应用套式PCR检测6种血清型钩端螺旋体

万成松；张文炳；曹虹；赵卫

关键词：钩端螺旋体, 套式PCR, 检测

摘要：目的用套式 PCR 快速检测水沟和丛林等地的钩端螺旋体.方法选 Leptospira borgpetersenii 中的一段保守序列 IS1533,设计两对引物,用套式 PCR 检测六种不同血清型的钩体.结果 6株致病株均出现单一246bp 的特异性扩增产物,而腐生株、空白对照无任何 DNA 扩增条带.用琼脂糖凝胶电泳,能检测500fg 模板的扩增产物.结论套式 PCR 是一种灵敏度高、特异性强的快速检测自然疫源中钩体的有效方法.

中国人兽共患病学报杂志相关文献

幼鸽暴发新城疫及其对人感染报告

1997年11月,河南省荥阳市某鸽场饲养的10～15龄的肉鸽相继发病.经临床诊断、病理剖检、病原分离鉴定和动物实验,证实为鸽新城疫.同时此期间发生了1例鸽新城疫对人的感染,一并报道如下.

作者：陈丽颖；王亚宾；张红英；王自振刊期： 1999年第05期
间接血凝法检测孕妇血清、阴道分泌物沙眼衣原体抗体

沙眼衣原体可以引起多个部位的感染,泌尿生殖道感染是一种常见的性传播疾病,间接血凝法检测孕妇血清中的沙眼衣原体抗体能否反应孕妇泌尿生殖道的感染情况,是一个有待于解决的问题.孕妇沙眼衣原体感染对孕妇和新生儿健康的危害都比较严重,了解孕妇沙眼衣原体的感染情况可为制订预防措施提供理论依据.

作者：王全意；张桂宁；郝风荣；潘玉珍；刘海英；戴旻笙刊期： 1999年第05期
日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因在大肠杆菌的表达

目的克隆并表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因以制备血吸虫疫苗候选分子.方法利用 PCR 技术扩增日本血吸虫大陆株的 cDNA 基因,经 BamHI 和 EcoRI 双酶切后定向克隆于原核表达质粒 PEGX2-T,并在大肠杆菌进行表达研究.结果获得目的基因克隆,在大肠杆菌可诱导表达约 44kD 的融合蛋白,该重组抗原能被慢性血吸虫病人血清特异性识别.结论成功地表达了一种血吸虫疫苗候选抗原,为进一步研究打下基础.

作者：田生和；段凯；赖建平；王大坤；郑宏；石磊刊期： 1999年第05期
阿奇霉素、干扰素联合治疗弓形虫病91例疗效分析

弓形虫病(Toxoplasmosis)在我国及我区不少见.而采用阿奇霉素、干扰素联合治疗弓形虫病报告不多.近年来,国内沙红报告1例,国外陆续用于临床.自1996年1月至1998年12月,我们将91例弓形虫病随机分成两组,采用阿奇霉素、干扰素或螺旋霉素、SMZCO联合治疗,结果显示阿奇霉素组优于螺旋霉素组,χ2＝17.25,P＜0.005.

作者：何爱珍；姚瑾刊期： 1999年第05期
旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

目的比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用.方法收集人工感染大鼠小肠内的成虫,经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原.采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原.分别用两种抗原免疫小鼠,间隔1周共免疫3次,末次免疫后1周,每只小鼠攻击感染100条旋毛虫感染性肌肉幼虫.感染后1周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力,感染后5周检查肌肉幼虫负荷.结果成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为79.55%、62.25%和65.0%.成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是97.27%、86.60%和90.0%.结论实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力,但后者的免疫原性更强.

作者：申丽洁；朱声华；罗仲金；雷莉刊期： 1999年第05期
赖型钩体重组质粒及表达保护性抗原,p68的研究

目的寻找钩体病基因工程疫苗保护性抗原候选.方法 (1)鸟枪法构建赖型钩体017株基因库;(2)α互补、DNA 原位杂交筛选重组质粒;(3)Southern 杂交行 DNA 同源性分析;(4)双脱氧链中止测重组 DNA 序列及与外膜蛋白基因(omp)匹配;(5)IPTG 诱导重组子表达;(6)免疫印迹、MAT、EIA、MTT检测表达蛋白抗原特性及IL-2、IL-6活性;(7)纯化表达蛋白p68进行豚鼠主动免疫/攻击实验,观免疫保护性.结果 (1)重组质粒 pDJH2(亚克隆pDJt)插入片段1.9kb,与各致病钩体不同片段 DNA 高度同源;(2)序列测定插入片段实际1811bp,推测有2个读框(ORF),各有启动子、终止密码.查 Gen Bank/EMBL 无类似序列;(3)表达蛋白分子量68kD(p68);(4)p68是胸腺依赖性(TD)抗原,有良好抗原特性,抗血清效价1:524288,(EIA)具很强的动物免疫保护作用.结论 (1)p68编码基因是致病钩体保护性抗原基因;(2)p68是致病钩体外膜保护性抗原,可作钩体基因疫苗候选.

作者：江南；戴保民；李胜富；方之茂刊期： 1999年第05期
蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析

蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一,提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理,有可能制备诊断试剂,从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的.从国内引起食物中毒的100株蜡样芽胞杆菌中,选出试验用菌株.从培养后的上清液中,经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素.溶血素由B、L1和L2 3种成份组成,分子量分别为35、36和45kDa 3种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血,使兔皮肤血管通透性增加,兔小肠肠段结扎产生积液反应,Vero细胞形态学改变.提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质,试验也证实所提取的溶血素有免疫原性和免疫反应性

作者：贾力敏；蒋兆英；陈晓蔚；许文炯；杜雪飞；周自新刊期： 1999年第05期
金黄色葡萄球菌L型感染对小鼠垂直传播及DNA原位杂交的研究

本文用金黄色葡萄球菌及其稳定L型,经多种方式感染雌性昆明种小鼠,发现雌鼠妊娠率、每胎分娩的子鼠数及子鼠体重均低于对照组,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05).对感染鼠子宫内膜、胎盘及子鼠肝、肺等组织作免疫组化及金葡菌L型地高辛核酸探针原位杂交,结果发现金葡菌L型感染雌鼠子宫内膜、胎盘及子鼠肝、肺中金葡菌L型免疫组化阳性率分别为60.5%、93.3%及60%:金葡萄L型DNA探针原位杂交后在感染鼠子宫内膜、胎盘绒毛及子鼠肺组织中均发现有金葡菌DNA表达,阳性率分别为20.8%、33.3%、16.6%,均高于对照组.提示L型金黄色葡萄球菌可通过垂直传播感染方式导致2代动物先天性感染,这可能是引起妊娠异常结局的重要因素之一.

作者：夏佩莹；刘勇；汪万英；姚敏刊期： 1999年第05期
人巨细胞病毒先天感染小鼠大脑皮质的病理学特征

目的研究人巨细胞病毒 (HCMV)经小鼠胎盘垂直传播致胎鼠大脑皮质感染的病理学特征.方法在8～12周龄BALB/c雌雄小鼠腹腔内接种HCMV后,交配,待孕鼠妊娠第7天及临产时处死动物;无菌将雌胎鼠双侧大脑皮质取出,应用常规组织切片 HE 染色、脑压印片地高辛标记 HCMV 寡核苷酸探针原位杂交及病毒分离的方法进行检测分析.结果组织学检查发现,雌、胎鼠脑微血管扩张充血,脑实质有中性粒细胞和单核细胞浸润,部分神经细胞已变性坏死.在胎鼠脑组织切片上,还可见到软化灶及受染神经细胞核内 HCMV 特征性嗜碱性包涵体.原位杂交显示,病毒核酸存在于待产胎鼠脑神经细胞及胶质细胞核内及胞浆内.在胎鼠脑组织悬液中分离出该病毒.结论 HCMV 能通过BALB/c小鼠胎盘致发育中子鼠大脑皮质感染,发生侵袭性脑膜脑炎性病理改变.

作者：王明丽；吴建军；陈科；唐久来；李京培；史百芬；胡勇刊期： 1999年第05期
大肠杆菌O157的致病性:1例大肠杆菌O157∶NM和副溶血性弧菌的重叠感染

目的探讨从杭州一急性腹泻患者粪便中分离的大肠杆菌O157∶NM的致病性.方法对一重叠感染大肠杆菌O157∶NM和副溶血性弧菌的急性腹泻患者,调查其临床表现及相关流行病学资料,同时对分离菌株进行生化特性分析、血清学鉴定、毒力试验等,并采集发病后第4、18天血清与分离菌株试管定量凝集试验,检测其特异性抗菌抗体.结果菌株26-1为大肠杆菌O157∶NM,Vero毒素阴性,未携60MDa质粒,EHEC溶血素基因阴性:菌株26-2为副溶血性弧菌,为强毒株.患者第4、18天血清与分离菌株未见凝集阳性反应.结合临床表现和流行病学资料,考虑诊断该病例为急性副溶血性弧菌肠炎.结论我国人群和家畜肠道中可能存在一类致病性不明或非致病性的大肠杆菌O157菌株;EHEC的鉴定应重视毒力因子的检测,同时亦不能忽视患者是否有其它肠道病原体的重叠感染.

作者：潘劲草；孟冬梅；黄诚孝；斯国静；邓晶刊期： 1999年第05期
1997～1998年2792份儿科标本细菌培养及药敏分析

感染性疾病是儿科常见病,及早明确病原菌对于合理使用抗生素、提高疾病治愈率、预防菌群失调、减少并发症有着重要意义.本文将我科1997年1月～1998年12月间2 792份标本的细菌培养和药敏结果及临床特点作一分析.

作者：吴良霞；戴明红；李杰刊期： 1999年第05期
复方新诺明预防HIV感染患儿卡氏肺囊虫肺炎(附46例分析)

卡氏肺囊虫肺炎(PCP)是儿童艾滋病早期死亡的主要原因.预防卡氏肺囊虫肺炎对于延长艾滋病患儿的生存期至关重要.本文总结46例人类免疫缺陷病毒(HIV)感染患儿使用复方新诺明(SMZco)预防卡氏肺囊虫肺炎,现报告如下.

作者：陈赛斌刊期： 1999年第05期
1例长潜伏期狂犬病病例的实验检测研究

本文报道1例临床狂犬病病例,男性22岁,发病3天出现三恐症状,继而四肢撑于床上,口中流涎,呼吸循环衰竭死亡.追述病史,8岁时曾被犬咬伤左臂,留有疤痕,当时未作处理,以后未密切接触过犬或与犬类有关的食品和物品.为确诊长潜伏期的狂犬病,采取一系列实验研究,采集死者脑海马回,应用单克隆抗体(McAb)作酶联免疫反应和免疫荧光检测病毒抗原,仅几小时即检测到病毒抗原,达到快速诊断.为确证检测结果,用细胞培养和动物接种分离病毒,获得病毒株,并进一步鉴定.从而为长达14年潜伏期的狂犬病病例找到了病原,对防病措施的落实提供了依据.

作者：沈蕊华；丁晓光；张金芳；刘敏勇；伍稚梅刊期： 1999年第05期
4例弓形虫病的临床及实验诊断

刚地弓形虫可引起人畜的弓形虫病.该虫呈世界性分布,动物及人体感染普遍,许多国家和地区的人群感染很普遍,其感染率为25%～50%,我国人群感染率为5%～20%,但真正发病者不多.至1991年病例报告仅51例[1].1996年以来我们发现并诊治了4例弓形虫病,在国内,尤其在浙江省内尚不多见,现报告如下:

作者：金春兰；毛文祥；谢鑫友刊期： 1999年第05期
钩端螺旋体L型感染与钩端螺旋体脑动脉炎的关系

目的探讨钩端螺旋体 L 型感染与钩体脑动脉炎发病的可能关系.方法对74例钩体脑动脉炎患者血液及脑脊液进行钩端螺旋体普通培养、L 型培养,患者血清做显微镜凝集试验,用免疫荧光染色确定钩体 L 型及其原菌型.结果钩体脑动脉炎患者钩体L型培养、普通培养、钩体 MAT的阳性率分别为:47.3%、18.9%、70.3%.分离出的钩体 L 型呈多形性.结论钩端螺旋体 L 型感染与钩体脑动脉炎的发病关系密切.

作者：江振友；林晨；蒋惠荷；罗伟中；李英欣刊期： 1999年第05期
恶性疟原虫FCC-1/HN株EBA-175和HRP-II基因片段在HeLa细胞中的表达及鉴定

目的在 HeLa 细胞中表达恶性疟原虫红细胞结合蛋白 EBA-175 和富组氨酸蛋白 HRP-II,进一步研究其生物学功能和免疫学特性.方法将 EBA-175和 HRP-II 部分基因串接插入 PCDNA3 真核表达载体,获得重组表达质粒 PCDNA3/EBA175-HRPII.采用磷酸钙-DNA 共沉淀法将重组质粒转染 HeLa 细胞进行体外表达,对表达产物进行 SDS-PAGE、Dot-ELISA 和 Western-blot 鉴定.结果表达产物占表达蛋白总量的16.4%,相对分子量与预设计的 48kDa 基本相符.表达产物与鼠抗恶性疟原虫血清及构建的重组质粒免疫鼠血清产生特异免疫反应.结论表达载体 PCDNA3 在 HeLa 细胞内可表达出具有一定免疫学活性的恶性疟原虫重组抗原蛋白.

作者：陈海峰；王又红；余新炳；吕芳丽；陈观今刊期： 1999年第05期
极重型全身性弓形虫病1例

患儿男,15月龄.因发热3d,伴左侧肢体反复抽搐2d入院.体查:体温39℃,神志清醒,精神萎靡.腹软,肝脾均在肋下2cm,无明显触痛.颈软,左上、下肢轻度瘫痪.头颅CT显示右顶部小片状低密度影.脑脊液常规生化正常,培养阴性.血培养阴性.天冬氨酸转氨酶57IU.

作者：齐静姣；张平刊期： 1999年第05期
江苏省1997年狂犬病监测结果分析

狂犬病是一种严重的致死性疾病,病死率百分之百.为了更有效地开展狂犬病防制工作,我省对狂犬病发病的影响因素、宿主状况及疫苗免疫情况进行了监测.现将1997年监测结果报告如下.

作者：胡静；张清媛；胡小奎；田秉铨；朱凤才；刘光中刊期： 1999年第05期
用Vero-E6细胞大量增殖恙虫病立克次体的研究

目的为了探讨建立一种简便而可靠的恙虫病立克次体增殖方法,以得到较大量的恙虫病立克次体.方法采用了以Vero-E6细胞增殖恙虫病立克次,并且对Vero-E6感染细胞的培养条件进行了改进.结果成功地使恙虫病立克次体在Vero-E6细胞中得到大量增殖.结论改进后的Vero-E6细胞培养法可以获得大量的恙虫病立克次体,该方法既经济又适用.

作者：张志强；胡玲美；杨青；刘昕昕；魏安明；鲁志新刊期： 1999年第05期
肺包虫病的诊断与外科处理

包虫病又称棘球蚴病,是我国北方尤以畜牧业发达地区常见的寄生虫病之一.而肺包虫的发病率反次于肝包虫病居.第二位.我院自1982～1998年共救治肺包虫病46例,本文就其单发、多发性肺虫病合并其它部位包虫及并发症的诊断处理、手术体会分析如下:

作者：国斌；郝永存；余生林；王永成刊期： 1999年第05期