黄家利；王继红；程梅；王欣；曾建涛
目的 构建含人骨形态蛋白-2(BMP-2)基因的重组腺病毒,并转染入间充质干细胞,诱导其向骨细胞分化,从而生成新骨并修复骨缺损.方法 用重组腺病毒作为载体,将人BMP-2基因转染入小鼠胚胎问充质干细胞,Western blot检测BMP-2虽白的分泌表达.观察重组腺病毒Adv-BMP-2转染后小鼠间允质干细胞的增殖变化,并进行碱性磷酸酶活性、钙化结节形成和细胞中成骨相关蛋白mRNA转录水平等细胞分化的指征检定.将Adv-BMP-2转染后的小鼠问充质干细胞注入裸鼠右侧大腿四头肌内,观察新骨生成情况.将重组腺病毒Adv-BMP-2转染的大鼠骨髓间充质干细胞崩于大鼠大节段骨缺损的修复,并对植入的骨髓间充质干细胞进行跟踪观察.结果 Western blot分析表明,重组腺病毒Adv-BMP-2转染的细胞可分泌表达BMP-2蛋白.转染后的小鼠间充质干细胞的增殖速度与重组腺病毒Adv-BMP-2的转染量旱剂量相关.Adv-BMP-2转染的干细胞碱性磷酸酶上升,并在体外形成钙结节,同时,成骨相关蛋白Osteopontin、Osteocalcin、Bone sialoprotein及Collagen仅1(I)的mRNA水平也上升.用Adv-BMP-2转染的问充质干细胞能在裸鼠的大腿肌肉内形成发育成熟的新骨,转染的白体性骨髓间充质干细胞能有效修复大鼠大节段股骨缺损.在免疫抑制剂FK506的支持下,Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓问充质干细胞也能修复大鼠的大节段骨缺损.没有FK506支持下的Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓间充质干细胞及重组腺病毒Adv-β-gal转染的骨髓间充质干细胞则不能在体内形成新骨.植入骨缺损部位的骨髓间充质干细胞能直接参与骨缺损的修复,且有向全身其他组织器官迁移的趋势,但生存期较短.结论 用腺病毒介导的BMP-2基因转染人间充质干细胞能有效诱导干细胞向骨细胞分化,生成新骨并修复骨缺损.
作者：楼觉人；弘之土田；桥木淳一 刊期： 2009年第04期
目的 探讨高脂、胰岛素抵抗合并高脂高糖对大鼠肝脏血管牛成素样蛋白3(Angptl 3)和脂蛋白脂肪酶(LPL)基因mRNA转录的影响.方法 建立高脂(HL)、胰岛素抵抗合并高脂高糖(IR-HLG)大鼠模型,采用自动分析仪检测模型大鼠空腹血糖(BG)、总三酰甘油(TG)和胆固醇(TC)含量,采用Realtime PCR定量检测各组大鼠肝组织Angptl3和LPL基因的mRNA转录水平.结果 模型组大鼠血清TG、TC含量及肝脏Angptl3和LPL基因mRNA转录水平均较对照组明显升高;IR-HLG组大鼠的BG水平和Angptl3水平较对照组和HL组均明显升高,LPL水平较HL组明显下降.结论 随血脂的增高,Angptl3和LPL的表达均增强;在高糖、胰岛素抵抗状态下,Angptl3的表达增高,而LPL的表达则部分受到抑制.
作者：黄家利；王继红；程梅；王欣；曾建涛 刊期： 2009年第04期
目的 构建X盒结合蛋白1-u(XBP1-u)基凶原核表达质粒,表达并纯化XBP1-U蛋白.方法 利用RT-PCR技术从肝癌细胞HepG2中扩增XBP1-U基因,先插入中间载体pGEM-T easy,再将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组原核表达质粒pET32a-XBP1-u,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后,进行Western blot 鉴定.结果 测序分析证实,克隆入pET32a的XBP1-u序列与GenBank中登录的XBP1-u cDNA序列一致.IPTG的佳诱导浓度为0.5mmol/L,佳诱导时间为6 h.目的 蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为33 000.纯化的蛋白经SDS-PAGE分析显示单一条带,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建了XBP1-u基因原核表达质粒,表达并纯化了XBP1-u蛋白,为XBPI-u在肿瘤发病中的作用机制及在应激性疾病临床治疗中的研究奠定了基础.
作者：李婧；林建炜；张静；郭风劲 刊期： 2009年第04期
目的 优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件.方法 将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的 蛋白,纯化产物经Western blot进行鉴定.结果 以50 mmol/L Tris buffer、2 mol/L,pH 11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的 蛋白复性得率大于40%.经纯化后,目的 蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性.结论 优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1 Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据.
作者：孙静；傅晶晶；霍烛；陈佩；胡云章；刘勇；郝彦玲 刊期： 2009年第04期
目的 检测妊娠期高血压子痫前期、子痫患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα及Ⅱb的水平,并探讨其临床意义.方法 采用流式细胞术检测16例轻度子痫前期患者、32例重度子癫前期/子癫患者和22名正常孕晚期孕妇剖官产术前及术后72 h内及20名正常非孕妇女血小板GP Ⅰ bα、GPⅡ b水平的变化.结果 剖宫产术前,重度子痫前期/子痫组血小板GP Ⅰ bα水平与正常非孕组、正常孕晚期组和轻度子痫前期组比较均明显降低,且差异有统计学意义;其他3组比较,差异无统计学意义;重度子痫前期/子痫组剖宫产术后,血小板GPⅠ bα水平与术前比较明显升高,差异有统计学意义;各组血小板GPⅡ b水平变化差异无统计学意义.结论 GP Ⅰ bα的水平是反映血管内皮损伤、血小板活化、黏附聚集、微血管血栓前状态的重要指标,对于监测病情发展和指导临床治疗具有重要意义.
作者：郑明阳；马晓艳；廖琪 刊期： 2009年第04期
目的 制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证.方法 采用2株不同结合位点的抗hPRI.单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证.结果 试剂盒佳定量范围在5～100 ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.999 9,灵敏度为o.49 ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%.试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1 500 ng/ml.与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.953 7和0.948 6.结论 已成功制备灵敏、特异的hPRL CLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测.
作者：温涛；赵建增；罗胜军；高荣；高英杰 刊期： 2009年第04期
目的 构建并筛选小鼠细胞周期检测点激酶1(Chk1)基因的RNAi表达质粒,为肿瘤的基因治疗探索新途径.方法 根据GenBank中登录的Chk1基因序列及shRNA设计原则,设计、合成用于构建Chk1基因RNAi质粒的寡核苷酸,并构建4种重组Chk1 RNAi质粒,酶切及测序鉴定正确后,以脂质体LipofectamineTM 2000介导转染小鼠Lewis肺癌细胞株.转染后48 h,采用RT-PCR技术检测转染细胞中Chk1基因mRNA的转录水平,筛选有效的Chk1 RNAi质粒.结果 4种重组Chk1RNAi质粒经酶切鉴定及测序证明构建正确.转染后48 h,转染质粒pGPU6/GFP/Neo-Chk1-536的Lewis细胞Chk1基因mRNA的转录水平下降,以其作为后续实验的有效质粒.结论 已成功构建并筛选出Chk1基因的iRNA表达质粒,为Chk1基因iRNA治疗肿瘤的研究奠定了基础.
作者：王铁君；郭喜平；董丽华；韩成敏 刊期： 2009年第04期
目的 观察人呼吸道合胞病毒(HRSV)在不同温度保存、冻融和超声波处理的稳定性.方法 将HRSV A2株接种于KMB17,细胞上适应培养后,收获病毒液,分别置于37、22、4和-20℃条件下保存不同时间,或经冻融和超声波处理后,用微量细胞病变法检测HRSV的感染性滴度,观察其稳定性.结果 HRSV在37℃保存,病毒感染性滴度下降很快,第4天时,降至约1.50 lgCCID50/ml,5 d后降至1.00 lgCCID50/ml以下,几乎检测不到;在22℃保存,病毒感染性滴度下降相对缓慢,第14 天时比原始滴度降低约3.20 lgCCID50/ml;在4℃和-20℃下保存较稳定,分别保存5周和3个月后,病毒感染性滴度下降<0.60 lgCID50/ml.冻融1、2、3次,病毒感染性滴度分别下降1.37、2.55和3.61 lgcCID50/ml,冻融4次后,病毒几乎无感染性.超声波处理后,病毒感染性滴度下降很快,处理1次病毒滴度即下降至原始滴度的50%左右,处理2次后,病毒几乎无感染性.结论 HRSV不宜在37℃和22℃存放,可短暂保存于4℃,在-20℃可保存较长时问;冻融和超声波处理均对病毒感染性滴度有明显影响.
作者：蒋蕊鞠；李华；龙润乡；陈思瑾；陈洪波；宋霞；崔萍芳；谢忠平 刊期： 2009年第04期
水痘是由水痘.带状疱疹病毒引起的一种疾病,主要见于儿童,在人群中具有极高的感染率.IgG是机体感染水痘后产生的两种主要中和抗体之一,检测血清中水痘IgG抗体在水痘血清流行病学研究、水痘疫苗的免疫效果评价、临床诊断等方面具有重要意义.本文主要对检测血清中水痘IgG抗体敏感性和特异性较高的膜抗原荧光抗体法、酶联免疫吸附法、间接免疫荧光抗体法、免疫吸附血凝试验法、补体扩大中和试验法和放射免疫法作简要介绍.
作者：宋颖丽；姜典财；李长贵 刊期： 2009年第04期
目的 制备传染性喉气管炎病毒(ILlv)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定.方法 将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定.结果 经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400 bp的ILTV gD特异性条带.IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTV gD基因得到了表达.结论 已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径.
作者：杨明凡；崔保安；陈红英；王学斌；魏战勇 刊期： 2009年第04期
目的 克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Ra)胞外区基因.方法 采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增slL-5Ra胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPRO EX中,构建重组表达质粒pPRO EX/slL-5Ra,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE和Western blot检测目的 蛋白的表达.结果 重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确.表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36 100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠slL-5Rα单抗发生特异性免疫反应.结论 已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础.
作者：宋爱玲；蔡累；杨怡；王伟华；王增禄；张英起；李志奎 刊期： 2009年第04期
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠胰腺损伤组织的修复作用.方法 应用贴壁法分离、纯化、扩增大鼠MSCs,经流式细胞仪检测其细胞周期及表面标志后,用DAPI标记,经尾静脉注入胰腺损伤模型大鼠体内,15 d后,在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在大鼠胰腺组织的定位,组织病理切片观察胰腺损伤组织的病理改变,PCR检测胰腺损伤区组织的Sty基因.结果 体外纯化、扩增、富集的MSCs经流式细胞仪检测,86.67%的细胞处于GO/G1期,细胞表面CD34呈阴性表达,CD44呈阳性表达.DAPI标记的MSCs移植治疗15 d后,激光共聚焦显微镜下可见,MSCs在损伤的胰腺组织中多见,在正常胰腺组织中偶见;组织病理切片可见损伤的胰腺组织结构开始恢复,胰岛再建;PCR结果显示,治疗组胰腺组织可扩增出Sty基因.结论 MSCs对大鼠胰腺损伤组织可能具有修复作用.
作者：滕春燕；于庭；王春娥；陈玉丙；金春香 刊期： 2009年第04期
目前,绝大部分病毒性疫苗是通过细胞培养制备的.牛血清中含有的多种生物活性物质,如生长因子、激素、脂类、无机盐等成分,是细胞繁殖所需促生长因子和营养物质的来源.
作者：洪小栩；佘清 刊期： 2009年第04期
目的 观察氟伐他汀对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 用链脲佐菌素复制糖尿病大鼠模型,成模后给予氟伐他汀治疗.采用ELISA法检测尿微量白蛋白浓度;Western blot和RT-PCR法检测大鼠肾皮质CTGF蛋白及mRNA的表达水平;免疫组化法检测肾小球内CTGF和FN的表达.结果 氟伐他汀治疗组大鼠尿白蛋白排泄率、肾脏肥大指数(KHI)、肾皮质中CTGF的mRNA及蛋白表达、肾小球内CTGF和FN的表达较糖尿病组大鼠均明显降低.结论 氟伐他汀能降低肾小球内CTGF及FN的表达,减轻肾小球肥大,起到抑制和延缓糖尿病肾病进展的作用.
作者：罗曼宇；吴曼；罗萍 刊期： 2009年第04期
尖锐湿疣是一种常见的性病,治疗方法很多,但容易复发.我科于2006年1月～2008年3月,对前来就诊的128例患者采用二氧化碳激光术加安特鲁克(注射用重组人白细胞介素-2,长春长生基因药业股份有限公司生产)肌肉注射,对其疗效与复发情况进行观察,现报道如下.
作者：程健；李世军；贺国有 刊期： 2009年第04期
目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体罗格列酮(ROZ)联合应用对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先用不同浓度的TSA和ROZ分别作用于SGC-7901细胞,MTT法检测二者对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合作用浓度.将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA+ROZ组,加入相应的药物处理48 h后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并应用流式细胞仪检测细胞周期情况,RT-PCR检测PPARγ和Cyclin D1基因mRNA的转录水平.结果 对SGC-7901细胞增殖抑制作用不显著的低剂量TSA(40 nmol/L)与ROZ联用时,能显著增强ROZ对细胞增殖的抑制作用,TSA+ROZ组GO/G1期细胞比例较单用TSA或ROZ组明显增加,且Cyclin D1基因mRNA转录水平明显下降;TSA作用于细胞后,PPARγ基因mRNA转录水平较对照组明显升高,而ROZ单独作用后,细胞PPARγ基因mRNA转录水平无改变.结论 TSA可明显增强ROZ对SGC-7901细胞增殖的抑制效应,提示HDAC在SGC-7901细胞内可能具有抑制PPARγ的作用.
作者：马国栋；张才全；侯俊；彭洪 刊期： 2009年第04期
目的 构建百日咳毒素(PT)S1亚基片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的百日咳毒素S1亚基基因序列,人工合成密码子优化的S1基因,利用重叠PCR技术将S1基因上的两段DNA序列拼接在一起,形成-个新的基因序列S1'.将该序列与7ZTS表达载体连接,构建重组原核表达质粒7ZTS-S1',转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 S1'基因经PCR鉴定及测序证明与预期相符;重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建止确;表达蛋白的相对分子质量约17 400,表达量约占菌体总蛋白的8%,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建百日咳毒素S1亚基片段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为PT单抗及其检测试剂盒的研制奠定了基础.
作者：时成波；曹玉锋；张秀霞；吴晓娟；李雨桐；徐光磊；尹晓东 刊期： 2009年第04期
超氧化物(O2-)与许多病理过程有关,通过细胞外超氧化物歧化酶(ecSOD)基凶转移除去细胞外的超氧化物,对于治疗因氧化应激反应过强而引发的血管疾病具有广阔的前景.近的研究已揭示了ecSOD的表达调控以及肝素取代等方面的相关机制,为探讨ecSOD如何与其他凶素协同作用,从而调节血管功能的机理提供了新的思路.本文对ecSOD基因转移及活性调控的新研究进展作一综述.
作者：杨丰科；徐克；李思东 刊期： 2009年第04期
目的 观察纯化甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)接种普通狨猴的安全性和免疫原性.方法 将800 EU/0.5 ml和1600 EU/nd两个剂量的纯化甲肝灭活疫苗(JS-4株)与进口疫苗(50 U/ml)分别接种普通狨猴各2只,进行安全性和免疫原性检测,并进行强毒(JS-12株)攻击保护试验及毒力试验.结果 接种疫苗后72 h,各组狨猴均未发生局部及全身反应;有特异性抗.HAV产生;肝脏血清酶活性均有一过性升高,未见肝脏病理改变;并均能抵抗甲肝病毒强毒株(JS-12)的攻击;JS-4毒株采用106.67 CCID50/ml剂量接种狨猴后未见毒力反应,但产生了73 000 mIU/ml的高水平抗体;而JS-12毒株接种狨猴后,狨猴出现肝脏血清酶活性升高和肝组织病理学改变.结论 纯化甲型肝炎灭活疫苗具有良好的安全性和免疫原性.
作者：张玉慧；曹雨露；陈丽玲；郑红；蒋建江；周佳丽；王益民；胡艳灵；黄明；孙玲华；陈明曦；练幼辉；陈统球 刊期： 2009年第04期
目的 采用喷雾干燥法制备脊髓灰质炎微球减毒活疫苗.方法 以正交试验法筛选佳保护剂配方及佳工艺条件,通过样品的得率、含水量、病毒滴度、微球形态、粒径大小分布和热力学性质等特性评价疫苗的稳定性.结果 佳喷雾干燥工艺为:入口风温180℃,入口风压3.9 m/s,进样速度2.5 ml/min,保护剂配方1.5%海藻糖+0.2%人血白蛋白(HSA)+0.2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)w/v).微球形态完整,分散性好,平均粒径为10.9 μm,得率为54.25%,干粉疫苗37℃放置1周和25℃保存6个月,病毒的滴度下降不超过0.5 lgCCID50/ml.结论 喷雾干燥法制备的脊髓灰质炎微球减毒活疫苗稳定性好,工艺简便,易于工业化生产.
作者：曾丽文；王道军；胡凝珠；胡云章 刊期： 2009年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
