武晓云；王世立
目的 观察注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用.方法 将SD大鼠随机分为4组,分别经皮下注射RCT-18 129、37、11 mg/(kg·d)和0.9％ NaCl注射液,每2d给药1次.雄鼠连续给药5周、雌鼠连续给药2周后,按雌雄1∶1的比例合笼交配,合笼期为2周,计算交配率.雄鼠继续给药至交配成功,雌鼠继续给药至妊娠第6天.实验过程中观察动物的一般反应、体重及摄食量变化.确定雌鼠受精后处死雄鼠,解剖检查睾丸和附睾等生殖器官.于妊娠第15天解剖孕鼠,综合评价妊娠及胚胎形成和早期发育等情况.结果 RCT-18高、中、低剂量组雌性和雄性大鼠均未出现明显的母体毒性反应.各组大鼠各脏器均未见肉眼可见的异常.各剂量RCT-18对大鼠的交配率、妊娠率、生殖系统脏器重量和系数以及早期胚胎发育均无明显影响.结论 RCT-18对SD大鼠的生育力及早期胚胎发育无明显毒性作用.
作者：宋翼升；杨红忠；张立将；由振强；周国亮；潘水珍；谢方；黄敏；王文祥；房健民；宣尧仙 刊期： 2011年第11期
目的 探讨骨化三醇( Calcitriol)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的治疗作用及相关机制.方法 用含200 μg髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55肽段(Myelin oligodendrocyte glycoprotein 33-35,MOG33-35)、250 μg结核菌素的50μl弗氏不完全佐剂(IFA)皮内免疫C57BL/6小鼠,并分别于免疫当天和第2天注射百日咳毒素,建立EAE实验性动物模型(EAE组)；骨化三醇组从免疫当天起隔日腹腔注射骨化三醇100 ng进行治疗,观察两组小鼠临床评分的差异；于EAE发病高峰期处死小鼠,取脊髓及淋巴结,通过HE及LFB染色观察脊髓中炎细胞浸润及髓鞘脱失；采用流式细胞术检测两组淋巴细胞CD4+T细胞亚型的分布.结果 与EAE组比较,骨化三醇组发病延缓且发病较轻,临床评分差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01或P＜0.001)；骨化三醇组较EAE组小鼠脊髓白质炎性细胞浸润明显减少,脱髓鞘斑块明显减轻；骨化三醇组与EAE组相比,Th17细胞亚群明显受到抑制(P＜0.05),而Th2和Treg细胞水平明显升高(P均＜0.05).结论 骨化三醇可以延缓EAE发病,减轻临床症状及病理改变,并能够通过调节CD4+T细胞亚群平衡,即抑制Th17细胞,上调Th2和Treg细胞水平发挥对EAE的预防和治疗作用.
作者：汪占文；杨金凤；孔庆飞；詹晓霞；穆莉莉；李乐乐；孙博；张瑶；王广友；李呼伦；张迎庆；周明言 刊期： 2011年第11期
目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231中u-PA、uPAR、ERK表达的影响.方法 将MDA-MB-231 (ER-)细胞分为4组:UTI组(UTI 800 U/ml)、TXT组(TXT 3.7 μg/ml)、UTI+TXT组(UTI 800 U/ml+ TXT3.7μg/ml)、对照组(等量生理盐水).给药后24h,分别采用荧光定量RT-PCR检测各组细胞中uPA、uPAR、ERK基因mRNA的水平,Western blot法检测各组细胞中uPA、uPAR、p-ERK1/2蛋白的表达水平.结果 UTI组和UTI+ TXT组MDA-MB-231 (ER-)细胞中uPA和uPAR基因mRNA的水平均明显低于对照组(P＜0.05),而TXT组中二者的表达水平均明显高于对照组(P＜0.01),各组间ERK基因mRNA的水平差异无统计学意义(P＞0.05)；UTI组和UTI+ TXT组中uPA、uPAR和p-ERK1/2蛋白的表达水平均明显低于对照组(P＜0.01),而TXT组中3种蛋白的表达水平均明显高于对照组(P＜0.05).结论 UTI可抑制MDA-MB-231细胞中uPA、uPAR、p-ERK的表达,而TXT可上调三者的表达.
作者：罗杰；高峰；赵晓亮；孙治君 刊期： 2011年第11期
目的 评价梯形微板法在ABO反定型中的应用.方法 采用梯形微板进行血型抗原抗体免疫学反应,利用高科技摄像数码分析技术进行凝集判别,确定血型,分析该方法的准确性、可靠性、重复性和脂血抗干扰性,同时以U型微板法作平行对照.结果 梯形微板法的准确性为99.97％,可靠性较高,重复性为100％,且能有效避免脂血的干扰,各项指标均优于U型微板法.结论 梯形微板法在ABO反定型鉴定中是一项准确性高、稳定性好的检测手段,更适合于血站系统的大批量标本的结果处理.
作者：杜雪宁；刘芳兰；王振卿；张来玉 刊期： 2011年第11期
目的 建立b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)多糖(Polyribosylribitolphosphate,PRP)的ELISA检测方法.方法 用灭活的Hib菌免疫家兔,1周免疫4次,共免疫6周,采血,检测血清抗体滴度.对兔免疫血清进行非特异性抗体免疫吸附,纯化兔抗PRP抗体,用纯化的兔抗PRP抗体包被酶标板,HRP标记的羊抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA法检测PRP.确定标准曲线的佳线性范围,并对方法进行特异性、准确性和精密性验证.结果 兔免疫血清的抗体效价可达1∶2 800.该方法的线性检测范围为0.030～0.500 ng/ ml,检测限为0.030 ng/ml.该方法检测大肠杆菌上清蛋白、牛血清白蛋白、LB培养基及破伤风-乙脑结合疫苗均无特异性反应；检测0.500、0.250、0.150 ng/ml的PRP标准品试验内变异系数(CV)在1.16％～2.40％之间,回收率在93.2％～107.2％之间；试验间CV在1.57％～4.11％之间,回收率在101.3％～101.6％之间.结论 该方法特异性、准确性和精密性均较好,可以特异性检测b型流感嗜血杆菌多糖.
作者：祝婧烨；沈坚；秦洁；马相虎；王维；瞿爱东 刊期： 2011年第11期
目的 研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白.方法 用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价；采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型；按本公司静脉注射人免疫球蛋白( Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较.结果 筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5％,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49％,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)“血液制品生产用人血浆规程”要求；甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主；制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白制检规程”要求.结论 成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义.
作者：杨汇川；张燕；高阳；何建琴；吕加成；刘素芳；王焰；吴强；杨春；张雪梅 刊期： 2011年第11期
肺炎球菌表面黏附素A(Pneumococcal surface adhesin A,PsaA)为脂蛋白,属于ABC型转运蛋白复合物(ATPbinding cassette transporter),存在于各型肺炎球菌中,是其重要的毒力因子和黏附因子,编码基因高度保守,具有转运Mn2+及黏附功能.肺炎球菌表面膜蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA)是与其毒力相关的一种重要的表面抗原,在目前发现的所有临床分离的肺炎球菌中几乎均存在,其编码基因变异性较大.PsaA和PspA均为肺炎球菌的保护性抗原和新型肺炎球菌疫苗的研发热点之一.本文就这两种蛋白的结构、功能、免疫学特性及应用的研究进展作一综述.
作者：唐玉龙 刊期： 2011年第11期
目的 原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽skl、sk2、sk3及3条肽段串联序列.方法 用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆人原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化.SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性.结果 分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒；his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应；经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量高,可达40 mg/L,纯度超过90％.结论 已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础.
作者：袁作为；张君；胡接力；张秀瑜；黄爱龙；郑建 刊期： 2011年第11期
目的 提取、纯化牛心肌肌钙蛋白T( Cardiac troponin T,cTnT),并制备其单克隆抗体.方法 采用组织匀浆、蛋白层析技术提取、纯化牛cTnT,紫外分光光度法检测其浓度；SDS-PAGE检测其纯度；间接ELISA法检测其反应特性.将纯化的牛cTnT免疫小鼠,进行细胞融合,间接ELSIA法筛选阳性杂交瘤细胞株,采用小鼠体内法制备腹水.结果 纯化的两批牛cTnT浓度分别为0.246和0.336 mg/ml；相对分子质量约为37 000,纯度分别为86.02％和93.77％；纯化的cTnT蛋白可与鼠抗牛cT-nT单克隆抗体结合.共获得5株分泌抗牛cTnT单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中,阳性杂交瘤细胞株3B10腹水抗体效价达1∶10240.结论 已成功提取、纯化了牛cTnT,并建立了稳定分泌抗牛cTnT单抗的杂交瘤细胞株,为cTnT检测试剂盒的国产化奠定了基础.
作者：付海英；崔衢；吴静；李勇；施雨露；王艳玲；李一 刊期： 2011年第11期
目的 建立第6代百日咳疫苗效力国家标准品.方法 选用百日咳菌株(沪64-21),发酵罐培养,收获的百日咳菌液经脱毒灭活后,分装冻干,作为备选品,按《中国药典》三部(2010版)进行无菌试验、血清学试验、水分含量及百日咳特异性毒性检测.以WHO标准品PWIS和中国百日咳疫苗效力国家标准品3号、5号为标准,经5个实验室进行协作标定,并考察其效力稳定性.结果 该备选标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定；经协作标定45次,分别以国家标准品3号、5号和WHO标准品为标准进行量值溯源,标定结果差异无统计学意义(P＞0.05)；终合并效价为13 IU/ml (95％ CI=12.23～13.26 IU/ml)；保存期内标准品的效力稳定.结论 该备选标准品各项指标均符合要求,可作为新的第6代百日咳疫苗效力国家标准品使用.
作者：骆鹏；沈立濛；孙琦；徐永革；祖俊；徐颖华；王丽婵；卫辰；侯启明；史峥；郁佳俊；叶娟；郭玉芬；高慧；潘海龙；刘玲；杨邦玲；张庶民 刊期： 2011年第11期
目的 探讨普洱茶水提物对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响.方法 以佛波酯处理THP-1细胞48 h,分化得到巨噬细胞,以其为炎症细胞模型,用不同浓度的普洱茶水提物(125、250 μg/ml)与终浓度为100 EU/ml的脂多糖的混合物作用于巨噬细胞,ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的含量.结果 普洱茶水提物能有效抑制巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌,且浓度为250 μg/ml的普洱茶水提物对TNF-α分泌的抑制作用强于浓度为125 μg/ml的普洱茶水提物,呈剂量依赖性.结论 普洱茶水提物对巨噬细胞炎症因子TNF-α的分泌具有抑制作用.这种效果与已知的绿茶抗炎的主要成分EGCG无关.
作者：李春磊；王宣军；宋爽；李冬青；师思；郝淑美；盛军 刊期： 2011年第11期
目的 建立马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺.方法 制备并纯化破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及重组破伤风毒素c片段(Recombinant tetanus toxin C fragment,rTT-C),将TT/rTT-C(2∶1)免疫马匹,待血清抗体效价达3 500 IU/ml时,采血,分离血清,灭活,去除外源蛋白,胃蛋白酶消化制备F(ab′)2,经DEAE柱层析纯化,并对其进行中和抗体效力、安全性和稳定性检测.结果 纯化的TT和rTT-C的浓度分别为70 000 Lf/L和4～5 mg/L,纯度分别达95％以上和96％以上；纯化的TAT-F( ab′)2收率为1.4％,纯度达91％以上,中和抗体效价＞15 000 IU/ml；其安全性及稳定性均符合《中国药典》三部(2005版)要求,有效期暂定为18个月.结论 建立了马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)2新的制备工艺,制备的制品达到甚至超过了国外的质量标准,为马抗血清同类制品的升级换代提供了技术支持.
作者：刘永祥；赵忠鹏；罗德炎；陈中伟；杨涛；王希良；高俊杰 刊期： 2011年第11期
目的 观察甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转时限.方法 选择2009年9月16～27日我院收治的甲型H1N1流感确诊病例38例,经同一名医生进行咽拭子采集,采用RT-PCR方法检测甲型通用、甲1通用、季节性流感、甲型H1N1亚型4个病毒亚型,以甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型均阴转作为判定病毒核酸阴转的标准.结果 38例甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转的时限短1d,长14d,平均4.5d；病毒核酸阴转时间主要集中在第3、4、5天,第5天与第4天相比,甲型通用、甲1通用和甲型H1N1的阴转比例均明显增加(P＜0.05)；发病36 h内接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为4.1d;37～72 h接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为5.2d；有3例甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型病毒核酸未同时阴转.结论 甲型H1N1流感抗病毒治疗1周,大部分患者病毒核酸阴转,不具有传染性；尽早(36 h内)接受抗病毒治疗,可以缩短病毒核酸阴转时间；甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型具有较好的一致性,对三者未同时阴转的情况,应注意是否同时合并其他甲型流感病毒亚型感染.
作者：崔文玉；闫世明；赵云虹；杨光绪；张智勇；于关成 刊期： 2011年第11期
目的 建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测.方法 用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性；在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFTT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值；并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证；用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性.结果 狂犬病病毒抗原AG:CTN-1 =4∶1为适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00 ～ 33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r＞0.99),低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU.该方法检测人血白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应；试验内变异系数在6.68％～7.84％之间；回收率在97.25％ ～104.50％之间；试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P＞0.05).该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性；与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P＞0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801.结论 已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查.
作者：王伟伟；王远征；张国强；马昱 刊期： 2011年第11期
目的 观察卡介菌多糖核酸对过敏性鼻炎合并哮喘的临床治疗效果.方法 将98例2001年初～2009年初在吉林市中心医院耳鼻喉科就诊的过敏性鼻炎合并哮喘患者随机分为治疗1组、治疗2组及对照组,3组均给予相同的过敏哮喘基础治疗,治疗1组再经肌肉注射卡介菌多糖核酸(BCG polysaccharide and nucleic acid,BCG-PSN)注射液,疗程3个月；治疗2组再经肌肉注射BCG-PSN,疗程6个月；对照组只进行基础治疗,不给予BCG-PSN.观察疗程结束后1年内3组患者过敏性鼻炎及哮喘的发作情况,根据哮喘的发作次数及程度判断疗效.结果 疗程结束后0～6个月内,治疗1组和治疗2组的过敏性鼻炎及哮喘的临床症状明显好转,显效率和总有效率均明显高于对照组(P＜0.05或P＜ 0.01)；疗程结束后7～ 12个月,治疗2组的显效率和总有效率均明显高于对照组(P均＜0.05).BCG-PSN治疗中未见明显不良反应.结论 BCG-PSN治疗过敏性鼻炎合并哮喘疗效确切,安全可靠,远期疗效与疗程有关.
作者：王敏；何巍；王伟善；周欣 刊期： 2011年第11期
目的 克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用.方法 以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性.结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4％,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90％,浓度为0.5mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用.结论 已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据.
作者：熊玉霞；杨致邦；于拽拽；戴维；蒋任举；蒋英 刊期： 2011年第11期
目的 建立重组复杂蛋白快速表达体系.方法 利用定点整合技术建立定点整合宿主细胞库,分别以X-Fc融合蛋白和人凝血因子Ⅷ(FⅧ)为研究对象进行定点整合转染和表达分析.结果 通过定点整合转染建立了高表达的宿主细胞库；X-Fc融合蛋白和人FⅧ均在宿主细胞中获得了高表达,X-Fc融合蛋白的表达量为220 mg/L,人FⅧ在有血清培养条件下的酶活性为2 IU/ml,且细胞株表达稳定,易于扩大培养.结论 已成功建立了基于CHO细胞定点整合的重组复杂蛋白快速表达体系,该体系在克隆效率和时间上具有很大优势,可实现蛋白的有效快速表达.
作者：何太平；杨波；谭晓晶；唐菁燕；雷韬；宋春雷；聂艳桃；徐珑 刊期： 2011年第11期
目的 优化皮上划痕人用炭疽活疫苗的运输条件及活菌数测定方法.方法 用平皿培养菌落计数法对厂家先后2次送检(第1次为常温下运输3d,第2次为低温下运输6h)的皮上划痕人用炭疽活疫苗进行活菌数测定；对第2次送检的7批疫苗分别使用吸量管和移液器取样进行活菌数测定；取第2次送检的1批疫苗,分别使用吸量管和移液器取样进行5次活菌数测定,比较两种工具测定的精密度.结果 第1次送检的7批疫苗活菌数均不符合规定,第2次送检的疫苗活菌数显著高于第1次送检样品(P＜0.01),均符合规定；使用吸量管和移液器取样对活菌数测定结果影响不大,差异无统计学意义(P＞0.05)；使用移液器取样测定活菌数的变异系数(11.3％)明显低于使用吸量管取样测定活菌数的变异系数(23.0％).结论 炭疽活疫苗在送检过程中必须低温运输；使用移液器取样测定活菌数精密度高且操作方便,有利于制品的质量控制.
作者：魏东；李恪梅；王秉翔；王国治 刊期： 2011年第11期
目的 应用生物信息学方法分析Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶(New Delhi metallo-β-1actamase 1,NDM1)的基本性质,并与常见的β内酰胺类抗生素进行分子对接,在理论上研究NDM1对β内酰胺类抗生素和抑制剂的水解活性.方法 应用EMBOSS 6.3.1.1软件包的程序分析NDM1的基本性质,并分别利用SWISS-MODEL同源建模和PHYRE 2.0折叠识别法构建NDM1的空间结构,再运用Arguslab 4.0软件的dock模块进行β内酰胺类抗生素与NDM1分子对接.结果 NDM1共270个氨基酸残基,理论等电点为6.3,包含1个跨膜区,α螺旋占27％,β折叠占34.5％；与抗生素对接能量由低到高依次为氨苄西林、头孢拉啶、阿莫西林、头孢唑林、甲氧西林、美罗培南、亚胺培南、氨曲南、克拉维酸.结论 NDM1对氨苄西林催化效率高,对氨曲南催化效率低,克拉维酸对NDM1无抑制作用.
作者：曾建涛；李泉 刊期： 2011年第11期
目的 研究聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide-co-polyethylene glycol,PELA)包裹哈维弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK制备的微球疫苗的部分特性及其对鲫鱼(Carassius auratus gibelio)的口服免疫效果.方法 用可生物降解的合成高分子材料PELA,通过乳化溶剂挥发法包裹OmpK,制备微球疫苗,Bradford法测定蛋白浓度,计算蛋白包裹率；通过扫描电镜观察微球粒径大小及其在4℃保存不同时间的形貌.取鲫鱼随机分为3组:微球疫苗组、OmpK蛋白组和空白对照组,前两组采用疫苗或蛋白拌饲投喂方式口服免疫,投喂3d,间隔7d,再投喂3d加强免疫；对照组投喂不含疫苗的饲料.加强免疫4周和8周后,经腹腔注射20LD50的Vh EcGS020802株攻击,记录各组鱼死亡数,计算相对免疫保护率.结果 制备的PELA-OmpK微球疫苗中OmpK蛋白的包裹率达78％.微球粒径小于12μm,且90％微球的粒径小于5μm.4℃保存10d微球表面光滑、圆整；保存30 d PELA微球降解,粒径较大的微球表面出现空洞；保存60 d可见大量碎片,微球表面毛糙松散,出现多个空洞.微球疫苗加强免疫鲫鱼4周和8周后,对活菌攻击的相对免疫保护率分别为70％和48％,而口服OmpK蛋白组和空白对照组鱼全部死亡.结论 用PELA包裹裸疫苗制备成微球疫苗,对抗原具有一定的保护作用,PELA用作鱼类口服疫苗的投递载体是可行的.
作者：任燕；张小江；常藕琴；陶家发；赖迎迢；石存斌；吴淑勤 刊期： 2011年第11期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
