曾丽文；王道军；胡凝珠；胡云章
目的 探讨高脂、胰岛素抵抗合并高脂高糖对大鼠肝脏血管牛成素样蛋白3(Angptl 3)和脂蛋白脂肪酶(LPL)基因mRNA转录的影响.方法 建立高脂(HL)、胰岛素抵抗合并高脂高糖(IR-HLG)大鼠模型,采用自动分析仪检测模型大鼠空腹血糖(BG)、总三酰甘油(TG)和胆固醇(TC)含量,采用Realtime PCR定量检测各组大鼠肝组织Angptl3和LPL基因的mRNA转录水平.结果 模型组大鼠血清TG、TC含量及肝脏Angptl3和LPL基因mRNA转录水平均较对照组明显升高;IR-HLG组大鼠的BG水平和Angptl3水平较对照组和HL组均明显升高,LPL水平较HL组明显下降.结论 随血脂的增高,Angptl3和LPL的表达均增强;在高糖、胰岛素抵抗状态下,Angptl3的表达增高,而LPL的表达则部分受到抑制.
作者：黄家利；王继红；程梅；王欣；曾建涛 刊期： 2009年第04期
目的 构建X盒结合蛋白1-u(XBP1-u)基凶原核表达质粒,表达并纯化XBP1-U蛋白.方法 利用RT-PCR技术从肝癌细胞HepG2中扩增XBP1-U基因,先插入中间载体pGEM-T easy,再将其克隆至原核表达载体pET32a,构建重组原核表达质粒pET32a-XBP1-u,转化E coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后,进行Western blot 鉴定.结果 测序分析证实,克隆入pET32a的XBP1-u序列与GenBank中登录的XBP1-u cDNA序列一致.IPTG的佳诱导浓度为0.5mmol/L,佳诱导时间为6 h.目的 蛋白以包涵体形式表达,相对分子质量约为33 000.纯化的蛋白经SDS-PAGE分析显示单一条带,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建了XBP1-u基因原核表达质粒,表达并纯化了XBP1-u蛋白,为XBPI-u在肿瘤发病中的作用机制及在应激性疾病临床治疗中的研究奠定了基础.
作者：李婧；林建炜；张静；郭风劲 刊期： 2009年第04期
目的 构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,并检测Ad-CMV-TK/GCV系统对小鼠Lewis肺癌细胞的抑制作用.方法 PCR扩增HSV-TK基因,以复制缺陷型腺病毒为载体构建重组腺病毒Ad-CMV-TK,在HEK293细胞中包装,CsCl2梯度离心法纯化后,感染Lewis肺癌细胞,Western blot检测HSV-TK蛋白的表达;MTT法检测Ad-CMV-TK/GCV系统对Lewis细胞的体外抑制作用;同时检测Ad-CMV-TK/GCV系统对C57荷瘤小鼠的抑瘤作用.结果 重组腺病毒Ad-CMV-TK感染的Lewis细胞可特异地表达HSV-TK蛋白,Ad-CMV-TK/GCV系统在体外能明显抑制Lewis细胞的生长,当GCV浓度为100 μmol/L时,Lewis细胞的存活率仅为16%;在体内能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长,与Ad-Blank/GCV对照组和PBS对照组相比,差异具有统计学意义.结论 已成功构建了重组腺病毒Ad-CMV-TK,Ad-CMV-TK/GCV系统在体内及体外对小鼠Lewis肺癌细胞均有明显的抑制作用,为进一步研究其抗肿瘤机制及应用奠定了基础.
作者：张煜；于湘辉；查晓；孔维 刊期： 2009年第04期
目的 研究组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)与过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体罗格列酮(ROZ)联合应用对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 首先用不同浓度的TSA和ROZ分别作用于SGC-7901细胞,MTT法检测二者对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合作用浓度.将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA+ROZ组,加入相应的药物处理48 h后,MTT法检测各组细胞增殖抑制率,并应用流式细胞仪检测细胞周期情况,RT-PCR检测PPARγ和Cyclin D1基因mRNA的转录水平.结果 对SGC-7901细胞增殖抑制作用不显著的低剂量TSA(40 nmol/L)与ROZ联用时,能显著增强ROZ对细胞增殖的抑制作用,TSA+ROZ组GO/G1期细胞比例较单用TSA或ROZ组明显增加,且Cyclin D1基因mRNA转录水平明显下降;TSA作用于细胞后,PPARγ基因mRNA转录水平较对照组明显升高,而ROZ单独作用后,细胞PPARγ基因mRNA转录水平无改变.结论 TSA可明显增强ROZ对SGC-7901细胞增殖的抑制效应,提示HDAC在SGC-7901细胞内可能具有抑制PPARγ的作用.
作者：马国栋；张才全；侯俊；彭洪 刊期： 2009年第04期
目的 用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记家兔皮肤成纤维细胞,确定佳标记方法,探讨其作为成纤维细胞示踪方法的可行性.方法 取12-16周龄健康中国大耳白兔颈部皮肤,胶原酶消化,分离并培养成纤维细胞.取第3代细胞,加入终浓度分别为2.5、5、10和15μg/ml的BrdU共培养,MTT法检测细胞的生长情况.分别用2.5、5、10和15μg/ml的BrdU标记第3代细胞,标记6、12、24和48 h后,采用免疫荧光法检测各组细胞的标记阳性率.以佳剂量及时间标记家兔成纤维细胞,与壳聚糖-甘油磷酸钠水凝胶混合后,注入兔颈内动脉,1周后,免疫荧光法观察植入细胞.结果 加入BrdU 48 h内,各浓度的BrdU对家兔成纤维细胞生长的影响均不明显.标记剂量及标记时间均可影响标记率,但标记时间的影响更大.5 μg/ml剂量标记24 h,标记率可达(94.50±2.08)%,再加大标记剂量或延长标记时间,标记率提高不明显.以该方法标记的家兔成纤维细胞注入家兔颈内动脉1周后,可在兔颈内动脉观察到大量标记细胞.结论 BrdU对家兔成纤维细胞的佳标记方法为5μg/ml标记24 h,该方法对细胞影响小,标记率高,适用于成纤维细胞体内示踪.
作者：甄勇；许侃；罗祺；陈学思；赵长稳；王柏；张德智 刊期： 2009年第04期
目的 构建百日咳毒素(PT)S1亚基片段原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达重组蛋白.方法 根据GenBank中登录的百日咳毒素S1亚基基因序列,人工合成密码子优化的S1基因,利用重叠PCR技术将S1基因上的两段DNA序列拼接在一起,形成-个新的基因序列S1'.将该序列与7ZTS表达载体连接,构建重组原核表达质粒7ZTS-S1',转化大肠杆菌JM109(DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定.结果 S1'基因经PCR鉴定及测序证明与预期相符;重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建止确;表达蛋白的相对分子质量约17 400,表达量约占菌体总蛋白的8%,且具有良好的反应原性.结论 已成功构建百日咳毒素S1亚基片段重组原核表达质粒,并在大肠杆菌中表达了重组蛋白,为PT单抗及其检测试剂盒的研制奠定了基础.
作者：时成波；曹玉锋；张秀霞；吴晓娟；李雨桐；徐光磊；尹晓东 刊期： 2009年第04期
目的 观察骨髓间充质干细胞(MSCs)对大鼠胰腺损伤组织的修复作用.方法 应用贴壁法分离、纯化、扩增大鼠MSCs,经流式细胞仪检测其细胞周期及表面标志后,用DAPI标记,经尾静脉注入胰腺损伤模型大鼠体内,15 d后,在激光共聚焦显微镜下观察MSCs在大鼠胰腺组织的定位,组织病理切片观察胰腺损伤组织的病理改变,PCR检测胰腺损伤区组织的Sty基因.结果 体外纯化、扩增、富集的MSCs经流式细胞仪检测,86.67%的细胞处于GO/G1期,细胞表面CD34呈阴性表达,CD44呈阳性表达.DAPI标记的MSCs移植治疗15 d后,激光共聚焦显微镜下可见,MSCs在损伤的胰腺组织中多见,在正常胰腺组织中偶见;组织病理切片可见损伤的胰腺组织结构开始恢复,胰岛再建;PCR结果显示,治疗组胰腺组织可扩增出Sty基因.结论 MSCs对大鼠胰腺损伤组织可能具有修复作用.
作者：滕春燕；于庭；王春娥；陈玉丙；金春香 刊期： 2009年第04期
目的 检测妊娠期高血压子痫前期、子痫患者血小板膜糖蛋白(GP)Ⅰbα及Ⅱb的水平,并探讨其临床意义.方法 采用流式细胞术检测16例轻度子痫前期患者、32例重度子癫前期/子癫患者和22名正常孕晚期孕妇剖官产术前及术后72 h内及20名正常非孕妇女血小板GP Ⅰ bα、GPⅡ b水平的变化.结果 剖宫产术前,重度子痫前期/子痫组血小板GP Ⅰ bα水平与正常非孕组、正常孕晚期组和轻度子痫前期组比较均明显降低,且差异有统计学意义;其他3组比较,差异无统计学意义;重度子痫前期/子痫组剖宫产术后,血小板GPⅠ bα水平与术前比较明显升高,差异有统计学意义;各组血小板GPⅡ b水平变化差异无统计学意义.结论 GP Ⅰ bα的水平是反映血管内皮损伤、血小板活化、黏附聚集、微血管血栓前状态的重要指标,对于监测病情发展和指导临床治疗具有重要意义.
作者：郑明阳；马晓艳；廖琪 刊期： 2009年第04期
目的 制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证.方法 采用2株不同结合位点的抗hPRI.单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证.结果 试剂盒佳定量范围在5～100 ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.999 9,灵敏度为o.49 ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%.试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1 500 ng/ml.与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.953 7和0.948 6.结论 已成功制备灵敏、特异的hPRL CLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测.
作者：温涛；赵建增；罗胜军；高荣；高英杰 刊期： 2009年第04期
目前,绝大部分病毒性疫苗是通过细胞培养制备的.牛血清中含有的多种生物活性物质,如生长因子、激素、脂类、无机盐等成分,是细胞繁殖所需促生长因子和营养物质的来源.
作者：洪小栩；佘清 刊期： 2009年第04期
超氧化物(O2-)与许多病理过程有关,通过细胞外超氧化物歧化酶(ecSOD)基凶转移除去细胞外的超氧化物,对于治疗因氧化应激反应过强而引发的血管疾病具有广阔的前景.近的研究已揭示了ecSOD的表达调控以及肝素取代等方面的相关机制,为探讨ecSOD如何与其他凶素协同作用,从而调节血管功能的机理提供了新的思路.本文对ecSOD基因转移及活性调控的新研究进展作一综述.
作者：杨丰科；徐克；李思东 刊期： 2009年第04期
目的 建立重组人血小板衍生生长因子-BB(hPDGF-BB)在酿酒酵母中的表达及纯化工艺.方法 在5 L发酵罐中,探讨接种量、溶氧、诱导温度和诱导pH值对菌体密度及目的 蛋白表达量的影响,并通过离子交换层析和凝胶过滤层析对目的 蛋白进行纯化.结果 重组hPDGF-BB工程菌在5 L发酵罐分批补料培养中,经84 h发酵.细胞A600值可达65.1,目的 蛋白表达量占26%.纯化后的蛋白纯度可达95%,产量为15.4 mg/L,收率为21.9%.结论 已建立了周期短、产率高的hPDGF-BB发酵及纯化工艺,为其大规模生产奠定了基础.
作者：薛亮；朱艳飞；彭端；王永华；杨博；杨汝德 刊期： 2009年第04期
尖锐湿疣是一种常见的性病,治疗方法很多,但容易复发.我科于2006年1月～2008年3月,对前来就诊的128例患者采用二氧化碳激光术加安特鲁克(注射用重组人白细胞介素-2,长春长生基因药业股份有限公司生产)肌肉注射,对其疗效与复发情况进行观察,现报道如下.
作者：程健；李世军；贺国有 刊期： 2009年第04期
目的 优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件.方法 将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的 蛋白,纯化产物经Western blot进行鉴定.结果 以50 mmol/L Tris buffer、2 mol/L,pH 11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的 蛋白复性得率大于40%.经纯化后,目的 蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性.结论 优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1 Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据.
作者：孙静；傅晶晶；霍烛；陈佩；胡云章；刘勇；郝彦玲 刊期： 2009年第04期
目的 构建蜂毒肽(Melittin)与变构hIL-2融合基因原核表达质粒,并检测表达的融合蛋白对宿主菌E. coli生长的影响.方法 以质粒pGEX-4T-2/Melittin-IL-2(88Arg)为模板,通过PCR定点诱变为Melittin-IL-2(88Arg,125Ala).将PCR产物和pET-15b载体分别经双酶切后连接,构建重组表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125SAla),转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.SDS-PAGE及ELISA分析表达产物;检测诱导不同时间重组菌的A600值,绘制生长曲线,并进行活菌计数.结果 PCR扩增的目的 片段长542 bp,重组表达质粒测序分析证明目的 基因如预期突变;ELISA可检测到目的 蛋白表达,但表达量较低;SDS-PAGE分析未见目的条带;诱导表达4 h,重组菌A600值由0.8 下降至0.6;诱导2 h,活菌计数由108个/ml降至104个/ml.结论 已成功构建了原核表达质粒pET-15b/M-IL-2(88Arg,125Ala),表达的融合蛋白可能对宿主菌具有毒性,从而杀伤宿主菌.
作者：郑旭；鲁晓晴；宋卫青；赵巍；闫志勇；钱冬萌；丁守怡；宋旭霞；徐莉莉；李鹏；王斌 刊期： 2009年第04期
目的 评价家蚕生物反应器生产的重组禽流感血凝素疫苗的安全性和免疫原性.方法 将SD大鼠随机分为5组,分别经皮下注射9.4、1.88和0.375 mg/kg剂量的重组禽流感血凝素疫苗(含氧氧化铝佐剂)、Al(OH),和牛理盐水,每10 d注射1次,连续注射3次,分别于第1次给药后第2、22和42天进行血液学、血液生化学、病理学和免疫原性检测.结果 3个剂量组疫苗第1次给药后第42天,检测抗体滴度(P/N)在8-11之间,CD4+、CD8+T淋巴细胞含量及IFNy和IL-2的含量与两对照组相比,未见明显升高;连续3次给药后,大鼠的血液学和生化学指标均无明显改变;给药期间注射部位皮下出现肉芽肿样结节,经20 d恢复后有所改善;9.4和1.88 mg/kg剂量组动物出现可逆性的脾肿大症状;整个实验期间,动物未出现任何其他明显不良反应.结论 重组禽流感血凝素疫苗对大鼠具有良好的安全性,但免疫原性较低.
作者：徐潘生；陈云祥；沈敏；辛艳飞；陈国灿；张升；张立将；由振强；宣尧仙 刊期： 2009年第04期
目的 制备传染性喉气管炎病毒(ILlv)gD基因重组禽痘病毒,并进行纯化及初步鉴定.方法 将含有ILTV河南长葛株gD基因的禽痘病毒转移载体转染禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞,采用蓝色蚀斑筛选纯化重组禽痘病毒,并经PCR及间接免疫荧光试验(IFA)进行鉴定.结果 经过5轮蚀斑筛选纯化,获得1株重组禽痘病毒rFPV-ILTV-gD,其PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,可见约1400 bp的ILTV gD特异性条带.IFA检测显示重组禽痘病毒中的ILTV gD基因得到了表达.结论 已成功制备并纯化了ILTVgD基因重组禽痘病毒,为预防ILT提供了新的途径.
作者：杨明凡；崔保安；陈红英；王学斌；魏战勇 刊期： 2009年第04期
目的 克隆并原核表达小鼠可溶性IL-5受体α(sIL-5Ra)胞外区基因.方法 采用RT-PCR从BALB/c小鼠脾脏组织中分别扩增slL-5Ra胞外区前后段基因片段,酶切后将两段基因连接,插入原核表达载体pPRO EX中,构建重组表达质粒pPRO EX/slL-5Ra,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达.采用SDS-PAGE和Western blot检测目的 蛋白的表达.结果 重组表达质粒经双酶切和DNA测序,证实构建正确.表达的sIL-5Rα胞外区蛋白相对分子质量约36 100,表达量约占菌体总蛋白的30%,且可与兔抗小鼠slL-5Rα单抗发生特异性免疫反应.结论 已成功克隆并原核表达了小鼠sIL-5Rα胞外区基因,为进一步探讨sIL-5Rα对哮喘的治疗作用及开发新的哮喘治疗药物奠定了基础.
作者：宋爱玲；蔡累；杨怡；王伟华；王增禄；张英起；李志奎 刊期： 2009年第04期
水痘是由水痘.带状疱疹病毒引起的一种疾病,主要见于儿童,在人群中具有极高的感染率.IgG是机体感染水痘后产生的两种主要中和抗体之一,检测血清中水痘IgG抗体在水痘血清流行病学研究、水痘疫苗的免疫效果评价、临床诊断等方面具有重要意义.本文主要对检测血清中水痘IgG抗体敏感性和特异性较高的膜抗原荧光抗体法、酶联免疫吸附法、间接免疫荧光抗体法、免疫吸附血凝试验法、补体扩大中和试验法和放射免疫法作简要介绍.
作者：宋颖丽；姜典财；李长贵 刊期： 2009年第04期
目的 探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用.方法 人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达水平.结果 经酶切和测序鉴定,表明重组真核表达质粒构建正确.转染重组真核表达质粒的A549细胞PTEN基因mRNA转录水平与未转染组相比,差异无统计学意义,蛋白表达水平较未转染组明显降低.结论 miRNA21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达.
作者：徐晓明；张政；彭惠民；晏宁 刊期： 2009年第04期
中国生物制品学杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中华预防医学会,长春生物制品研究所有限责任公司
