼痛自评分均明显降低,与治疗前相比有明显差异(P<0.05);治疗后其各项躯体伴随症状均无明显改善,与治疗前相比无明显差异(P>0.05).结论 六味地黄丸具有纠正老年ROU(阴虚火旺型)患者T淋巴细胞亚群的平衡失调,调节自身免疫功能,增强机体抗病能力的作用.

    作者:孙林琳;刘建伟;徐伟 刊期: 2010年第05期

  • 青藤碱对肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡的影响

    目的 研究青藤碱(SIN )对肺癌A549细胞增殖的影响及其机制,为SIN预防和治疗肺癌提供实验依据.方法 SIN高(1.0 mmol/L)、中(0.5 mmol/L)、低(0.25 mmol/L)剂量组及空白对照组分别处理体外培养的人肺癌细胞系A549细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测处理24、48、72 h后A549细胞的增殖活性;采用流式细胞仪测定各剂量组SIN作用48 h后细胞周期;采用流式细胞术和TUNNEL方法检测细胞凋亡.结果 高、中、低剂量组SIN处理A549细胞48、72 h后,细胞增殖明显受到抑制,且呈时间、剂量依赖性.SIN处理组G_1期细胞比例明显增加,与空白对照组比较有统计学意义.SIN处理组细胞凋亡率也较对照组升高,呈剂量依赖性.TUNNEL法可见凋亡细胞的阳性反应.结论 SIN在体外能有效抑制肺癌细胞生长,其机制与其阻滞细胞周期于G_1期、诱导细胞凋亡有关.

    作者:姜廷枢;李胜岐 刊期: 2010年第05期

  • 老年公寓老人焦虑状态相关因素分析

    目的 了解重庆市区某老年公寓老年人的焦虑情况,探讨老年公寓老人出现焦虑状态的流行病学特点及相关因素.方法 采用随机抽样的方法,于2007年4月~6月对重庆市8个主城区各抽取1所老年公寓(≥65岁的老人)进行调查,调查工具为症状自评量表,汉密尔顿焦虑量表和一般项目调查表等.结果 (1)性别、职业性质和教育程度三方面,健康组和疾病组比较有统计学差异(P<0.05);(2)SCL-90量表中躯体化、焦虑、抑郁纬度,疾病组高于健康组,比较有统计学差异(P<0.01);HAMA量表中躯体性焦虑、精神性焦虑两因子,疾病组和健康组比较有统计学差异(P<0.001).(3)经Logistic回归分析,老年公寓中年龄大、文化程度低、丧偶、有躯体疾病和性格内向的老年人焦虑状态明显.结论 重庆市老人公寓老人焦虑状态明显;焦虑状态的发生与年龄、文化程度、婚姻状况、躯体疾病及性格有关.

    作者:张皑频;曾宪祥;杨德兰 刊期: 2010年第05期

  • 不同剂量东莨菪碱对老年有机磷中毒并发呼吸衰竭的临床研究

    老年重度急性有机磷中毒(AOPP)并发急性呼吸衰竭的传统治疗方法是在使用呼吸机基础上给予阿托品,但却增加老年患者阿托品中毒死亡危险.因此近几年我科在AOPP的抢救过程中应用中枢性抗胆碱药东莨菪碱,发现其具有安全范围大,用量小等优点,但应用在老年AOPP并发的呼吸衰竭优剂量未见报道.因此本文主要探讨在老年AOPP并发呼吸衰竭的抢救过程中不同剂量东莨菪碱的治疗效果.

    作者:郑福禄;刘宇鹏 刊期: 2010年第05期

  • 芪蛭益肺颗粒对COPD大鼠模型SP-A表达和超微结构的影响

    目的 探讨芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)表达及肺组织超微结构的影响.方法 运用气管内滴注脂多糖加烟熏28 d法建立COPD大鼠模型,免疫组化法检测SP-A表达及透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构变化.结果 与空白组比较,模型组大鼠SP-A表达明显减少,有显著差异(P<0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构不完整;与模型组比较,芪蛭益肺颗粒治疗组大鼠SP-A表达明显增强,差异显著(P<0.01),肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构完整.结论 芪蛭益肺颗粒可显著提高模型大鼠SP-A表达,改善细胞超微结构,对COPD的发生起到预防保护作用.

    作者:李金田;张莉;刘永琦;李娟;张毅;魏舒畅 刊期: 2010年第05期

  • 野生型PTEN基因对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖、凋亡和侵袭活性的影响

    目的 探讨外源性野生型PTEN基因对人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226增殖、凋亡、侵袭活性的影响以及PTEN/FAK信号传导通路在细胞侵袭活性中的作用.方法 将携带人野生型PTEN及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)体外转染至RPMI8226细胞.通过MTT法检测细胞生长曲线,Hoechst33342染色检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及FAK mRNA水平变化,Western印迹检测PTEN、FAK及p-FAK蛋白变化,Transwell小室检测RPMI8226细胞侵袭能力.结果 Ad-PTEN-GFP以感染复数为100转染RPMI8226细胞后,第4天达到大生长抑制率为42.01%,Ad-PTEN-GFP转染RPMI 8226细胞72 h后细胞凋亡率为(35.02±6.80)%,PTEN mRNA及蛋白表达升高,FAK mRNA以及FAK、p-FAK蛋白表达下调,与Ad-GFP组相比差异显著(P<0.01,P<0.05);Transwell小室结果显示,转染Ad-PTEN-GFP组漏入下室内及黏附于下室面细胞数量较Ad-GFP组显著减少(P<0.01).结论 转染野生型PTEN基因的RPMI8226细胞增殖受抑,凋亡增加,细胞侵袭力明显减弱,其作用可能与下调FAK、p-FAK表达有关.

    作者:王素云;成志勇;邓凯;陈浩;姚丽;杨静慈;尚银涛;潘崚 刊期: 2010年第05期

中国老年学杂志

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主管:中国老年学学会

主办:中国老年学学会 吉林省卫生厅