学术投稿

应用套式PCR检测6种血清型钩端螺旋体

万成松;张文炳;曹虹;赵卫

关键词:钩端螺旋体, 套式PCR, 检测
摘要:目的用套式 PCR 快速检测水沟和丛林等地的钩端螺旋体.方法选 Leptospira borgpetersenii 中的一段保守序列 IS1533,设计两对引物,用套式 PCR 检测六种不同血清型的钩体.结果 6株致病株均出现单一246bp 的特异性扩增产物,而腐生株、空白对照无任何 DNA 扩增条带.用琼脂糖凝胶电泳,能检测500fg 模板的扩增产物.结论套式 PCR 是一种灵敏度高、特异性强的快速检测自然疫源中钩体的有效方法.
中国人兽共患病学报杂志相关文献
  • 江苏省1997年狂犬病监测结果分析

    狂犬病是一种严重的致死性疾病,病死率百分之百.为了更有效地开展狂犬病防制工作,我省对狂犬病发病的影响因素、宿主状况及疫苗免疫情况进行了监测.现将1997年监测结果报告如下.

    作者:胡静;张清媛;胡小奎;田秉铨;朱凤才;刘光中 刊期: 1999年第05期

  • 几种不同方法制备恶性疟原虫基因组DNA的比较

    目的比较3种不同的基因组 DNA提取方法制备恶性疟原虫基因组DNA的效果.方法分别采用酚-氯仿-异戊醇抽提法、Wizard基因组DNA纯化试剂盒和磷酸钠盐溶液,分离提取恶性疟原虫基因组DNA,通过DNA含量测定和PCR鉴定,比较它们的提取效果.结果前两种方法制备恶性疟原虫基因组DNA的效果相仿,纯度较高;第三种方法为简便,所得的DNA含量明显高于前两种方法,但其纯度较低,蛋白质含量高.结论 3种方法各有优缺点,第3种方法简便、快捷、经济,更有实用价值.

    作者:江钢锋 刊期: 1999年第05期

  • 1例长潜伏期狂犬病病例的实验检测研究

    本文报道1例临床狂犬病病例,男性22岁,发病3天出现三恐症状,继而四肢撑于床上,口中流涎,呼吸循环衰竭死亡.追述病史,8岁时曾被犬咬伤左臂,留有疤痕,当时未作处理,以后未密切接触过犬或与犬类有关的食品和物品.为确诊长潜伏期的狂犬病,采取一系列实验研究,采集死者脑海马回,应用单克隆抗体(McAb)作酶联免疫反应和免疫荧光检测病毒抗原,仅几小时即检测到病毒抗原,达到快速诊断.为确证检测结果,用细胞培养和动物接种分离病毒,获得病毒株,并进一步鉴定.从而为长达14年潜伏期的狂犬病病例找到了病原,对防病措施的落实提供了依据.

    作者:沈蕊华;丁晓光;张金芳;刘敏勇;伍稚梅 刊期: 1999年第05期

  • 环状病毒分子生物学研究新进展

    环状病毒(Orbivirus)是呼肠病毒科(Reoviridae)的一类虫媒病毒,通过吸血昆虫和其它节肢动物(蠓、蜱、蚊、白蛉等)传播给脊椎动物(包括人),并在节肢动物和脊椎动物这两种宿主体内繁殖,引起人、野生动物、家畜等相关疾病.

    作者:陈娟;黄祥瑞 刊期: 1999年第05期

  • 恙虫病东方体CMY株sta56基因片段序列分析

    目的了解恙虫病东方体 CMY 株与其它株的关系.方法测定 CMY 株 sta56 基因片段的核苷酸序列并与其它株相应序列进行比较.结果在测定的 324bp序列中,GC 含量为43.5%;与Karp、Gilliam、Kato、kuroki、Kawasaki 及Shimokoshi 株相应序列的同源性分别为91.0%、87.3%、87.0%、87.3%、86.1% 及 73.8%.结论 CMY 株与已报道的恙虫病东方体菌株不同,与 Karp 株有很高的同源性.

    作者:陈添胜;谭丽霞;罗会明;许曼波 刊期: 1999年第05期

  • 旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠免疫保护作用的比较研究

    目的比较旋毛虫成虫可溶性抗原和排泄分泌抗原对小鼠的免疫保护作用.方法收集人工感染大鼠小肠内的成虫,经研磨和冻融制备成虫可溶性抗原.采用体外培养的方法从培养液中提取旋毛虫成虫排泄分泌抗原.分别用两种抗原免疫小鼠,间隔1周共免疫3次,末次免疫后1周,每只小鼠攻击感染100条旋毛虫感染性肌肉幼虫.感染后1周检查小鼠小肠内成虫数量和雌虫生殖力,感染后5周检查肌肉幼虫负荷.结果成虫可溶性抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别为79.55%、62.25%和65.0%.成虫排泄分泌抗原诱导的成虫减虫率、新生幼虫减虫率和肌肉幼虫减虫率分别是97.27%、86.60%和90.0%.结论实验结果表明旋毛虫成虫可溶性抗原和成虫排泄分泌抗原均能够诱导宿主产生较强的抗攻击感染的免疫力,但后者的免疫原性更强.

    作者:申丽洁;朱声华;罗仲金;雷莉 刊期: 1999年第05期

  • 恙螨体内HFRSV基因检测及定位的初步研究

    1997年以来我们采用分子生物学方法对小盾纤恙螨的媒介意义进行研究.结果表明,用RT-PCR和Nested RT-PCR从恙螨体内检测到HFRSr-RNA;用原位分子杂交技术在恙螨的卵巢细胞、支肠细胞等组织中检测到HFRSU-RNA.以上结果为恙螨的媒介意义提供了具有分子水平的直接证据,对 HFRS 的流行病学和预防具有重要的理论意义和实用价值.

    作者:张云;朱进;唐家琪;吴光华 刊期: 1999年第05期

  • 从海南省人血清中检出甲属虫媒病毒HYM1抗体

    1995年,从海南省立才蚊虫标本中分离到1株病毒,编号为HYM1.经理化、生物学性状及血清学鉴定表明HYM1与MAY病毒抗原性相近.应用间接免疫荧光法对海南省部分地区人血清标本共426份,进行了抗体检测.其中当地人血清标本226份,阳性17份,阳性率为7.08%.驻海南省部队人血清标本200份,阳性1份,阳性率为0.5%.

    作者:徐春华;蒋廉华;田小东;林立辉;陈唯军;赵春生;陈焕勇 刊期: 1999年第05期

  • 肺炎衣原体包涵体核酸组分衍化分析法的建立

    吖啶橙(AO)染色可以作为肺炎衣原体(Cpn)包涵体的染色方法.它是一种快速检查 Cpn 感染的较好方法,有可能替代荧光单抗染色的功能,克服单抗染色时细胞结构显示不清的缺点,具有简捷、价廉和既能反映衣原体包涵体的形态和成份,又能反映包涵体不同时期 RNA 和 DNA 含量变化的独特优点.

    作者:余竹元;项俊庆;王卫群;李子华 刊期: 1999年第05期

  • 汉坦病毒(Hantavirus)研究进展

    汉坦病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属,在临床上引起肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征.自1978年李镐汪等从疫区的黑线姬鼠肺组织中分离到汉坦病毒76-118株以来[1],各国学者相继分离到不同型别的汉坦病毒.特别是1993年美国西部暴发流行致死性极高(50%)的汉坦病毒肺综合征[2],引起了国际上的广泛重视.

    作者:姚智慧;董关木 刊期: 1999年第05期

  • 以丙硫苯咪唑、左旋咪唑治疗感染囊尾蚴猪的试验

    猪囊尾蚴病(简称猪囊虫病)是一种严重危害人畜共患互染的寄生虫病.本病不仅严重影响猪的生长发育,而且屠宰后其胴体、内脏无利用价值,给养殖业带来巨大的经济损失.人感染有钩绦虫病,严重危害健康.近年来,国外应用吡喹酮治疗牛囊尾蚴病及国内有以吡喹酮,丙硫苯咪唑治疗猪囊尾蚴病的报道,都取得较好疗效.

    作者:沈维力;张洪伟;成栓之;陈学;潘亚茹 刊期: 1999年第05期

  • 福建近年恙螨感染恙虫病东方体的检测研究

    目的检测恙螨幼虫体内恙虫病东方体,分析福建恙虫病可能流行的趋势.方法从福建山区及沿海地区捕鼠采集恙螨幼虫,通过分类鉴定,以每只鼠体的寄生螨作为一个被检单位,用套式 PCR 扩增恙虫病东方体Sta 58kDa基因的88bp片段,以确定恙螨幼虫是否携带本病原,继而估计该地区是否存在恙虫病疫源地.结果从105份被检单位的恙螨幼虫检出7份恙虫病东方体阳性标本,主要宿主为黄毛鼠,主要媒介为纤恙螨属的地里纤及小板纤恙螨,与有关资料比较,证实本省恙虫病的宿主和媒介未发生明显变化.结论福建沿海地区恙螨的恙虫病东方体的感染率高于山区,疫源地有继续扩大的趋势.

    作者:严延生;郑健;陈亮;廖灏溶;于恩庶 刊期: 1999年第05期

  • 病毒性疾病的感染途径与转归

    在病毒性疾病中,有些为自限性感染,即感染后病程较短,随体内病毒被迅速清除而痊愈[1].如甲型肝炎、戊型肝炎、流行性感冒、流行性腮腺炎、病毒性胃肠炎等等.有些则为慢性感染,感染后病程长,病毒能在体内较长期存在,病情呈慢性进行性发展,如慢性乙型肝炎,艾滋病等[1].各类传染病中,目前对人类健康威胁大的莫过于慢性病毒性传染病(特别是慢性乙型肝炎,艾滋病等).这些病毒持续感染的机制一直是困扰传染病学、病毒学和免疫学研究的一个难点.

    作者:张敏;朱善宏 刊期: 1999年第05期

  • 胸部肿瘤与弓形虫感染相关因素分析

    调查93例胸部肿瘤患者,弓形虫总感染率34.4%,其中以肺癌患者感染率高,达38.46%(20/52);性别分布无显著性差异(P>0.05);低年龄组感染率显著低于高龄组感染率(P<0.05);职业分布以干部(53.06%)、工人(36.73%),显著高于农民(10.20%)(P<0.01));肿瘤病人养猫户弓形虫感染率(45.78%)高于未养猫户(26.31%)(P<0.01);说明养猫是肿瘤病人感染弓形虫的机会条件.本文建议对早期肿瘤病人弓形虫感染者应进行抗弓形虫特异治疗,手术时应避开虫血症期,防止术中播散和交叉感染.

    作者:沈振华;梁全发;胡学宁;王乐;柳(依) 刊期: 1999年第05期

  • 大肠杆菌O157∶H7的毒力因子与分子检测

    1982年,在美国Michigan和Oregon的一起出血性肠炎暴发中首次分离出E.coli O157:H7,回顾性检测自1973年以来亚特兰大疾病控制中心收集的3000多份大肠杆菌,仅分离1份过去存在的O157:H7,显然E.coli O157:H7是一种新的致病菌[1].

    作者:刘光明;苏水宽;揭斐;郭美华 刊期: 1999年第05期

  • 用Vero-E6细胞大量增殖恙虫病立克次体的研究

    目的为了探讨建立一种简便而可靠的恙虫病立克次体增殖方法,以得到较大量的恙虫病立克次体.方法采用了以Vero-E6细胞增殖恙虫病立克次,并且对Vero-E6感染细胞的培养条件进行了改进.结果成功地使恙虫病立克次体在Vero-E6细胞中得到大量增殖.结论改进后的Vero-E6细胞培养法可以获得大量的恙虫病立克次体,该方法既经济又适用.

    作者:张志强;胡玲美;杨青;刘昕昕;魏安明;鲁志新 刊期: 1999年第05期

  • 赖型钩体重组质粒及表达保护性抗原,p68的研究

    目的寻找钩体病基因工程疫苗保护性抗原候选.方法 (1)鸟枪法构建赖型钩体017株基因库;(2)α互补、DNA 原位杂交筛选重组质粒;(3)Southern 杂交行 DNA 同源性分析;(4)双脱氧链中止测重组 DNA 序列及与外膜蛋白基因(omp)匹配;(5)IPTG 诱导重组子表达;(6)免疫印迹、MAT、EIA、MTT检测表达蛋白抗原特性及IL-2、IL-6活性;(7)纯化表达蛋白p68进行豚鼠主动免疫/攻击实验,观免疫保护性.结果 (1)重组质粒 pDJH2(亚克隆pDJt)插入片段1.9kb,与各致病钩体不同片段 DNA 高度同源;(2)序列测定插入片段实际1811bp,推测有2个读框(ORF),各有启动子、终止密码.查 Gen Bank/EMBL 无类似序列;(3)表达蛋白分子量68kD(p68);(4)p68是胸腺依赖性(TD)抗原,有良好抗原特性,抗血清效价1:524288,(EIA)具很强的动物免疫保护作用.结论 (1)p68编码基因是致病钩体保护性抗原基因;(2)p68是致病钩体外膜保护性抗原,可作钩体基因疫苗候选.

    作者:江南;戴保民;李胜富;方之茂 刊期: 1999年第05期

  • 卡氏肺囊虫基因分型方法的应用研究进展

    卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii,Pc)于1988年被证明是一种真菌,主要引起免疫妥协患者,特别是感染HIV的AIDS患者的卡氏肺囊虫肺炎(PcP).在临床和流行病学研究中,传统的表型分型方法,如用特异抗血清仅能区分来自不同宿主及不同地理区域的Pc,不能进行株鉴定,难以满足实际需要[1~3];现代的基因分型方法,因其分辨力和分型率高而倍受重视.由于感染人类的Pc尚不能人工培养,RFLP[4]、PFGE[5]等需用大量病原体的分型方法并不适合临床及环境样本中微量Pc的分析.

    作者:杨湘越;王栋 刊期: 1999年第05期

  • 弓形虫P30基因DNA免疫小鼠诱导小鼠体液免疫应答及保护性研究

    目的用重组质粒 pcDNA3-P30 免疫 BALB/c小鼠,观察其 DNA 免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用.方法大量制备质粒 DNA,肌肉注射免疫小鼠.ELISA 测定 IgG 抗体滴度;免疫鼠血液组织 P30 基因 PCR 扩增;弓形虫攻击感染.结果用ELIAS 法检测的抗体 IgG 滴度1∶2560,免疫后3周及6个月从免疫鼠血液组织中检测到 P30 基因;攻击感染实验组的存活时间较对照时间延长(P<0.05),结论重组质粒pcDNA3-P30 免 BALB/c 小鼠可诱导一定的体液免疫应答,对抗攻击感染具有一定的保护性.

    作者:周永安;陈观今;郭虹;郑焕钦 刊期: 1999年第05期

  • 蜡样芽胞杆菌溶血性肠毒素的提取及生物学活性分析

    蜡样芽胞杆菌是国内引起细菌性食物中毒的常见细菌之一,提取其溶血性肠毒素有助于阐明它的发病机理,有可能制备诊断试剂,从而达到预防和控制蜡样芽胞杆菌食物中毒的目的.从国内引起食物中毒的100株蜡样芽胞杆菌中,选出试验用菌株.从培养后的上清液中,经过盐析、离子交换柱层析、制备性凝胶电泳提取蜡样芽胞杆菌溶血素.溶血素由B、L1和L2 3种成份组成,分子量分别为35、36和45kDa 3种成份的协同作用在血琼脂上引起靶状溶血,使兔皮肤血管通透性增加,兔小肠肠段结扎产生积液反应,Vero细胞形态学改变.提示蜡样芽胞杆菌溶血素具有肠毒素的性质,试验也证实所提取的溶血素有免疫原性和免疫反应性

    作者:贾力敏;蒋兆英;陈晓蔚;许文炯;杜雪飞;周自新 刊期: 1999年第05期

中国人兽共患病学报杂志

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主管:中国科学技术协会

主办:中国微生物学会