潘德顺;陈伟强
IFN-α是目前临床上常用的抗HBV药物,但普通IFN-α半衰期只有4~6 h,患者不得不接受频繁的皮下注射,疗程至少半年.重组人白蛋白融合干扰素α-2b(rHSA-IFNα-2b)是通过生物工程技术,构建编码人血清白蛋白(HSA)和IFNα-2b的融合基因并在载体中获得高效表达而成的一种长效干扰素~([1]).本研究以HepG2 2.2.15细胞为模型,对rHSA-IFNα-2b的体外抗HBV作用进行了研究,为rHSA-IFNα-2b用于临床治疗慢性乙型肝炎提供实验依据.
作者:徐丙发;范鲁雁;范清林;魏伟;宋礼华 刊期: 2010年第02期
目的 研究鞘内注射氟代柠檬酸(fluorocitrate,Fc)对致炎大鼠痛觉过敏的影响.方法 采用大鼠右后爪踝关节外侧皮下注射完全弗氏佐剂(complete freunds adjuvant,CFA)50 μl 致炎模型.测定给予CFA或 Fc前后大鼠机械性缩爪阈值(MWT)和热刺激缩爪潜伏期(TWL).免疫组化分析脊髓背角星形胶质细胞标记物(GFAP)和小胶质细胞标记物(OX-42)的表达.结果 大鼠皮下注射CFA 24 h后出现明显的炎性痛敏,鞘内注射Fc后4,6,8,10,12 h,与CFA组大鼠比较,大鼠MWT明显提高(P<0.01),TWL明显延长(P<0.01).鞘内注射Fc 6 h后,降低脊髓背角GFAP和OX-42表达.结论 脊髓胶质细胞可能参与炎性痛敏的发生和维持,氟代柠檬酸可能通过抑制其生物活性而发挥镇痛作用.
作者:冯继英;杨建平;王丽娜;成浩;张艳兵;陈庆才;彭艳 刊期: 2010年第02期
目的 探讨间尼索地平(m-Nis)对5-羟色胺(5-HT)诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖和迁移的影响,并深入研究其作用机制.方法 采用植块法培养大鼠PASMCs.实验分为6组:空白对照组、5-HT(1 μmol·L~(-1))组,m-Nis(10~(-5)、10~(-6)、10~(-7)、10~(-8) mol·L~(-1))组.噻唑蓝(MTT)比色法、Transwell迁移小室法分别测定PASMCs的增殖和迁移,Western blot法检测大鼠PASMCs中增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达及细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)的磷酸化水平,研究m-Nis对ERK1/2/MAPK信号通路的影响.结果 不同浓度m-Nis明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖(P<0.05或P<0.01)和迁移(P<0.01),并呈现一定的浓度依赖性;另外,Western blot结果 显示m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs中PCNA的蛋白表达有不同程度的抑制作用(P<0.05或P<0.01),10~(-5),10~(-6),10~(-7) mol·L~(-1) m-Nis还明显抑制了5-HT诱导的大鼠PASMCs中ERK1/2磷酸化水平的升高,p-ERK1/2/ERK1/2比值均有不同程度地降低(P<0.05或P<0.01).结论 m-Nis对5-HT诱导的大鼠PASMCs增殖和迁移有明显的抑制作用,可能与其抑制PCNA蛋白表达及ERK1/2/MAPK信号通路有关.
作者:陈雪彦;刘焕龙;潘振华;张永健 刊期: 2010年第02期
群体药动学(PPK)应用统计学原理,综合评价影响药动学个体间及个体内差异的各种因素,进一步利用Bayesian反馈,能够较为准确地预测患者个体药动学参数.PPK在免疫抑制剂环孢素、他克莫司、霉酚酸及西罗莫司的合理用药均有广泛应用.
作者:陈冰;蔡卫民 刊期: 2010年第02期
目的 观察蒺藜皂苷单体B(TTSMB)对大乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用.方法 分离出生1~3 d大鼠心肌细胞,培养72 h后随机分为:正常对照组(Control)、缺氧/复氧模型组(H/R)、蒺藜皂苷组(GSTT)、蒺藜皂苷单体B(TTSMB )10、1、0.1 nmol·L~(-1)组.观察细胞形态学变化,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养基中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)含量,并采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率及应用Western blot检测TTSMB对凋亡相关蛋白caspase-3的作用.结果 与对照组比较,H/R组心肌细胞存活数明显减少,心肌细胞培养液中CK、LDH、AST释放量增加(P<0.01),SOD活力下降,MDA含量升高(P<0.01);与模型组比较,TTSMB 10、1、0.1 nmol·L~(-1)组存活心肌细胞数明显增多(P<0.05,P<0.01),心肌细胞培养液中CK、LDH、AST含量降低,SOD活力增加、MDA含量降低(P<0.05,P<0.01),心肌细胞凋亡率明显下降,caspase-3表达亦下降.结论 TTSMB可减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤,抑制心肌细胞凋亡,具有心肌细胞保护作用,其机制与抗自由基作用有关.
作者:张爽;李红;杨世杰 刊期: 2010年第02期
目的 本文采用两种化学刺激建立两种新的大鼠内脏高敏感性肠易激综合征(IBS)模型.方法 采用成年大鼠,经肠道连续6 d给予冰醋酸或芥末油刺激后,进行直肠扩张,评估肠道敏感性,记录胃肠电频率、峰电位、峰峰值和面积,检测血清5-HT含量.结果 与对照组相比,冰醋酸模型肠敏感性(P<0.05)、胃肠电频率(P<0.01)均升高;芥末油模型肠敏感性(P<0.01),胃肠电频率(P<0.01)、峰电位(P<0.05)、峰峰值(P<0.01)、峰面积(P<0.01),血清5-HT含量(P<0.05)均有变化,提示模型组敏感性增高.与模型组比较,反证药物组肠敏感性、胃肠电及血清5-HT含量均有一定恢复.结论 通过对成年大鼠肠道进行化学刺激,成功建立了新的大鼠内脏高敏感性IBS模型.
作者:朱力阳;彭成;谢晓芳;王嫣虹 刊期: 2010年第02期
目的 研究芍药苷(paeoniflorin,PF)对MPP~+所致大鼠黑质脑片多巴胺能神经元损伤的保护作用,并观察PF对α-synuclein(α-syn) mRNA表达水平的影响.方法 离体培养SD大鼠黑质器官型脑片,培养的d 10给予不同浓度的MPP~+(0.1、0.5、1.0 mmol·L~(-1))处理24 h,并在0.5 mmol·L~(-1) MPP~+处理的基础上,给予1 μmol·L~(-1)或10 μmol·L~(-1)的PF进行干预.免疫组化法计数黑质致密部酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞数,定量RT-PCR法检测α-syn mRNA的表达丰度.结果 MPP~+(0.1、0.5、1.0 mmol·L~(-1))处理导致黑质致密部TH+细胞数较正常对照组减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);MPP~+(0.5 mmol·L~(-1))使α-syn mRNA的表达水平明显升高(P<0.01).PF(10 μmol·L~(-1))有效增加了TH+细胞的数量(P<0.01),并明显下调了α-syn mRNA的表达(P<0.05).结论 PF能有效拮抗MPP~+导致的多巴胺能神经元受损死亡,其机制可能与下调α-syn的表达有关.
作者:曹碧茵;孔岩;徐侣;杨亚萍;刘春风 刊期: 2010年第02期
目的 观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对糖基化终末产物(AGEs)诱导肾小管上皮细胞(HKC)转分化及JAK/STAT信号通路的影响.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆.分别采用白蛋白和AGEs进行刺激.采用Western印迹检测SOCS-1、α-SMA、E-钙黏着糖蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(collagen I,Col I)、信号转导和转录活化因子1、3(STAT1、STAT3)及其磷酸化蛋白(p-STAT1、p-STAT3)的表达;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子-β_1(TGF-β_1)的分泌;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和E-cadherin mRNA的表达.结果 与对照组相比,AGEs组肾小管细胞α-SMA和Col I蛋白表达明显上调,细胞培养上清中TGF-β_1含量增加,α-SMA mRNA的表达增加,而E-cadherin蛋白和mRNA表达下调.SOCS-1过表达能够抑制AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA和Col I的表达及STAT1和STAT3的磷酸化,减少TGF-β_1的含量,下调AGEs刺激引起的HKC细胞α-SMA mRNA的表达,同时能够逆转AGEs刺激引起的HKC细胞E-cadherin蛋白和mRNA的下调表达.结论 SOCS-1过表达抑制AGEs诱导的肾小管上皮细胞转分化可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的.
作者:史永红;任韫卓;赵松;郝军;姚芳;刘巍;吴海江;段惠军 刊期: 2010年第02期
目的 研究蜂毒素(Melittin)对胃上皮癌细胞SGC-7901细胞生长及细胞周期阻滞的影响.方法 采用罗丹明B(SRB)染色法观察Melittin对SGC-7901细胞株生长曲线的影响;用流式细胞仪检测Melittin对该细胞周期阻滞的影响;RT-PCR检测细胞周期相关基因mRNA的表达.结果 Melittin(1、2、4、8×10~(-3)μg·L~(-1))体外给药24 h,能抑制SGC-7901细胞的增殖活性(P<0.05 or P<0.01);Melittin(4、8×10~(-3) μg·L~(-1))作用SGC-7901 24 h后,能明显阻滞该细胞株于G_2/M期;并且降低G_2/M期相关基因CylinB1-CDK1-Cdc25c mRNA的表达.结论 Melittin具有抑制胃上皮癌细胞SGC-7901增殖的作用,其机制可能与干扰该细胞G_2/M期相关基因的转录有关.
作者:吴宝明;李俊;吕雄文;金涌;赵斌;黄艳;王怡苹;楼蓉;王朋景 刊期: 2010年第02期
目的 在中国男性健康受试者中研究CYP2C19基因多态性对奥美拉唑药代动力学及不同奥美拉唑制剂相对生物利用度的影响.方法 筛选18名男性健康志愿者,其中CYP2C19 野生型(w/w)、CYP2C19突变杂合子(w/m)、CYP2C19突变纯合子(m/m)各6名.采取随机双交叉试验,受试者随机口服试验制剂或参比制剂奥美拉唑肠溶胶囊40 mg.抽取血样3 ml至给药后12 h.1 wk后交叉服药.采用LC/MS法测定血浆奥美拉唑浓度,用3P97软件进行个体药动学建模并估算药动学参数.结果 w/w、w/m、m/m组参比制剂奥美拉唑的AUC与C_(max)分别为1178.44±340.24、2328.10±1011.83、5062.02±1097.29 μg·h·L~(-1)与602.87±118.25,926.43±134.48,1406.29±233.58 μg·L~(-1),3组间差异存在显著性(P<0.05).k_e 、CL/F、T_(1/2)和Vd/F也均存在组间差异(P<0.05).w/w、w/m、m/m组试验制剂奥美拉唑的AUC与C/_(max)分别为1224.82±531.67、2723.34±519.29、5692.49±1575.35 μg·h·L~(-1)与618.74±231.43、910.67±125.99、1303.31±152.01 μg·L-1,3组间差异存在显著性(P<0.05).3组间的k_e 、CL/F、T_(1/2)和Vd/F等参数差异均有显著性(P<0.05).w/w、w/m、m/m组奥美拉唑的相对生物利用度分别为94.29%±14.06%、93.08%±11.22%、91.84%±13.03%,3组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 不同的CYP2C19基因型,表现为不同的CYP2C19酶活性,影响奥美拉唑的血药浓度和体内药动学过程.临床患者在使用奥美拉唑治疗前进行CYP2C19基因分型,将有利于优化个体治疗方案.CYP2C19基因多态性对奥美拉唑的相对生物利用度无影响.
作者:马晶晶;李金恒;曹晓梅;张尊建;田媛 刊期: 2010年第02期
以菊科植物抱茎苦荬菜[Ixeris sonchifolia(Bge.)Hance]全草为原料研制开发的苦碟子注射液已广泛应用于临床,在治疗冠心病心绞痛等方面收到了较好的疗效~([1]).为全面提高苦碟子注射液药品质量标准,降低生产成本,将苦碟子注射液按中药五类新药(冻干粉针剂)开发,其有效部位苦碟子总黄酮(total flavonoids of Sowthistle-leafixeris seedling,TFS)含量由原来的15%提升到90%.
作者:翟玉荣;于小风;曲绍春;徐华丽;睢大构 刊期: 2010年第02期
目的 分析人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株MCF-7/Taxol中的紫杉醇结合的差异蛋白质,探索抗肿瘤药物新靶点.方法 合成生物素化紫杉醇,HPLC-MS联用法检测合成产物.SRB法检测生物素化紫杉醇的生物活性,免疫磁珠偶联后与MCF-7及其MCF-7/Taxol的全细胞蛋白液反应,获得紫杉醇结合蛋白,SDS-PAGE电泳获得差异蛋白条带,LC-MS/MS分析,Western blot鉴定差异结合蛋白.结果 成功合成生物素化紫杉醇,生物素化紫杉醇的生物活性和紫杉醇相当.经过蛋白电泳分析,MCF-7/Taxol的紫杉醇结合蛋白较MCF-7多一差异条带,LC-MS/MS分析提示数个目标蛋白,经过Western blot验证差异条带中有Heat shock protein HSP 90、Dermcidin Precursor、Actinin.结论 成功获得了MCF-7和MCF-7/Taxol之间的紫杉醇细胞差异结合蛋白,对这些蛋白作用机制的的深入探索,可能为抗肿瘤药物的研究寻找到新的靶点蛋白,发现新的肿瘤耐药机制.
作者:张正华;梁晓华;吴学勇;侯凯生;张小平;吕中伟 刊期: 2010年第02期
目的 对比评价西红花苷和西红花酸在小鼠体内抗氧化活性.方法 采用硅胶柱层析从栀子中分离西红花酸和西红花苷纯品,普通昆明小鼠灌胃给药西红花酸和西红花苷,剂量分别是西红花酸6.25、12.5和25.0 mg·kg~(-1)和西红花苷18.7、37.5和75.0 mg·kg~(-1)·d~(-1),采用测定普通小鼠体内抗氧化指标(SOD、GSH-Px、TAOC和MDA)的方法 对比评价西红花酸和西红花苷-1体内抗氧化活性.结果 两种化合物都能明显提高小鼠肾脏和肝脏的SOD, 肝脏的GSH-Px,心脏和肾脏的TAOC,降低血浆的MDA.结论 西红花酸和西红花苷-1具有相似的体内抗氧化活性,其主要活性部位可能是肝脏和肾脏.
作者:陈阳;杨婷;黄娟;田西;赵璨;蔡乐;冯丽娟;张浩 刊期: 2010年第02期
目的 观察淀粉样β蛋白_(1-42)(Aβ_(1-42))和thiorphan对恒河猴大脑海马神经元淀粉样蛋白、乙酰胆碱转移酶(ChAT)以及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响,为注射thiorphan和Aβ_(1-42)建立恒河猴AD模型提供数据准备.方法 开颅后先注射thiorphan到猕猴的大脑皮质和基底核,消耗已存在的Neprilysin,然后再缓慢的注射孵育好的纤丝状Aβ_(1-42),后植入含有thiorphan的微渗透泵到基底核.HE染色观察海马结构病理改变.免疫组化的方法 检测猴子海马Aβ_(1-42)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞的表达.结果 HE染色显示海马CA1、CA2等区神经元萎缩,海马齿状回局部颗粒细胞丢失被胶质细胞取代;免疫组化结果 显示模型组海马各区Aβ_(1-42)、ChAT、GFAP阳性细胞吸光度(OD值)分别为0.59±0.05、0.21±0.04、0.19±0.04,与对照组比较P<0.01,差异具有统计学意义.结论 Aβ_(1-42)和thiorphan联合颅内给药导致恒河猴海马产生类似AD患者的病理改变.
作者:李文德;吴玉娥;闵凡贵;李卓;黄家园;黄韧 刊期: 2010年第02期
目的 探讨沉默Notch1基因对人神经胶质瘤U251细胞增殖能力的影响.方法 采用Notch1-shRNA慢病毒感染人胶质瘤U251细胞,筛选稳定低表达Notch1的细胞单克隆,Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达;CCK-8法测定细胞生长;平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验检测细胞的集落形成能力;裸鼠种植瘤模型观察Notch1沉默对种植瘤生长的影响.结果 成功筛选得到Notch1稳定沉默的U251细胞单克隆,其Notch1蛋白下调(65.3±5.1)%.Notch1稳定沉默细胞的生长增殖能力明显受到抑制,生长曲线与对照组相比明显减慢;Notch1沉默组的平板克隆形成率为(18.6±2.5)%,低于对照组(37.0±3.3)%;Notch1沉默组软琼脂集落形成率(51±5)%,低于对照组(80±4)%;Notch1沉默组裸鼠腋下种植瘤生长速度减慢,30 d后瘤重(0.31±0.09)g,明显低于对照组(2.35±0.71)g;统计学分析差异均有显著性.结论 RNAi沉默Notch1基因可致人胶质瘤U251细胞的体外增殖和体内成瘤能力下降.
作者:张明芳;郭亚;齐元麟;郑志父 刊期: 2010年第02期
目的 研究新型ATP敏感性钾通道(K_(ATP))开放剂埃他卡林(iptakalim,IPT)对人肺动脉内皮细胞内皮素(ET)系统的作用.方法 原代培养人肺动脉内皮细胞(HPAECs),分别加入不同浓度埃他卡林,共同孵育24 h后;应用放射免疫法测定各组细胞上清内皮素-1(ET-1)浓度的变化,同时用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法 检测各组细胞ET-1及内皮素转换酶(ECE)mRNA表达的变化. 结果 在IPT浓度为10~(-6) mol·L~(-1)及以上时,能够剂量依赖性地抑制HPAECs合成分泌ET-1,同时也降低ET-1 mRNA的表达量;在IPT浓度为10~(-7) mol·L~(-1)及以上时,能够剂量依赖性地降低ECE mRNA的表达量.结论 IPT通过抑制人肺动脉内皮细胞ET-1和 ECE mRNA的表达量,继而抑制内皮细胞合成分泌ET-1,可能成为较有前途的治疗肺动脉高压的有效药物.
作者:宗峰;倪惠娟;解卫平;王虹 刊期: 2010年第02期
高糖引起的细胞衰老与氧化应激、糖基化终产物的产生增加、信号转导通路的活化密切相关~([1]).二苯乙烯苷(TSG)是何首乌中提取的一种具有明显药理活性水溶性有效成分~([2]),具有抗氧化作用、延缓衰老、改善脂质代谢等功能.
作者:李彩蓉;蔡飞;黎荣;赵辛元;杨颖乔 刊期: 2010年第02期
目的 研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制.方法 用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1 mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48 h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变.结果 MTT结果 显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显.随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48 h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高.结论 EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用.
作者:赵英新;刘荣;范冬梅;任思楣;李崴;师锐赞;张砚君;杨铭 刊期: 2010年第02期
目的 检测成人肝癌组织是否表达褪黑素受体(melatonin receptor,MR),并探讨其结合特性.方法 免疫组化法检测肝癌组织MR两种亚型(MT1、MT2)的表达和分布.采用放射配体结合法检测肝癌组织MR特异性结合和动力学特性.结果 免疫组化结果 显示,成人肝癌组织MT1和MT2均呈聚集型粽黄色颗粒阳性染色,主要分布在细胞膜和细胞质,细胞核中表达少.放射配体结合结果 表明,成人肝癌组织存有~(125)I标记的褪黑素(~(125)I-Mel)特异结合位点,大结合容量(B_(max))值为(0.29±0.07) pmol·g~(-1) protein,平衡解离常数(K_d)值为(48.7±6.5) pmol·L~(-1),动力学分析表明该特异性结合特点为可饱和及可逆性结合.结论 成人肝癌组织表达MR,包括MT1和MT2,其结合特性为低结合容量、高亲和力、可饱和性及可逆性.
作者:亢晓彬;马勇;魏伟 刊期: 2010年第02期
目的 检验猫眼草水煎液的致突变性;改进经典的Ames试验体系使之适应于中药体外致突变性检验.方法 通过经典的Ames试验检测猫眼草的体外致突变性;通过哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验检测猫眼草的致畸作用;改进的Ames试验通过增设含补充组氨酸(含量对应于猫眼草水煎液中组氨酸浓度)的阴性对照,排除样品中组氨酸成分对试验结果 的影响.结果 猫眼草水煎液在经典的Ames试验中为强阳性;对哺乳动物骨髓细胞染色体致畸作用为阴性;在改进的Ames试验中猫眼草水煎液的致突变性为阴性.结论 经典的Ames试验不适合猫眼草水煎液致突变性检测,改进后的Ames实验体系适合.猫眼草水煎液在体外和体内均没有致突变性.
作者:金建玲;张辉;刘波;蔡玉品;高培基 刊期: 2010年第02期