费东亮；马鸣潇；程健
目的 利用杆状病毒系统表达中蜂囊状幼虫病毒(chinese sacbroodvirus,CSBV)结构蛋白VP1基因.方法 提取感染CSBV的中蜂囊状幼虫总RNA,RT-PCR法扩增VP1基因,克隆至载体pFastBacI中,构建重组转座质粒pFastBacI-VP1,转化至感受态大肠埃希菌DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-VP1,转染至昆虫细胞sf9中,获得第1代重组杆状病毒,经透射电镜观察杆状病毒粒子；病毒连续传代3次后,RT-PCR鉴定重组杆状病毒,SDS-PAGE检测VP1蛋白的表达情况,Western blot检测表达产物的反应原性.结果 重组杆粒经PCR鉴定构建正确；第1代重组杆状病毒经透射电镜观察,可见杆状病毒粒子；重组杆状病毒以M13通用引物和VP1基因特异引物进行PCR扩增,分别可见3 263和963 bp的片段,大小均与理论值一致；CSBV VP1基因能够在sf9细胞中表达,表达的重组VP1蛋白相对分子质量约3 1 000,可与兔抗CSBV-VP1阳性血清发生特异性反应.结论 成功利用杆状病毒表达系统表达了CSBV VP1基因,为深入研究CSBV的感染机制和蜜蜂的免疫机制以及中蜂囊状幼虫病血清诊断试剂盒的研制奠定了基础.
作者：费东亮；马鸣潇；程健 刊期： 2013年第07期
目的 评价重组人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)疫苗免疫原性2种检测方法的相关性.方法 应用间接酶联免疫吸附(ELISA)法和假病毒中和(pseudovirion-based neutralization assay,PBNS)法对26份阴性血清样本、34份自然感染HPV16或HPV18的血清样本及30份接种HPV16/18型双价疫苗后7个月的血清样本进行抗体滴度检测,并采用Pearman进行相关性分析.结果 3组样本的抗HPV16型和HPV18型抗体滴度的2次检测结果比值显示,试验室内重复性较好；2种方法检测血清样本抗HPV16型抗体滴度的总体相关系数为0.826,抗HPV18型为0.921；自然感染HPV的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.519,抗HPV18型为0.613；接种HPV16/18型双价疫苗后的血清样本抗HPV16型抗体滴度的相关系数为0.671,抗HPV18型为0.879.结论 间接ELISA法和PBNS法在检测血清样本中抗HPV16/18型抗体滴度时均具有较好的重复性和相关性,其中以接种疫苗后的血清样本中抗体滴度相关性佳,为HPV疫苗免疫原性的检测及剂量探索试验提供了参考依据.
作者：赵慧；李娟；潘晖榕；林玉香；李少伟；李长贵 刊期： 2013年第07期
目的 观察重组酵母乙型肝炎疫苗(60 μg)抗-HBs阳转率及接种反应.方法 对河北省承德市滦平县89名(男52名,女37名)因按常规免疫程序(0、1、6)接种重组酵母乙肝疫苗(10 μg)未产生免疫应答者重新接种重组酵母乙型肝炎疫苗(60μg)2针次,间隔4周.分别于末次免疫后1和6个月采血,分离血清,采用乳胶化学检测法检测抗-HBs水平,并计算阳转率；分别于首次和末次免疫后30 min及72 h内,观察局部(疼痛、瘙痒、硬结)和全身(发热、乏力、腹泻)不良反应.结果 末次免疫后1个月,男性抗-HBs阳转率为96％,女性为97％,末次免疫后6个月,男性抗-HBs阳转率为98％,女性为100％,男女抗-HBs阳转率差异均无统计学意义(P＞0.05),免疫2针次后,抗-HBs阳转率接近100％.首次和末次免疫后30 min及72 h内,局部和全身不良反应发生率均未超过6％.结论 重组酵母乙型肝炎疫苗(60μg)可提高按常规程序接种乙肝疫苗未产生免疫应答人群的抗-HBs阳转率,且疫苗接种后局部和全身不良反应发生率较低,可推广使用.
作者：王桂红；齐桂华；张金华 刊期： 2013年第07期
目的 探讨干扰素α2a(interferonα 2a,IFNα2a)与白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)联合作用对体外肝癌细胞HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响.方法 用不同浓度的IFNα2a(5 000、10 000、15 000 IU/ml)和IL-2(2 500、5 000、10 000 IU/ml)单独及联合作用HepG2.2.15细胞96 h后,采用WST-1法检测细胞增殖情况,倒置相差显微镜观察联合作用组细胞形态学变化,ELISA法检测联合作用组细胞上清中HBsAg和HBeAg的表达,斑点杂交法检测联合作用组细胞HBV-DNA的复制情况.结果 与不同浓度的IFNα2a和IL-2单独作用相比,二者联合作用对HepG2.2.15细胞增殖的抑制作用明显增强(P＜0.05);IFNα2a与IL-2联合作用组HepG2.2.15细胞显微镜下可见细胞逐渐变圆,胞浆中颗粒增多,增殖变慢,细胞间接触不紧密,细胞周围碎片增多；联合作用组细胞培养上清中HBsAg和HBeAg的表达明显受到抑制(P＜0.05)；5 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2、10 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2和15 000 IU/ml IFNα2a+10 000 IU/ml IL-2对HepG2.2.15细胞HBV-DNA的复制有抑制作用.结论 IFNα2a与IL-2联合作用对HepG 2.2.15细胞增殖及HBV-DNA复制均有抑制作用.本实验为后续体内动物实验及筛选合适的疫苗佐剂奠定了基础,也为新型乙型肝炎疫苗及治疗性乙型肝炎疫苗的研究提供了参考.
作者：徐艳玲；刘令九；侯丽娟；岳立广；隋红；赵小琳；金立杰 刊期： 2013年第07期
近年来,随着研究的深入,特异性细胞免疫在百日咳感染和疫苗诱导的免疫保护等方面的作用越来越引起人们的重视.本文就百日咳杆菌主要毒力因子在诱导细胞免疫及免疫调节中的作用、百日咳感染及疫苗免疫接种后诱导产生的细胞免疫应答等方面的研究进展作一综述.
作者：张平；徐颖华 刊期： 2013年第07期
抗体药物是生物技术药物研发领域中公认的研究热点.在抗体药物研制过程中,免疫原性一直是限制其临床应用的重要因素,不但严重影响其安全性和有效性,有时还会导致严重的临床后果.本文主要分析了抗体药物本身引起免疫原性的多种因素以及针对这些因素的改进方法,即通过抗体的人源化、去免疫化、糖基化修饰、抗体分子小型化和多聚体问题的改善来降低抗体药物的免疫原性.
作者：陈雪静；刘晓志 刊期： 2013年第07期
目的 探讨环境内分泌干扰物邻苯二甲酸二(2-乙基)已酯(Di-2-ethylhexy1 phthalate,DEHP)作用于SD孕鼠后,对哺乳期雄性幼鼠睾丸组织中Notchl的表达及其在隐睾所致不育症中可能发挥的作用.方法 将30只妊娠第12.5天的SD孕鼠随机分为正常对照组、玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组,每组10只.玉米油对照组和DEHP诱导隐睾组SD孕鼠自妊娠第12.5～19.5天,分别每日灌胃玉米油(2ml)和DEHP(500 mg/kg),正常对照组不给药.取各组出生后第20天的雄性幼鼠,镜下观察睾丸位置,并统计隐睾发生情况.采用RT-PCR及Western blot法检测各组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正常对照组和玉米油对照组相比,DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠的隐睾发生率明显上升(P＜0.05);DEHP诱导隐睾组雄性幼鼠睾丸组织中Notch1基因mRNA和蛋白表达水平均明显低于正常对照组和玉米油对照组(P＜0.05).结论 孕期暴露环境内分泌干扰物DEHP可引起雄性子代发生隐睾,隐睾子代睾丸组织中Notch1表达有改变,并可能与隐睾导致的不育有关.
作者：刘东尧；吴盛德；华燚；何文飞；何昀；陈柏林；龙春兰；魏光辉 刊期： 2013年第07期
目的 采用高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法(high performance anion exchange chromatography withpulsed amperometric detector,HPAEC-PAD)测定b型流感嗜血杆菌(haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗的多聚磷酸核糖基核糖醇(polyribosylribitol phosphate,PRP)多糖含量.方法 用终浓度为0.3N的NaOH溶液将待测疫苗中的PRP多糖或分离得到的游离多糖在室温下振荡水解(16±8)h,采用CarboPac@PA-10阴离子交换柱在NaOH/醋酸钠溶液梯度洗脱条件下分离水解产物,用脉冲安培检测器检测信号,根据样品的峰面积计算得到待测疫苗中的PRP多糖含量及游离多糖含量,样品均重复检测2次,计算2次检测结果的相对标准偏差(RSD).同时采用《中国药典》三部(2010版)附录ⅧJ中的地衣酚法测定相同批次样品的PRP多糖含量及游离多糖含量,并对两种方法得到的结果进行比较.结果 相同样品重复检测2次,结果间的差异非常小,RSD不超过4.6％.HPAEC-PAD法测得的总PRP结果与地衣酚法测得的结果接近,前者测得的S01～S03样品的PRP浓度值分别为后者的105％、104％和106％; HPAEC-PAD法测得的游离PRP结果与地衣酚法测得的结果差别较大,前者测得的S01～S03样品的游离PRP浓度值分别为后者的126％、109％和115％.结论 HPAEC-PAD法测定Hib结合疫苗的PRP多糖含量灵敏度高,重复性和分离效果好,样品不需要衍生处理,可同时测定多组分,可作为传统地衣酚法的替代方法用于Hib结合疫苗中多糖含量的测定.
作者：贺鹏飞；唐静；李亚南；李茂光；叶强 刊期： 2013年第07期
目的 表达、纯化东方马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus,EEEV)E2蛋白,并检测其对小鼠的免疫原性.方法 利用IPTG诱导重组大肠埃希菌BL21-pET30-EEEV-E2,表达E2蛋白,用包涵体纯化试剂盒纯化重组E2蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot分析.将BALB/c小鼠随机分为4组∶PBS对照组、弗氏佐剂对照组(弗氏佐剂与PBS按体积比1∶1乳化)、E2蛋白组(E2蛋白与PBS按体积比1∶1混合)和E2蛋白+弗氏佐剂组(E2蛋白与弗氏佐剂按体积比1∶1乳化),每组10只,各组均经小鼠后肢肌肉免疫3次,两次免疫间隔时间均为14 d,免疫剂量均为100 μl/只.第2次免疫后第7天,采用流式细胞术检测小鼠体内CD4+和 CD8+T细胞比例；第2次免疫后第14天,采用细胞因子ELISA定量试剂盒检测小鼠血清中IL-2、IL-4和IFNγ的含量；第3次免疫后第7天,采用MrT法检测小鼠淋巴细胞增殖情况；每次免疫后第14天,采用EHSA法检测小鼠血清中IgG抗体效价.结果 表达的重组E2蛋白相对分子质量约为53 000,表达量为菌体总蛋白的26.3％；纯化的重组E2蛋白纯度达95％以上；表达和纯化的重组E2蛋白均可与鼠抗His标签单克隆抗体结合.与PBS对照组、弗氏佐剂对照组和E2蛋白组相比,E2蛋白+弗氏佐剂组小鼠体内CD4+与CD8+T细胞比值、血清中IL-2、IL-4和IFNγ浓度、体内淋巴细胞增殖指数均明显升高(P＜0.01)；小鼠初次免疫后即可产生E2蛋白IgG抗体,且随着免疫时间的延长,抗体效价逐渐上升,第3次免疫后第14天,抗体效价可达1∶320.结论 表达并纯化了重组E2蛋白,其能使小鼠产生较强的免疫反应,为新型EEEV疫苗的研制提供了参考.
作者：马金柱；王化磊；郑学星；吴红霞；薛向红；王铁成；杨松涛；夏咸柱 刊期： 2013年第07期
2006年,研究人员将一系列转录因子导入小鼠成纤维细胞中,诱导出了一种类似于胚胎干细胞状态的细胞,称为“诱导性多能干细胞”(induced pluripotent stem cell,简称iPS细胞).iPS细胞在具有高度自我更新和分化能力的同时,进一步避免了传统胚胎干细胞的伦理学问题,特别是该技术使于细胞自体化移植更易实现,在很大程度上推进了干细胞技术的临床应用.目前,在iPS细胞的诱导方式和诱导效率方面,已取得了较大进展,但在iPS细胞的诱导过程以及再分化过程中,细胞针对于自体的免疫原性是否发生改变,目前尚不明确.本文就近年来iPS细胞免疫原性的研究进展作一简要综述.
作者：赵巍 刊期： 2013年第07期
目的 对奶牛乳房炎致病大肠埃希菌(E.coli)进行分型及外膜蛋白酶T(outer membrane protease,OmpT)的抗原性验证.方法 采用凝集试验测定黑龙江省分离的84株致病E.coli的O血清型,PCR扩增种系分类群标记基因法对84株Ecoli进行分型；经BLAST比对筛选ompT基因后,PCR验证ompT基因的普遍性；克隆A、B1、D群代表株ompT基因,测序后进行同源性比对；构建B1群E coli 2002-1株ompT基因重组表达质粒pET-32a-ompT,转化E.coliRosetta,IPTG诱导表达；表达的重组蛋白经亲和层析纯化后,Westem blot法鉴定重组蛋白的抗原性.结果 84株奶牛乳房炎致病E.coli中共鉴定出血清型51株,覆盖42个O血清型,归属A种系进化群10株,占11.90 ％;B1种系进化群74株,占88.10％；无肠外强致病的B2和D群.各型E.coli均可扩增出ompT基因.4亚群代表株ompT基因具有高度保守性,同源性达97％以上.重组表达质粒pET-32a-ompT经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确.表达的重组蛋白相对分子质量约55 000,诱导4h,目的蛋白的表达量高,约占菌体总蛋白的29.8％.纯化的重组OmpT蛋白纯度为87.6％,与4亚群E.coli免疫血清均可发生特异性反应.结论 种系进化是对奶牛乳房炎致病E.coli分型的理想方法,外膜蛋白酶OmpT在E.coli各种系进化群中抗原性良好,可作为研制E.coli蛋白亚单位疫苗的候选抗原.
作者：佟春玉；李润婷；呼瑞；马金柱；宋佰芬；朱战波；崔玉东 刊期： 2013年第07期
目的 观察凋亡抑制蛋白Survivin基因干扰和过表达对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 将Survivin基因shRNA干扰质粒和过表达质粒pcDNA3.1-GFP-Survivin在脂质体介导下转染MCF-7细胞,并设空白对照组和脂质体对照组,转染后48 h,荧光显微镜下观察转染效率；荧光定量RT-PCR法检测转染细胞中Survivin基因mRNA的转录水平；MTT法检测转染细胞的凋亡率.结果 转染MCF-7细胞后48 h,Survivin基因RNAi质粒和过表达质粒的转染效率为50％ ～ 60％；shRNA质粒转染组MCF-7细胞中Survivin基因mRNA的转录水平明显低于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显高于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05)；shRNA质粒转染组MCF-7细胞的凋亡率明显高于空白对照组和脂质体对照组,而过表达质粒转染组明显低于空白对照组和脂质体对照组(P＜0.05).结论 Survivin基因对人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有一定的抑制作用,可作为人乳腺癌生物治疗的候选基因.
作者：李鹏 刊期： 2013年第07期
目的 探讨霉酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF)对博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化组织中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达的影响.方法 将C57BL/6小鼠随机分为6组:正常对照组、MMF对照组、BLM模型组、MMF低(20 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量干预组,每组6只.BLM模型组和MMF 3个干预组经气管注入BLM(6 mg/kg),正常对照组和MMF对照组注入等量无菌生理盐水；次日按MMF对照组和MMF干预低、中、高剂量组小鼠体重计算MMF给药量,灌胃小鼠,每日1次,连续14d,正常对照组和BLM模型组用等体积的双蒸水灌胃.灌胃第16天采集小鼠肺脏标本,经HE、Masson染色,从组织形态学上观察肺组织纤维化情况并进行Aschcroft评分；RT-PCR法检测小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平；Western blot法检测小鼠肺组织中TGF-β1蛋白的表达水平.结果 BLM诱导的小鼠肺纤维化改变显著,Ashcroft评分较正常对照组显著增高(P＜0.01),表明小鼠肺纤维化模型构建成功；MMF高剂量干预组肺组织损伤减轻,炎细胞浸润及胶原沉积减少,Ashcroft评分显著降低(P=0.000).MMF高剂量干预组与BLM模型组比较,TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显减低(P＜0.05)；而MMF低、中剂量干预组与BLM模型组之间、MMF对照组与正常对照组之间,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 高剂量的MMF(100 mg/kg)可抑制BLM诱导的肺纤维化小鼠肺组织中TGF-β1基因mRNA的转录水平及蛋白表达水平,有望成为治疗肺纤维化的理想药物.
作者：曹姝；李少林；吴府容；康强强；李芳；王颖 刊期： 2013年第07期
目的 评价诺华公司生产的b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)结合疫苗的安全性及免疫原性.方法 采用随机、对照、双盲方法,将320名2～5月龄健康婴幼儿按照1:1的比例分为实验组和对照组,实验组接种3剂诺华公司生产的Hib结合疫苗,对照组接种3剂某进口Hib结合疫苗,每剂间隔1个月,接种部位和途径均为上臂三角肌肌肉注射.每剂接种后30 min、6h、24 h、48 h、72 h,对观察对象进行主动安全性观察；每剂接种后4～28d,观察对象主动报告接种疫苗后的不良反应及不良事件发生情况.分别于接种前和全程免疫后28 d采集指血,ELISA法测定Hib-PRP抗体水平,评价疫苗的免疫原性.结果 实验组3针总局部反应发生率为12.67％,对照组3针总局部反应发生率为14.69％,两组差异无统计学意义(P＞0.05)；实验组第1针局部反应发生率明显低于对照组,而第2、3针局部反应发生率高于对照组.实验组3针总全身反应发生率为19.33％,对照组3针总全身反应发生率为22.38％,两组差异无统计学意义(P＞0.05)；实验组与对照组各针次全身反应发生率差异均无统计学意义(P＞0.05).实验组和对照组接种疫苗后,Hib-PRP抗体水平≥1.0 μg/ml的比例分别为97.33％和95.80％,二者差异无统计学意义(P＞0.05)；Hib-PRP抗体水平≥0.15 μg/ml的比例均为100％.实验组和对照组接种疫苗后,Hib-PRP抗体水平分别为(3.82±39.76)和(5.22±43.22)μg/ml.结论 未观察到诺华公司Hib结合疫苗与某进口Hib结合疫苗的安全性和免疫原性存在差别.
作者：罗凤基；李丽；张国辉；张政；王朝云；杨立清；艾星；白云骅；芦强 刊期： 2013年第07期
目的 构建含NLS-RARα基因的重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并检测其在K562细胞中的表达.方法 以质粒pGBKT7-PML-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,与穿梭质粒dTrace-TO4连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TO4-NLS-RARα,经Pme Ⅰ酶切线性化后,转化含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒pAd-NLS-RARα,经Pac Ⅰ酶切线性化后,转染AD293细胞,获得重组腺病毒Ad-NLS-RARα,经4轮扩增后,测定重组腺病毒滴度,并进行PCR及测序鉴定；将重组腺病毒感染K562细胞,采用流式细胞术测定感染效率,RT-PCR法和Western blot法检测NLS-RARα在K562细胞中的转录及表达水平.结果 重组腺病毒Ad-NLS-RARα经4轮扩增后,滴度可达6.9×lO8 pfu/ml,PCR及测序鉴定证明构建正确,对K562细胞的感染效率可达70％左右；重组腺病毒Ad-NLS-RARα携带的NLS-RARα基因可在K562细胞中高效表达.结论 已成功构建了重组腺病毒Ad-NLS-RARα,并在K562细胞中高效表达了NLS-RARα基因.
作者：胡秀秀；刘北忠；钟梁；高远梅；张曦；吴秀娟；王慧；朱新瑜 刊期： 2013年第07期
目的 探讨激活素受体相互作用蛋白1(activin receptor-interaction protein 1,ARIP1)和ARIP2在小鼠脑神经细胞中的共表达.方法 RT-PCR法检测C57BL小鼠小脑、垂体、大脑、脾脏、心脏、肾脏、肝脏、胰腺组织中ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录；以融合蛋白GST-ARIP1C和MBP-ARIP2C作为抗原免疫新西兰白兔,制备抗ARIP1和ARIP2抗体,经A蛋白亲和层析柱纯化后,ELISA法检测抗体的交叉反应；用制备的抗体,采用免疫组织化学染色检测ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织中的表达；RT-PCR法检测小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞中激活素ⅡA型受体(activin receptorⅡA,ActRⅡA)、ARIP1和ARIP2基因mRNA的转录.结果 在小鼠大脑、小脑及垂体组织中可见ARIP1基因mRNA的转录,在小鼠各部位组织中均可见ARIP2基因mRNA的转录；制备的兔抗ARIP1和ARIP2抗体无交叉反应；ARIP1和ARIP2在小鼠脑组织的海马和下丘脑同时表达；ActRIⅡA及ARIP1和ARIP2 mRNA在神经元样细胞系Neuro-2a细胞中共表达.结论 ARIP1和ARIP2可在小鼠脑神经细胞中共表达.
作者：谢佳男；齐妍；赵阳；王增艳；赵莉佩；崔雪玲；柳忠辉；王轶楠 刊期： 2013年第07期
目的 建立特异的CHO细胞DNA残留量荧光定量PCR(Q-PCR)检测方法.方法 采用DNeasy Tissue Kit提取CHO细胞基因组DNA,制备DNA标准品；确定Q-PCR反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,并验证其专属性、准确性及精密性；用建立的方法对1003b02、1008b05、1012b09、1104b04、1108b13、1112b24批康柏西普原液的CHO细胞DNA残留量进行检测.结果 建立的标准曲线Ct值与模板DNA浓度的对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.99以上；检测HUVEC、HEK293细胞的DNA残留量均无特异性扩增曲线；检测高、中、低浓度的DNA标准品(105、103、101 pg/ml)的平均回收率均在Q-PCR方法可接受的回收率范围(50％ ～ 200％)内,批间变异系数分别为9.3％、21.8％、26.8％；检测100 pg/ml浓度的DNA标准品的平均回收率为111.6％,变异系数为20.4％；康柏西普原液的DNA残留量远低于100 pg/剂量.结论 已成功建立特异的CHO细胞DNA残留量Q-PCR检测方法,该方法专属性好,准确性及精密性高,可作为CHO宿主细胞DNA残留量的常规检测方法.
作者：牛冬云；连炜；何静；邬智刚；柯潇 刊期： 2013年第07期
目的 探讨吸水链霉菌谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase,TGase,EC 2.3.2.13)的两种同源异形体成熟酶TGases A和TGases B的分子差异,并进行系统分析和鉴定.方法 吸水链霉菌培养上清液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化后,将纯化产物再经阴离子交换层析,分析纯化产物的分子表面带电性质,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)和远紫外圆二色谱(far ultra-violet circular dichroism spectrometry,Far-UV CD)法分析纯化产物的肽段序列及二级结构的差异,并检测成熟酶N-末端氨基酸序列.结果 经阴离子交换层析和凝胶过滤层析分离纯化获得TGases的两种成熟酶TGases A和TGases B,均具有酶活性；TGase A和TGase B成熟酶分子具有不同的表面带电性质,酶活分别为(28.33±1.45)U/mg和(22.54±1.77)U/mg; TGases A和TGases B在质荷比(m/z)4 536.481和4 873.393处两个低丰度肽段有差异,但N-末端6个氨基酸序列完全相同；两者二级结构均以α-螺旋为主,但二级结构存在一定差异.结论 吸水链霉菌TGases A和TGases B是由同一种酶原活化产生的同源异形体,两者的表面电荷性质、肽段序列及分子二级结构均有差异.
作者：崔文璟；杜坤；周丽；刘中美；丁旭；周哲敏 刊期： 2013年第07期
目的 观察不同剂量重组人源抗狂犬病病毒单克隆抗体(recombinated human rabies immunoglobin,rhRIG)注射液人体单次给药的安全性.方法 采用随机、单盲、安慰剂平行对照的方法,对成功筛选的48名健康受试者按照随机数字表进行分组,共分低、中、高3个rhRIG单次给药组(10、20、40 IU/kg),每组12人,每个剂量组均按3∶1设1个安慰剂(rhRIG的赋形剂)平行对照组,每组4人,依次经上臂三角肌(≤2 ml)、臀大肌(≤10 ml)和大腿外侧肌肉(剩余药液)进行肌肉注射.分别在筛选期(入组用药前14 d内)、用药后7、14和42 d记录不良事件(adverseevent,AE)、严重不良事件(serious adverse events,SAE)、局部反应、全身反应的发生情况,并进行生命体征、实验室(血常规、尿常规、血生化)、心电图、胸片、腹部B超检查.结果 不同剂量rhRIG组中共发生7例次AE,分别为谷氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶和谷氨酰转肽酶升高、血白细胞下降、上呼吸道感染、宫外孕,其中宫外孕判断为SAE.上述AE均判断与试验药物无关或可能无关.对照组未发生任何AE/SAE.所有受试者用药后生命体征均未见异常改变.结论 受试者单次肌肉注射10 ～ 40 IU/kg rhRIG后耐受性良好.
作者：王美霞；贾敏；金铭；韩靖；段瑾；王立清；金荣华；李宁；姚家琳 刊期： 2013年第07期
目的 原核表达艰难梭状芽孢杆菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(Glutamate dehydrogenase,GDH),纯化重组蛋白,并检测其酶活性.方法 采用PCR法从标准株ATCC BAA-1805中扩增GDH基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28-GDH,转化感受态大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE和Western blot分析,并通过Ni-NAT层析柱分离纯化后,根据脱氢酶酶活测定方法,测定纯化蛋白的酶活性.结果 重组表达质粒pET-28-GDH经双酶切及测序,证实构建正确,重组蛋白的相对分子质量约46000,可与抗His单抗特异性结合,主要以可溶性形式表达.纯化的目的蛋白纯度可达90％,浓度为1.7 mg/ml.纯化蛋白GDH以NADPH和NADP为辅酶,酶活性分别为42.6和63.3 U/L.结论 已成功在大肠杆菌中表达了重组CD GDH,纯化的目的蛋白纯度高,具有GDH酶活性,为制备GDH单克隆抗体奠定了基础.
作者：杜茜；吴志鹃；蔡雪飞；袁作为；张君；郑建 刊期： 2013年第07期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
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