学术投稿

狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法的建立及初步应用

王伟伟;王远征;张国强;马昱

关键词:狂犬病病毒, 抗体, 酶联免疫吸附测定, 快速免疫荧光抑制试验
摘要:目的 建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,用于不同株狂犬病疫苗免疫后抗体水平的检测.方法 用市售的不同狂犬病疫苗株抗原免疫NIH小鼠,制备免疫血清,用不同的疫苗株抗原包被酶标板,分别测定小鼠血清抗体效价,并通过不同株抗原抗体的交叉中和实验,分析抗原的差异性;在此基础上,将不同毒株抗原按不同比例混合包被酶标板,分别测定阳性血清样本,并与快速免疫荧光抑制试验(RFFTT)检测结果比较,确定包被抗原模式,建立狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,绘制标准曲线,确定佳定量范围及灵敏度,确定Cut-off值;并对其特异性、精密性、准确性及稳定性进行验证;用建立的方法与其他市售狂犬病病毒抗体检测试剂分别检测血清样品,分析检测结果的一致性及相关性.结果 狂犬病病毒抗原AG:CTN-1 =4∶1为适包被抗原模式,试剂经优化后,检测抗体效价范围在535.00 ~ 33.44 mIU/ml之间,具有良好的线性关系(r>0.99),低检出限为8.36 mIU/ml,Cut-off值为0.735 mIU.该方法检测人血白蛋白、破伤风阳性血清、乙肝表面抗原阳性血清、白喉阳性质控血清均未发生反应;试验内变异系数在6.68%~7.84%之间;回收率在97.25% ~104.50%之间;试剂置37℃3 d,与4℃保存试剂测定结果差异无统计学意义(P>0.05).该方法检测血清样品与市售狂犬病病毒抗体检测试剂比较,均具有良好的一致性;与RFFIT测定结果比较,二者差异无统计学意义(P>0.05),回归方程为Y=-0.475+3.246 X,相关系数为0.801.结论 已建立了狂犬病病毒抗体竞争ELISA检测方法,可用于大规模狂犬病病毒抗体的筛查.
中国生物制品学杂志相关文献
  • Notch2胞内段基因过表达对K562细胞增殖的影响及其机制

    目的 探讨外源性Notch2胞内段基因过表达对慢性粒细胞白血病(Chronic myeloid leukemia,CML)细胞株K562增殖的影响及其机制.方法 将携带Notch2胞内段(ICN2)基因的质粒转染K562细胞,MTT法检测细胞的增殖;流式细胞仪检测细胞的细胞周期分布;RT-PCR检测Notch2基因全长mRNA的转录,Western blot检测Notch2蛋白的表达;RT-PCR检测Notch通路下游靶基因Hes1、Hey1及细胞增殖、凋亡相关基因numb、Bcl-2、NF-κB和TGF-β1的mRNA转录水平.结果 与未转染组相比,转染组K562细胞数量减少,增殖显著受抑(P<0.01);转染48 h后的K562细胞G1期细胞比例显著增多(P<0.01),S期细胞比例显著减少(P<0.01);Notch2基因mRNA及下游靶基因Hes1和Hey1 mRNA转录水平均明显增强(P<0.01),Notch2蛋白表达量增加(P<0.01);numb基因mRNA转录水平无变化;Bcl-2表达下调,NF-κB和TGF-β1表达上调.结论 Notch2胞内段基因过表达可抑制K562细胞增殖,其机制可能是通过上调TGF-β1和NF-κB基因表达及下调Bcl-2基因表达,将细胞阻滞于G1期来实现的.

    作者:杨春秀;陈建斌;张树君;李芳菲;杨泽松 刊期: 2011年第11期

  • 钩体疫苗免疫小鼠佳剂量的筛选

    钩端螺旋体病(钩体病)为一种分布广泛的人兽共患病,呈世界范围流行,我国为该病的高发地区之一.接种安全、有效的疫苗是预防钩体病的有效手段.为研究人用钩体疫苗免疫小鼠的佳剂量,为进一步研究疫苗的安全性及有效性提供依据,本文采用上海生物制品研究所生产的三价钩体疫苗(包括黄疸出血型、流感伤寒型、秋季型,每型菌不少于1.5×108条/ml,剂量5ml)免疫小鼠,筛选佳免疫剂量,为下一步多种疫苗联合接种的研究奠定基础.

    作者:王亚玉;易彬樘;卢娟;闫永平 刊期: 2011年第11期

  • 恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统的构建及表达

    目的 构建恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统并进行表达.方法 应用基因重组技术构建含pfs25基因的醇氧化酶启动子1(Alcohol oxidase promoter 1,AOX1)重组质粒pICpfs25和三磷酸甘油醛脱氢酶启动子(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAP)重组质粒pGAPpfs25,取酶切鉴定和测序正确的重组质粒电转化毕赤酵母菌GS115,获得毕赤酵母重组体ICpfs25和GAPpfs25,并构建含两种启动子的酵母重组体IC-GAP/2pfs25,甲醇诱导pfs25基因表达,Western blot分析表达产物的反应原性,ELISA分析各重组体表达上清中Pfs25蛋白的含量.结果 各重组体的表达产物经SDS-PAGE分析均可见相对分子质量约25 000的Pfs25蛋白条带,双启动子重组体Pfs25蛋白的表达量约占表达上清的70%,明显高于单一启动子重组体,且双启动子重组体Pfs25蛋白的表达量随着补加甲醇量的增加而逐渐增加;各重组体的表达产物均可与小鼠抗Pfs25单抗487特异性结合;双启动子重组体表达上清的ELISA反应明显强于其他重组体表达上清.结论 已构建了恶性疟原虫合子表面蛋白Pfs25毕赤酵母双启动子表达系统,两种启动子共同作用可明显提高目的蛋白的表达量.

    作者:雷清;刘晓;陈勇;陆俭;蒋琳 刊期: 2011年第11期

  • 38例甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转时限的观察

    目的 观察甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转时限.方法 选择2009年9月16~27日我院收治的甲型H1N1流感确诊病例38例,经同一名医生进行咽拭子采集,采用RT-PCR方法检测甲型通用、甲1通用、季节性流感、甲型H1N1亚型4个病毒亚型,以甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型均阴转作为判定病毒核酸阴转的标准.结果 38例甲型H1N1流感患者病毒核酸阴转的时限短1d,长14d,平均4.5d;病毒核酸阴转时间主要集中在第3、4、5天,第5天与第4天相比,甲型通用、甲1通用和甲型H1N1的阴转比例均明显增加(P<0.05);发病36 h内接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为4.1d;37~72 h接受抗病毒治疗者,病毒核酸阴转平均时间为5.2d;有3例甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型病毒核酸未同时阴转.结论 甲型H1N1流感抗病毒治疗1周,大部分患者病毒核酸阴转,不具有传染性;尽早(36 h内)接受抗病毒治疗,可以缩短病毒核酸阴转时间;甲型通用、甲1通用、甲型H1N1亚型具有较好的一致性,对三者未同时阴转的情况,应注意是否同时合并其他甲型流感病毒亚型感染.

    作者:崔文玉;闫世明;赵云虹;杨光绪;张智勇;于关成 刊期: 2011年第11期

  • 注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用

    目的 观察注射用重组人B淋巴细胞刺激因子受体-抗体融合蛋白(RCT-18)对大鼠生育力及早期胚胎发育的毒性作用.方法 将SD大鼠随机分为4组,分别经皮下注射RCT-18 129、37、11 mg/(kg·d)和0.9% NaCl注射液,每2d给药1次.雄鼠连续给药5周、雌鼠连续给药2周后,按雌雄1∶1的比例合笼交配,合笼期为2周,计算交配率.雄鼠继续给药至交配成功,雌鼠继续给药至妊娠第6天.实验过程中观察动物的一般反应、体重及摄食量变化.确定雌鼠受精后处死雄鼠,解剖检查睾丸和附睾等生殖器官.于妊娠第15天解剖孕鼠,综合评价妊娠及胚胎形成和早期发育等情况.结果 RCT-18高、中、低剂量组雌性和雄性大鼠均未出现明显的母体毒性反应.各组大鼠各脏器均未见肉眼可见的异常.各剂量RCT-18对大鼠的交配率、妊娠率、生殖系统脏器重量和系数以及早期胚胎发育均无明显影响.结论 RCT-18对SD大鼠的生育力及早期胚胎发育无明显毒性作用.

    作者:宋翼升;杨红忠;张立将;由振强;周国亮;潘水珍;谢方;黄敏;王文祥;房健民;宣尧仙 刊期: 2011年第11期

  • 第6代百日咳疫苗效力国家标准品的建立

    目的 建立第6代百日咳疫苗效力国家标准品.方法 选用百日咳菌株(沪64-21),发酵罐培养,收获的百日咳菌液经脱毒灭活后,分装冻干,作为备选品,按《中国药典》三部(2010版)进行无菌试验、血清学试验、水分含量及百日咳特异性毒性检测.以WHO标准品PWIS和中国百日咳疫苗效力国家标准品3号、5号为标准,经5个实验室进行协作标定,并考察其效力稳定性.结果 该备选标准品的各项检测指标均符合国家标准品的规定;经协作标定45次,分别以国家标准品3号、5号和WHO标准品为标准进行量值溯源,标定结果差异无统计学意义(P>0.05);终合并效价为13 IU/ml (95% CI=12.23~13.26 IU/ml);保存期内标准品的效力稳定.结论 该备选标准品各项指标均符合要求,可作为新的第6代百日咳疫苗效力国家标准品使用.

    作者:骆鹏;沈立濛;孙琦;徐永革;祖俊;徐颖华;王丽婵;卫辰;侯启明;史峥;郁佳俊;叶娟;郭玉芬;高慧;潘海龙;刘玲;杨邦玲;张庶民 刊期: 2011年第11期

  • 梯形微板法在ABO反定型中的应用

    目的 评价梯形微板法在ABO反定型中的应用.方法 采用梯形微板进行血型抗原抗体免疫学反应,利用高科技摄像数码分析技术进行凝集判别,确定血型,分析该方法的准确性、可靠性、重复性和脂血抗干扰性,同时以U型微板法作平行对照.结果 梯形微板法的准确性为99.97%,可靠性较高,重复性为100%,且能有效避免脂血的干扰,各项指标均优于U型微板法.结论 梯形微板法在ABO反定型鉴定中是一项准确性高、稳定性好的检测手段,更适合于血站系统的大批量标本的结果处理.

    作者:杜雪宁;刘芳兰;王振卿;张来玉 刊期: 2011年第11期

  • 乌司他丁和泰索帝对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中uPA、uPAR、ERK表达的影响

    目的 探讨乌司他丁(Ulinastatin,UTI)和泰索帝(Taxotere,TXT)对体外培养的人乳腺癌细胞MDA-MB-231中u-PA、uPAR、ERK表达的影响.方法 将MDA-MB-231 (ER-)细胞分为4组:UTI组(UTI 800 U/ml)、TXT组(TXT 3.7 μg/ml)、UTI+TXT组(UTI 800 U/ml+ TXT3.7μg/ml)、对照组(等量生理盐水).给药后24h,分别采用荧光定量RT-PCR检测各组细胞中uPA、uPAR、ERK基因mRNA的水平,Western blot法检测各组细胞中uPA、uPAR、p-ERK1/2蛋白的表达水平.结果 UTI组和UTI+ TXT组MDA-MB-231 (ER-)细胞中uPA和uPAR基因mRNA的水平均明显低于对照组(P<0.05),而TXT组中二者的表达水平均明显高于对照组(P<0.01),各组间ERK基因mRNA的水平差异无统计学意义(P>0.05);UTI组和UTI+ TXT组中uPA、uPAR和p-ERK1/2蛋白的表达水平均明显低于对照组(P<0.01),而TXT组中3种蛋白的表达水平均明显高于对照组(P<0.05).结论 UTI可抑制MDA-MB-231细胞中uPA、uPAR、p-ERK的表达,而TXT可上调三者的表达.

    作者:罗杰;高峰;赵晓亮;孙治君 刊期: 2011年第11期

  • 重组戊型肝炎病毒抗原ELISA检测方法的建立

    目的 建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测.方法 以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证.用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率.结果 建立的ELISA方法线性范围为2~128 ng/ml,低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2( IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应;该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95. 13%~104.50%之间,试验内及试验间变异系数均<15%;包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5d,其检测HEV抗原内部参考品的A 450值及敏感性均未发生显著变化;3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95%,符合相关质控要求.结论 已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测.

    作者:陈子杨;吴业红;张健锋;常军亮;时成波;贾媛;郭立君;李春晖 刊期: 2011年第11期

  • 乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA及其检测的研究进展

    共价闭合环状DNA (Covalently closed circular DNA,cccDNA)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)复制的模板,也是慢性乙肝患者持续感染的主要原因.由于核苷类药物对cccDNA无抑制作用,因此不能从根本上清除病毒,也就不能彻底治疗乙肝.本文对HBV cccDNA的新研究进展及检测作一综述.

    作者:苏怀彬;胡接力 刊期: 2011年第11期

  • 分枝杆菌噬茵体D29裂解酶gp10的原核表达及抗脓肿分枝杆菌活性

    目的 克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用.方法 以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性.结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4%,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90%,浓度为0.5mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用.结论 已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据.

    作者:熊玉霞;杨致邦;于拽拽;戴维;蒋任举;蒋英 刊期: 2011年第11期

  • Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶的生物信息学分析

    目的 应用生物信息学方法分析Ⅰ型新德里金属β内酰胺酶(New Delhi metallo-β-1actamase 1,NDM1)的基本性质,并与常见的β内酰胺类抗生素进行分子对接,在理论上研究NDM1对β内酰胺类抗生素和抑制剂的水解活性.方法 应用EMBOSS 6.3.1.1软件包的程序分析NDM1的基本性质,并分别利用SWISS-MODEL同源建模和PHYRE 2.0折叠识别法构建NDM1的空间结构,再运用Arguslab 4.0软件的dock模块进行β内酰胺类抗生素与NDM1分子对接.结果 NDM1共270个氨基酸残基,理论等电点为6.3,包含1个跨膜区,α螺旋占27%,β折叠占34.5%;与抗生素对接能量由低到高依次为氨苄西林、头孢拉啶、阿莫西林、头孢唑林、甲氧西林、美罗培南、亚胺培南、氨曲南、克拉维酸.结论 NDM1对氨苄西林催化效率高,对氨曲南催化效率低,克拉维酸对NDM1无抑制作用.

    作者:曾建涛;李泉 刊期: 2011年第11期

  • 人禽流感裂解疫苗对小鼠的免疫原性观察

    目的 观察人禽流感裂解疫苗对小鼠的免疫原性.方法 将不同血凝素含量(20、30、45 μ,g/ml)的铝佐剂和无佐剂人禽流感裂解疫苗各3批分别经腹腔注射免疫小鼠,0.5ml/只,每批疫苗又分为1针、2针和3针组,每组10只,每针间隔1周,同时设空白对照组.首针免疫后21 d,分别采血,分离血清,检测血凝抑制抗体效价和中和抗体效价.结果 1针、2针组各3批无佐剂疫苗免疫小鼠的血凝抑制抗体效价和中和抗体效价分别小于1∶40和1∶200;2针、3针组各3批铝佐剂疫苗的血凝抑制抗体效价均大于1∶50,2针组20、30μg/ml血凝素铝佐剂疫苗的中和抗体效价均大于1∶200;2针、3针组20、30与45 μg/ml血凝素铝佐剂疫苗的血凝抑制抗体效价和中和抗体效价差异均无统计学意义(P>0.05);且2针、3针组3批铝佐剂疫苗的血凝抑制抗体效价和中和抗体效价均明显高于相应的3批无佐剂疫苗.结论 铝佐剂疫苗对小鼠的免疫原性明显优于无佐剂疫苗,且20、30 μg/ml血凝素铝佐剂疫苗接种2针可获得理想的免疫效果.

    作者:刘书珍;闫昆明;周蕾;王飞宇;傅连弟;高伟星;周长民;聂飞;王敏文 刊期: 2011年第11期

  • DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响

    目的 探讨DN-ALK2对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 RT-PCR法检测MDA-MB-231细胞中ALK2基因mRNA的转录;分别以腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞,并设空白对照组,通过MTT法、平板集落形成试验、细胞划痕试验及Transwell侵袭试验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力.结果 MDA-MB-231细胞中内源性表达ALK2.腺病毒DN-ALK2和RFP感染MDA-MB-231细胞36 h后,荧光表达量一致,约为70%.MDA-MB-231/DN-ALK2细胞中高表达DN-ALK2.与MDA-MB-231/RFP组相比,MDA-MB-231/DN-ALK2组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05);而MDA-MB-231/RFP组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 DN-ALK2可以在体外抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、迁移与侵袭.

    作者:孙笑笑;王科;冯红蕾;罗进勇;王虹;张彦 刊期: 2011年第11期

  • 一种新的造血干细胞获取方法的建立

    目的 建立一种新的造血干细胞获取方法,为临床应用提供实验依据.方法 将明胶海绵移植到小鼠后肢的大腿内侧肌间隙,12d后分离明胶海绵中的迁移细胞.采用流式细胞术和免疫荧光法检测迁移细胞和骨髓细胞中CD34+、Sca-1+和CD34+Sca-1+细胞的表达,利用体外造血克隆分析迁移细胞和骨髓细胞中造血克隆的密度.结果 迁移细胞的数量在移植12d时达大;迁移细胞中CD34+、Sca-1+和CD34Sca-1+细胞的比例明显高于骨髓细胞(P<0.05),造血克隆比例也明显高于骨髓(P<0.01).结论 利用生物材料明胶海绵成功建立了一种高效的造血干细胞获取方法,可实现自体细胞治疗.

    作者:武晓云;王世立 刊期: 2011年第11期

  • 辅助性T细胞17与相关疾病发生的研究进展

    辅助性T细胞17(T helper cells 17,Th17)是新近发现的一种辅助性T细胞,该类细胞在机体的抗微生物免疫中起非常重要的作用,也与很多自身免疫性疾病的发生有一定的关系,如过敏、糖尿病、类风湿性关节炎等.Th17细胞是与Th1及Th2细胞不同的T细胞亚类,可分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22等细胞因子.本文就Th17细胞的基本生物学功能、与感染性疾病及自身免疫性疾病发生的相关性作一综述.

    作者:史利军;袁维峰;李刚 刊期: 2011年第11期

  • PELA-OmpK微球疫苗的部分特征及其对鲫鱼的口服免疫效果

    目的 研究聚-DL-乳酸-聚乙二醇共聚物(DL-polylactide-co-polyethylene glycol,PELA)包裹哈维弧菌(Vibrio harveyi,Vh)重组外膜蛋白OmpK制备的微球疫苗的部分特性及其对鲫鱼(Carassius auratus gibelio)的口服免疫效果.方法 用可生物降解的合成高分子材料PELA,通过乳化溶剂挥发法包裹OmpK,制备微球疫苗,Bradford法测定蛋白浓度,计算蛋白包裹率;通过扫描电镜观察微球粒径大小及其在4℃保存不同时间的形貌.取鲫鱼随机分为3组:微球疫苗组、OmpK蛋白组和空白对照组,前两组采用疫苗或蛋白拌饲投喂方式口服免疫,投喂3d,间隔7d,再投喂3d加强免疫;对照组投喂不含疫苗的饲料.加强免疫4周和8周后,经腹腔注射20LD50的Vh EcGS020802株攻击,记录各组鱼死亡数,计算相对免疫保护率.结果 制备的PELA-OmpK微球疫苗中OmpK蛋白的包裹率达78%.微球粒径小于12μm,且90%微球的粒径小于5μm.4℃保存10d微球表面光滑、圆整;保存30 d PELA微球降解,粒径较大的微球表面出现空洞;保存60 d可见大量碎片,微球表面毛糙松散,出现多个空洞.微球疫苗加强免疫鲫鱼4周和8周后,对活菌攻击的相对免疫保护率分别为70%和48%,而口服OmpK蛋白组和空白对照组鱼全部死亡.结论 用PELA包裹裸疫苗制备成微球疫苗,对抗原具有一定的保护作用,PELA用作鱼类口服疫苗的投递载体是可行的.

    作者:任燕;张小江;常藕琴;陶家发;赖迎迢;石存斌;吴淑勤 刊期: 2011年第11期

  • 静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白的研制

    目的 研制高效价静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白.方法 用甲型H1N1流感疫苗(简称甲流)对固定供血浆者按疫苗说明书免疫后2周开始采集原料血浆,采用血凝抑制法检测原料血浆和制品的甲流抗体效价;采用柱层析法从高效价甲流免疫血浆中提取富含IgM免疫球蛋白的样品,模拟低温乙醇蛋白分离法工艺从小量混合血浆分离IgG样品,测定血浆和提取样品的甲流抗体效价,分析甲流中和抗体效价与IgG、IgM含量的对应关系,判断甲流中和抗体的免疫球蛋白类型;按本公司静脉注射人免疫球蛋白( Intravenous immunoglobulin,IVIG)生产工艺制备静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,并与普通IVIG及相应合并血浆的甲流抗体效价进行比较.结果 筛选到甲流抗体效价≥320 HU/ml的合格血浆9 866袋,合格率达33.5%,其中抗体效价≥640 HU/ml的血浆占合格血浆的49%,血浆质量符合《中国药典》三部(2010版)“血液制品生产用人血浆规程”要求;甲流抗体效价与IgG含量呈相应比例关系,而与IgM含量无关,甲流中和抗体的免疫球蛋白类型以IgG为主;制备的甲流人免疫球蛋白制品的甲流中和抗体效价达2 560 HU/ml,为普通IVIG的197倍,其他质量指标符合《中国药典》三部(2010版)“静注人免疫球蛋白制检规程”要求.结论 成功研制了静注甲型H1N1流感人免疫球蛋白,在甲流疫情得到有效控制的情况下,仍具有战略储备意义.

    作者:杨汇川;张燕;高阳;何建琴;吕加成;刘素芳;王焰;吴强;杨春;张雪梅 刊期: 2011年第11期

  • 马蹄香对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性观察

    目的 观察马蹄香(Valeviana jatamansi Jones)对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性,以评价其安全性.方法 给小鼠灌服5 000、7 500、10 000 mg/kg的马蹄香,对照组灌胃1%羧甲基纤维素钠(CMC),观察小鼠的中毒症状,记录小鼠的死亡数,采用Red-Munchen法计算半数致死量(LD50),并检查小鼠组织和脏器的病理变化;对大鼠分别灌服4 000、1 000和200 mg/kg的马蹄香,连续给药14 d,对照组灌胃CMC水溶液,给药后观察14 d,检测大鼠体重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化情况.结果 急性毒性试验结果显示,灌胃马蹄香后,小鼠短时间内出现活动减少,而后趋于正常,病理学检测未发现小鼠组织或脏器有明显异常改变,LD50> 10 000 mg/kg;亚急性毒性试验结果显示,马蹄香各剂量组大鼠的增重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 马蹄香具有较好的安全性.

    作者:孙远;付玉;刘冰;李鹏;田秀丽;王珊;宋宇;夏咸柱;王承宇 刊期: 2011年第11期

  • HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽的原核表达及纯化

    目的 原核表达并纯化HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽skl、sk2、sk3及3条肽段串联序列.方法 用普通PCR及重叠延伸PCR法从HIV-1 B亚型质粒扩增得到sk1、sk2、sk3基因序列及3条肽段基因片段的6种连接序列,并分别克隆人原核表达载体pET-32a(+)及pGEX4T-2中,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经Ni-NAT或谷胱甘肽-Sepharose-4B层析柱亲和层析纯化.SDS-PAGE分析融合肽的表达,Western blot分析融合肽的抗原性.结果 分别以pET-32a(+)和pGEX4T-2为载体,共构建了18个重组表达质粒;his-sk1、his-sk123、his-sk213、his-sk231及GST-sk3、GST-sk123、GST-sk213分别在pET-32a(+)及pGEX4T-2表达载体中以可溶形式表达,且均能与HIV-1阳性血清反应,而不能与HIV DNA-天坛疫苗免疫血清反应;经大量诱导表达纯化后,GST-sk3表达量高,可达40 mg/L,纯度超过90%.结论 已成功表达并纯化了具有生物学活性的HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别肽,为研制HIV自然感染与疫苗诱导产生抗体鉴别诊断试剂盒奠定了基础.

    作者:袁作为;张君;胡接力;张秀瑜;黄爱龙;郑建 刊期: 2011年第11期

中国生物制品学杂志

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