学术投稿

肠道病毒71型与甲型肝炎病毒灭活疫苗联合免疫效果的初步评价

杨婷;李华;龙润乡;杨蓉;董承红;蒋蕊鞠;崔萍芳;白惠珠;谢忠平

关键词:肠道病毒A型, 人, 肝炎病毒, 甲型, 灭活疫苗, 联合免疫
摘要:目的 初步评价肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)与甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)灭活疫苗联合免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平以及两种抗原间的相互作用.方法 将HAV灭活疫苗和EV71灭活疫苗以不同剂量配比制成联合疫苗,免疫ICR小鼠后,通过ELISA法检测血清HAV抗体效价;固定病毒-稀释血清法检测血清EV71中和抗体效价;流式细胞术检测脾脏中淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的百分率;ELISPOT法检测脾脏中淋巴细胞分泌IL-4和IFNγ的水平.结果 初免后28 d和加强免疫后7d,各组小鼠血清中EV71中和抗体阳转率均达100%,单价疫苗组和联合疫苗组EV71中和抗体效价均呈剂量依赖性;初免后28 d,小鼠血清中能够产生保护性HAV抗体,加强免疫后抗体水平升高;联合疫苗组与相应的单价疫苗组间抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),未发现EV71与HAV的相互作用;初免后28 d,各组小鼠脾脏中CD8+细胞比例高于CD4+细胞(P<0.001),加强免疫后7d则相反(P<0.001);初免后28 d,HAV全病毒和EV71多肽均不能刺激各组小鼠脾细胞产生阳性反应,加强免疫后7d,各组小鼠脾细胞分泌IL-4的水平均高于IFNγ(P<0.05).结论 一定剂量的HAV和EV71联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫应答,同时诱导细胞免疫应答,但相对较弱,未发现两种抗原间存在相互干扰或协同作用.
中国生物制品学杂志相关文献
  • 干扰素及IL-6、IL-1β在肠道病毒71型感染过程中的作用

    目的 探讨干扰素(Interferon,IFN)及白细胞介素-6( Interleukin-6,IL-6)、IL-1β在肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)感染过程中的作用.方法 采用EV71-FY23,在IFNα1b、IFNλ1和IFNγ分别存在的条件下感染Vero细胞及KMB17细胞,检测IFN对细胞的保护作用;建立EV71感染乳鼠模型,检测IFNα1b、IFNλ1、IFNγ、IL-6及IL-1β的抗病毒作用.结果 IFNα1b和IFNλ1对EV71感染的细胞具有明显的保护作用,而IFNγ的保护作用不明显;IFNα1b对感染EV71的乳鼠具有较好的保护效果,其在病毒感染之前的预处理方式产生的保护效果较为明显;IL-1β对感染EV71的乳鼠亦有不同程度的保护作用,而IL-6预处理方式不但无保护作用,反而加速了乳鼠的死亡.结论 IFN和IL-1β对EV71感染具有保护作用,而IL-6无此作用.

    作者:范胜涛;王丽春;赵恒;刘龙丁;李琦涵 刊期: 2012年第04期

  • 蛋白质、多肽类药物聚乙二醇修饰的研究进展

    随着基因工程技术的发展,蛋白质、多肽类药物的临床应用越来越受到重视.但蛋白质、多肽类药物的免疫原性和毒副反应及半衰期短等问题限制了其应用和发展.聚乙二醇( Polyethylene glycol,PEG)能够使蛋白药物溶解行为改善,稳定性增强,免疫原性消除或降低,循环半衰期延长,药代动力学优化,在生物技术和生物医学中具有广泛的应用前景.本文就蛋白质、多肽类药物的PEG修饰、修饰技术的发展、修饰的主要途径以及PEG修饰药物的现状及前景作一综述.

    作者:惠希武;陈虹;黄秉仁 刊期: 2012年第04期

  • 猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株与基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92一步RT-PCR鉴别方法的建立

    目的 建立一种猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)野毒株与基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92一步RT-PCR鉴别方法.方法 基于高致病性PRRSVTJ株及其基因缺失致弱疫苗株TJM-F92的nsp2基因序列设计1对引物,建立可鉴别不同高致病性PRRSV野毒株与基因双缺失弱毒疫苗株的一步法RT-PCR,并进行特异性、灵敏度、敏感性、重复性验证.结果 高致病性PRRSV TJ株扩增出1 100bp的条带,基因缺失弱毒疫苗株TJM-F92扩增出740 bp的条带,可对两毒株作出准确鉴别;建立的一步法RT-PCR可测出101 TCID50/ml的PRRSV-TJ疫苗毒株,灵敏度较高;对已知阳性和阴性仔猪血清样品的检测结果100%相符,敏感性较高,且重复性较好.结论 建立的一步法RT-PCR可用于接种TJM-F92疫苗猪群中PRRSV野毒感染与疫苗免疫猪的临床鉴别,有助于评价疫苗的免疫效果并及早发现野毒感染.

    作者:梅林;高英杰;梁智选;赵建增 刊期: 2012年第04期

  • 国内外联合疫苗的研究新进展

    随着扩大免疫规划的执行以及新型疫苗的不断开发和应用,儿童接种疫苗的针次越来越多,这不但增加了儿童接种疫苗的痛苦,也给家长和医务工作者带来诸多不便.因此,开发和应用接种1次能预防多种疾病的联合疫苗是发展的趋势.本文对国内外联合疫苗的新研究进展作一综述.

    作者:王丽婵 刊期: 2012年第04期

  • 超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚

    目的 采用超滤法去除A群脑膜炎球菌多糖料液中的苯酚.方法 选取Omega OS01 0C10膜包(C型筛网,10 KD,过滤面积0.1m2)和Omega OS010T12膜包(T型筛网,10 KD,过滤面积0.1m2),分别对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,比较两种膜包不同压力对膜滤速的影响,测定超滤前后膜净水滤速的恢复率,分析经超滤和透析后样品中磷和苯酚含量及固体总量.结果 OS010T12膜包切向流速和压力的增加对滤速的影响较OS010C10膜包更显著,且在较低的压力差和过膜压力下,OS010T12膜包具有更高的过滤速度;在浓缩和洗滤阶段,OS010T12膜包的平均滤速较OS010C10膜包高约1.3倍;膜包经清洗后,膜净水滤速OS010T12膜包可恢复至试验前水平;两种膜包超滤的滤出液中苯酚的含量均符合《中国药典》三部(2010版)要求,且多糖回收率均高达90%以上,超滤用时比透析至少节约46 h,且耗水量只有透析工艺的20%.结论 可用OS010T12膜包替换透析袋,对A群脑膜炎球菌多糖料液进行超滤,去除残余苯酚,为A群脑膜炎球菌多糖疫苗的生产提供了参考.

    作者:胡菁;薛红刚;郭蓉;陈有喜;瞿明霞;陈浩军 刊期: 2012年第04期

  • pUC118-ski/DH5α工程菌发酵工艺的优化

    目的 优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺.方法 筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定佳发酵参数;以佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性.结果 佳发酵参数为:以甘油为碳源的培养基,发酵温度25℃,以50%Glycerol梯度恒速流加方式补料,培养时间为12 h;以佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批工程菌,菌体湿重和质粒含量分别达52.7~60.3 g/L和1.79~1.95 mg/g湿菌,质粒拷贝数为1012 copies/μl,超螺旋质粒的比例达90%以上.结论 优化了pUC 118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺,为重组质粒的规模化生产及下游纯化奠定了基础.

    作者:彭艳;李平;刘苹;周元国 刊期: 2012年第04期

  • 肺炎链球菌热休克蛋白ClpL的原核表达、纯化及抗原特性分析

    目的 原核表达并纯化肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,S.pn)热休克蛋白ClpL,并评价其作为S.pn疫苗候选蛋白的可行性.方法 PCR扩增S.pn D39全长ClpL基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,转化E.coli BL21 (DE3),IPTG诱导表达,表达的重组ClpL蛋白经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗ClpL多克隆抗体的效价及亚型;Western blot分析ClpL蛋白在5种常见S.pn中的保守性;流式细胞术及Western blot分析ClpL蛋白在S.pn中的亚细胞定位.结果 重组表达质粒pET-28a(+ )-ClpL经双酶切及测序证实构建正确;ClpL蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得了可溶性表达,纯化后纯度达90%,浓度为4.97 mg/ml;免疫小鼠可产生高滴度、高特异性的IgG抗体,以IgG1和IgG2b亚型为主;ClpL蛋白在5株常见S.pn中均有表达;ClpL蛋白为分泌型蛋白,不表达于S.pn表面.结论 原核表达并纯化了S.pn ClpL蛋白,其作为一种在S.pn中保守存在的分泌型蛋白,可能是一种较好的疫苗候选蛋白.

    作者:钟文;张群;龚艺;张彦青;陈倩;陈特;董杰;王虹;张雪梅 刊期: 2012年第04期

  • 胰岛新生相关蛋白肽对体外培养的人胰岛细胞分泌胰岛素水平的影响

    目的 探讨胰岛新生相关蛋白肽(Islet neogenesis associated protein-pp,INGAP-pp)对体外培养的人胰岛细胞分泌胰岛素水平的影响.方法 取成人胰头癌患者手术中切除的胰腺组织正常胰尾部分,分离纯化胰岛进行体外培养,检测胰岛的生物学活性,并比较添加与不添加INGAP-pp培养的胰岛分泌胰岛素能力的变化.结果 分离纯化的胰岛具有良好的生物学活性.在体外培养21 d后,未添加INGAP-pp的胰岛分泌胰岛素的能力逐渐丢失,胰岛形态发生显著变化,细胞团崩解后细胞逐渐死亡;而添加了INGAP-pp的胰岛形态保持相对良好,且胰岛素分泌水平从培养的第6天起均显著高于未添加组(P<0.05或P<0.01).结论 INGAP-pp能显著促进体外培养的人胰岛细胞分泌胰岛素.

    作者:任莉莉;齐晖;陈丽娟;李富荣 刊期: 2012年第04期

  • NaOH乙醇溶液和γ射线辐照两步法灭活壳聚糖中病毒工艺的建立

    目的 建立NaOH乙醇溶液和γ射线辐照两步法灭活壳聚糖中病毒的工艺.方法 以牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhoea virus,BVDV)和猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)为指示病毒,分别采用NaOH乙醇溶液和γ射线辐照法灭活壳聚糖中的BVDV和PPV,并对两种方法进行优化.以优化的灭活条件建立两步法灭活工艺,测定病毒滴度、壳聚糖相对分子质量、脱乙酰度和乙醇含量.结果 含8 mol/L NaOH的10%乙醇溶液,35℃处理1h后冻干,再采用γ射线辐照(5 kGy),BVDV和PPV的滴度均下降4 lgTCID50以上,同时,壳聚糖的相对分子质量仅降低8.4%,脱乙酰度无显著变化,未检出残留乙醇.结论 NaOH乙醇溶液和γ射线辐照两步法可有效灭活壳聚糖中的指示病毒,同时对壳聚糖质量影响较小,为保证壳聚糖作为生物材料及药用辅料使用的安全性提供了保障.

    作者:李博;张家骊;夏文水 刊期: 2012年第04期

  • COL1A1基因干扰对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响

    目的 探讨COL1A1基因干扰对人结肠癌HCT-8细胞增殖的影响.方法 将COL1A1基因干扰质粒pGPU6/GFP/Neo-COL1A1 (RNAi COL1A1)和阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC( PGNsN)瞬时转染入HCT-8细胞,并设空白对照组.转染后48~ 72 h,采用半定量RT-PCR法检测COL1A1基因在细胞中的转录水平;MTT法检测细胞的增殖活力;并将各组细胞接种至BALB/c小鼠上皮组织中,每隔6d分别测量小鼠体内肿瘤大小.结果 RNAi COL1A1组HCT-8细胞COL1A1基因的mRNA转录水平较PGNsN组和空白对照组显著降低(P<0.01).RNAi COL1A1组与PGNsN组和空白对照组比较,细胞的增殖活力有所降低,第4~7天差异有统计学意义(P<0.05),其中在第5和第6天差异极显著(P<0.01).RNAi COL1A1组小鼠体内肿瘤大小与PGNsN组和空白对照组比较,前18d差异无统计学意义(P>0.05);在第24天,显著小于两个对照组(P<0.05);在第30天,差异极显著(P<0.01).结论 COL1A1基因被干扰后,能够抑制HCT-8细胞增殖,为COL1A1成为癌症治疗的候选基因提供了实验依据.

    作者:李鹏;马艳娇;李建华;宫鹏涛;杨举;李赫;欧阳红生;张西臣 刊期: 2012年第04期

  • 山葵提取物对结肠癌SW480细胞增殖及抑癌基因P16INK4a mRNA转录水平的影响

    目的 研究山葵提取物对结肠癌SW480细胞增殖及抑癌基因P16INK4amRNA转录水平的影响.方法 采用不同浓度的山葵提取物作用于SW480细胞48 h后,MTT法检测其对SW480细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布的变化;RT-pCR检测抑癌基因P16INK4amRNA转录水平的变化.结果 山葵提取物对SW480细胞的增殖具有抑制作用,且呈浓度依赖性,IC50值约为130μmol/L;细胞的早期、晚期凋亡率呈浓度依赖性升高,细胞周期主要阻滞于G2期;细胞中抑癌基因P16INK4amRNA的转录水平下降,且呈浓度依赖性.结论 山葵提取物对SW480细胞的增殖具有抑制作用,并可诱导细胞凋亡;其通过抑制抑癌基因P16INK4amRNA的转录使细胞周期主要阻滞于G2期.

    作者:毛春梅;杨兰兰;刘先俊 刊期: 2012年第04期

  • 应用双启动子共表达体系提高人胰岛素原在毕赤酵母中的表达量

    目的 应用AOXl和GAP双启动子共表达体系提高人胰岛素原在毕赤酵母中的表达量.方法 用限制性内切酶EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切pMD18-T-HMPIDesB30质粒,回收含短C肽AAK并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物HMPIDesB30( Human mini-proinsulin des B30)片段,插入pGAPZαA载体中,构建重组质粒pGAPZαA-HMPIDesB30,电转化至经质粒pPIC9K-HMPIDesB30异位整合的胰岛素原分泌菌株FJ-H1(pPIC9K-HMPIDesB30/GS115)中,应用抗生素法筛选高表达菌株,并进行发酵试验.结果 重组质粒pGA PZαA-HM PIDesB30经双酶切及测序证实构建正确;经Zeocin筛选获得高表达量菌株FJ-H3.经30 L发酵罐发酵,FJ-H3菌株人胰岛素原的表达水平可达1.6 g/L,分别为FJ-H1菌株的1.6倍,FJ-H2菌株(pGAPZαA-HMPIDesB30/GS 115)的5.3倍;经质谱分析,胰蛋白酶酶切后的目的蛋白相对分子质量与理论值相符.结论 利用AOX1和GAP双启动子在毕赤酵母中高效表达了人胰岛素原类似物HMPIDesB30,为实现胰岛素的规模化制备奠定了基础.

    作者:李红亮;陈勇;陈海容;黄程;冯一建;梅翔;何跃;范开 刊期: 2012年第04期

  • 人白细胞介素-29基因的克隆及真核表达

    目的 克隆人白细胞介素-29 (Interleukin-29,IL-29)基因并进行真核表达.方法 提取人外周血单个核细胞( PBMC)总RNA,经逆转录合成cDNA,以其为模板,PCR扩增IL-29基因,插入真核表达载体pPIC9K,构建重组真核表达质粒pPIC9K-29,转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.结果 扩增的IL-29基因序列与GenBank中登录的序列(NM_172140)相同;重组表达质粒pPIC9K-29经双酶切及测序证实构建正确;表达产物经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量分别约30 000和27 000的特异蛋白条带,经Western blot分析,均可与羊抗人IL-29多抗发生特异性反应.结论 已克隆并在毕赤酵母GS115中表达了人IL-29,为进一步研究其生物学活性及其应用奠定了基础.

    作者:陈伟;于明磊;郑海军;郁心;邬敏辰;吴静 刊期: 2012年第04期

  • 骨髓源性神经组织干细胞的分离、培养及鉴定

    目的 分离、培养并鉴定SD大鼠骨髓中神经组织干细胞(Neural tissue committed stem cells,NTCSCs).方法 采用DMEM/F12(1∶1)无血清神经干细胞条件培养液,从大鼠骨髓中分离、培养克隆生长的NTCSCs,采用免疫组化法对骨髓NTCSCs及其分化进行鉴定,RT-PCR法检测骨髓NTCSCs中Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-Tubulin、GFAP基因mRNA的转录.结果 分离培养获得悬浮生长的细胞球,该细胞球表达神经干细胞标志Nestin及CXCR4,分化后表达神经元标志βⅢ-Tubulin和神经胶质细胞标志GFAP;该细胞中有Nestin、CXCR4、CD31、βⅢ-Tubulin、GFAP基因mRNA转录.结论 在骨髓中成功分离到NTCSCs,其具有神经生物学特征,可作为种子细胞,在临床中枢神经系统疾病的治疗及创伤的修复中具有广阔的应用前景.

    作者:李琳;张兴秀;王健;姜容;郑敏 刊期: 2012年第04期

  • 乙型脑炎病毒SA14-14-2株和P3株单克隆抗体的制备及应用

    目的 制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2株(简称SA)和P3株单克隆抗体,并进行初步应用.方法 分别用JEV SA株减毒活疫苗和P3抗原免疫BALB/c小鼠,交叉加强免疫1次,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,选择人血清白蛋白(HSA)抗体阴性、JEV抗体阳性的克隆进行2次亚克隆,制备腹水并纯化,对单抗及杂交瘤细胞进行鉴定.用SA单抗建立捕获ELISA法检测JEV抗体,竞争抑制ELISA法和双抗体夹心ELISA法检测JEV抗原含量.结果 经3次融合,共获得4株分泌抗JEV SA株单抗和3株分泌抗JEV P3株单抗的杂交瘤细胞株,未获得SA株和P3株共同决定簇的单抗;7株单抗均为IgG1型,特异性良好,但均无中和活性;SA株单抗的相对亲和力大小为:3DI> 5E3> 6H3> 4F12,均能识别SA相同的抗原表位;P3株单抗的相对亲和力大小为:1C7> 5H12> 3C4,均能识别P3相同的抗原表位;7株杂交瘤细胞于液氮中放置6个月及体外连续培养3个月后,制备的腹水抗体效价保持稳定;用5E3株SA单抗建立了检测JEV抗体的捕获ELISA法及检测JEV抗原的竞争抑制ELISA法和双抗体夹心ELISA法.结论 已制备了JEV SA株和P3株单克隆抗体;以SA株单抗建立的捕获ELISA法检测JEV抗体比间接ELISA法更简便,且敏感性更高,对于抗原浓度高的样品,双抗体夹心ELISA法检测比竞争抑制ELISA法更有优势.

    作者:周志军;施金荣;朱华松;王平;余模松 刊期: 2012年第04期

  • 国内10省市孕妇孕期IgG血型抗体效价与ABO新生儿溶血病的相关性分析

    目的 分析国内10省市孕妇孕期IgG血型抗体效价与ABO新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn,HDN)的相关性.方法 对本市300名孕妇及其丈夫进行ABO血型定型;对孕妇血清进行IgG抗-A和(或)抗-B效价测定;孕妇分娩后,对有HDN临床指征的患儿进行ABO血型定型及HDN 3项试验;分析本市及国内其他9省市孕妇IgG血型抗体效价与HDN的相关性.结果 本市300名孕妇的ABO血型均为0型,其丈夫为非0型(A、B或AB型).国内10省市HDN的发生率均随孕妇IgG血型抗体效价的升高而升高;各效价组HDN的发生率10省市间相比,差异均有统计学意义(P均<0.05);合计国内10省市数据,孕妇IgG血型抗体不同效价组间HDN的发生率均有统计学意义(P<0.05),孕妇IgG血型抗体效价与HDN的发生率呈正相关(r=0.866,P<0.05),以抗体效价32~64的HDN发生率增幅大(440%).结论 孕妇IgC血型抗体效价可作为评估HDN发生风险的指标之一,但并非唯一性指标,还应结合其他检测结果及孕妇临床状况综合分析,做出判断.

    作者:朱业华;伍伟健;马春会;郭如华;余晋林 刊期: 2012年第04期

  • 人胱抑素C的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备

    目的 构建人胱抑素C(Cystatin C,Cys C)基因原核表达质粒,表达并纯化带有硫氧还蛋白(Thioredoxin,Trx)的Trx-Cys C融合蛋白,并制备抗人Trx-Cys C多克隆抗体.方法 在不改变氨基酸序列的前提下,对Cys C的全长编码基因进行大肠杆菌同义密码子偏好性优化后,人工合成其序列,插入原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a(+ )-Cys C,转化大肠杆菌BL21( DE3),IPTG低温诱导表达.表达的融合蛋白经Ni-Sepharose 6FF纯化后,免疫新西兰大白兔,制备抗人Cys C 多克隆抗体,采用间接ELISA及Western blot进行鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确,获得的经同义密码子优化后的序列与预期一致;重组Cys C蛋白获得了可溶性表达,相对分子质量约为35 000,表达量约占菌体总蛋白的50%;纯化的重组蛋白纯度达90%以上,可被Cys C临床检测试剂盒所识别.制备的抗人Cys C多克隆抗体效价达1∶(5.12× 106)以上,并能特异性识别市售Cys C蛋白.结论 已成功原核表达并纯化了可溶性重组Cys C蛋白,并制备了高效价的抗人Cys C多克隆抗体,为进一步建立Cys C免疫学检测方法奠定了基础.

    作者:陈特;黄美容;王鹏;刘宇思;王虹;张雪梅;胥文春 刊期: 2012年第04期

  • 肠道病毒71型与甲型肝炎病毒灭活疫苗联合免疫效果的初步评价

    目的 初步评价肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)与甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus,HAV)灭活疫苗联合免疫小鼠诱导的特异性免疫应答水平以及两种抗原间的相互作用.方法 将HAV灭活疫苗和EV71灭活疫苗以不同剂量配比制成联合疫苗,免疫ICR小鼠后,通过ELISA法检测血清HAV抗体效价;固定病毒-稀释血清法检测血清EV71中和抗体效价;流式细胞术检测脾脏中淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的百分率;ELISPOT法检测脾脏中淋巴细胞分泌IL-4和IFNγ的水平.结果 初免后28 d和加强免疫后7d,各组小鼠血清中EV71中和抗体阳转率均达100%,单价疫苗组和联合疫苗组EV71中和抗体效价均呈剂量依赖性;初免后28 d,小鼠血清中能够产生保护性HAV抗体,加强免疫后抗体水平升高;联合疫苗组与相应的单价疫苗组间抗体水平差异无统计学意义(P>0.05),未发现EV71与HAV的相互作用;初免后28 d,各组小鼠脾脏中CD8+细胞比例高于CD4+细胞(P<0.001),加强免疫后7d则相反(P<0.001);初免后28 d,HAV全病毒和EV71多肽均不能刺激各组小鼠脾细胞产生阳性反应,加强免疫后7d,各组小鼠脾细胞分泌IL-4的水平均高于IFNγ(P<0.05).结论 一定剂量的HAV和EV71联合疫苗可诱导小鼠产生良好的体液免疫应答,同时诱导细胞免疫应答,但相对较弱,未发现两种抗原间存在相互干扰或协同作用.

    作者:杨婷;李华;龙润乡;杨蓉;董承红;蒋蕊鞠;崔萍芳;白惠珠;谢忠平 刊期: 2012年第04期

  • 猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

    目的 建立基于TaqMan探针的猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)荧光定量PCR检测方法.方法 根据PCV2ORF2的相对保守序列,设计两对特异性引物及TaqMan探针,制备重组质粒标准品;优化反应体系及反应条件,绘制标准曲线,建立PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法,并验证其敏感性、特异性及重复性;用建立的方法对50份临床样本进行检测,并与普通PCR检测结果进行比较.结果 重组质粒标准品经PCR及测序鉴定构建正确;建立的定量标准曲线Ct值与模板拷贝数对数之间呈良好的线性关系,相关系数R2为0.993 85;该方法的敏感性为6×101拷贝/μl,比普通PCR高2个数量级;检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪瘟兔化弱毒均无扩增曲线;检测3份PCV2阳性模板的变异系数在0.07%~0.50%之间;临床样本的阳性检出率(64%)明显高于普通PCR(44%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 建立的PCV2 TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较高的敏感性、特异性和重复性,适用于临床样本中微量PCV2的快速检测及其组织亲嗜性、细胞培养特性的研究.

    作者:陈蓉;王艳;魏建忠;刘军军;孙裴;殷宗俊;李郁 刊期: 2012年第04期

  • p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制

    目的 探讨高尔基体囊泡转运蛋白(Golgi-vesicular transport protein)p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响及其机制.方法 采用脂质体法将质粒pGPU6/GFP/Neo/p115(p115 shRNA)和阴性对照质粒(shNC)分别转染至BGC-823细胞中,并设空白对照组.转染后48 h,采用RT-PCR、Westemblot和细胞免疫荧光法检测各组细胞中p115基因及蛋白表达的变化,及其对巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质金属蛋白酶-2( Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、MMP-9基因和蛋白表达的调节;细胞划痕及Transwell小室试验检测细胞迁移及侵袭能力的变化.结果 p115 shRNA组细胞中p115、MIF、MMP-2、MMP-9在基因和蛋白水平的表达均较shNC组和空白对照组明显下降(P<0.01 );p115shRNA组细胞的划痕愈合能力明显低于两个对照组(P<0.01);p115 shRNA组的穿膜细胞数明显低于两个对照组(P<0.01).结论 在BGC-823细胞中,抑制P115的表达后,可能通过下调MIF、MMP-2、MMP-9的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭运动.

    作者:闫田静;易永芬;邓玮;文雪;屈玉玲 刊期: 2012年第04期

中国生物制品学杂志

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