梁瑜祯；张木勋；夏宁；杨月莲；冯乐平
目的:对比研究水浴和微波加热条件下附子中乌头类生物碱的水解规律,检测与不同中药配伍煎煮后附子中乌头类生物碱的含量变化.方法:分别以水煎煮和微波加热的方法提取附子药材,采用高效液相色谱法(HPLC)分别对其中的3种双酯型生物碱及其水解产物进行含量测定;同时检测与不同中药配伍煎煮后,附子中乌头类生物碱减少程度的差异.结果:附子水煎煮30 min后,中乌头碱和次乌头碱的含量分别变为峰值的10.5%和41.9%,乌头碱完全检测不到;附子微波加热150 S后中乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量分别为峰值的59.2%、41.4%和86.6%.与生附子单煎煮比较,生附子与大黄、干姜或甘草共煎后,乌头类生物碱总含量均明显下降,分别降至附子单煎煮时的52.8%、66.2%和53.4 0A;与人参或白芍共煎煮后略有下降,分别为附子单煎煮时的79.5%和83.7%.结论:附子中乌头类生物碱在水煎煮和微波加热过程中有不同的水解规律;生附子与大黄、干姜、甘草、人参或白芍共煎后乌头类生物碱含量均有下降.
作者：随志刚；陈明玉；刘志强；皮子凤；刘忠英 刊期： 2009年第02期
目的:构建调控β-半乳糖苷酶(β-gal)基因表达的四环素基因表达调控载体,验证其在肝癌细胞内调控β-半乳糖苷酶基因的表达,为进一步利用该调控系统调控治疗基因治疗肝癌奠定实验基础.方法:根据2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因与pcDNA3.1载体的基因核苷酸序列,设计引物,以pcDNA3.1载体为模板进行PCR.将具有串联2个四环素调控子结合位点(Tet02)基因的PCR产物连接入pcDNA3.1载体CMV启动子下游,构建成pcDNA3.1-Tet02载体,应用ABI 3130测序仪利用pcDNA3.1-TetO2载体对TetO2PCR产物进行测序分析.再将p-gaI克隆入pcDNA3.1-TetO2载体,构建成受四环素调控表达的β-半乳糖苷酶基因的表达载体pcDNA3.1-TetO2-β-gal.利用脂质体将携带四环素调控子基因(TR)的pcDNA6/TR载体转染到肝癌细胞HepG2中,利用杀稻瘟菌素进行细胞转染的稳定筛选,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TR基因在HepG2细胞内的表达.将pcDNA3.1-TetO2-β-gal载体转染到稳定表达.pcDNA6/TR的HepG2细胞中,转染3～4 d后,给予强力霉素(4 mg·L-1),利用β半乳糖苷酶原位染色试剂盒染色,检测β-半乳糖苷酶基因的表达.结果:构建的pcDNA3.1-TetO2载体测序结果表明,串联2个四环素调控子结合位点(TetO2)基因片段插入到pcDNA3.1载体CMV启动子基因下游.pcDNA3.1-Tet02-β-gal载体酶切鉴定结果表明,β-gal成功地克隆入pcDNA3.1-TetO2载体.RT-PCR结果显示,TR基因在pcDNA6/TR转染的经杀稻瘟菌素筛选的HepG2细胞内得到稳定表达.给予强力霉素后,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内得以表达;而未给予强力霉素,β-半乳糖苷酶基因在稳定转染TR基因的HepG2细胞内表达受到抑制.结论:成功地构建了调控β-半乳糖苷酶基因表达的四环素基因表达调控载体,利用该载体成功地调控了β-半乳糖苷酶基因在HepG2细胞内的表达.
作者：王茜；杜珍武；卜丽莎；张桂珍 刊期： 2009年第02期
乳腺癌是少数对于激素治疗敏感的肿瘤之一,内分泌治疗效果明确;他莫西酚(TAM)是乳腺癌的一线内分泌治疗药物,然而其耐药问题始终困扰着临床医师.CCND1基因是近年来确定的癌基因,在多种肿瘤中具有异常表现,与乳腺癌的关系尤为密切,是近年来研究较为深入的癌基因之一.CCND1基因的表达与乳腺癌的发生、相关标记的表达(激素受体ER)、TAM治疗敏感性及预后具有相关性.本文作者综述CCND1基因与乳腺癌的关系及CCND1与乳腺癌TAM治疗敏感性的关系,明确乳腺癌的发生机制及雌激素在乳腺癌中的作用方式.CCND1基因可能成为乳腺癌基因治疗的新靶点,并在乳腺癌患者的内分泌治疗筛选中起到重要作用.
作者：邢琬莹；李强；孙光；续哲莉；张西臣 刊期： 2009年第02期
目的:研究CD4+CD25high Foxp3+调节性T细胞(Tregs)在恶性肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达,探讨其在肿瘤发病中的作用及临床意义.方法:采用流式细胞术检测61例不同分期恶性肿瘤患者PBMC中CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比,进一步分析CD4+CD25+及CD4+CD25highT细胞中表达Foxp3+T细胞的百分比,并与正常对照组(n=32)进行比较.结果:与正常对照组比较,Ⅰ及Ⅱ期恶性肿瘤患者PBMC中CD4+CD25+/CD4+及CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比均无明显变化(P>0.05),Ⅲ及Ⅳ期恶性肿瘤患者均明显增高(P<0.05),随肿瘤恶性程度增高,CD4+CD25+/CD4+及CD4+CD25high/CD4+T细胞的百分比也逐渐增高,恶性肿瘤患者CD4+CD25+及CD4+CD25highFoxp3+T细胞表达水平较正常对照组均增高,组间比较差异均有显著性(P<0.01).结论:恶性肿瘤患者外周血调节性T细胞增高可能是恶性肿瘤发病及免疫机制异常的主要原因之一,定期检测外周血中上述指标的变化,有利于了解恶性肿瘤患者的病情变化及预后判断.
作者：王雪野；韩梅；高长斌；肖中平；陈琳；高鹏；孔令环 刊期： 2009年第02期
复发性阿弗他溃疡是口腔黏膜病中常见的一种溃疡病,具有反复发作的特点,中医认为该病属于脾中伏火上炎所致.本文作者采用中药为主,中西结合的方法治疗复发性阿弗他溃疡86例,取得了良好的疗效,现报道如下.
作者：王云峰 刊期： 2009年第02期
目的:研究卵巢浆液性囊腺癌组织中prostasin基因的表达,探讨prostasin基因在卵巢浆液性囊腺癌发生和发展中的意义.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测10例卵巢浆液性囊腺癌、10例卵巢浆液性囊腺瘤及10例正常卵巢组织中prostasin mRNA的表达量.应用免疫组织化学方法检测prostasin蛋白在60例卵巢浆液性囊腺癌、24例卵巢浆液性囊腺瘤及24例正常卵巢组织中的表达率.结果:prostasin mRNA在卵巢浆液性囊腺癌组织中表达量显著增高(0.415±0.177),与正常卵巢组(0.192±0.128)及卵巢浆液性囊腺瘤组(0.237±0.232)比较,差异均有显著性(P<0.05).prostasin蛋白主要在细胞质中表达,在卵巢浆液性囊腺癌组的阳性表达率(65.0%)明显高于正常卵巢组(12.5%)及卵巢浆液性囊腺瘤组(25.0%)(P<0.01),卵巢浆液性囊腺癌病理分级越高、临床分期越晚组织中prostasin蛋白表达率越高(P<0.05).结论:prostasin基因在卵巢癌发生和发展中起促进作用.
作者：张晓霞；费军伟；舒畅；倪劲松；王芯蕊；李荷莲 刊期： 2009年第02期
1临床资料患者,男性,82岁,患有2型糖尿病、脑梗塞、慢性喘息性支气管炎、肺纤维化等多种疾病.2008年4月1日因血糖不稳定来本院治疗.4月5日患者出现左手指麻木,向左上肢、头皮扩散,予静脉滴注血塞通治疗.
作者：刘波；张晓艳；张伟；李明阳 刊期： 2009年第02期
本文作者利用CT增强扫描技术,对孤立性肺结节(SPN)的增强特性进行分析和研究,并讨论此方法对SPN的诊断价值.1资料与方法1.1一般资料本组44例患者,男性26例,女性18例;年龄31～72岁,平均47.1岁其中肺癌25例(腺癌13例、鳞癌10例、转移瘤2例)、炎性结节13例(肺脓肿5例、炎性假瘤8例)、结核瘤6例;临床表现24例有咳嗽和痰中带血f;44例X线片均示肺部单发结节病灶.
作者：杨春明；张亚红 刊期： 2009年第02期
目的:探讨核因子.cB(NF-rB)在高浓度葡萄糖诱导胰岛细胞凋亡中的作用.方法:对分离纯化的小鼠胰腺胰岛细胞进行体外培养,按DMEM培养液里葡萄糖浓度不同,分为6组:G1组(5.6 mmol·L-1葡萄糖)、G2组(7.8 mmol·L-1)、G3组(11.1 mmol·L-1)、G4组(16.7 mmol·L-1)、G5组(22.2 mmol·L-1)及G6组(27.6 mmol·L-1).采用放射免疫法检测各组胰岛细胞胰岛素分泌水平;免疫组织化学染色法检测NF-kB活性;免疫荧光法检测细胞色素C释放和细胞核染色检测细胞凋亡.结果:当葡萄糖浓度5.6～11.1 mmol·L-1时,随着葡萄糖浓度升高,胰岛细胞胰岛素分泌逐渐增加(P<0.05),NF-kB的活性逐渐增加(P<0.05),但此时细胞凋亡未见显著的变化(P>0.05),细胞色素C释放的组间比较差异无显著性(P>0.05).当葡萄糖浓度≥16.7 mmol·L-1时,与葡萄糖浓度≤11.1mmol·L-1各组比较,NF-kB表达明显增加,细胞色素C的释放也逐渐增强(P<0.05),胰岛细胞凋亡百分率同时也呈明显增加趋势(P<0.05).结论:高浓度葡萄糖可以诱导胰岛细胞NF-kB表达增加,细胞色素C释放增强,同时诱导胰岛细胞凋亡,提示NF-kB的激活与胰岛细胞凋亡可能存在必然的联系,抑制NF-kB活性可能对于保护胰岛细胞有重要作用.
作者：梁瑜祯；张木勋；夏宁；杨月莲；冯乐平 刊期： 2009年第02期
目的:探讨人白细胞介素12(IL-12)两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接的新方法.为进一步研究IL-12基因的生物学功能以及应用提供实验基础.方法:采用两个牛弹性蛋白基序(10个氨基酸)的基因序列为两个亚基基因拼接的连接肽基因.根据人IL-12 p35、p40两个亚基基因片段以及连接肽基因核苷酸序列设计引物,其中p40基因下游引物包括部分连接肽基因序列以及Kpn Ⅰ酶切位点,p35基因上游引物包括部分连接肽基因序列以及Kpn Ⅰ酶切位点.通过聚合酶链反应(PCR)方法分别获得人IL-12 p35与p40基因片段.利用Kpn Ⅰ内切酶对p35与p40基因的PCR产物进行酶切,酶切产物回收后利用T4 DNA连接酶进行连接,应用p40基因上游引物与p35基因下游引物对连接产物进行PCR扩增.利用Kpn Ⅰ内切酶对连接产物进行酶切鉴定.将扩增的连接产物克隆入T载体,挑选阳性克隆并进行酶切鉴定,酶切鉴定正确的克隆进行拼接产物的核苷酸序列测序.结果:通过PCR分别获得约1 000 bp大小的p40基因片段与600 bp大小的p35基因片段,两个基因酶切片段连接后PCR扩增获得1 600 bp左右的拼接产物,采用Kpn Ⅰ内切酶对拼接产物进行酶切后获得约1 000和600 bp大小的基因片段,分别与p40和p35基因片段大小一致.拼接产物的T载体经酶切鉴定可见1 600 bp大小的酶切产物,拼接产物测序结果与GenBank核酸数据库上的p40基因、p35基因以及连接肽基因核苷酸序列完全一致.结论:利用该基因分子拼接技术成功地将人白介素12两个亚基基因通过连接肽基因进行拼接.建立了一种简单、方便、有效进行人白细胞介素12两个亚基基因拼接的新方法,为进一步研究IL-12的C生物学功能以及基因治疗提供实验基础.
作者：杜珍武；齐熙明；王茜；昊晓冬；杨绍娟；张桂珍 刊期： 2009年第02期
目的:探讨免疫球蛋白IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌中的表达及表达强度与卵巢上皮性癌病理分级的相关性.方法:应用免疫组织化学法检测卵巢上皮性癌组织芯片(含177例卵巢上皮性癌),50例卵巢良性肿瘤上皮组织中IgA、IgM、IgD、IgE的表达水平.结果:卵巢上皮性癌组织中IgA、IgM、IgD、IgE的表达水平均明显高于卵巢良性肿瘤上皮组织(P<0.001);卵巢上皮性癌病理分级与IgA、IgM、IgD和IgE的表达强度均呈正相关(r=0.422,P<0.001,r=0.460,P<0.001;r=0.458,P<0.001;r=0.593,P<0.001)即病理分级越高,IgA、IgM、IgD和IgE表达越强.结论:IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌组织中高表达;IgA、IgM、IgD、IgE在卵巢上皮性癌组织中的异常表达提示与肿瘤的发生、发展密切相关.
作者：张多加；崔满华 刊期： 2009年第02期
目的:研究重组人骨形成蛋白2(rhBMPz)对人牙髓干细胞分化及Delta蛋白表达的影响,为人牙髓干细胞的研究提供理论依据.方法:酶消化法获得人牙髓干细胞,光镜下进行形态学观察,免疫荧光法检测细胞表面标志的表达;取第5代牙髓干细胞,分为实验组(加含50肛g·L-1rhBMPz的培养液)及阴性对照组(只加入培养液),检测碱性磷酸酶活性和Delta蛋白表达的变化.结果:人牙髓干细胞呈集落状生长,免疫组织化学检测显示nestin、vimentin染色呈阳性,免疫荧光法检测STRO-1呈阳性.与阴性对照组比较,实验组第7、14及2l天碱性磷酸酶活性均明显升高(P<0.01),第21天Western blotting法检测Delta蛋白表达明显升高(PGO.05).结论:培养的牙髓干细胞具有干细胞特性,并且rhBMPz可使其碱性磷酸酶活性增高并上调Delta蛋白表达,提示Delta蛋白可能参与牙髓干细胞向成牙本质样细胞分化的过程.
作者：于娜；何飞；谭颖徽 刊期： 2009年第02期
参脉注射液主要成分为人参皂苷及麦冬苷,是纯中药制剂,具有明显的扩张冠状动脉血管,增加心肌供血,增强心肌收缩力,改善微循环,调节血管功能.本文作者采用参脉注射液治疗老年心绞痛患者68例,取得满意效果,现报道如下.
作者：徐艳红 刊期： 2009年第02期
目的:评价成人上位、中位胸椎节段(T1～T8)椎弓根形态对螺钉植入安全性的影响.方法:采用大体直接测量方法,测量5具新鲜成人尸体胸椎(T1～T8)椎弓根的横径,比较其与临床应用的胸椎椎弓根螺钉的匹配程度;模拟手术情况,按照个体化原则选择植入螺钉型号,并于直视下植入椎弓根螺钉,肉眼下观察螺钉植入后椎弓根皮质破坏情况.结果:成人胸椎T6～T8节段,椎弓根横径分别为4.53(4.40～4.70)、5.38(5.25～5.60)和5.55(5.50～5.80)mm,均>4.5 mm,可以满足小直径螺钉植入.T1～T5椎弓根横径分别为4.74(3.85～5.25)、4.47(3.45～5.25)、4.15(3.60～4.65)、3.75(3.10～4.50)和4.25(3.70～4.65)mm.在所有测量胸椎标本中,椎弓根横径<4.5 mm的椎体占标本总体的22.5%.螺钉植入椎弓根后,2个椎体发生椎弓根外侧皮质破坏.结论:成人T3～T4节段椎弓根横径窄,影响椎弓根螺钉的安全植入,但在上位及中位胸椎的大部分节段,可以安全植入.
作者：付长峰；刘中国；刘一；张绍昆；赵松；闫明 刊期： 2009年第02期
腰硬联合麻醉克服了硬膜外麻醉阻滞诱导时间长、阻滞不完善的缺点,但有很高的低血压发生率,如果不采用预防血压下降的措施,几乎所有的患者都发生显著的血压下降,其收缩压可下降30%.本文作者在腰麻药液中加入少量的麻黄素,使患者的血液动力学变化和低血压发生率减少,有效地避免了血压剧烈波动对机体的刺激.
作者：尹建平；张宇航 刊期： 2009年第02期
目的:检测卵巢上皮性肿瘤组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和微血管密度(MVD)的表达,探讨HIF-1α和MVD在卵巢上皮性肿瘤发生、发展中的作用.方法:237例卵巢上皮性肿瘤患者,包括浆液性囊腺瘤79例、交界性浆液性囊腺瘤12例、浆液性囊腺癌51例、黏液性囊腺瘤67例、交界性黏液性囊腺瘤9例、黏液性囊腺癌19例.其中浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌按FIGO的手术一病理分期为:Ⅰ期13例,Ⅱ期26例,Ⅲ期19例,Ⅵ期12例.采用免疫组织化学方法检测上述卵巢上皮性肿瘤组织中HIF-1α表达和MVD,并将良性肿瘤、交界性肿瘤和恶性肿瘤,以及恶性肿瘤不同分期之间的HIF-1α表达和MVD值进行对比.同时对HIF-1α的表达和MVD值之间的相关性进行分析.结果:卵巢交界性浆液性囊腺瘤较卵巢浆液性囊腺瘤和黏液性囊腺瘤组织中HIF_1a的阳性率均明显增高(P<0.05).卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌组织中HIF-la表达的阳性率均明显高于两组卵巢良性肿瘤(P<0.05).卵巢交界性浆液性囊腺瘤和卵巢交界性黏液性囊腺瘤两交界性肿瘤组织中,MVD值均较两良性肿瘤组明显增高(P<0.05).卵巢浆液性囊腺癌和黏液性囊腺癌组织中MVD值均较两良性肿瘤组和两交界性肿瘤组明显增高(P<0.05).随着卵巢癌手术一病理分期级别的增高,HIF-1α表达的阳性率也由I期的38.46%逐渐增高至Ⅳ期的83.33%,其中Ⅳ期较Ⅰ期的阳性率明显增高(P<0.05).随手术一病理分期级别的增高,MVD也增高,各组间比较差异具有显著性(P<0.05).不同组织类型及手术病理分期的卵巢上皮性肿瘤组织中,HIF-1α表达与MVD呈正相关关系(r=0.540,P<0.01).结论:HIF-1α与卵巢上皮性肿瘤血管形成密切相关,提示HIF-1α可能在促进卵巢上皮性肿瘤的发生、发展起到重要的作用.
作者：付莉；刘爱民；冯卫；王爱绘；王冰冰；杨丽晓；张茜 刊期： 2009年第02期
目的:探讨分离、培养新生大鼠脊髓源性神经干细胞的方法并对其进行分化鉴定,为临床应用脊髓神经干细胞进行周围神经系统疾病的替代治疗奠定细胞学基础.方法:首次采用注射器灌注法分离新生24 hWistar大鼠脊髓源性神经干细胞,神经细胞培养液调节细胞终浓度并进行培养,形成克隆后,传代.将传至第1代培养细胞加入含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基诱导其分化.形态学方法观察细胞的生长状态,利用鼠抗Nestin抗体、鼠抗GFAP抗体、鼠抗MAP-2抗体进行分化的神经干细胞免疫组织化学鉴定.结果:新生大鼠脊髓源性神经干细胞可在体外培养条件下贴壁生长,在血清的作用下可分化为具有典型神经细胞形态、表达特异性组织蛋白Nestin、GFAP、MAP-2的神经细胞.结论:大鼠脊髓内可分离出脊髓源性神经干细胞,呈贴壁增殖状态,并有分化能力.
作者：张殿君；刘一；付长峰；宿晓云；王芳；李相军 刊期： 2009年第02期
目的:观察雌激素受体α(ERα)和β(ERβ)在人正常乳腺组织细胞中的定位,为探讨ERα和ERβ与乳腺组织生长发育的关系奠定基础.方法:应用免疫组织化学的方法,检测16例在加拿大拉瓦尔大学附属医院接受乳房缩小成形术患者的正常乳腺组织的ERα和ERβ阳性表达率及分布情况.结果:Era在小叶上皮细胞和导管上皮细胞的细胞核内检测到,在小叶和小叶内导管分布于上皮细胞的内层,在小叶间导管分布于上皮细胞的外层.ERβ在小叶上皮细胞和导管上皮细胞的细胞核内检测到,但是ERβ在上皮细胞中的分布并无规律,而且在细胞浆内也可以检测到弱到中等强度的染色.同时,在一些间质细胞,血管内皮细胞和淋巴细胞亦出现染色情况.ERβ在乳腺上皮细胞中阳性百分数明显高于Erα的阳性百分数,两者比较差异有显著性(t=29.789,P<0.01).同时Erβ的阳性表达率明显高于Era的阳性表达率,两者比较差异有显著性(χ2=8.127,P<0.05).结论:雌激素受体各亚型在人正常乳腺组织中有着不同的分布特点,ERβ的广泛分布暗示着ERβ可能是乳腺组织中占优势的雌激素受体.
作者：李嗣杰；韩冰；范志民；付彤；宋东；刘国津 刊期： 2009年第02期
目的:构建重组人HIF-Ia真核表达质粒,为进行人HIF-1α基因的克隆与表达做准备.方法:从人外周血细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法反转录合成cDNA.分别以含有绿色荧光蛋白(EGFP)片段的质粒PIREGFP质粒和反转录合成的cDNA为模板,加入所设计的3对引物[EGFP-linker、HIF-1α)上游(up)和下游(down)引物]所扩增目的基因片段分别与T载体连接后转化大肠杆菌DH5α,LB/Amp平板培养基筛选菌落,提取质粒.测序正确后经酶切先后克隆进入pVAXl载体.结果:通过聚合酶链反应(PCR)分别获得约870、1 199和672 bp的特异性DNA片段,分别与T载体连接后测序,测序结果与GenBank所提供的基因序列相同.将以上3个片段依次连入pVAXl载体后,所得质粒经酶切鉴定后获得约1 800 bp片段,与预想结果一致.结论:成功构建了重组人HIF-1α真核表达质粒pVAxl-EGFP-linker-HIF-1α.
作者：陆蕴松；高忠礼；刘光耀 刊期： 2009年第02期
本文作者对38例有详细随访记录的跟骨骨折患者临床资料进行分析,评估手术疗效和并发症.1临床资料1.1一般资料本组38例跟骨关节内骨折,男性25例,女性13例;年龄23～59岁,平均37.3岁.受伤原因:坠落伤10例,交通伤11例,下楼滑倒17例.左足跟骨骨折21例,右足15例;开放性骨折2例.术前常规摄跟骨前后位、侧位和轴位X线片,冠状位和水平位CT扫描.
作者：杨勇；王建新；宁湘煜 刊期： 2009年第02期
吉林大学学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：吉林大学
